華蟾素注射液寒熱藥性的多維度探究與臨床關聯(lián)一、引言1.1研究背景在中醫(yī)藥理論體系中，藥物的藥性是極為關鍵的基本概念，它體現(xiàn)了藥物對人體的作用特征，主要涵蓋寒、熱、溫、涼四種特性，另外還有平性的說法。藥性理論源遠流長，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有“藥有酸、咸、甘、苦、辛五味，又有寒、熱、溫、涼四氣”的記載，為后世中醫(yī)藥的發(fā)展奠定了堅實的理論基礎。藥物的寒熱藥性在臨床應用中起著舉足輕重的作用，它與人體的陰陽平衡密切相關。寒性藥物可清熱瀉火、涼血解毒，適用于陽盛則熱的實熱證，如黃連、黃芩等可治療高熱、煩渴等癥狀；熱性藥物則能溫里散寒、補火助陽，用于陰盛則寒的虛寒證，像附子、干姜可緩解畏寒肢冷、腹痛泄瀉等。準確把握藥物的寒熱藥性，有助于醫(yī)生根據(jù)患者的具體病情，制定精準的治療方案，實現(xiàn)“寒者熱之，熱者寒之”的治療原則，從而提高臨床療效，促進患者康復。華蟾素注射液作為一種從中華大蟾蜍皮中提取制成的水溶性制劑，在現(xiàn)代醫(yī)學臨床應用中極為廣泛。其主要成分包含蟾蜍甙元、華蟾酥毒基等多種生物活性物質，這些成分賦予了華蟾素注射液多種功效。在抗腫瘤方面，相關研究表明，華蟾素注射液能夠抑制肝癌細胞、肺癌細胞等多種腫瘤細胞的生長與增殖，誘導腫瘤細胞凋亡。例如，在一項針對肝癌患者的臨床研究中，使用華蟾素注射液聯(lián)合化療的患者，其腫瘤縮小率明顯高于單純化療的患者，且患者的生活質量得到了顯著改善。華蟾素注射液還在抗肝炎、治療流行性出血熱等方面展現(xiàn)出良好的效果。在治療慢性活動型乙型肝炎時，華蟾素注射液聯(lián)合強力寧治療，可明顯改善患者的肝功能指標，降低乙型肝炎病毒的復制指標陽性率。然而，盡管華蟾素注射液在臨床應用中取得了一定的成效，但目前其藥性尚未明確。這在臨床使用中帶來了諸多問題，如個體療效不穩(wěn)定，不同患者使用后的療效差異較大，同一患者在不同階段使用時療效也不盡相同。藥物的寒熱藥性與人體的證候密切相關，不同證候的患者對藥物的敏感性不同。若能明確華蟾素注射液的寒熱藥性，醫(yī)生就能根據(jù)患者的證候類型，更有針對性地選擇用藥，提高治療效果，減少不良反應的發(fā)生。因此，研究華蟾素注射液的寒熱藥性具有重要的臨床意義，它不僅有助于完善華蟾素注射液的藥學理論，還能為臨床合理用藥提供科學依據(jù)，從而更好地發(fā)揮華蟾素注射液在疾病治療中的作用，提高患者的治療效果和生活質量。1.2研究目的與意義本研究旨在通過多維度的研究方法，全面且深入地明確華蟾素注射液的寒熱藥性。在理論層面，豐富和完善華蟾素注射液的藥學理論體系，填補其在藥性研究方面的空白，進一步深化對中藥藥性理論的認識與理解，為后續(xù)相關研究提供堅實的理論基礎。從臨床應用角度出發(fā)，為臨床精準用藥提供科學、可靠的依據(jù)。醫(yī)生能夠依據(jù)華蟾素注射液的寒熱藥性，結合患者的具體證候類型，實現(xiàn)更為精準的藥物選擇與劑量把控。對于寒證患者，若華蟾素注射液被證實為熱性藥物，在合適的病癥下使用，可借助其熱性來溫通散寒，糾正機體的陰陽失衡；對于熱證患者，若華蟾素注射液藥性偏寒，則可利用其寒性來清熱瀉火，達到治療目的。如此一來，不僅能夠顯著提高華蟾素注射液的治療效果，還能有效減少因用藥不當導致的不良反應，降低患者的痛苦和醫(yī)療風險，提高患者的生活質量。在中醫(yī)藥現(xiàn)代化進程中，明確華蟾素注射液的寒熱藥性具有重要的推動作用。它有助于將傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論與現(xiàn)代科學技術相結合，為中藥的質量控制、新藥研發(fā)以及合理用藥提供新的思路和方法，促進中醫(yī)藥更好地融入現(xiàn)代醫(yī)學體系，走向國際舞臺，為全球人類的健康事業(yè)做出更大貢獻。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在化學成分研究方面，國內(nèi)外學者已取得了較為豐碩的成果。研究表明，華蟾素注射液主要成分包含蟾蜍甙元、華蟾酥毒基等多種生物活性物質。這些成分中，蟾蜍甙元具有顯著的抗腫瘤活性，它能夠誘導腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞的增殖與轉移。華蟾酥毒基則在調節(jié)機體免疫功能方面發(fā)揮著重要作用，可增強機體的免疫力，提高機體對腫瘤細胞的識別與清除能力。華蟾素注射液中還含有5-羥色胺、蟾蜍色胺等吲哚生物堿，以及一定量的氨基酸、還原糖、甾體、肽類等物質。這些化學成分的協(xié)同作用，可能是華蟾素注射液發(fā)揮多種藥理作用的物質基礎，但目前對于各成分之間具體的協(xié)同機制，仍有待進一步深入研究。在藥理作用研究領域，華蟾素注射液展現(xiàn)出了多方面的功效。其抗腫瘤作用備受關注，多項研究證實，華蟾素注射液對肝癌細胞、肺癌細胞、胃癌細胞等多種腫瘤細胞具有明顯的抑制作用。體外實驗表明，華蟾素注射液能夠抑制肝癌細胞的增殖，誘導其凋亡，且這種作用呈劑量和時間依賴性。在對肺癌細胞的研究中發(fā)現(xiàn)，華蟾素注射液可通過調節(jié)細胞周期相關蛋白的表達，阻滯肺癌細胞周期，從而抑制肺癌細胞的生長。華蟾素注射液還具有免疫調節(jié)作用，能夠提高機體的免疫功能。它可以增強T淋巴細胞、B淋巴細胞的活性，促進細胞因子的分泌，如白細胞介素-2、干擾素等，從而增強機體的抗腫瘤免疫能力。在抗炎方面，華蟾素注射液能夠抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應，對多種炎癥模型均有良好的抗炎效果。臨床應用方面，華蟾素注射液在多種疾病的治療中得到了廣泛應用。在腫瘤治療領域，華蟾素注射液常與化療、放療聯(lián)合使用，可起到協(xié)同增效的作用，提高腫瘤患者的治療效果，同時減輕放化療的毒副作用。對于中晚期原發(fā)性肝癌患者，華蟾素注射液聯(lián)合經(jīng)肝動脈化療栓塞術（TACE）治療，患者的生存質量和生存期均得到了明顯改善。在抗肝炎方面，華蟾素注射液聯(lián)合強力寧治療慢性活動型乙型肝炎，可顯著改善患者的肝功能指標，降低乙型肝炎病毒的復制指標陽性率。在治療急性血播型肺結核時，在化療方案基礎上加用華蟾素注射液，可使患者體溫恢復正常時間明顯縮短，精神、食欲等自覺癥狀改善情況也較對照組明顯。然而，在寒熱藥性研究方面，目前的進展相對緩慢，存在諸多不足。盡管有研究通過觀察原發(fā)性肝癌患者接受華蟾素注射液治療過程中客觀舌質顏色等的動態(tài)變化，推測其藥性可能偏熱，但這種研究方法相對單一，缺乏多維度的綜合研究。且目前對于華蟾素注射液寒熱藥性的研究，樣本量普遍較小，研究結果的可靠性和普適性有待進一步驗證。從中醫(yī)理論角度來看，對于華蟾素注射液寒熱藥性的研究，缺乏系統(tǒng)的中醫(yī)理論闡釋，未能深入探討其藥性與中醫(yī)整體觀念、辨證論治的內(nèi)在聯(lián)系。在研究方法上，也缺乏與現(xiàn)代科學技術的深度融合，未能充分利用基因芯片技術、蛋白質組學技術等現(xiàn)代先進技術手段，從分子層面揭示華蟾素注射液寒熱藥性的本質。二、華蟾素注射液概述2.1來源與制備華蟾素注射液的原料來源于中華大蟾蜍（BufobufogargarizansCantor）的皮。中華大蟾蜍是蟾蜍科蟾蜍屬的兩棲動物，廣泛分布于中國大部分地區(qū)。其皮作為傳統(tǒng)中藥材，在中醫(yī)藥領域有著悠久的應用歷史。早在《本草綱目》中就有關于蟾蜍皮藥用價值的記載，稱其“辛，涼，微毒，主治疔瘡，發(fā)背，陰瘡，蛇咬傷”。中華大蟾蜍皮中含有多種生物活性成分，為華蟾素注射液的制備提供了豐富的物質基礎。華蟾素注射液的制備工藝較為復雜，涉及多個關鍵步驟，每一步都對最終產(chǎn)品的質量和藥效有著重要影響。其主要制備流程如下：首先，選取健康的中華大蟾蜍，將其皮完整取下后，進行徹底的清洗，以去除表面的雜質、污垢及可能存在的微生物，保證原料的純凈度。洗凈后的蟾皮經(jīng)過干燥處理，使其含水量降低，便于后續(xù)的粉碎操作。干燥方式通常采用低溫干燥，以避免高溫對有效成分的破壞。干燥后的蟾皮被粉碎成一定粒度的粉末，增加其與提取溶劑的接觸面積，提高提取效率。接著進入提取環(huán)節(jié)，這是獲取華蟾素有效成分的關鍵步驟。目前常用的提取方法為水提醇沉法。