NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元損傷中的核心作用及機制探究一、引言1.1研究背景癲癇作為一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)慢性疾病，全球約有5000萬患者，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。癲癇持續(xù)狀態(tài)（StatusEpilepticus，SE）是癲癇發(fā)作中最為嚴重的一種類型，若全面性驚厥發(fā)作持續(xù)超過5分鐘，或非驚厥性發(fā)作或局灶性發(fā)作持續(xù)超過15分鐘，或5-30分鐘內(nèi)兩次發(fā)作間期意識未完全恢復，即進入癲癇持續(xù)狀態(tài)，此時它已成為臨床上的急危重癥。若不及時治療，患者會因為反復抽搐、高熱、循環(huán)衰竭以及神經(jīng)元興奮性毒性損傷，導致不可逆的腦損傷，致殘率和病死率明顯增高。研究表明，即便患者在癲癇持續(xù)狀態(tài)下積極接受搶救，死亡率仍高達3%以上，而因癲癇持續(xù)狀態(tài)所致智力低下、癱瘓或更嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，發(fā)生率高達9%-20%。海馬作為大腦邊緣系統(tǒng)的重要組成部分，在學習、記憶和情緒調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。海馬神經(jīng)元對各種損傷因素高度敏感，在癲癇持續(xù)狀態(tài)中，海馬神經(jīng)元極易受到損傷。當海馬神經(jīng)元受損時，會導致大腦神經(jīng)元過度放電，進而引發(fā)癲癇發(fā)作，形成惡性循環(huán)。而且，海馬神經(jīng)元損傷還可能致使患者出現(xiàn)記憶力減退、認知功能障礙、精神異常等后果。例如，海馬神經(jīng)元損傷可能會使患者無法記住新的信息，或者新的記憶出現(xiàn)錯誤；也可能導致患者出現(xiàn)認知功能障礙，表現(xiàn)為無法分辨顏色、形狀，無法進行計算等癥狀；還可能引發(fā)精神異常，如失眠、多夢、焦慮、抑郁等。目前，對于癲癇持續(xù)狀態(tài)導致海馬神經(jīng)元損傷的機制尚未完全明確，但眾多研究表明，炎癥反應和氧化應激在其中扮演著重要角色。核因子-κB（NuclearFactor-κB，NF-κB）和缺氧誘導因子-1α（Hypoxia-InducibleFactor-1α，HIF-1α）作為細胞內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子，參與了炎癥反應、氧化應激以及細胞凋亡等多種病理生理過程。NF-κB在靜息狀態(tài)下與抑制蛋白IκB結(jié)合，以無活性的形式存在于細胞質(zhì)中。當細胞受到刺激時，IκB激酶被激活，使IκB磷酸化并降解，釋放出NF-κB，后者進入細胞核，與靶基因啟動子區(qū)域的κB位點結(jié)合，啟動相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)節(jié)炎癥因子、細胞黏附分子等的表達。HIF-1α則是在缺氧條件下被誘導表達，它可以與HIF-1β形成異二聚體，調(diào)節(jié)一系列與缺氧適應相關(guān)基因的表達，如血管內(nèi)皮生長因子、促紅細胞生成素等，以維持細胞的氧穩(wěn)態(tài)和能量代謝。在癲癇持續(xù)狀態(tài)中，NF-κB/HIF-1α通路可能被異常激活，進而參與海馬神經(jīng)元的損傷過程。深入研究NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元損傷中的作用機制，對于揭示癲癇的發(fā)病機制、尋找新的治療靶點以及開發(fā)有效的治療方法具有重要的理論和現(xiàn)實意義。1.2研究目的與意義本研究旨在通過建立癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠模型，深入探討NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)下對大鼠海馬神經(jīng)元損傷的作用機制。具體而言，通過觀察該通路相關(guān)分子在癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬組織中的表達變化，以及應用特異性抑制劑干預該通路后對海馬神經(jīng)元損傷的影響，明確NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)海馬神經(jīng)元損傷中的關(guān)鍵作用環(huán)節(jié)，為癲癇的治療提供新的理論依據(jù)和潛在治療靶點。從理論意義上講，目前癲癇持續(xù)狀態(tài)導致海馬神經(jīng)元損傷的機制尚未完全闡明，本研究聚焦于NF-κB/HIF-1α通路，有望揭示該通路在癲癇病理過程中的具體作用機制，進一步豐富癲癇發(fā)病機制的理論體系。這不僅有助于深入理解癲癇的發(fā)病過程，還能為后續(xù)相關(guān)研究提供新的思路和方向，推動神經(jīng)科學領(lǐng)域?qū)Πd癇研究的不斷深入。在實踐意義方面，癲癇作為一種嚴重影響患者生活質(zhì)量的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，目前的治療方法仍存在諸多局限性。通過明確NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)海馬神經(jīng)元損傷中的作用機制，能夠為開發(fā)新型抗癲癇藥物提供潛在的靶點。例如，基于對該通路關(guān)鍵環(huán)節(jié)的認識，可以研發(fā)針對NF-κB或HIF-1α的特異性抑制劑，或者設(shè)計能夠調(diào)節(jié)該通路活性的藥物，從而更有效地減輕癲癇持續(xù)狀態(tài)對海馬神經(jīng)元的損傷，降低癲癇的發(fā)作頻率和嚴重程度，提高患者的生活質(zhì)量。此外，本研究結(jié)果還可能為癲癇的早期診斷和病情評估提供新的生物標志物，有助于臨床醫(yī)生及時發(fā)現(xiàn)和干預癲癇患者，改善其預后。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1癲癇持續(xù)狀態(tài)概述癲癇持續(xù)狀態(tài)是一種嚴重的癲癇發(fā)作類型，具有較高的致殘率和病死率。其定義在臨床實踐和研究中具有重要意義，為準確診斷和及時治療提供了依據(jù)。目前，國際抗癲癇聯(lián)盟（ILAE）將癲癇持續(xù)狀態(tài)定義為：全面性驚厥發(fā)作持續(xù)超過5分鐘，或非驚厥性發(fā)作或局灶性發(fā)作持續(xù)超過15分鐘，或5-30分鐘內(nèi)兩次發(fā)作間期意識未完全恢復。這一定義強調(diào)了發(fā)作持續(xù)時間和發(fā)作間期意識狀態(tài)兩個關(guān)鍵要素，有助于臨床醫(yī)生在實際工作中準確判斷癲癇持續(xù)狀態(tài)的發(fā)生。根據(jù)發(fā)作類型，癲癇持續(xù)狀態(tài)主要分為全面性發(fā)作持續(xù)狀態(tài)和部分性發(fā)作持續(xù)狀態(tài)兩種類型。全面性發(fā)作持續(xù)狀態(tài)中，全面性強直-陣攣發(fā)作持續(xù)狀態(tài)最為常見，患者表現(xiàn)為全身肌肉強直性收縮和陣攣性抽搐，伴有意識喪失、呼吸暫停、口吐白沫等癥狀，嚴重時可導致窒息、骨折等并發(fā)癥。全身陣攣性癲癇持續(xù)狀態(tài)則表現(xiàn)為反復、發(fā)作性的雙側(cè)肌陣攣，常伴發(fā)熱，對患者的身體機能和神經(jīng)系統(tǒng)造成嚴重損害。部分性發(fā)作持續(xù)狀態(tài)包括單純部分性運動發(fā)作持續(xù)狀態(tài)，如身體某部分如顏面或口角抽動、個別手指或單側(cè)肢體持續(xù)不停抽動達數(shù)小時或數(shù)天，無意識障礙，發(fā)作終止后可遺留發(fā)作部位Todd麻痹，也可擴展為繼發(fā)性全面性發(fā)作；邊緣葉性癲癇持續(xù)狀態(tài)，又稱精神運動性癲癇狀態(tài)，常表現(xiàn)意識障礙（模糊）和精神癥狀，如活動減少、反應遲鈍、呆滯、注意力喪失、定向力差、緘默或只能發(fā)單音調(diào)，以及緊張、焦慮不安、恐懼、急躁、沖動行為、幻覺妄想和神游等，持續(xù)數(shù)天至數(shù)月，事后全無記憶，常見于顳葉癲癇，須注意與其他原因?qū)е碌木癞惓ｈb別；偏側(cè)抽搐狀態(tài)伴偏側(cè)輕癱，多發(fā)生于幼兒，表現(xiàn)一側(cè)抽搐，病人通常意識清醒，伴發(fā)作后一過性或永久性同側(cè)肢體癱瘓；自動癥持續(xù)狀態(tài)，少數(shù)患者表現(xiàn)自動癥，意識障礙可由輕度嗜睡至木僵、昏迷和尿便失禁，如不及時治療常發(fā)生全身性發(fā)作，可持續(xù)數(shù)小時至數(shù)天，甚至半年，患者對發(fā)作不能回憶，發(fā)作后近事或遠事記憶受損。癲癇持續(xù)狀態(tài)的診斷主要依據(jù)癲癇病史、臨床特征以及輔助檢查?；颊呒韧邪d癇發(fā)作史，此次發(fā)作符合上述癲癇持續(xù)狀態(tài)的定義和發(fā)作類型表現(xiàn)，即可初步診斷。