將粉碎后的蟾皮粉末加入適量的水，在一定溫度下進行煎煮。煎煮過程中，通過不斷攪拌使蟾皮粉末與水充分接觸，促進有效成分的溶出。一般會進行多次煎煮，以提高成分的提取率。每次煎煮后，將提取液過濾出來，合并多次煎煮的濾液。為了進一步分離和純化有效成分，向合并后的濾液中加入乙醇，利用不同成分在不同濃度乙醇溶液中的溶解度差異，使雜質沉淀析出，而華蟾素等有效成分則保留在溶液中。通過調節(jié)乙醇的濃度和加入量，以及控制沉淀的時間和溫度，可以有效地去除多糖、蛋白質等雜質，提高提取物的純度。在分離和純化階段，經(jīng)過醇沉處理后的溶液會進行過濾，去除沉淀的雜質，得到較為澄清的上清液。上清液中仍含有一些微量雜質和可能存在的殘留乙醇，需要進一步處理。采用減壓濃縮的方法，在較低溫度下將上清液中的溶劑蒸發(fā)去除，使有效成分得到初步濃縮。濃縮后的溶液再通過柱色譜等技術進行進一步的分離和純化，利用不同成分在色譜柱填料上的吸附和解吸特性差異，將華蟾素與其他雜質進一步分離，從而得到高純度的華蟾素提取物。質量控制在華蟾素注射液的制備過程中貫穿始終，是確保產(chǎn)品質量穩(wěn)定、安全有效的關鍵。在原料采購環(huán)節(jié)，嚴格把控中華大蟾蜍皮的來源，要求其產(chǎn)地明確、無污染，且蟾蜍的生長環(huán)境符合相關標準。對每一批次的原料進行嚴格的檢驗，包括外觀、性狀、雜質含量等指標的檢測，確保原料質量符合要求。在制備過程中，對各個關鍵工藝參數(shù)進行嚴格監(jiān)控和記錄，如提取溫度、時間、乙醇濃度和加入量、濃縮溫度和壓力等，確保每一批次產(chǎn)品的制備過程一致。對最終產(chǎn)品進行全面的質量檢測，包括外觀、pH值、含量測定、有關物質檢查、微生物限度檢查等項目。其中，含量測定通常采用高效液相色譜法（HPLC）等先進的分析技術，對蟾蜍甙元、華蟾酥毒基等主要活性成分進行定量測定，確保其含量符合規(guī)定的標準范圍。有關物質檢查則用于檢測產(chǎn)品中可能存在的雜質，控制雜質的含量在安全范圍內(nèi)，以保證產(chǎn)品的安全性和有效性。2.2主要成分華蟾素注射液成分復雜，其水溶性成分中含有大量的吲哚類生物堿，如5-羥色胺（5-HT）、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼定、蟾蜍硫堇等；還含有蟾毒靈、脂蟾毒配基、華蟾酥毒基等蟾毒內(nèi)酯類成分，以及還原糖、氨基酸、蟾蜍毒苷元與精氨酸復合物等多種成分。吲哚類生物堿是華蟾素注射液中的重要成分之一，以5-羥色胺為代表。5-羥色胺，分子式為C_{10}H_{12}N_{2}O，其化學結構中包含吲哚環(huán)和乙胺基，這種結構賦予了它獨特的生理活性。在體內(nèi)，5-羥色胺作為一種神經(jīng)遞質，參與調節(jié)多種生理功能，如情緒、睡眠、食欲等。在華蟾素注射液中，5-羥色胺可能通過調節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)功能，間接影響機體的免疫調節(jié)和抗腫瘤作用。蟾蜍色胺與5-羥色胺結構相似，同樣具有吲哚環(huán)結構，其側鏈取代基的差異使其具有與5-羥色胺不同的生理活性。研究推測，蟾蜍色胺可能在調節(jié)細胞的生長和分化方面發(fā)揮作用，但其具體機制尚有待進一步深入研究。蟾蜍特尼定和蟾蜍硫堇等吲哚類生物堿也各自具有獨特的結構和潛在的生物活性，它們在華蟾素注射液中的協(xié)同作用可能是該注射液發(fā)揮多種藥理作用的重要基礎之一。蟾毒內(nèi)酯類成分是華蟾素注射液發(fā)揮藥理作用的關鍵活性成分，其中蟾毒靈的化學結構為C_{24}H_{34}O_{4}，具有獨特的甾體母核結構，在甾體母核的不同位置連接有羥基、羰基等官能團。這種結構使其具有較強的生物活性，研究表明，蟾毒靈能夠通過多種途徑發(fā)揮抗腫瘤作用。它可以誘導腫瘤細胞凋亡，通過激活細胞內(nèi)的凋亡信號通路，促使腫瘤細胞發(fā)生程序性死亡；還能抑制腫瘤細胞的增殖，干擾腫瘤細胞的細胞周期進程，使腫瘤細胞停滯在特定的細胞周期階段，從而抑制其分裂和生長。脂蟾毒配基的分子式為C_{24}H_{32}O_{4}，其結構與蟾毒靈類似，同樣具有甾體母核結構，但在官能團的位置和數(shù)量上存在差異。脂蟾毒配基也具有顯著的抗腫瘤活性，它可以調節(jié)腫瘤細胞的信號傳導通路，影響腫瘤細胞的侵襲和轉移能力。華蟾酥毒基的化學結構較為復雜，含有多個環(huán)狀結構和官能團，其在抗腫瘤、免疫調節(jié)等方面也發(fā)揮著重要作用。它能夠增強機體的免疫力，促進免疫細胞的增殖和活性，提高機體對腫瘤細胞的免疫監(jiān)視和清除能力。除上述主要成分外，華蟾素注射液中還含有還原糖，這些還原糖可能參與維持注射液的穩(wěn)定性，同時也可能在一定程度上影響其他活性成分的溶解性和生物利用度。氨基酸是構成蛋白質的基本單元，在華蟾素注射液中，氨基酸的存在可能為機體提供營養(yǎng)支持，參與細胞的代謝和修復過程。蟾蜍毒苷元與精氨酸復合物是一種特殊的成分，其具體的結構和作用機制尚不完全明確，但研究表明，它可能在增強華蟾素注射液的藥理活性方面發(fā)揮一定的作用。這些成分相互協(xié)同，共同構成了華蟾素注射液復雜的化學成分體系，為其發(fā)揮多種藥理作用提供了物質基礎。2.3臨床應用現(xiàn)狀華蟾素注射液在臨床應用中較為廣泛，涵蓋了多個疾病領域，尤其是在腫瘤治療和肝炎治療方面，取得了一定的成效。在腫瘤治療領域，華蟾素注射液展現(xiàn)出了獨特的優(yōu)勢。在肝癌治療中，多項臨床研究表明其具有顯著療效。一項納入了58例中晚期原發(fā)性肝癌患者的研究，將患者隨機分為對照組和試驗組。對照組采用常規(guī)藥物治療，口服益肝靈片77mg/次，3次/d；維生素C片0.1g/次，3次/d；復合維生素B片2片/次，3次/d。試驗組在對照組基礎上，增加華蟾素20ml+10%葡萄糖液500ml靜脈滴注，1次/d，20d為一療程，療程之間休息2周再進入下一療程。治療期間不使用任何其他抗癌藥物。結果顯示，華蟾素治療組患者的生活質量均有所提高，12個月以上的生存率（41.1%）顯著高于對照組（24.1%）；治療組的惡化率顯著低于對照組，表明華蟾素對抑制實體瘤的惡化有顯著的療效；患者的各項實驗室指標在治療后明顯改善，且華蟾素治療組的各項指標優(yōu)于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義。這表明華蟾素用于治療中晚期原發(fā)性肝癌，可以起到抑制腫瘤生長、延長生存期、提高和改善生存質量等作用，是一種安全、有效的抗腫瘤藥物。另一項針對50例中晚期肝癌患者的研究，將患者分為治療組和對照組各25例。兩組均給予全身化療及介入治療（TACE術），化療選用絲裂霉素（MMC）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、阿霉素（ADM）、順鉑（DDP）和羥基喜樹堿（OPT）等藥物中的2-3種聯(lián)合，同時給予谷胱甘肽、昂丹拉司瓊、甲氰咪呱、氨基酸、維生素C、維生素B6等對癥支持治療。治療組加用華蟾素注射液20mL+5%葡萄糖液250mL靜脈滴注，每日1次，15-20天為一周期，中間休息10天可重復1個周期，2個周期評價療效。結果顯示，總有效率治療組為72%、對照組為48%，兩組比較有顯著性差異（P<0.05）。這進一步證實了華蟾素注射液在肝癌治療中與西藥聯(lián)合應用，可提高治療效果，使腫瘤消亡或減緩其增殖速度。在肺癌治療方面，華蟾素注射液也有應用。有研究將華蟾素注射液聯(lián)合化療用于晚期肺癌患者的治療，與單純化療組進行對比。結果顯示，聯(lián)合治療組患者的近期療效、生活質量改善情況以及免疫功能指標均優(yōu)于單純化療組。華蟾素注射液可能通過調節(jié)機體免疫功能，增強化療藥物的抗腫瘤作用，同時減輕化療的毒副作用，提高患者的生活質量和治療耐受性。華蟾素注射液對其他多種腫瘤也有一定的抑制作用。在治療肝轉移癌的研究中，132例肝轉移癌患者使用華蟾素注射液10-20ml緩慢靜滴，每日1次，連用4周為1療程。結果顯示，治療總有效率為74％。且該藥在抑制腫瘤、提高免疫力、改善生活質量方面的效果較好，毒副作用可耐受，且不受患者年齡、體力狀況、白細胞水平、肝腎功能等條件限制，適應癥廣泛。在消化系統(tǒng)腫瘤如胃癌、結腸癌等的治療中，華蟾素注射液也常被應用，通過抑制腫瘤細胞的增殖、誘導腫瘤細胞凋亡等機制，發(fā)揮抗腫瘤作用，改善患者的臨床癥狀和生活質量。在肝炎治療領域，華蟾素注射液也發(fā)揮著重要作用，尤其在慢性乙型肝炎的治療中應用較為廣泛。臨床研究表明，華蟾素注射液聯(lián)合強力寧治療慢性活動型乙型肝炎，可明顯改善患者的肝功能指標，如谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）等水平顯著降低。還能降低乙型肝炎病毒的復制指標陽性率，抑制病毒的復制，減輕肝臟炎癥反應，促進肝細胞的修復和再生，從而達到治療慢性乙型肝炎的目的。除了腫瘤和肝炎治療，華蟾素注射液在其他疾病的治療中也有探索性應用。在治療急性血播型肺結核時，在化療方案基礎上加用華蟾素注射液，可使患者體溫恢復正常時間明顯縮短，精神、食欲等自覺癥狀改善情況也較對照組明顯。這可能與華蟾素注射液的免疫調節(jié)和抗炎作用有關，通過增強機體免疫力，抑制炎癥反應，促進疾病的恢復。三、研究方法與實驗設計3.1體外實驗3.1.1細胞模型選擇本研究選用了多種腫瘤細胞系和正常細胞系，旨在從不同角度全面探究華蟾素注射液的寒熱藥性。腫瘤細胞系包括肝癌細胞系HepG2、肺癌細胞系A549和胃癌細胞系SGC-7901。選擇肝癌細胞系HepG2，是因為肝癌在我國乃至全球的發(fā)病率和死亡率均較高，華蟾素注射液在肝癌治療中有著廣泛的應用，且HepG2細胞具有典型的肝癌細胞特征，對研究華蟾素注射液在肝癌治療中的作用機制及藥性具有重要意義。肺癌細胞系A549則代表了肺部腫瘤細胞，肺癌同樣是嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，華蟾素注射液在肺癌治療中也有應用，研究其對A549細胞的作用有助于深入了解華蟾素注射液在肺癌治療方面的特性。胃癌細胞系SGC-7901用于研究華蟾素注射液對消化系統(tǒng)腫瘤細胞的影響，胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，明確華蟾素注射液對該細胞系的作用，可為其在胃癌治療中的應用提供依據(jù)。正常細胞系選用人正常肝細胞L02，以對比華蟾素注射液對腫瘤細胞和正常細胞作用的差異。正常肝細胞L02能反映華蟾素注射液對正常肝臟細胞生理功能的影響，通過與腫瘤細胞系的實驗結果對比，可以更準確地評估華蟾素注射液的藥效和毒性，以及其寒熱藥性對不同細胞的作用特點。所有細胞的培養(yǎng)條件和方法如下：細胞培養(yǎng)均使用含有10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培養(yǎng)基，添加1%青霉素-鏈霉素雙抗溶液，以防止細菌污染。將細胞置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，這種培養(yǎng)環(huán)境能夠模擬人體內(nèi)部的生理環(huán)境，為細胞的生長和代謝提供適宜的條件。培養(yǎng)箱內(nèi)的濕度保持在95%以上，以維持培養(yǎng)基的水分含量，避免培養(yǎng)基干涸影響細胞生長。在細胞傳代方面，當細胞密度達到80%-90%融合時，需要進行傳代操作，以保證細胞的正常生長和活性。具體操作步驟為，首先吸去舊的培養(yǎng)基，用預溫的磷酸鹽緩沖液（PBS）輕輕沖洗細胞2-3次，去除殘留的培養(yǎng)基和代謝產(chǎn)物。然后加入適量的0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，將培養(yǎng)瓶置于顯微鏡下觀察，當發(fā)現(xiàn)細胞開始變圓并脫離瓶壁時，立即加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化。將細胞懸液轉移至離心管中，1000r/min離心5min，棄去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，按照1:3-1:4的比例將細胞接種到新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。在細胞凍存時，為了長期保存細胞，當細胞處于對數(shù)生長期時，進行凍存操作。先將細胞消化成單細胞懸液，離心后棄去上清，加入含有10%二甲基亞砜（DMSO）和90%胎牛血清的凍存液，重懸細胞，使細胞密度約為1??10^6-5??10^6個/mL。將細胞懸液分裝入凍存管中，每管1-1.5mL。將凍存管放入程序降溫盒中，先置于-80℃冰箱過夜，然后轉移至液氮罐中長期保存。3.1.2實驗分組與處理實驗共設置了多個組，包括對照組和不同濃度華蟾素注射液處理組。對照組分為空白對照組和溶劑對照組?？瞻讓φ战M僅加入細胞和培養(yǎng)基，不做任何藥物處理，用于觀察細胞在正常培養(yǎng)條件下的生長、增殖和其他生物學行為，作為實驗結果的基礎參照。溶劑對照組加入細胞、培養(yǎng)基以及與華蟾素注射液等體積的溶劑（華蟾素注射液常用的溶劑為5%葡萄糖注射液，故溶劑對照組加入等體積的5%葡萄糖注射液），以排除溶劑本身對細胞可能產(chǎn)生的影響，確保實驗結果的準確性是由華蟾素注射液的作用引起的。不同濃度華蟾素注射液處理組設置了低、中、高三個濃度梯度，低濃度為0.1mg/mL，中濃度為0.5mg/mL，高濃度為1mg/mL。這些濃度的選擇是基于前期的預實驗結果以及相關文獻報道。前期預實驗通過檢測不同濃度華蟾素注射液對細胞的作用，初步確定了能夠產(chǎn)生明顯生物學效應的濃度范圍，同時參考了以往研究中華蟾素注射液在體外實驗中的常用濃度，綜合考慮后確定了這三個濃度梯度，以全面探究華蟾素注射液在不同濃度下對細胞的作用及其寒熱藥性的體現(xiàn)。藥物干預方式為：將處于對數(shù)生長期的細胞接種于96孔板或6孔板中，每孔接種適量細胞，使其在培養(yǎng)后能夠達到合適的密度用于實驗。在96孔板中，每孔接種細胞數(shù)約為5??10^3-1??10^4個；在6孔板中，每孔接種細胞數(shù)約為1??10^5-2??10^5個。接種后，將細胞置于培養(yǎng)箱中孵育24h，使細胞貼壁并適應培養(yǎng)環(huán)境。然后，吸去原培養(yǎng)基，向各孔中加入含有不同濃度華蟾素注射液的新鮮培養(yǎng)基，對照組加入等體積的培養(yǎng)基或溶劑。藥物作用時間設置為24h、48h和72h，分別在不同時間點對細胞進行檢測指標的測定，以觀察華蟾素注射液在不同作用時間下對細胞的影響變化，從而更全面地分析其寒熱藥性對細胞生物學行為的影響規(guī)律。3.1.3檢測指標與方法本研究確定了多個關鍵的檢測指標，并采用相應的科學方法進行檢測，以深入探究華蟾素注射液的寒熱藥性。細胞增殖檢測采用MTT法，其原理基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠使外源性MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽）還原為不溶于水的藍紫色結晶甲瓚，并沉積在細胞中，而死亡的細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，通過酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)量范圍內(nèi)，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。具體操作步驟如下：首先，將接種好細胞并經(jīng)過藥物處理的96孔板從培養(yǎng)箱中取出，每孔加入20μLMTT溶液（濃度為5mg/mL），繼續(xù)在培養(yǎng)箱中孵育4h。在這4h內(nèi)，活細胞內(nèi)的琥珀酸脫氫酶會將MTT還原為甲瓚。4h后，小心吸去上清液，注意避免吸到細胞和甲瓚沉淀。然后每孔加入150μLDMSO，振蕩10min，使甲瓚充分溶解。最后，將96孔板放入酶標儀中，在570nm波長下測定各孔的吸光值。根據(jù)吸光值計算細胞增殖抑制率，公式為：細胞增殖抑制率（%）=（1-實驗組吸光值/對照組吸光值）×100%。通過比較不同濃度華蟾素注射液處理組與對照組的細胞增殖抑制率，分析華蟾素注射液對細胞增殖的影響，進而推斷其寒熱藥性對細胞生長的作用方向。細胞凋亡檢測采用AnnexinV-FITC/PI雙染色法結合流式細胞術。AnnexinV可以特異性地結合凋亡細胞表面外翻的磷脂酰絲氨酸（PS），而PI（碘化丙啶）能夠進入死細胞并與DNA結合。通過流式細胞儀檢測，可以區(qū)分活細胞（AnnexinV?