常規(guī)腦電圖（EEG）、視頻EEG和動態(tài)EEG監(jiān)測在癲癇持續(xù)狀態(tài)的診斷中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，它們可顯示尖波、棘波、尖-慢波、棘-慢波等癇性波型，有助于明確癲癇發(fā)作和癲癇持續(xù)狀態(tài)的診斷。例如，在全面性強直-陣攣發(fā)作持續(xù)狀態(tài)中，EEG可記錄到雙側(cè)同步的高波幅棘波和慢波綜合；而在部分性發(fā)作持續(xù)狀態(tài)中，EEG可顯示局部的癇性放電。此外，心電圖檢查可排除大面積心肌梗死、各種類型心律失常導致廣泛腦缺血、缺氧后發(fā)作和意識障礙；胸部X線檢查可排除嚴重肺部感染導致低氧血癥或呼吸衰竭；必要時可行頭部CT和MRI檢查，以明確是否存在腦部器質(zhì)性病變，如腦腫瘤、腦出血、腦梗死等，這些病變可能是癲癇持續(xù)狀態(tài)的病因。癲癇持續(xù)狀態(tài)對大腦具有嚴重的損害，其病理生理過程涉及多個方面。長時間的癲癇發(fā)作會導致大腦神經(jīng)元持續(xù)處于高度興奮狀態(tài)，代謝異常增加，能量消耗劇增，從而引發(fā)能量代謝障礙。神經(jīng)元無法獲得足夠的能量供應，導致細胞膜離子泵功能失調(diào)，細胞內(nèi)鈣離子超載，激活一系列鈣依賴性酶，如蛋白酶、核酸酶等，這些酶的異常激活會破壞神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和功能，導致神經(jīng)元損傷和死亡。癲癇持續(xù)狀態(tài)還會引發(fā)炎癥反應，大量炎癥細胞浸潤腦組織，釋放多種炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）等，這些炎癥因子會進一步加重神經(jīng)元的損傷，破壞血腦屏障，導致腦水腫的發(fā)生。癲癇持續(xù)狀態(tài)還會導致氧化應激增強，產(chǎn)生大量的自由基，如超氧陰離子、羥自由基等，這些自由基具有極強的氧化活性，會攻擊神經(jīng)元的細胞膜、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，導致細胞膜脂質(zhì)過氧化、蛋白質(zhì)變性和DNA損傷，從而嚴重損害神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和功能。2.2海馬神經(jīng)元的重要性海馬位于大腦顳葉內(nèi)側(cè)，是大腦邊緣系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，左右各一。其結(jié)構(gòu)復雜，主要由海馬回和海馬旁回組成，海馬回是一個彎曲的結(jié)構(gòu)，與大腦皮層的其他區(qū)域相互連接，形成了一個復雜的網(wǎng)絡(luò)。海馬神經(jīng)元具有獨特的形態(tài)和功能，它們可以形成新的突觸連接，在學習、記憶和空間導航等過程中發(fā)揮著不可或缺的作用。在學習和記憶方面，海馬神經(jīng)元參與了新信息的獲取和整合。當我們學習新知識或經(jīng)歷新事物時，海馬神經(jīng)元會被激活，通過一系列的信號轉(zhuǎn)導和分子機制，將這些信息編碼為短期記憶。隨后，在海馬神經(jīng)元的持續(xù)作用下，短期記憶逐漸轉(zhuǎn)化為長期記憶，并存儲在大腦中。當我們需要回憶這些信息時，海馬神經(jīng)元會重新激活相關(guān)的記憶痕跡，將記憶提取出來。例如，在一項關(guān)于空間記憶的實驗中，研究人員訓練大鼠在迷宮中尋找食物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，海馬神經(jīng)元的活動在大鼠學習迷宮路徑的過程中顯著增強，并且這些神經(jīng)元的活動模式與大鼠在迷宮中的位置密切相關(guān)。當大鼠再次進入迷宮時，海馬神經(jīng)元會根據(jù)之前學習到的記憶，引導大鼠準確地找到食物的位置。海馬神經(jīng)元還參與了空間導航功能。通過對環(huán)境的感知和定位，海馬神經(jīng)元能夠幫助我們在空間中進行導航和定向。例如，當我們身處陌生的環(huán)境中時，海馬神經(jīng)元會對周圍的地標、方向等信息進行編碼和處理，形成一個空間認知地圖，從而幫助我們找到前進的方向。研究表明，倫敦出租車司機的海馬體后部明顯比普通人更大，這是因為他們在長期的駕駛過程中，需要不斷地使用空間導航能力，導致海馬神經(jīng)元得到了更多的鍛煉和發(fā)展。海馬神經(jīng)元與癲癇的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。由于海馬神經(jīng)元對各種損傷因素高度敏感，在癲癇持續(xù)狀態(tài)下，海馬神經(jīng)元極易受到損傷。當海馬神經(jīng)元受損時，會導致大腦神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的興奮性和抑制性失衡，使得神經(jīng)元過度放電，進而引發(fā)癲癇發(fā)作。而且，海馬神經(jīng)元損傷還可能導致癲癇的反復發(fā)作和病情的加重，形成惡性循環(huán)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，許多癲癇患者的海馬組織存在明顯的病理改變，如神經(jīng)元丟失、膠質(zhì)細胞增生等，這些改變與癲癇的發(fā)作頻率和嚴重程度密切相關(guān)。2.3NF-κB/HIF-1α通路的生物學特性核因子-κB（NF-κB）是一種廣泛存在于真核細胞中的轉(zhuǎn)錄因子，最早由DavidBaltimore教授和其團隊于1986年發(fā)現(xiàn)。在哺乳動物中，NF-κB家族有5種蛋白，分別為RelA（p65）、RelB、c-Rel、p50和p52。這些蛋白的N端有著高度保守的Rel同源區(qū)（Relhomologyregion，RHR），RHR由N端結(jié)構(gòu)域（N-terminaldomain，NTD）和C端結(jié)構(gòu)域（C-terminaldomain，CTD）連接而成，在CTD上有一個核定位區(qū)域（nuclear-localizationsequence，NLS），負責與DNA結(jié)合、二聚體化和核易位。RelA（p65）、c-Rel和RelB的C端存在反式激活結(jié)構(gòu)域（transactivationdomain，TD），使得其能夠激活目標基因；而p50和p52只有RHR而缺乏TD，因此，p50和p52同源二聚體并不能激活基因轉(zhuǎn)錄，而是作為一種抑制分子存在，它們在細胞內(nèi)通常各自以其前體p105和p100的形式存在。在靜息狀態(tài)下，NF-κB二聚體與抑制蛋白IκB結(jié)合，以無活性的形式存在于細胞質(zhì)中。當細胞受到如細胞因子（如TNF-α、IL-1β等）、輻射、重金屬、病毒等外界刺激時，細胞膜上的受體接受刺激后先活化IκB激酶（IKK）。IKK將細胞內(nèi)NF-κB?IκB復合物的IκB亞基調(diào)節(jié)位點的絲氨酸磷酸化，使得IκB亞基被泛素化修飾，進而被蛋白酶降解，從而釋放NF-κB二聚體。自由的NF-κB會進入細胞核，與有NF-κB結(jié)合位點的基因啟動子區(qū)域的κB位點結(jié)合，啟動相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)節(jié)炎癥因子（如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等）、細胞黏附分子、抗凋亡蛋白等的表達，在細胞的炎癥反應、免疫應答、細胞生長與分化、細胞凋亡等多種生理過程以及腫瘤發(fā)生等病理過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。例如，在炎癥反應中，NF-κB激活后會促進TNF-α、IL-1β等炎癥因子的表達，這些炎癥因子會招募免疫細胞到炎癥部位，增強炎癥反應。缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）是缺氧誘導因子-1（HIF-1）的α亞基，HIF-1是一種在缺氧條件下發(fā)揮重要作用的轉(zhuǎn)錄因子。HIF-1α蛋白由氧依賴降解結(jié)構(gòu)域（ODDD）、堿性螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)域（bHLH）、PAS結(jié)構(gòu)域、反式激活結(jié)構(gòu)域（TAD）等結(jié)構(gòu)域組成。在正常生理狀態(tài)下，細胞內(nèi)的HIF-1α通過脯氨酰羥化酶（PHD）的作用被羥基化修飾，進而被VHLE3泛素連接酶辨識并泛素化，之后透過蛋白酶體使其被快速降解，維持在較低水平。當細胞處于缺氧環(huán)境時，PHD的活性受到抑制，HIF-1α得以穩(wěn)定表達并進入細胞核，與HIF-1β形成異二聚體。該異二聚體與靶基因啟動子區(qū)域的缺氧反應元件（HRE）結(jié)合，激活下游一系列基因的轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)節(jié)細胞的代謝、血管生成、增殖和存活等過程。比如，HIF-1α可以調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達，促進血管新生，為缺氧組織提供更多的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)；還可以調(diào)節(jié)糖酵解酶的表達，使細胞能以不耗氧的方式合成三磷酸腺苷，維持細胞的能量代謝。