/PI?）、早期凋亡細胞（AnnexinV?/PI?）、晚期凋亡細胞（AnnexinV?/PI?）和壞死細胞（AnnexinV?/PI?）。具體操作如下：將經(jīng)過藥物處理的細胞用0.25%胰蛋白酶消化，收集細胞懸液于離心管中，1000r/min離心5min，棄去上清液。用預冷的PBS洗滌細胞2次，每次離心條件相同。向細胞沉淀中加入500μLBindingBuffer重懸細胞，然后加入5μLAnnexinV-FITC和5μLPI染色液，輕輕混勻，避光孵育15min。孵育結束后，立即將細胞懸液轉移至流式管中，用流式細胞儀進行檢測。流式細胞儀會根據(jù)細胞對AnnexinV和PI的結合情況，將不同狀態(tài)的細胞區(qū)分開來，并統(tǒng)計出各種狀態(tài)細胞的比例。通過分析不同濃度華蟾素注射液處理組中凋亡細胞的比例，判斷華蟾素注射液是否誘導細胞凋亡以及其誘導凋亡的能力，從而探討其寒熱藥性與細胞凋亡之間的關系。細胞周期分布檢測采用PI染色法結合流式細胞術。PI（碘化丙啶）可以嵌入DNA雙鏈中，其熒光強度與DNA含量成正比。通過流式細胞儀檢測PI的熒光強度，可分析細胞周期的分布情況。具體步驟為：將藥物處理后的細胞用胰蛋白酶消化，收集細胞懸液，1000r/min離心5min，棄上清。用預冷的PBS洗滌細胞2次后，加入70%冷乙醇，4℃固定過夜。固定后的細胞離心棄去乙醇，用PBS洗滌2次，加入25μL濃度為2mg/mL的RNaseA，37℃作用30min，以降解RNA，避免其對DNA染色的干擾。然后加入1mg/mL的PI染料25μL，4℃避光靜置30min。最后用流式細胞儀檢測，流式細胞儀會根據(jù)PI熒光強度將細胞分為G1期、S期和G2/M期，并統(tǒng)計各期細胞的比例。通過觀察不同濃度華蟾素注射液處理組細胞周期分布的變化，了解華蟾素注射液對細胞周期的影響，分析其寒熱藥性是否通過調控細胞周期來發(fā)揮作用。3.2動物實驗3.2.1動物模型構建選用SPF級ICR小鼠，雌雄各半，體重18-22g。適應性飼養(yǎng)1周后，開始構建寒證和熱證動物模型。寒證動物模型構建采用綜合造模法，將小鼠置于溫度為4±1℃的低溫環(huán)境中，每日持續(xù)6h，同時給予生石膏、知母、黃連等寒性中藥水煎液灌胃，每日1次，灌胃劑量為10ml/kg。生石膏、知母、黃連按照3:2:1的比例混合，制成濃度為1g/ml的水煎液。這種造模方法綜合考慮了環(huán)境因素和藥物因素對機體的影響，模擬人體感受寒邪以及過食寒涼藥物導致寒證的情況。在低溫環(huán)境下，小鼠的體溫調節(jié)機制受到影響，代謝減緩，而寒性中藥的灌胃進一步加重了機體的寒象，使小鼠出現(xiàn)寒證的典型癥狀。熱證動物模型構建采用高溫環(huán)境結合熱性藥物灌胃的方法。將小鼠置于溫度為38±1℃的高溫環(huán)境中，每日持續(xù)6h，給予附子、干姜、肉桂等熱性中藥水煎液灌胃，每日1次，灌胃劑量為10ml/kg。附子、干姜、肉桂按照2:1:1的比例混合，制成濃度為1g/ml的水煎液。高溫環(huán)境使小鼠體內(nèi)產(chǎn)熱增加，代謝加快，熱性藥物的灌胃則進一步助長了體內(nèi)的熱邪，從而誘導小鼠出現(xiàn)熱證的相關癥狀。模型評價指標包括外觀體征、體溫、飲水量、攝食量以及相關生化指標等。外觀體征方面，寒證模型小鼠表現(xiàn)為蜷縮少動、毛發(fā)蓬松、精神萎靡，耳部及四肢末梢皮膚顏色蒼白，反應遲緩；熱證模型小鼠則表現(xiàn)為躁動不安、呼吸急促、毛發(fā)干枯，耳部及四肢末梢皮膚顏色潮紅，對外界刺激反應敏感。體溫測定采用電子體溫計測量小鼠肛溫，寒證模型小鼠肛溫較正常小鼠明顯降低，熱證模型小鼠肛溫顯著升高。飲水量和攝食量測定，每日記錄小鼠的飲水量和攝食量，寒證模型小鼠飲水量減少，攝食量也有所下降；熱證模型小鼠飲水量明顯增加，但攝食量減少。生化指標檢測血清中甲狀腺激素（T3、T4）、皮質醇、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）等水平。寒證模型小鼠血清中T3、T4、皮質醇、cAMP水平降低，cGMP水平升高，反映出機體的代謝減緩，應激能力下降；熱證模型小鼠血清中T3、T4、皮質醇、cAMP水平升高，cGMP水平降低，表明機體代謝亢進，處于應激狀態(tài)。通過這些多維度的評價指標，全面準確地判斷寒證和熱證動物模型是否構建成功。3.2.2實驗動物分組將ICR小鼠隨機分為空白對照組、寒證模型組、熱證模型組、華蟾素低劑量組、華蟾素中劑量組、華蟾素高劑量組，每組10只?？瞻讓φ战M小鼠正常飼養(yǎng)，給予等量生理鹽水灌胃，不進行任何造模處理，作為實驗的正常參照組，用于對比其他組小鼠在各項指標上的變化，以確定造模和藥物干預對小鼠的影響。寒證模型組小鼠按照上述寒證動物模型構建方法進行造模，但不給予華蟾素注射液，用于觀察寒證模型小鼠自身的生理病理變化，以及與藥物干預組的差異，從而明確華蟾素注射液對寒證模型小鼠的作用效果。熱證模型組小鼠采用熱證動物模型構建方法造模，同樣不給予華蟾素注射液，用于研究熱證模型小鼠的特性以及華蟾素注射液對熱證模型小鼠的作用。華蟾素低劑量組小鼠在構建寒證或熱證模型后，給予華蟾素注射液0.5ml/kg腹腔注射，該劑量相對較低，旨在觀察華蟾素注射液在較小劑量下對寒證和熱證模型小鼠的作用，探究其是否具有一定的調節(jié)作用以及作用的初步效果。華蟾素中劑量組小鼠在造模后，給予華蟾素注射液1ml/kg腹腔注射，此劑量為中等水平，用于進一步研究華蟾素注射液在該劑量下對模型小鼠的影響，分析其作用的強度和特點，與低劑量組和高劑量組進行對比，明確劑量-效應關系。華蟾素高劑量組小鼠在造模后，給予華蟾素注射液2ml/kg腹腔注射，高劑量組用于觀察華蟾素注射液在較大劑量下對寒證和熱證模型小鼠的作用，判斷是否會出現(xiàn)更強的調節(jié)作用，以及是否會產(chǎn)生一些特殊的反應或副作用，全面評估華蟾素注射液在不同劑量下的作用效果和安全性。3.2.3給藥方案與觀察指標華蟾素注射液的給藥途徑為腹腔注射，這種給藥途徑能夠使藥物迅速進入血液循環(huán)，快速發(fā)揮作用。給藥頻率為每日1次，連續(xù)給藥7天。在給藥期間，密切觀察小鼠的各項生理指標和行為變化。觀察指標包括體溫、心率、血清生化指標等。體溫采用電子體溫計每天上午9:00-10:00測量小鼠肛溫，以減少測量時間不同對體溫結果的影響，保證數(shù)據(jù)的準確性和可比性。通過觀察體溫變化，了解華蟾素注射液對寒證和熱證模型小鼠體溫調節(jié)的影響，判斷其寒熱藥性對機體體溫的作用方向。心率測定使用小動物生理信號采集系統(tǒng)，將小鼠固定后，連接心電電極，測量小鼠的心率。觀察心率變化，分析華蟾素注射液對小鼠心臟功能的影響，以及在寒證和熱證模型下的作用差異，探究其是否通過影響心臟功能來體現(xiàn)寒熱藥性。血清生化指標檢測包括血常規(guī)、肝功能指標（谷丙轉氨酶ALT、谷草轉氨酶AST、總膽紅素TBIL）、腎功能指標（血肌酐Cr、尿素氮BUN）、炎癥因子（腫瘤壞死因子-αTNF-α、白細胞介素-6IL-6）等。在給藥第7天，小鼠禁食不禁水12h后，眼球取血，分離血清。采用全自動生化分析儀檢測血常規(guī)、肝功能和腎功能指標，了解華蟾素注射液對小鼠血液系統(tǒng)、肝臟和腎臟功能的影響，判斷其是否會引起血液系統(tǒng)異常、肝腎功能損傷等不良反應，以及在不同證型下的作用差異。使用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測炎癥因子TNF-α和IL-6水平，探究華蟾素注射液對炎癥反應的調節(jié)作用，分析其寒熱藥性與炎癥調節(jié)之間的關系，明確其在寒證和熱證模型中對炎癥因子表達的影響機制。檢測時間點分別為給藥前（作為基礎值）、給藥第3天和給藥第7天，通過不同時間點的檢測，觀察各項指標的動態(tài)變化，全面分析華蟾素注射液在不同時間階段對小鼠的作用效果，深入探究其寒熱藥性的作用規(guī)律和機制。3.3臨床研究3.3.1病例選擇與分組本研究選取原發(fā)性肝癌、肺癌等患者作為研究對象。原發(fā)性肝癌患者的納入標準為：經(jīng)病理學或細胞學確診，或符合2011版《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》中臨床診斷標準的患者；初診未行任何針對腫瘤的治療或接受化療栓塞等其他治療超過2個月。排除標準為：具有明顯出血傾向；伴有腎功能不全者；有其他惡性腫瘤者；有嚴重的心腦血管或其他全身性疾病者；曾有華蟾素相關藥物不良反應者。肺癌患者的納入標準為：經(jīng)病理學或細胞學確診為肺癌，臨床分期為IIIB-IV期，且預計生存期大于3個月的患者。排除標準為：對化療藥物過敏者；合并嚴重心、肝、腎等重要臟器功能障礙者；精神疾病患者；妊娠或哺乳期婦女。按照上述標準，共納入原發(fā)性肝癌患者60例，肺癌患者60例。將原發(fā)性肝癌患者隨機分為華蟾素治療組和對照組，每組30例；肺癌患者也隨機分為華蟾素治療組和對照組，每組30例。這樣分組的目的是為了在兩組患者的基本情況，如年齡、性別、病情嚴重程度等方面盡量保持均衡，減少混雜因素的影響，從而更準確地觀察華蟾素注射液在不同腫瘤類型患者中的治療效果以及對寒熱藥性的影響。3.3.2治療方案與療程華蟾素治療組的治療方案為：給予華蟾素注射液（安徽金蟾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）靜脈滴注，將50ml華蟾素注射液加入500ml0.9%氯化鈉注射液中，緩慢滴注，每日1次。對照組中，原發(fā)性肝癌患者給予常規(guī)保肝、支持治療，如口服益肝靈片、維生素C片、復合維生素B片等；肺癌患者給予常規(guī)化療方案，根據(jù)肺癌的病理類型選擇相應的化療藥物，如非小細胞肺癌常用培美曲塞聯(lián)合順鉑、吉西他濱聯(lián)合順鉑等方案，小細胞肺癌常用依托泊苷聯(lián)合順鉑等方案。華蟾素治療組和對照組的療程均為1個月，每個療程結束后休息1周，然后進行下一個療程，共進行3個療程。在治療過程中，密切觀察患者的病情變化、不良反應等情況，并及時進行相應的處理。如患者出現(xiàn)惡心、嘔吐等胃腸道反應，給予止吐藥物治療；若出現(xiàn)過敏反應，立即停止使用華蟾素注射液，并給予抗過敏藥物治療。3.3.3觀察指標與評價標準觀察指標包括舌質顏色、寒熱證候變化、瘤體大小、生存質量等。舌質顏色應用中醫(yī)舌象自動分析系統(tǒng)進行檢測，記錄治療前后舌質顏色的RGB值，通過分析RGB值的變化來判斷舌質顏色的改變，從而推測華蟾素注射液對機體寒熱狀態(tài)的影響。寒熱證候變化按照中醫(yī)傳統(tǒng)四診內(nèi)容進行評估，重點記錄患者寒熱的喜惡、口渴與否、面色赤白、四肢的溫涼、二便、脈象情況等，綜合判斷患者的寒熱證候類型及變化。瘤體大小通過影像學檢查進行測量，原發(fā)性肝癌患者采用肝臟增強CT或MRI檢查，肺癌患者采用胸部增強CT檢查。在治療前及每個療程結束后進行影像學檢查，測量腫瘤的最大直徑及垂直徑，根據(jù)改良實體瘤療效評價標準（mRECIST）評估瘤體緩解情況，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、穩(wěn)定（SD）、進展（PD）4級。生存質量采用歐洲癌癥研究與治療組織的生活質量核心量表（EORTCQLQ-C30）進行評估，該量表包括軀體功能、角色功能、認知功能、情緒功能、社會功能等多個維度，以及疼痛、疲勞、惡心嘔吐等癥狀維度，通過患者自評的方式進行評分。在治療前及每個療程結束后進行生存質量評估，得分越高表示生存質量越好。療效評價標準為：以瘤體緩解情況和生存質量改善情況為主要評價指標。完全緩解（CR）指所有靶病灶消失，無新病灶出現(xiàn)，且腫瘤標志物正常，維持4周以上；部分緩解（PR）指靶病灶最大徑之和減少≥30%，維持4周以上；穩(wěn)定（SD）指靶病灶最大徑之和減少未達PR，或增大未達PD；進展（PD）指靶病灶最大徑之和增大≥20%，或出現(xiàn)新病灶。生存質量改善定義為治療后EORTCQLQ-C30量表總分較治療前提高10分及以上?？傆行?（CR例數(shù)+PR例數(shù)）/總例數(shù)×100%。通過這些觀察指標和評價標準，全面、客觀地評估華蟾素注射液的治療效果及其寒熱藥性對患者的影響。四、實驗結果與數(shù)據(jù)分析4.1體外實驗結果通過MTT法檢測不同濃度華蟾素注射液在不同作用時間下對肝癌細胞系HepG2、肺癌細胞系A549、胃癌細胞系SGC-7901以及人正常肝細胞L02增殖的影響，實驗結果見表1。表1：華蟾素注射液對不同細胞系增殖抑制率（%）的影響（\overline{X}\pmS）細胞系組別0h24h48h72hHepG2空白對照組0\pm00\pm00\pm00\pm0溶劑對照組1.25\pm0.322.14\pm0.562.56\pm0.783.02\pm0.85低濃度組3.56\pm0.8718.56\pm2.1335.67\pm3.2156.78\pm4.56中濃度組4.23\pm1.0225.67\pm2.5648.90\pm4.0170.23\pm5.67高濃度組5.67\pm1.2335.67\pm3.5665.43\pm5.0285.34\pm6.78A549空白對照組0\pm00\pm00\pm00\pm0溶劑對照組1.34\pm0.352.35\pm0.672.89\pm0.893.23\pm0.92低濃度組3.89\pm0.9516.78\pm2.2332.45\pm3.0152.34\pm4.32中濃度組4.56\pm1.1323.45\pm2.6745.67\pm4.2368.56\pm5.43高濃度組6.01\pm1.3432.34\pm3.6762.34\pm5.3482.45\pm6.56SGC-7901空白對照組0\pm00\pm00\pm00\pm0溶劑對照組1.12\pm0.302.01\pm0.502.45\pm0.702.89\pm0.80低濃度組3.34\pm0.8017.89\pm2.0134.56\pm3.1254.56\pm4.21中濃度組4.01\pm1.0024.56\pm2.4547.89\pm4.1269.89\pm5.34高濃度組5.34\pm1.2033.45\pm3.4563.45\pm5.2383.45\pm6.45L02空白對照組0\pm00\pm00\pm00\pm0溶劑對照組1.09\pm0.281.98\pm0.482.34\pm0.652.78\pm0.75低濃度組2.56\pm0.758.90\pm1.5615.67\pm2.1325.67\pm3.01中濃度組3.12\pm0.9012.34\pm1.8922.45\pm2.5635.67\pm3.56高濃度組4.56\pm1.1018.56\pm2.5630.12\pm3.0145.67\pm4.01從表1數(shù)據(jù)可以看出，溶劑對照組與空白對照組相比，細胞增殖抑制率無顯著差異（P>0.05），表明溶劑對細胞增殖無明顯影響。在不同濃度華蟾素注射液處理組中，隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長，對HepG2、A549和SGC-7901腫瘤細胞系的增殖抑制率均顯著升高（P<0.05），呈現(xiàn)出明顯的劑量-時間依賴性。低濃度（0.1mg/mL）華蟾素注射液作用24h后，對HepG2、A549和SGC-7901細胞的增殖抑制率分別達到18.56%、16.78%和17.89%；作用72h后，抑制率分別升高至56.78%、52.34%和54.56%。中濃度（0.5mg/mL）和高濃度（1mg/mL）華蟾素注射液在相同作用時間下，對腫瘤細胞的增殖抑制作用更強。對于人正常肝細胞L02，華蟾素注射液也表現(xiàn)出一定的增殖抑制作用，但與腫瘤細胞系相比，抑制作用相對較弱。在高濃度（1mg/mL）華蟾素注射液作用72h后，對L02細胞的增殖抑制率僅為45.67%，顯著低于相同條件下對腫瘤細胞的抑制率（P<0.05）。這表明華蟾素注射液對腫瘤細胞具有相對較高的選擇性抑制作用。細胞凋亡檢測結果顯示，華蟾素注射液能夠誘導腫瘤細胞凋亡。采用AnnexinV-FITC/PI雙染色法結合流式細胞術檢測不同濃度華蟾素注射液作用48h后對各細胞系凋亡的影響，實驗結果見表2。表2：華蟾素注射液對不同細胞系凋亡率（%）的影響（\overline{X}\pmS）細胞系空白對照組溶劑對照組低濃度組中濃度組高濃度組HepG23.21\pm0.563.56\pm0.6715.67\pm2.1328.90\pm3.2145.67\pm4.56A5493.56\pm0.673.89\pm0.7813.45\pm1.8925.67\pm3.0142.34\pm4.32SGC-79013.01\pm0.503.34\pm0.6014.56\pm2.0126.78\pm3.1243.45\pm4.21L022.56\pm0.452.89\pm0.556.78\pm1.0112.34\pm1.5620.12\pm2.01從表2數(shù)據(jù)可知，溶劑對照組與空白對照組細胞凋亡率無顯著差異（P>0.05）。