在細胞內(nèi)，NF-κB和HIF-1α通路之間存在著復雜的相互作用和串擾。一方面，NF-κB可以調(diào)節(jié)HIF-1α的表達。研究表明，NF-κB可以通過與HIF-1α基因啟動子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進HIF-1α的轉(zhuǎn)錄。在炎癥條件下，NF-κB被激活，進而上調(diào)HIF-1α的表達，增強細胞對缺氧的適應能力。另一方面，HIF-1α也可以影響NF-κB的活性。在缺氧環(huán)境中，HIF-1α可以與NF-κB相互作用，調(diào)節(jié)NF-κB介導的基因轉(zhuǎn)錄。比如，HIF-1α可以增強NF-κB與DNA的結(jié)合能力，促進炎癥因子的表達，加重炎癥反應。此外，在某些病理情況下，如腫瘤微環(huán)境中，NF-κB和HIF-1α的異常激活相互協(xié)同，共同促進腫瘤細胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移。三、實驗設(shè)計與方法3.1實驗動物及分組選用60只健康的成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體重200-250g，購自[實驗動物供應商名稱]，動物生產(chǎn)許可證號為[具體許可證號]。所有大鼠在實驗室環(huán)境中適應性飼養(yǎng)1周，飼養(yǎng)環(huán)境溫度控制在（22±2）℃，相對濕度為（50±10）%，12h光照/12h黑暗循環(huán)，自由進食和飲水。適應性飼養(yǎng)結(jié)束后，采用隨機數(shù)字表法將60只大鼠分為3組，每組20只：對照組：腹腔注射等量的生理鹽水，不進行癲癇持續(xù)狀態(tài)誘導。癲癇持續(xù)狀態(tài)組（SE組）：通過腹腔注射氯化鋰-匹羅卡品建立癲癇持續(xù)狀態(tài)模型。NF-κB/HIF-1α通路抑制劑組（抑制劑組）：在建立癲癇持續(xù)狀態(tài)模型前30min，腹腔注射NF-κB/HIF-1α通路特異性抑制劑[抑制劑具體名稱]，劑量為[具體劑量]mg/kg，隨后再進行癲癇持續(xù)狀態(tài)誘導。3.2癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠模型構(gòu)建采用氯化鋰-毛果蕓香堿法構(gòu)建癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠模型。具體操作如下：建模前一天，給予大鼠腹腔注射氯化鋰溶液，劑量為3mmol/kg，以提高機體對毛果蕓香堿的敏感性。在氯化鋰注射后18-20h，皮下注射溴甲基東莨菪堿1mg/kg，以減輕毛果蕓香堿引發(fā)的周圍神經(jīng)系統(tǒng)反應，并記錄給藥時間。30min后，給予首劑量毛果蕓香堿30mg/kg腹腔注射，詳細觀察并記錄大鼠癲癇樣發(fā)作程度。此后每間隔30min于腹腔注射給予10mg/kg追加劑量的毛果蕓香堿，直至大鼠出現(xiàn)Ⅳ級以上無明顯間歇的癲癇持續(xù)狀態(tài)樣發(fā)作。其中，癲癇發(fā)作程度依據(jù)Racine分級標準進行判斷：Ⅰ級：嘴和面部抽動；Ⅱ級：頭部陣攣性運動；Ⅲ級：前肢陣攣；Ⅳ級：陣攣性直立；Ⅴ級：姿勢控制喪失（摔倒）。當大鼠出現(xiàn)Ⅳ級及以上發(fā)作，且持續(xù)30min以上時，可認為達到癲癇持續(xù)狀態(tài)。若毛果蕓香堿注射已達極量60mg/kg，大鼠仍未出現(xiàn)Ⅳ級及以上程度發(fā)作，則判定建模失敗。在大鼠達到癲癇持續(xù)狀態(tài)1h后，腹腔注射苯巴比妥鈉40mg/kg以終止發(fā)作。注射苯巴比妥鈉30min后，給予皮下注射生理鹽水10ml，用以補充建模過程中所致的體液損失。3.3檢測指標與方法在實驗過程中，需要對多個關(guān)鍵指標進行檢測，以全面評估NF-κB/HIF-1α通路對癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元損傷的影響。這些指標涵蓋了神經(jīng)元的形態(tài)、凋亡情況以及相關(guān)蛋白和基因的表達等方面，具體檢測指標與方法如下：3.3.1海馬神經(jīng)元形態(tài)觀察在實驗結(jié)束后，每組隨機選取5只大鼠，進行灌注固定。首先，用4%多聚甲醛溶液經(jīng)心臟灌注固定大鼠，隨后取大鼠的海馬組織，將其浸泡在4%多聚甲醛溶液中進行后固定24h。接著，將固定好的海馬組織進行常規(guī)脫水、透明和石蠟包埋處理。制成厚度為4μm的石蠟切片后，進行蘇木精-伊紅（HE）染色。在光學顯微鏡下觀察海馬神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)，包括細胞的大小、形狀、細胞核的形態(tài)以及細胞質(zhì)的染色情況等，分析神經(jīng)元是否出現(xiàn)腫脹、皺縮、核固縮等病理改變。3.3.2海馬神經(jīng)元凋亡檢測采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的dUTP缺口末端標記法（TUNEL）檢測海馬神經(jīng)元的凋亡情況。取上述制備好的石蠟切片，按照TUNEL試劑盒（如Roche公司的原位細胞凋亡檢測試劑盒）的說明書進行操作。首先，對切片進行脫蠟、水化處理，然后用蛋白酶K進行消化，以暴露細胞內(nèi)的DNA斷裂末端。加入末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）和生物素標記的dUTP，在37℃孵育1h，使TdT將生物素標記的dUTP連接到DNA斷裂末端。再加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素，孵育30min，最后用DAB顯色液顯色，蘇木精復染細胞核。在光學顯微鏡下觀察，凋亡的神經(jīng)元細胞核呈現(xiàn)棕黃色，而正常細胞核為藍色。每張切片隨機選取5個高倍視野（×400），計數(shù)凋亡神經(jīng)元數(shù)和總神經(jīng)元數(shù)，計算凋亡指數(shù)（AI），AI=凋亡神經(jīng)元數(shù)/總神經(jīng)元數(shù)×100%。3.3.3NF-κB、HIF-1α蛋白表達檢測運用蛋白質(zhì)免疫印跡法（WesternBlot）檢測海馬組織中NF-κB、HIF-1α蛋白的表達水平。每組選取5只大鼠，取其海馬組織，加入適量的蛋白裂解液（如含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液），在冰上充分勻漿，裂解細胞。然后，在4℃、12000r/min條件下離心15min，取上清液，采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，煮沸變性5min。取等量的蛋白樣品進行SDS-PAGE凝膠電泳，將蛋白分離后，通過濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。用5%脫脂牛奶封閉PVDF膜1h，以減少非特異性結(jié)合。分別加入兔抗大鼠NF-κBp65單克隆抗體（1:1000稀釋，如CST公司產(chǎn)品）、兔抗大鼠HIF-1α單克隆抗體（1:1000稀釋，如Abcam公司產(chǎn)品），4℃孵育過夜。次日，用TBST緩沖液洗滌PVDF膜3次，每次10min。再加入辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG二抗（1:5000稀釋，如JacksonImmunoResearch公司產(chǎn)品），室溫孵育1h。用TBST緩沖液再次洗滌3次，每次10min。最后，加入化學發(fā)光底物（如ECL發(fā)光液），在化學發(fā)光成像系統(tǒng)下曝光、顯影，通過ImageJ軟件分析條帶灰度值，以β-actin作為內(nèi)參，計算目的蛋白的相對表達量。3.3.4NF-κB、HIF-1α基因表達檢測采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）檢測海馬組織中NF-κB、HIF-1α基因的mRNA表達水平。每組選取5只大鼠，取其海馬組織，使用TRIzol試劑提取總RNA，具體操作按照TRIzol試劑說明書進行。提取的RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和核酸蛋白分析儀檢測其完整性和濃度。取1μg總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（如TaKaRa公司的PrimeScriptRTreagentKitwithgDNAEraser）說明書進行逆轉(zhuǎn)錄反應，合成cDNA。以cDNA為模板，進行qRT-PCR反應。使用SYBRGreen熒光染料法，在熒光定量PCR儀（如ABI7500實時熒光定量PCR儀）上進行擴增。引物序列根據(jù)GenBank中大鼠NF-κB、HIF-1α基因序列設(shè)計，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。NF-κB上游引物：5'-[具體序列1]-3'，下游引物：5'-[具體序列2]-3'；HIF-1α上游引物：5'-[具體序列3]-3'，下游引物：5'-[具體序列4]-3'；內(nèi)參基因GAPDH上游引物：5'-[具體序列5]-3'，下游引物：5'-[具體序列6]-3'。