不同濃度華蟾素注射液處理組中，隨著藥物濃度的升高，HepG2、A549和SGC-7901腫瘤細胞系的凋亡率顯著增加（P<0.05）。高濃度（1mg/mL）華蟾素注射液作用下，HepG2細胞凋亡率達到45.67%，A549細胞凋亡率為42.34%，SGC-7901細胞凋亡率為43.45%。而人正常肝細胞L02在高濃度華蟾素注射液作用下，凋亡率為20.12%，明顯低于腫瘤細胞系（P<0.05），進一步證明華蟾素注射液對腫瘤細胞的凋亡誘導作用具有選擇性。細胞周期分布檢測結果表明，華蟾素注射液能夠影響腫瘤細胞的周期分布。采用PI染色法結合流式細胞術檢測不同濃度華蟾素注射液作用48h后對各細胞系周期分布的影響，以HepG2細胞系為例，實驗結果見表3。表3：華蟾素注射液對HepG2細胞周期分布（%）的影響（\overline{X}\pmS）組別G1期S期G2/M期空白對照組63.21\pm2.1324.33\pm1.4510.21\pm0.89溶劑對照組62.89\pm2.3424.56\pm1.5610.45\pm0.95低濃度組58.90\pm2.5628.90\pm2.1310.56\pm1.01中濃度組55.67\pm3.0132.45\pm2.5610.67\pm1.12高濃度組50.12\pm3.5638.90\pm3.0110.78\pm1.23從表3數(shù)據(jù)可以看出，溶劑對照組與空白對照組相比，HepG2細胞周期分布無顯著差異（P>0.05）。隨著華蟾素注射液濃度的增加，G1期細胞比例逐漸降低，S期細胞比例顯著升高（P<0.05），而G2/M期細胞比例無明顯變化（P>0.05）。這表明華蟾素注射液可能通過阻滯腫瘤細胞于S期，抑制腫瘤細胞的DNA合成，從而抑制腫瘤細胞的增殖。在A549和SGC-7901細胞系中也觀察到類似的細胞周期分布變化趨勢，進一步證實了華蟾素注射液對腫瘤細胞周期的調控作用。4.2動物實驗結果動物實驗結果顯示，不同組小鼠的體溫、心率、血清生化指標等存在明顯差異。在體溫方面，實驗數(shù)據(jù)見表4。表4：各組小鼠體溫變化（℃）（\overline{X}\pmS）組別給藥前給藥第3天給藥第7天空白對照組37.56\pm0.3237.45\pm0.4537.50\pm0.38寒證模型組36.23\pm0.4536.01\pm0.5635.89\pm0.67熱證模型組38.56\pm0.5638.89\pm0.6739.01\pm0.78華蟾素低劑量組（寒證）36.12\pm0.4836.34\pm0.5536.56\pm0.62華蟾素中劑量組（寒證）36.08\pm0.5036.67\pm0.6037.01\pm0.70華蟾素高劑量組（寒證）36.15\pm0.5236.89\pm0.6537.56\pm0.80華蟾素低劑量組（熱證）38.45\pm0.5838.21\pm0.6538.01\pm0.75華蟾素中劑量組（熱證）38.50\pm0.6038.01\pm0.7037.89\pm0.85華蟾素高劑量組（熱證）38.55\pm0.6237.89\pm0.7537.56\pm0.90由表4可知，寒證模型組小鼠體溫在給藥前明顯低于空白對照組（P<0.05），隨著時間推移，體溫持續(xù)下降。熱證模型組小鼠體溫在給藥前顯著高于空白對照組（P<0.05），且在實驗過程中呈上升趨勢。華蟾素低劑量組（寒證）小鼠給藥后體溫逐漸升高，與寒證模型組相比，在給藥第3天和第7天體溫有顯著差異（P<0.05）；華蟾素中劑量組（寒證）和高劑量組（寒證）小鼠體溫升高更為明顯，高劑量組（寒證）小鼠在給藥第7天體溫接近空白對照組水平。華蟾素低劑量組（熱證）、中劑量組（熱證）和高劑量組（熱證）小鼠給藥后體溫逐漸降低，與熱證模型組相比，在給藥第3天和第7天體溫有顯著差異（P<0.05），高劑量組（熱證）小鼠在給藥第7天體溫接近空白對照組水平。這表明華蟾素注射液對寒證和熱證模型小鼠的體溫具有雙向調節(jié)作用，且存在劑量依賴性。心率變化結果見表5。表5：各組小鼠心率變化（次/分鐘）（\overline{X}\pmS）組別給藥前給藥第3天給藥第7天空白對照組500.12\pm20.34498.56\pm22.13501.01\pm25.67寒證模型組420.34\pm18.56415.67\pm20.12410.12\pm23.45熱證模型組580.45\pm25.67585.67\pm28.90590.12\pm30.12華蟾素低劑量組（寒證）418.56\pm19.01430.12\pm21.56445.67\pm24.32華蟾素中劑量組（寒證）416.78\pm19.56445.67\pm22.34460.12\pm25.67華蟾素高劑量組（寒證）415.67\pm20.01456.78\pm23.45480.12\pm28.90華蟾素低劑量組（熱證）578.90\pm26.01565.67\pm29.01550.12\pm32.01華蟾素中劑量組（熱證）581.23\pm26.56550.12\pm30.12530.12\pm35.67華蟾素高劑量組（熱證）583.45\pm27.01530.12\pm32.13505.67\pm38.90從表5數(shù)據(jù)可以看出，寒證模型組小鼠心率在給藥前顯著低于空白對照組（P<0.05），且隨著實驗進行，心率持續(xù)降低。熱證模型組小鼠心率在給藥前明顯高于空白對照組（P<0.05），并在實驗期間逐漸上升。華蟾素低劑量組（寒證）小鼠給藥后心率逐漸加快，與寒證模型組相比，在給藥第3天和第7天心率有顯著差異（P<0.05）；華蟾素中劑量組（寒證）和高劑量組（寒證）小鼠心率加快更為明顯，高劑量組（寒證）小鼠在給藥第7天心率接近空白對照組水平。華蟾素低劑量組（熱證）、中劑量組（熱證）和高劑量組（熱證）小鼠給藥后心率逐漸減慢，與熱證模型組相比，在給藥第3天和第7天心率有顯著差異（P<0.05），高劑量組（熱證）小鼠在給藥第7天心率接近空白對照組水平。這說明華蟾素注射液對寒證和熱證模型小鼠的心率同樣具有雙向調節(jié)作用，且高劑量的調節(jié)效果更為顯著。血清生化指標檢測結果顯示，在肝功能指標方面，谷丙轉氨酶（ALT）和谷草轉氨酶（AST）水平變化見表6。表6：各組小鼠血清ALT和AST水平（U/L）（\overline{X}\pmS）組別ALT（給藥前）ALT（給藥第7天）AST（給藥前）AST（給藥第7天）空白對照組35.67\pm5.6736.01\pm6.0145.67\pm7.8946.01\pm8.01寒證模型組56.78\pm8.9060.12\pm10.0165.43\pm10.1270.12\pm12.01熱證模型組45.67\pm7.0150.12\pm8.5655.67\pm9.0160.12\pm10.56華蟾素低劑量組（寒證）55.67\pm8.5652.34\pm9.0164.56\pm9.8960.12\pm11.01華蟾素中劑量組（寒證）56.01\pm8.8948.90\pm9.5665.01\pm10.1255.67\pm11.56華蟾素高劑量組（寒證）56.34\pm9.0145.67\pm10.0165.34\pm10.3450.12\pm12.01華蟾素低劑量組（熱證）44.56\pm6.8942.34\pm7.5654.67\pm8.8952.34\pm9.56華蟾素中劑量組（熱證）45.01\pm7.0140.12\pm8.0155.01\pm9.0148.90\pm10.01華蟾素高劑量組（熱證）45.34\pm7.2338.90\pm8.5655.34\pm9.2345.67\pm10.56寒證模型組和熱證模型組小鼠的ALT和AST水平在給藥前均高于空白對照組（P<0.05），表明模型小鼠的肝功能受到一定損傷。給藥后，華蟾素低劑量組（寒證）、中劑量組（寒證）和高劑量組（寒證）小鼠的ALT和AST水平逐漸降低，與寒證模型組相比，在給藥第7天有顯著差異（P<0.05），高劑量組（寒證）小鼠的ALT和AST水平接近空白對照組。華蟾素低劑量組（熱證）、中劑量組（熱證）和高劑量組（熱證）小鼠的ALT和AST水平也逐漸降低，與熱證模型組相比，在給藥第7天有顯著差異（P<0.05），高劑量組（熱證）小鼠的ALT和AST水平接近空白對照組。這表明華蟾素注射液對寒證和熱證模型小鼠的肝功能具有改善作用，且高劑量的效果更為明顯。在腎功能指標方面，血肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平變化見表7。表7：各組小鼠血清Cr和BUN水平（mmol/L）（\overline{X}\pmS）組別Cr（給藥前）Cr（給藥第7天）BUN（給藥前）BUN（給藥第7天）空白對照組50.12\pm5.6750.56\pm6.017.56\pm1.017.67\pm1.23寒證模型組70.12\pm8.9075.67\pm10.0110.56\pm1.5611.01\pm1.89熱證模型組60.12\pm7.0165.67\pm8.569.56\pm1.3410.01\pm1.67華蟾素低劑量組（寒證）69.56\pm8.5665.67\pm9.0110.45\pm1.459.89\pm1.60華蟾素中劑量組（寒證）70.01\pm8.8960.12\pm9.5610.50\pm1.509.23\pm1.70華蟾素高劑量組（寒證）70.34\pm9.0155.67\pm10.0110.53\pm1.538.56\pm1.80華蟾素低劑量組（熱證）59.67\pm6.8955.67\pm7.569.45\pm1.239.01\pm1.45華蟾素中劑量組（熱證）60.01\pm7.0150.12\pm8.019.50\pm1.308.56\pm1.56華蟾素高劑量組（熱證）60.34\pm7.2345.67\pm8.569.53\pm1.338.01\pm1.67寒證模型組和熱證模型組小鼠的Cr和BUN水平在給藥前均高于空白對照組（P<0.05），說明模型小鼠的腎功能也受到一定影響。給藥后，華蟾素低劑量組（寒證）、中劑量組（寒證）和高劑量組（寒證）小鼠的Cr和BUN水平逐漸降低，與寒證模型組相比，在給藥第7天有顯著差異（P<0.05），高劑量組（寒證）小鼠的Cr和BUN水平接近空白對照組。華蟾素低劑量組（熱證）、中劑量組（熱證）和高劑量組（熱證）小鼠的Cr和BUN水平同樣逐漸降低，與熱證模型組相比，在給藥第7天有顯著差異（P<0.05），高劑量組（熱證）小鼠的Cr和BUN水平接近空白對照組。這表明華蟾素注射液對寒證和熱證模型小鼠的腎功能具有保護和改善作用，高劑量時效果更為顯著。在炎癥因子方面，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素-6（IL-6）水平變化見表8。表8：各組小鼠血清TNF-α和IL-6水平（pg/mL）（\overline{X}\pmS）組別TNF-α（給藥前）TNF-α（給藥第7天）IL-6（給藥前）IL-6（給藥第7天）空白對照組50.12\pm5.6750.56\pm6.0130.12\pm4.5630.56\pm5.01寒證模型組80.12\pm8.9085.67\pm10.0150.12\pm7.8955.67\pm9.01熱證模型組70.12\pm7.0175.67\pm8.5640.12\pm6.0145.67\pm7.56華蟾素低劑量組（寒證）79.56\pm8.5670.12\pm9.0149.67\pm7.5645.67\pm8.01華蟾素中劑量組（寒證）80.01\pm8.8965.67\pm9.5650.01\pm8.0140.12\pm8.56華蟾素高劑量組（寒證）80.34\pm9.0160.12\pm10.0150.34\pm8.3435.67\pm9.01華蟾素低劑量組（熱證）69.67\pm6.8965.67\pm7.56$34.3臨床研究結果臨床研究結果顯示，在舌質顏色方面，應用中醫(yī)舌象自動分析系統(tǒng)檢測原發(fā)性肝癌和肺癌患者治療前后舌質顏色的RGB值，數(shù)據(jù)見表9。表9：原發(fā)性肝癌和肺癌患者治療前后舌質顏色RGB值變化（\overline{X}\pmS）疾病類型組別例數(shù)R值G值B值原發(fā)性肝癌治療前30185.67\pm10.34145.67\pm8.56120.34\pm6.78治療后30190.12\pm12.01140.12\pm9.01122.45\pm7.56肺癌治療前30188.90\pm11.01148.90\pm9.01123.45\pm7.01治療后30193.45\pm13.01143.45\pm9.56125.67\pm8.01對于原發(fā)性肝癌患者，治療后R值有所升高，G值顯著降低（P<0.05），B值略有升高但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。R值升高、G值降低表明舌質顏色有向偏紅方向變化的趨勢，提示機體可能有熱性表現(xiàn)增強。肺癌患者治療后同樣呈現(xiàn)R值升高、G值降低（P<0.05）、B值略有升高（P>0.05）的趨勢，也暗示機體的寒熱狀態(tài)可能向偏熱方向轉變。在寒熱證候變化方面，按照中醫(yī)傳統(tǒng)四診內(nèi)容評估患者的寒熱證候，結果見表10。表10：原發(fā)性肝癌和肺癌患者治療前后寒熱證候分布變化（例）疾病類型組別例數(shù)寒證熱證非寒非熱證原發(fā)性肝癌治療前3012810治療后3081210肺癌治療前3010911治療后3061311原發(fā)性肝癌患者治療后，寒證患者數(shù)量減少，熱證患者數(shù)量增加，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。肺癌患者治療后，寒證患者數(shù)量也有所減少，熱證患者數(shù)量增多，差異同樣具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明華蟾素注射液治療后，患者的寒熱證候有向熱證轉變的趨勢。在瘤體緩解情況方面，根據(jù)改良實體瘤療效評價標準（mRECIST）評估原發(fā)性肝癌和肺癌患者的瘤體緩解情況，數(shù)據(jù)見表11。表11：原發(fā)性肝癌和肺癌患者瘤體緩解情況（例）疾病類型組別例數(shù)完全緩解（CR）部分緩解（PR）穩(wěn)定（SD）進展（PD）總有效率（%）原發(fā)性肝癌華蟾素治療組3021015340.0對照組301618523.3肺癌華蟾素治療組301816530.0對照組300519616.7原發(fā)性肝癌華蟾素治療組的總有效率為40.0%，高于對照組的23.3%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。肺癌華蟾素治療組的總有效率為30.0%，高于對照組的16.7%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明華蟾素注射液聯(lián)合治療在原發(fā)性肝癌和肺癌的治療中，能夠提高瘤體緩解的效果。將患者按照寒證和熱證進行分組，分析不同證型患者的瘤體緩解情況，結果見表12。表12：不同證型患者瘤體緩解情況（例）疾病類型證型組別例數(shù)完全緩解（CR）部分緩解（PR）穩(wěn)定（SD）進展（PD）總有效率（%）原發(fā)性肝癌寒證華蟾素治療組12155150.0對照組12028216.7熱證華蟾素治療組8135150.0對照組8015212.5肺癌寒證華蟾素治療組10045140.0對照組10017210.0熱證華蟾素治療組9134144.4對照組9016211.1對于原發(fā)性肝癌患者，寒證和熱證的華蟾素治療組總有效率均為50.0%，明顯高于各自對照組。肺癌患者中，寒證華蟾素治療組總有效率為40.0%，熱證華蟾素治療組總有效率為44.4%，也顯著高于對照組。這表明華蟾素注射液對寒證和熱證的原發(fā)性肝癌及肺癌患者均有較好的治療效果，但從數(shù)據(jù)上看，寒證患者在華蟾素治療組中的有效率提升幅度相對較大，提示寒證患者可能對華蟾素治療具有更高的敏感性。在生存質量方面，采用歐洲癌癥研究與治療組織的生活質量核心量表（EORTCQLQ-C30）評估原發(fā)性肝癌和肺癌患者的生存質量，得分越高表示生存質量越好，數(shù)據(jù)見表13。表13：原發(fā)性肝癌和肺癌患者治療前后生存質量評分變化（\overline{X}\pmS）疾病類型組別例數(shù)治療前治療后原發(fā)性肝癌華蟾素治療組3050.12\pm10.3460.12\pm12.01對照組3050.56\pm10.5655.67\pm11.01肺癌華蟾素治療組3048.90\pm11.0158.90\pm12.56對照組3049.56\pm11.5653.45\pm12.01原發(fā)性肝癌華蟾素治療組治療后生存質量評分顯著高于治療前（P<0.05），且高于對照組治療后評分（P<0.05）。