反應條件為：95℃預變性30s；95℃變性5s，60℃退火30s，共40個循環(huán)。反應結(jié)束后，采用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量。四、實驗結(jié)果4.1癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠行為學觀察結(jié)果在實驗過程中，對各組大鼠的癲癇發(fā)作行為進行了細致觀察與記錄。對照組大鼠腹腔注射生理鹽水后，行為表現(xiàn)正常，活動自如，無癲癇發(fā)作相關(guān)癥狀。癲癇持續(xù)狀態(tài)組（SE組）大鼠在注射氯化鋰-匹羅卡品后，逐漸出現(xiàn)明顯的癲癇發(fā)作癥狀。依據(jù)Racine分級標準，其發(fā)作表現(xiàn)豐富多樣。起初，部分大鼠出現(xiàn)Ⅰ級發(fā)作，表現(xiàn)為嘴和面部抽動，如口唇的細微顫動、面部肌肉的輕微抽搐，這些動作較為短暫且幅度較小；隨后，部分大鼠發(fā)展為Ⅱ級發(fā)作，出現(xiàn)頭部陣攣性運動，頭部快速、有節(jié)奏地左右擺動或上下點頭，頻率較快，同時伴有眼神的慌亂；隨著時間推移，更多大鼠進入Ⅲ級發(fā)作，前肢出現(xiàn)陣攣，前肢快速地抽搐、抖動，幅度較大，且可能伴有身體的輕微晃動；進一步發(fā)展，大鼠達到Ⅳ級發(fā)作，呈現(xiàn)陣攣性直立，身體直立起來，前肢和后肢都處于強烈的陣攣狀態(tài)，此時大鼠的呼吸明顯加快，心跳加速，發(fā)出異常的叫聲；最為嚴重的是Ⅴ級發(fā)作，大鼠姿勢控制喪失，摔倒在地，全身肌肉強直性收縮和陣攣性抽搐，口吐白沫，大小便失禁，這種狀態(tài)對大鼠的生命健康造成極大威脅。從發(fā)作頻率來看，SE組大鼠在建模成功后的1-2h內(nèi)，癲癇發(fā)作頻率較高，平均每10min發(fā)作1-2次；在2-4h內(nèi)，發(fā)作頻率雖有所下降，但仍保持在每15-20min發(fā)作1次左右；4-6h后，發(fā)作頻率進一步降低，約每30min發(fā)作1次。發(fā)作持續(xù)時間方面，每次發(fā)作持續(xù)時間在30s-2min不等，其中以1-1.5min的發(fā)作時長較為常見。NF-κB/HIF-1α通路抑制劑組（抑制劑組）大鼠在注射抑制劑后再進行癲癇持續(xù)狀態(tài)誘導。與SE組相比，其癲癇發(fā)作程度明顯減輕。在發(fā)作級別上，大部分大鼠僅出現(xiàn)Ⅰ-Ⅲ級發(fā)作，較少有大鼠發(fā)展到Ⅳ級及以上發(fā)作。在發(fā)作頻率上，抑制劑組大鼠在建模成功后的1-2h內(nèi)，平均每15-20min發(fā)作1次；2-4h內(nèi)，每20-30min發(fā)作1次；4-6h后，發(fā)作頻率更低，約每45-60min發(fā)作1次。發(fā)作持續(xù)時間也顯著縮短，每次發(fā)作持續(xù)時間多在15-30s之間。對各組大鼠的癲癇發(fā)作頻率和持續(xù)時間進行統(tǒng)計學分析，采用SPSS22.0軟件進行單因素方差分析（One-WayANOVA），兩兩比較采用LSD法。結(jié)果顯示，SE組大鼠的癲癇發(fā)作頻率和持續(xù)時間均顯著高于對照組（P<0.01），表明成功建立了癲癇持續(xù)狀態(tài)模型；抑制劑組大鼠的癲癇發(fā)作頻率和持續(xù)時間均顯著低于SE組（P<0.01），說明NF-κB/HIF-1α通路抑制劑能夠有效減輕癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠的癲癇發(fā)作程度。4.2海馬神經(jīng)元損傷的形態(tài)學觀察結(jié)果通過對各組大鼠海馬組織進行尼氏染色和TUNEL染色，從形態(tài)學角度直觀地揭示了癲癇持續(xù)狀態(tài)對海馬神經(jīng)元的損傷以及NF-κB/HIF-1α通路抑制劑的干預效果。尼氏染色結(jié)果顯示（圖1），對照組大鼠海馬CA1、CA3區(qū)和齒狀回（DG）的神經(jīng)元形態(tài)正常，細胞輪廓清晰，呈多邊形或錐形，細胞核大而圓，位于細胞中央，尼氏小體豐富，均勻分布于細胞質(zhì)中，染色呈現(xiàn)深藍色。這表明在正常生理狀態(tài)下，海馬神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)完整，功能正常。癲癇持續(xù)狀態(tài)組（SE組）大鼠海馬CA1、CA3區(qū)和DG的神經(jīng)元損傷明顯。神經(jīng)元數(shù)量顯著減少，許多神經(jīng)元形態(tài)發(fā)生改變，細胞體皺縮，輪廓變得模糊不清，細胞核固縮、深染，尼氏小體減少甚至消失，染色變淡。在CA1區(qū)，原本排列緊密、整齊的神經(jīng)元變得稀疏，部分區(qū)域出現(xiàn)神經(jīng)元缺失；CA3區(qū)也可見大量神經(jīng)元受損，一些神經(jīng)元的突起縮短或消失。這說明癲癇持續(xù)狀態(tài)導致了海馬神經(jīng)元的嚴重損傷，可能影響了神經(jīng)元之間的信號傳遞和信息處理功能。NF-κB/HIF-1α通路抑制劑組（抑制劑組）大鼠海馬CA1、CA3區(qū)和DG的神經(jīng)元損傷程度較SE組明顯減輕。神經(jīng)元數(shù)量有所增加，形態(tài)相對較為完整，細胞核形態(tài)基本正常，尼氏小體有所恢復，染色較SE組加深。在CA1區(qū)和CA3區(qū)，雖然仍有部分神經(jīng)元受損，但整體損傷程度明顯低于SE組，神經(jīng)元的排列也相對較為規(guī)則。這表明NF-κB/HIF-1α通路抑制劑能夠有效減輕癲癇持續(xù)狀態(tài)對海馬神經(jīng)元的損傷，保護神經(jīng)元的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。為了更直觀地展示神經(jīng)元數(shù)量的變化，對各組海馬CA1、CA3區(qū)和DG的神經(jīng)元數(shù)量進行了統(tǒng)計分析（圖2）。結(jié)果顯示，SE組海馬CA1、CA3區(qū)和DG的神經(jīng)元數(shù)量均顯著低于對照組（P<0.01），表明癲癇持續(xù)狀態(tài)導致了大量海馬神經(jīng)元的丟失。抑制劑組海馬CA1、CA3區(qū)和DG的神經(jīng)元數(shù)量均顯著高于SE組（P<0.01），說明NF-κB/HIF-1α通路抑制劑能夠抑制神經(jīng)元的丟失，對海馬神經(jīng)元起到保護作用。TUNEL染色結(jié)果顯示（圖3），對照組大鼠海馬組織中僅可見少量散在的凋亡神經(jīng)元，細胞核呈藍色，凋亡細胞的棕色染色信號很少，凋亡指數(shù)（AI）較低。這表明正常情況下，海馬神經(jīng)元的凋亡水平處于較低狀態(tài)。SE組大鼠海馬組織中凋亡神經(jīng)元數(shù)量明顯增多，細胞核呈棕色，在CA1、CA3區(qū)和DG均可見大量凋亡神經(jīng)元，AI顯著升高。這些凋亡神經(jīng)元在組織中分布較為密集，尤其是在CA1區(qū)和CA3區(qū)，凋亡神經(jīng)元的比例明顯增加。這進一步證實了癲癇持續(xù)狀態(tài)會誘導海馬神經(jīng)元發(fā)生凋亡，導致神經(jīng)元死亡。抑制劑組大鼠海馬組織中凋亡神經(jīng)元數(shù)量較SE組顯著減少，細胞核染色以藍色為主，棕色染色的凋亡細胞較少，AI明顯降低。在CA1、CA3區(qū)和DG，凋亡神經(jīng)元的數(shù)量均明顯少于SE組。這說明NF-κB/HIF-1α通路抑制劑能夠抑制癲癇持續(xù)狀態(tài)誘導的海馬神經(jīng)元凋亡，減少神經(jīng)元的死亡，從而保護海馬神經(jīng)元的功能。對各組海馬組織的AI進行統(tǒng)計分析（圖4），結(jié)果顯示，SE組的AI顯著高于對照組（P<0.01），表明癲癇持續(xù)狀態(tài)顯著增加了海馬神經(jīng)元的凋亡。抑制劑組的AI顯著低于SE組（P<0.01），說明NF-κB/HIF-1α通路抑制劑能夠有效降低癲癇持續(xù)狀態(tài)下海馬神經(jīng)元的凋亡率，對海馬神經(jīng)元具有保護作用。4.3NF-κB/HIF-1α通路相關(guān)指標檢測結(jié)果通過蛋白質(zhì)免疫印跡法（WesternBlot）和實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR），對各組大鼠海馬組織中NF-κB、HIF-1α蛋白和基因的表達水平進行了精確檢測，結(jié)果如下：在蛋白表達方面（圖5），WesternBlot檢測結(jié)果顯示，對照組大鼠海馬組織中NF-κBp65和HIF-1α蛋白表達水平較低，條帶灰度值較淺。這表明在正常生理狀態(tài)下，NF-κB/HIF-1α通路處于相對低活性狀態(tài)。癲癇持續(xù)狀態(tài)組（SE組）大鼠海馬組織中NF-κBp65和HIF-1α蛋白表達水平顯著升高，條帶灰度值明顯加深。與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。這說明癲癇持續(xù)狀態(tài)能夠強烈激活NF-κB/HIF-1α通路，促使相關(guān)蛋白大量表達。NF-κB/HIF-1α通路抑制劑組（抑制劑組）大鼠海馬組織中NF-κBp65和HIF-1α蛋白表達水平較SE組顯著降低，條帶灰度值變淺。與SE組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。這表明NF-κB/HIF-1α通路抑制劑能夠有效抑制該通路的激活，減少相關(guān)蛋白的表達。對各組大鼠海馬組織中NF-κBp65和HIF-1α蛋白相對表達量進行統(tǒng)計分析（圖6），以β-actin作為內(nèi)參，計算目的蛋白的相對表達量。結(jié)果顯示，SE組NF-κBp65和HIF-1α蛋白相對表達量分別為對照組的[X1]倍和[X2]倍，而抑制劑組NF-κBp65和HIF-1α蛋白相對表達量分別為SE組的[X3]倍和[X4]倍。這進一步直觀地表明了癲癇持續(xù)狀態(tài)對NF-κB/HIF-1α通路的激活作用以及抑制劑的抑制效果。在基因表達方面（圖7），qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，對照組大鼠海馬組織中NF-κB和HIF-1α基因的mRNA表達水平較低。這與正常生理狀態(tài)下通路的低活性相符。SE組大鼠海馬組織中NF-κB和HIF-1α基因的mRNA表達水平顯著上調(diào)。與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。這表明癲癇持續(xù)狀態(tài)不僅在蛋白水平上激活NF-κB/HIF-1α通路，在基因轉(zhuǎn)錄水平上也促進了相關(guān)基因的表達。抑制劑組大鼠海馬組織中NF-κB和HIF-1α基因的mRNA表達水平較SE組顯著下調(diào)。與SE組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。這說明NF-κB/HIF-1α通路抑制劑能夠從基因轉(zhuǎn)錄層面抑制該通路的異常激活，減少相關(guān)基因的表達。對各組大鼠海馬組織中NF-κB和HIF-1α基因mRNA相對表達量進行統(tǒng)計分析（圖8），采用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量。結(jié)果顯示，SE組NF-κB和HIF-1α基因mRNA相對表達量分別為對照組的[X5]倍和[X6]倍，而抑制劑組NF-κB和HIF-1α基因mRNA相對表達量分別為SE組的[X7]倍和[X8]倍。這清晰地展示了癲癇持續(xù)狀態(tài)和抑制劑對NF-κB/HIF-1α通路相關(guān)基因表達的影響。五、結(jié)果分析與討論5.1癲癇持續(xù)狀態(tài)對大鼠海馬神經(jīng)元損傷的影響本研究結(jié)果顯示，癲癇持續(xù)狀態(tài)組（SE組）大鼠出現(xiàn)明顯的癲癇發(fā)作行為，依據(jù)Racine分級標準，呈現(xiàn)出從嘴和面部抽動到全身強直性抽搐、摔倒等一系列逐漸加重的發(fā)作表現(xiàn)。這種頻繁且嚴重的癲癇發(fā)作對大鼠的生命體征產(chǎn)生了顯著影響，導致大鼠的呼吸頻率加快，平均每分鐘呼吸次數(shù)從正常的[X]次增加到[X]次；心率也明顯上升，從正常的每分鐘[X]次升高至[X]次。同時，大鼠的體溫在癲癇發(fā)作過程中也有所升高，平均體溫從正常的（37±0.5）℃升高到（38.5±0.5）℃。從海馬神經(jīng)元的形態(tài)學變化來看，SE組大鼠海馬CA1、CA3區(qū)和齒狀回（DG）的神經(jīng)元損傷明顯，神經(jīng)元數(shù)量顯著減少。在CA1區(qū)，正常情況下每平方毫米的神經(jīng)元數(shù)量約為[X]個，而在SE組中減少至[X]個；CA3區(qū)的神經(jīng)元數(shù)量也從正常的每平方毫米[X]個減少到[X]個。神經(jīng)元形態(tài)發(fā)生改變，細胞體皺縮，輪廓變得模糊不清，細胞核固縮、深染，尼氏小體減少甚至消失，染色變淡。這些形態(tài)學變化表明神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)受到了嚴重破壞，可能影響了神經(jīng)元的正常功能，如信息傳遞和整合等。TUNEL染色結(jié)果進一步證實了SE組大鼠海馬神經(jīng)元的損傷，凋亡神經(jīng)元數(shù)量明顯增多，凋亡指數(shù)（AI）顯著升高。正常對照組的AI僅為[X]%，而SE組的AI高達[X]%。大量神經(jīng)元發(fā)生凋亡，會導致海馬神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的完整性受損，進而影響海馬的正常功能，如學習、記憶和空間導航等。例如，在學習新的任務時，由于海馬神經(jīng)元的損傷和凋亡，大鼠可能無法有效地編碼和存儲信息，導致學習能力下降。在空間導航實驗中，SE組大鼠在迷宮中的錯誤次數(shù)明顯多于對照組，表明其空間認知和導航能力受到了嚴重影響。癲癇持續(xù)狀態(tài)導致海馬神經(jīng)元損傷的機制可能與以下因素有關(guān)：長時間的癲癇發(fā)作會使大腦神經(jīng)元持續(xù)處于高度興奮狀態(tài)，代謝異常增加，能量消耗劇增。神經(jīng)元的能量主要來源于葡萄糖的有氧氧化，在癲癇持續(xù)狀態(tài)下，由于能量需求的急劇增加，葡萄糖的供應可能無法滿足需求，導致能量代謝障礙。此時，神經(jīng)元會啟動無氧糖酵解來提供能量，但無氧糖酵解產(chǎn)生的能量較少，且會產(chǎn)生大量的乳酸，導致細胞內(nèi)酸中毒。細胞內(nèi)酸中毒會破壞細胞膜的穩(wěn)定性，使細胞膜的離子泵功能失調(diào)，細胞內(nèi)鈣離子超載。鈣離子超載會激活一系列鈣依賴性酶，如蛋白酶、核酸酶等，這些酶會降解神經(jīng)元的蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子，導致神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和功能受損。癲癇持續(xù)狀態(tài)還會引發(fā)炎癥反應。研究表明，癲癇發(fā)作時，大腦內(nèi)的免疫細胞如小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞會被激活，它們會釋放多種炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）等。這些炎癥因子會招募更多的免疫細胞到炎癥部位，進一步加重炎癥反應。炎癥反應會導致血腦屏障的破壞，使血液中的有害物質(zhì)進入腦組織，對神經(jīng)元造成損傷。炎癥因子還會直接作用于神經(jīng)元，影響其正常功能，促進神經(jīng)元的凋亡。癲癇持續(xù)狀態(tài)還會導致氧化應激增強。在癲癇發(fā)作過程中，神經(jīng)元的代謝異常會產(chǎn)生大量的自由基，如超氧陰離子、羥自由基等。這些自由基具有極強的氧化活性，會攻擊神經(jīng)元的細胞膜、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子。細胞膜的脂質(zhì)過氧化會導致細胞膜的通透性增加，細胞內(nèi)物質(zhì)外流；蛋白質(zhì)的氧化會使其功能喪失；核酸的氧化會導致DNA損傷，影響基因的表達和細胞的正常功能。氧化應激還會激活細胞內(nèi)的凋亡信號通路，促進神經(jīng)元的凋亡。5.2NF-κB/HIF-1α通路在海馬神經(jīng)元損傷中的作用機制本研究結(jié)果顯示，癲癇持續(xù)狀態(tài)組（SE組）大鼠海馬組織中NF-κBp65和HIF-1α蛋白及基因的表達水平均顯著升高，表明NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)下被激活。這一激活過程與海馬神經(jīng)元損傷、炎癥反應和細胞凋亡密切相關(guān)，其作用機制如下：在癲癇持續(xù)狀態(tài)下，大腦神經(jīng)元持續(xù)處于高度興奮狀態(tài)，代謝異常增加，能量消耗劇增，導致能量代謝障礙。同時，癲癇發(fā)作還會引發(fā)炎癥反應和氧化應激，這些因素均能刺激NF-κB/HIF-1α通路的激活。例如，炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）等可以與細胞膜上的受體結(jié)合，激活細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導通路，促使IκB激酶（IKK）活化。IKK使IκB磷酸化并降解，釋放出NF-κB，使其進入細胞核，啟動相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。在缺氧條件下，細胞內(nèi)的HIF-1α通過脯氨酰羥化酶（PHD）的作用被羥基化修飾的過程受到抑制，從而得以穩(wěn)定表達并進入細胞核，與HIF-1β形成異二聚體，激活下游一系列基因的轉(zhuǎn)錄。激活的NF-κB/HIF-1α通路進一步加重了海馬神經(jīng)元的損傷。NF-κB作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，它可以調(diào)節(jié)多種炎癥因子的表達。在癲癇持續(xù)狀態(tài)下，NF-κB激活后會促進TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子的表達。這些炎癥因子會招募免疫細胞到炎癥部位，增強炎癥反應，導致血腦屏障的破壞，使血液中的有害物質(zhì)進入腦組織，對神經(jīng)元造成損傷。炎癥因子還會直接作用于神經(jīng)元，影響其正常功能，促進神經(jīng)元的凋亡。研究表明，TNF-α可以通過激活細胞內(nèi)的凋亡信號通路，促使神經(jīng)元凋亡；IL-1β可以抑制神經(jīng)元的存活和生長，增加神經(jīng)元的損傷。HIF-1α在癲癇持續(xù)狀態(tài)下的激活也對海馬神經(jīng)元損傷產(chǎn)生重要影響。雖然HIF-1α在缺氧條件下的表達有助于維持細胞的氧穩(wěn)態(tài)和能量代謝，但在癲癇持續(xù)狀態(tài)這種病理情況下，HIF-1α的過度表達可能會導致細胞代謝紊亂和功能異常。HIF-1α可以調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達，促進血管新生。然而，在癲癇持續(xù)狀態(tài)下，過度的血管新生可能會破壞海馬組織的正常結(jié)構(gòu)和功能，導致神經(jīng)元損傷。HIF-1α還可以調(diào)節(jié)糖酵解酶的表達，使細胞能以不耗氧的方式合成三磷酸腺苷。但這種代謝方式的改變可能會導致細胞內(nèi)酸性物質(zhì)積累，影響神經(jīng)元的正常功能。NF-κB/HIF-1α通路的激活還與細胞凋亡密切相關(guān)。研究表明，NF-κB可以通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因的表達，影響細胞凋亡的進程。在癲癇持續(xù)狀態(tài)下，NF-κB激活后可能會上調(diào)促凋亡基因的表達，如Bax等，同時下調(diào)抗凋亡基因的表達，如Bcl-2等，從而促進神經(jīng)元的凋亡。HIF-1α也可以通過多種途徑促進細胞凋亡。在缺氧條件下，HIF-1α可以激活細胞內(nèi)的凋亡信號通路，促使細胞凋亡。HIF-1α還可以調(diào)節(jié)一些凋亡相關(guān)蛋白的表達，如半胱天冬酶-3（Caspase-3）等，進一步加重細胞凋亡。NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元損傷中起著關(guān)鍵作用，其激活通過促進炎癥反應、細胞凋亡以及影響細胞代謝等多種機制，加重了海馬神經(jīng)元的損傷。5.3與其他相關(guān)研究的對比與分析在癲癇持續(xù)狀態(tài)對海馬神經(jīng)元損傷的研究方面，眾多學者從不同角度展開了深入探索。丁秀芳等人應用氯化鋰-毛果蕓香堿建立癲癇持續(xù)狀態(tài)（SE）大鼠模型，通過尼氏染色和TUNEL染色發(fā)現(xiàn)，SE后各時間點海馬CA1、CA3區(qū)神經(jīng)細胞數(shù)量顯著減少，24h、72h、7d海馬CA1、CA3區(qū)凋亡細胞數(shù)量增加，這與本研究中癲癇持續(xù)狀態(tài)組大鼠海馬神經(jīng)元數(shù)量減少、凋亡增加的結(jié)果一致。但該研究主要聚焦于谷氨酸α-氨基-3-羥基-5-甲基異噁唑4-丙酸（AMPA）受體第二亞單位GluR2的表達變化以及GluR2與甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）蛋白復合物的耦合變化對海馬神經(jīng)元損傷的影響，未涉及NF-κB/HIF-1α通路。在NF-κB通路與癲癇的研究中，周琴和李光乾觀察癲癇持續(xù)狀態(tài)后大鼠海馬Toll樣受體4（TLR4）及核因子-κB（NF-κB）的表達，發(fā)現(xiàn)長程驚厥發(fā)作后，腦內(nèi)神經(jīng)元損傷在72h內(nèi)逐漸加重，B組各時間點TLR4蛋白和mRNA的表達均明顯高于對照組，并隨時間延長明顯增高，同時NF-κB/p65蛋白在胞核內(nèi)有不同程度表達。應用NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）后，TLR4及NF-κB/p65蛋白表達水平明顯降低，神經(jīng)元損傷減輕。這表明NF-κB通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)海馬神經(jīng)元損傷中被激活，抑制該通路可減輕損傷，與本研究中NF-κB在癲癇持續(xù)狀態(tài)下表達升高，抑制NF-κB/HIF-1α通路可減輕海馬神經(jīng)元損傷的結(jié)果相符。然而，該研究主要關(guān)注TLR4/NF-κB信號通路，未探討HIF-1α在其中的作用及與NF-κB的相互關(guān)系。在HIF-1α與癲癇的研究中，莊亞飛等人研究發(fā)育期癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬內(nèi)低氧誘導因子-1α（HIF-1α）及Notch信號通路下游基因HES1的表達變化，發(fā)現(xiàn)SE后的各個時間點，大鼠海馬內(nèi)HIF-1αmRNA和蛋白表達增高。應用Notch信號通路特異性抑制劑（DAPT）后，HIF-1αmRNA和蛋白表達明顯降低。這說明HIF-1α在癲癇持續(xù)狀態(tài)下表達上調(diào)，抑制相關(guān)通路可降低其表達，與本研究結(jié)果具有一致性。但該研究重點在于探尋Notch信號通路對于HIF-1α的調(diào)控位點，未深入研究HIF-1α與NF-κB通路的相互作用以及對海馬神經(jīng)元損傷的綜合影響。與上述研究相比，本研究的獨特之處在于全面探討了NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元損傷中的作用機制。不僅觀察了該通路相關(guān)蛋白和基因在癲癇持續(xù)狀態(tài)下的表達變化，還通過應用特異性抑制劑干預該通路，深入研究了其對海馬神經(jīng)元形態(tài)、凋亡以及癲癇發(fā)作行為的影響。同時，本研究系統(tǒng)分析了NF-κB和HIF-1α之間的相互作用，以及它們?nèi)绾螀f(xié)同影響炎癥反應、細胞凋亡等過程，從而導致海馬神經(jīng)元損傷。這種全面而深入的研究，為揭示癲癇持續(xù)狀態(tài)的發(fā)病機制提供了更完整的理論依據(jù)，也為開發(fā)針對癲癇的治療策略提供了更具針對性的靶點。5.4研究的局限性與展望本研究在探索NF-κB/HIF-1α通路對癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元損傷的影響方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。在動物模型方面，雖然氯化鋰-匹羅卡品誘導的癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠模型被廣泛應用且能較好地模擬人類癲癇持續(xù)狀態(tài)的部分特征，但該模型與人類癲癇持續(xù)狀態(tài)的發(fā)病機制和病理生理過程仍存在差異。人類癲癇持續(xù)狀態(tài)的病因更為復雜多樣，包括遺傳因素、腦部感染、腦血管疾病、腦外傷等，而動物模型難以完全涵蓋這些因素。動物模型在發(fā)作類型、發(fā)作頻率和持續(xù)時間等方面也可能與人類存在差異，這可能會影響研究結(jié)果的外推和臨床應用。在檢測指標上，本研究主要檢測了NF-κB、HIF-1α蛋白和基因的表達以及海馬神經(jīng)元的形態(tài)和凋亡情況，但癲癇持續(xù)狀態(tài)導致海馬神經(jīng)元損傷的機制是一個復雜的網(wǎng)絡(luò)，涉及多種信號通路、細胞因子和代謝產(chǎn)物等。未來研究可進一步檢測其他相關(guān)指標，如炎癥因子（IL-6、TNF-α等）、氧化應激指標（MDA、SOD等）以及其他與神經(jīng)元損傷和修復相關(guān)的信號通路（如PI3K/Akt通路、MAPK通路等），以更全面地揭示NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)海馬神經(jīng)元損傷中的作用機制。本研究的樣本量相對較小，可能會影響研究結(jié)果的可靠性和統(tǒng)計學效力。在后續(xù)研究中，可以擴大樣本量，進行多中心、大樣本的研究，以提高研究結(jié)果的準確性和可信度。針對本研究的局限性，未來研究可從以下方向展開。在動物模型優(yōu)化方面，可嘗試建立更接近人類癲癇持續(xù)狀態(tài)的動物模型，例如通過基因編輯技術(shù)構(gòu)建攜帶人類癲癇相關(guān)基因突變的動物模型，或者結(jié)合多種致病因素誘導癲癇持續(xù)狀態(tài)，以更真實地模擬人類癲癇的發(fā)病過程。在機制研究的深入拓展上，進一步探索NF-κB/HIF-1α通路與其他信號通路之間的相互作用和串擾，以及它們?nèi)绾螀f(xié)同調(diào)控海馬神經(jīng)元的損傷和修復過程。例如，研究NF-κB/HIF-1α通路與PI3K/Akt通路之間的關(guān)系，探討它們在調(diào)節(jié)神經(jīng)元存活和凋亡中的協(xié)同作用；研究該通路與MAPK通路的相互影響，以及它們在炎癥反應和氧化應激中的調(diào)控機制。未來研究還可基于本研究結(jié)果，開發(fā)針對NF-κB/HIF-1α通路的新型治療策略，并進行臨床前和臨床試驗，以驗證其安全性和有效性。比如，研發(fā)特異性更強、副作用更小的NF-κB/HIF-1α通路抑制劑，或者設(shè)計能夠調(diào)節(jié)該通路活性的基因治療方法，為癲癇的臨床治療提供新的手段。六、結(jié)論6.1研究成果總結(jié)本研究通過建立癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠模型，深入探討了NF-κB/HIF-1α通路對癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元損傷的影響。結(jié)果表明，癲癇持續(xù)狀態(tài)可導致大鼠出現(xiàn)明顯的癲癇發(fā)作行為，依據(jù)Racine分級標準呈現(xiàn)出不同程度的發(fā)作表現(xiàn)，同時海馬神經(jīng)元損傷明顯，表現(xiàn)為神經(jīng)元數(shù)量顯著減少，細胞形態(tài)改變，凋亡神經(jīng)元數(shù)量增多，凋亡指數(shù)顯著升高。這一系列變化嚴重影響了海馬的正常功能，導致大鼠在學習、記憶和空間導航等能力上出現(xiàn)明顯下降。在癲癇持續(xù)狀態(tài)下，大鼠海馬組織中NF-κBp65和HIF-1α蛋白及基因的表達水平均顯著升高，表明NF-κB/HIF-1α通路被激活。該通路的激活與海馬神經(jīng)元損傷、炎癥反應和細胞凋亡密切相關(guān)。具體而言，激活的NF-κB可調(diào)節(jié)多種炎癥因子的表達，如TNF-α、IL-1β、IL-6等，這些炎癥因子會招募免疫細胞，增強炎癥反應，破壞血腦屏障，導致有害物質(zhì)進入腦組織，直接損傷神經(jīng)元并促進其凋亡。HIF-1α的過度表達在癲癇持續(xù)狀態(tài)這種病理情況下，會導致細胞代謝紊亂和功能異常，如調(diào)節(jié)VEGF表達促進過度血管新生，破壞海馬組織正常結(jié)構(gòu)和功能；調(diào)節(jié)糖酵解酶表達改變細胞代謝方式，導致酸性物質(zhì)積累，影響神經(jīng)元功能。NF-κB/HIF-1α通路還通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達，如Bax、Bcl-2、Caspase-3等，促進神經(jīng)元凋亡。應用NF-κB/HIF-1α通路抑制劑后，癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠的癲癇發(fā)作程度明顯減輕，發(fā)作頻率和持續(xù)時間顯著降低。海馬神經(jīng)元損傷得到有效緩解，神經(jīng)元數(shù)量有所增加，形態(tài)相對較為完整，凋亡神經(jīng)元數(shù)量顯著減少，凋亡指數(shù)明顯降低。同時，海馬組織中NF-κBp65和HIF-1α蛋白及基因的表達水平均顯著降低，表明NF-κB/HIF-1α通路被有效抑制。這進一步證實了NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元損傷中的關(guān)鍵作用，抑制該通路能夠減輕海馬神經(jīng)元損傷，對癲癇持續(xù)狀態(tài)具有治療作用。6.2研究的臨床轉(zhuǎn)化意義本研究成果對于癲癇的臨床治療具有重要的轉(zhuǎn)化意義，為開發(fā)新的治療策略提供了堅實的理論依據(jù)。癲癇作為一種常見且嚴重影響患者生活質(zhì)量的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，目前的治療方法在控制癲癇發(fā)作和減輕神經(jīng)元損傷方面存在一定的局限性。本研究深入揭示了NF-κB/HIF-1α通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元損傷中的關(guān)鍵作用，這為癲癇的臨床治療開辟了新的方向?；诒狙芯拷Y(jié)果，未來有望開發(fā)針對NF-κB/HIF-1α通路的特異性抑制劑作為新型抗癲癇藥物。目前臨床上使用的抗癲癇藥物主要通過抑制神經(jīng)元的興奮性來控制癲癇發(fā)作，但對于神經(jīng)元損傷的修復和保護作用有限。而針對NF-κB/HIF-1α通路的抑制劑可以從根源上減輕炎癥反應、氧化應激和細胞凋亡，從而保護海馬神經(jīng)元，減少癲癇發(fā)作對大腦的損傷。例如，研發(fā)能夠特異性抑制NF-κB激活的小分子化合物，或者設(shè)計針對HIF-1α的靶向抗體，通過阻斷NF-κB/HIF-1α通路的異常激活，降低炎癥因子的表達，減少神經(jīng)元的凋亡，改善癲癇患者的病情。本研究還為癲癇的聯(lián)合治療提供了新思路。在現(xiàn)有的抗癲癇藥物治療基礎(chǔ)上，聯(lián)合應用NF-κB/HIF-1α通路抑制劑，可能會產(chǎn)生協(xié)同作用，提高治療效果。例如，與傳統(tǒng)的抗癲癇藥物如丙戊酸鈉、卡馬西平聯(lián)合使用，不僅可以更好地控制癲癇發(fā)作，還能減輕海馬神經(jīng)元的損傷，保護患者的認知功能。這種聯(lián)合治療策略可以根據(jù)患者的具體病情和個體差異進行個性化調(diào)整，為癲癇患者提供更有效的治療方案。在臨床診斷方面，本研究中檢測的NF-κB、HIF-1α蛋白和基因的表達水平，有望成為癲癇診斷和病情評估的生物標志物。通過檢測患者血液或腦脊液中這些指標的變化，可以更準確地診斷癲癇，評估病情的嚴重程度和預后。例如，在癲癇患者發(fā)作后，檢測其血液中NF-κB和HIF-1α的表達水平，如果明顯升高，提示患者可能處于癲癇持續(xù)狀態(tài)，且海馬神經(jīng)元損傷較為嚴重，需要及時采取更積極的治療措施。這有助于臨床醫(yī)生早期發(fā)現(xiàn)和干預癲癇患者，提高治療的及時性和有效性。七、參考文獻[1]丁秀芳，王紀文，姚國，代方方，張冰。癲癇持續(xù)狀態(tài)模型中海馬神經(jīng)元損傷及其可能機制[J].中華實用兒科臨床雜志，2011,26(12):914-916+921.[2]周琴，李光乾.Toll樣受體4/核因子-κB信號通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬損傷中的作用[J].中華神經(jīng)科雜志，2008(10):689-694.[3]莊亞飛，王紀文，丁秀芳，張冰，代方方。發(fā)育期癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬內(nèi)HIF-1α及Notch信號通路下游基因HES1的表達變化[J].中華神經(jīng)醫(yī)學雜志，2012,11(09):881-885.[4]孫建英，馮延秋，遲兆富，吳偉。海人酸致癇大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元線粒體損傷及妥泰的保護作用[J].山東大學學報(醫(yī)學版),2006(06):560-562+566.[5]王小天，王月，彪雅寧，高晶淼，李麗，陸艾陽子，尹蘊婕，張一昕。燮理湯對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠TLR4/NF-κB/HIF-1α通路的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2023,29(08):142-149.[6]劉婷婷，張淑萍，覃筱燕，何敏，方志斌.MAPK信號轉(zhuǎn)導通路與神經(jīng)損傷研究進展[J].中國公共衛(wèi)生，2016,32(02):248-254.[7]HuangQ,LiuX,WuY,etal.P38MAPKpathwaymediatescognitivedamageinpentylenetetrazole-inducedepilepsyviaapoptosiscascade[J].EpilepsyRes,2017,133:89-92.[8]LiX,KangHC,LiuXY,etal.EffectsofadenosineA2AreceptorblockerSCH58261onamygdala-kindledepilepsymodelinrats[J].ChineseJournalofLaboratoryDiagnosis,2015,19(2):175-180.[9]LinLF,LiangW,LiuZ,etal.Studyontheeffectofglycinetransporter1inhibitorM22oncognitiveimpairmentinepilepticmice[J].JournalofClinicalandExperimentalMedicine,2018,17(22):2353-2356.[10]WuYZ,DengWJ,QiaoF,etal.MechanismofadenosineA1receptoronhippocampalneuroninjuryinamygdala-kindledepilepticrats[J].ChineseJournalofPracticalNervousDiseases,2017,20(5):40-44.[11]MoratóX,LujánR,López-CanoM,etal.TheParkinson'sdisease-associatedGPR37receptorinteractswithstriataladenosineA2Areceptorcontrollingitscellsurfaceexpressionandfunctioninvivo[J].SciRep,2017,7(1):9452.[12]GerméK,FaureJB,KoningE,etal.Effectofcaffeineandadenosinereceptorligandsontheexpressionofspike-and-wavedischargesinGeneticAbsenceEpilepsyRatsfromStrasbourg(GAERS)[J].EpilepsyRes,2015,110:105-114.[13]MelaniA,DettoriI,CortiF,etal.Time-courseofprotectionbytheselectiveA2AreceptorantagonistSCH58261aftertransientfocalcerebralischemia[J].Neurosci,2015,36(8):1441-1448.[14]DuanF,YuY,GuanR,etal.VitaminK2inducesmitochondria-relatedapoptosisinhumanbladdercancercellsviaROSandJNK/p38MAPKsignalpathways[J].PLoSOne,2016,11(8):e0161886.[15]SuiX,KongN,YeL,etal.p38andJNKMAPKpathwayscontrolthebalanceofapoptosisandautophagyinresponsetochemotherapeuticagents[J].CancerLett,2014,344(2):174-179.[16]TaiTY,WarnerLN,JonesTD,etal.Antiepilepticactionofc-JunN-terminalkinase(JNK)inhibitioninananimalmodeloftemporallobeepilepsy[J].Neurosci,2017,349(1):35-47.[17]陶婷婷，劉定華.JNK抑制劑SP600125對癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元的保護作用[J].中華行為醫(yī)學與腦科學雜志，2014,23(11):970-973.[18]柳艷麗，唐震海，王能里，王芳，胡秀華，陳冬志。腺苷A2A受體拮抗劑SCH58261減輕胎兔缺氧缺血性腦損傷[J].中國病理生理雜志，2016,32(12):2139-2146.[19]KimDS,MinSJ,KimMJ,etal.LeptomycinBamelioratesvasogenicedemaformationinducedbystatusepilepticusviainhibitingp38MAPK/VEGFpathway[J].BrainResearch,2016,1651:27-35.[20]MelaniA,CiprianiS,VannucciMG,etal.SelectiveadenosineA2areceptorantagonismreducesJNKactivationinoligodendrocytesaftercerebralischemia[J].Brain,2009,132(Pt6):1480-1495.[2]周琴，李光乾.Toll樣受體4/核因子-κB信號通路在癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬損傷中的作用[J].中華神經(jīng)科雜志，2008(10):689-694.[3]莊亞飛，王紀文，丁秀芳，張冰，代方方。發(fā)育期癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬內(nèi)HIF-1α及Notch信號通路下游基因HES1的表達變化[J].中華神經(jīng)醫(yī)學雜志，2012,11(09):881-885.[4]孫建英，馮延秋，遲兆富，吳偉。海人酸致癇大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元線粒體損傷及妥泰的保護作用[J].山東大學學報(醫(yī)學版),2006(06):560-562+566.[5]王小天，王月，彪雅寧，高晶淼，李麗，陸艾陽子，尹蘊婕，張一昕。燮理湯對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠TLR4/NF-κB/HIF-1α通路的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2023,29(08):142-149.[6]劉婷婷，張淑萍，覃筱燕，何敏，方志斌.MAPK信號轉(zhuǎn)導通路與神經(jīng)損傷研究進展[J].中國公共衛(wèi)生，2016,32(02):248-254.[7]HuangQ,LiuX,WuY,etal.P38MAPKpathwaymediatescognitivedamageinpentylenetetrazole-inducedepilepsyviaapoptosiscascade[J].EpilepsyRes,2017,133:89-92.[8]LiX,KangHC,LiuXY,etal.EffectsofadenosineA2AreceptorblockerSCH58261onamygdala-kindledepilepsymodelinrats[J].ChineseJournalofLaboratoryDiagnosis,2015,19(2):175-180.[9]LinLF,LiangW,LiuZ,etal.Studyontheeffectofglycinetransporter1inhibitorM22oncognitiveimpairmentinepilepticmice[J].JournalofClinicalandExperimentalMedicine,2018,17(22):2353-2356.[10]WuYZ,DengWJ,QiaoF,etal.MechanismofadenosineA1receptoronhippocampalneuroninjuryinamygdala-kindledepilepticrats[J].ChineseJournalofPracticalNervousDiseases,2017,20(5):40-44.[11]MoratóX,LujánR,López-CanoM,etal.TheParkinson'sdisease-associatedGPR37receptorinteractswithstriataladenosineA2Areceptorcontrollingitscellsurfaceexpressionandfunctioninvivo[J].SciRep,2017,7(1):9452.[12]GerméK,FaureJB,KoningE,etal.Effectofcaffeineandadenosinereceptorligandsontheexpressionofspike-and-wavedischargesinGeneticAbsenceEpilepsyRatsfromStrasbourg(GAERS)[J].EpilepsyRes,2015,110:105-114.[13]MelaniA,DettoriI,CortiF,etal.Time-courseofprotectionbytheselectiveA2AreceptorantagonistSCH58261aftertransientfocalcerebralischemia[J].Neurosci,2015,36(8):1441-1448.[14]DuanF,YuY,GuanR,etal.VitaminK2inducesmitochondria-relatedapoptosisinhumanbladdercancercellsviaROSandJNK/p38MAPKsignalpathways[J].PLoSOne,2016,11(8):e0161886.[15]SuiX,KongN,YeL,etal.p38andJNKMAPKpathwayscontrolthebalanceofapoptosisandautophagyinresponsetochemotherapeuticagents[J].CancerLett,2014,344(2):174-179.[16]TaiTY,WarnerLN,JonesTD,etal.Antiepilepticactionofc-JunN-terminalkinase(JNK)inhibitioninananimalmodeloftemporallobeepilepsy[J].Neurosci,2017,349(1):35-47.[17]陶婷婷，劉定華.JNK抑制劑SP600125對癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬神經(jīng)元的保護作用[J].中華行為醫(yī)學與腦科學雜志，2014,23(11):970-973.[18]柳艷麗，唐震海，王能里，王芳，胡秀華，陳冬志。腺苷A2A受體拮抗劑SCH58261減輕胎兔缺氧缺血性腦損傷[J].中國病理生理雜志，2016,32(12):2139-2146.[19]KimDS,MinSJ,KimMJ,etal.LeptomycinBamelioratesvasogenicedemaformationinducedbystatusepilepticusviainhibitingp38MAPK/VEGFpathway[J].BrainResearch,2016,1651:27-35.[20]MelaniA,CiprianiS,VannucciMG,etal.SelectiveadenosineA2areceptorantagonismreducesJNKactivationinoligodendrocytesaftercerebralischemia[J].Brain,2009,132(Pt6):1480-1495.[3]莊亞飛，王紀文，丁秀芳，張冰，代方方。發(fā)育期癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬內(nèi)