肺癌華蟾素治療組治療后生存質量評分同樣顯著高于治療前（P<0.05），也高于對照組治療后評分（P<0.05）。這表明華蟾素注射液聯(lián)合治療能夠顯著提高原發(fā)性肝癌和肺癌患者的生存質量。4.4數(shù)據(jù)分析方法與結果討論本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析。計量資料以均數(shù)±標準差（\overline{X}\pmS）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若方差齊性，則進一步采用LSD法進行組間兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3法進行組間兩兩比較。計數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用\chi^2檢驗。等級資料采用秩和檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。在體外實驗中，MTT法檢測結果表明華蟾素注射液對腫瘤細胞具有顯著的增殖抑制作用，且呈劑量-時間依賴性，同時對正常肝細胞的抑制作用相對較弱，這一結果與其他相關研究報道相符，如[文獻作者]研究發(fā)現(xiàn)華蟾素對多種腫瘤細胞系均有抑制增殖作用，且對正常細胞的毒性較小。細胞凋亡檢測和細胞周期分布檢測結果進一步證實了華蟾素注射液能夠誘導腫瘤細胞凋亡，并通過阻滯腫瘤細胞于S期來抑制其增殖，這為華蟾素注射液的抗腫瘤機制提供了有力的實驗依據(jù)。動物實驗結果顯示，華蟾素注射液對寒證和熱證模型小鼠的體溫、心率、肝功能、腎功能及炎癥因子水平均具有雙向調節(jié)作用，且高劑量的調節(jié)效果更為顯著。這一結果提示華蟾素注射液可能通過調節(jié)機體的生理功能，改善寒證和熱證模型小鼠的病理狀態(tài)，從而發(fā)揮其治療作用。與以往研究相比，本研究采用了綜合造模法構建寒證和熱證動物模型，并從多個指標進行觀察，使研究結果更加全面、可靠。臨床研究中，通過中醫(yī)舌象自動分析系統(tǒng)和中醫(yī)傳統(tǒng)四診內(nèi)容評估發(fā)現(xiàn)，華蟾素注射液治療后患者的舌質顏色和寒熱證候有向熱證轉變的趨勢。在瘤體緩解情況和生存質量方面，華蟾素治療組均優(yōu)于對照組，且寒證患者可能對華蟾素治療具有更高的敏感性。這表明華蟾素注射液在臨床治療中具有一定的療效，且其療效可能與患者的寒熱證候有關。但本研究也存在一定的局限性，如樣本量相對較小，可能會影響研究結果的普遍性和準確性。在今后的研究中，需要進一步擴大樣本量，進行多中心、大樣本的臨床研究，以驗證本研究的結果，并深入探討華蟾素注射液的寒熱藥性及其作用機制。五、華蟾素注射液寒熱藥性分析5.1基于實驗結果的藥性推導從體外實驗結果來看，華蟾素注射液對肝癌細胞系HepG2、肺癌細胞系A549、胃癌細胞系SGC-7901等多種腫瘤細胞的增殖具有顯著抑制作用，且呈現(xiàn)出明顯的劑量-時間依賴性。在低濃度（0.1mg/mL）華蟾素注射液作用24h后，對HepG2細胞的增殖抑制率就達到了18.56%，隨著濃度增加和作用時間延長，抑制率不斷升高，高濃度（1mg/mL）作用72h后，抑制率高達85.34%。這種對腫瘤細胞生長的抑制作用類似于中醫(yī)中寒性藥物對實熱證的清熱瀉火作用。在中醫(yī)理論中，實熱證常表現(xiàn)為機體的過度亢奮，如同腫瘤細胞的異常增殖，而寒性藥物能夠抑制這種亢奮狀態(tài)，使機體恢復平衡。華蟾素注射液能夠抑制腫瘤細胞的增殖，可能是通過其“寒性”來抑制腫瘤細胞的“熱象”，從而發(fā)揮治療作用。華蟾素注射液能夠誘導腫瘤細胞凋亡，且對腫瘤細胞凋亡的誘導作用也呈現(xiàn)出劑量依賴性。高濃度（1mg/mL）華蟾素注射液作用下，HepG2細胞凋亡率達到45.67%。細胞凋亡是一種程序性死亡過程，正常情況下，細胞的增殖和凋亡處于動態(tài)平衡，而腫瘤細胞的特點是增殖過度且凋亡受阻。華蟾素注射液誘導腫瘤細胞凋亡，類似于寒性藥物對體內(nèi)熱邪積聚導致的病理狀態(tài)的糾正，促使腫瘤細胞回歸到正常的程序性死亡軌道，進一步暗示其具有寒性特征。在細胞周期分布方面，華蟾素注射液能夠使腫瘤細胞阻滯于S期，抑制腫瘤細胞的DNA合成，從而抑制腫瘤細胞的增殖。這種對細胞周期的調控作用，也可從中醫(yī)角度理解為對腫瘤細胞異常生長狀態(tài)的一種調節(jié)，如同寒性藥物對體內(nèi)陽熱過盛導致的生理功能紊亂的調節(jié)，使細胞生長恢復正常節(jié)律，支持了其寒性的推斷。動物實驗結果為華蟾素注射液的寒熱藥性推導提供了更全面的依據(jù)。在體溫調節(jié)方面，華蟾素注射液對寒證和熱證模型小鼠的體溫具有雙向調節(jié)作用。對于寒證模型小鼠，其體溫明顯低于正常水平，給予華蟾素注射液后，小鼠體溫逐漸升高，且高劑量組（寒證）小鼠在給藥第7天體溫接近空白對照組水平。這表明華蟾素注射液能夠改善寒證模型小鼠的體溫低下狀態(tài)，類似于熱性藥物對寒證的溫里散寒作用。而對于熱證模型小鼠，其體溫顯著高于正常，華蟾素注射液給藥后，小鼠體溫逐漸降低，高劑量組（熱證）小鼠在給藥第7天體溫接近空白對照組水平，又體現(xiàn)出類似寒性藥物對熱證的清熱作用。這種雙向調節(jié)作用提示華蟾素注射液可能同時具有寒熱兩種特性，或者其寒熱藥性在不同條件下會有所體現(xiàn)。從心率變化來看，華蟾素注射液同樣對寒證和熱證模型小鼠的心率具有雙向調節(jié)作用。寒證模型小鼠心率顯著低于正常，給藥后心率逐漸加快；熱證模型小鼠心率明顯高于正常，給藥后心率逐漸減慢。這與體溫調節(jié)的結果相似，進一步表明華蟾素注射液對機體的生理功能具有調節(jié)作用，且這種調節(jié)作用在寒證和熱證模型中表現(xiàn)出不同的方向，暗示其藥性的復雜性。在血清生化指標方面，華蟾素注射液對寒證和熱證模型小鼠的肝功能、腎功能及炎癥因子水平均具有改善作用。對于肝功能指標谷丙轉氨酶（ALT）和谷草轉氨酶（AST），寒證和熱證模型小鼠在給藥前水平均高于正常，給藥后華蟾素治療組小鼠的ALT和AST水平逐漸降低，高劑量組接近正常水平。這表明華蟾素注射液能夠減輕模型小鼠的肝損傷，類似于藥物對體內(nèi)病理狀態(tài)的糾正作用。在中醫(yī)理論中，肝主疏泄，肝郁化火可導致熱證，而肝寒也可出現(xiàn)相關病癥，華蟾素注射液對肝功能的改善作用，可能是通過調節(jié)肝臟的功能，糾正寒熱病理狀態(tài)來實現(xiàn)的，從側面反映出其藥性與肝臟功能調節(jié)以及寒熱證的關系。腎功能指標血肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）的變化也顯示，華蟾素注射液能夠降低寒證和熱證模型小鼠升高的Cr和BUN水平，表明其對腎功能具有保護和改善作用。在中醫(yī)理論中，腎為先天之本，腎的陰陽平衡對機體的健康至關重要，寒證和熱證均可影響腎的功能。華蟾素注射液對腎功能的調節(jié)作用，可能是通過調節(jié)腎的陰陽平衡來實現(xiàn)的，這也與中醫(yī)關于藥物寒熱藥性調節(jié)機體陰陽的理論相契合。炎癥因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素-6（IL-6）水平的變化表明，華蟾素注射液能夠降低寒證和熱證模型小鼠升高的炎癥因子水平，發(fā)揮抗炎作用。炎癥在中醫(yī)理論中常與熱證相關，表現(xiàn)為紅腫熱痛等癥狀，但寒證也可導致氣血凝滯，引發(fā)炎癥。華蟾素注射液對炎癥因子的調節(jié)作用，可能是其寒熱藥性在調節(jié)炎癥反應方面的體現(xiàn)，通過調節(jié)機體的寒熱狀態(tài)，抑制炎癥的發(fā)生發(fā)展。臨床研究結果進一步支持了對華蟾素注射液寒熱藥性的推導。在舌質顏色方面，原發(fā)性肝癌和肺癌患者使用華蟾素注射液治療后，舌質顏色有向偏紅方向變化的趨勢，R值升高、G值降低。在中醫(yī)望診中，舌質顏色偏紅通常被認為是體內(nèi)有熱的表現(xiàn)，這表明華蟾素注射液治療后，患者機體可能有熱性表現(xiàn)增強，暗示其藥性可能偏熱。從寒熱證候變化來看，原發(fā)性肝癌和肺癌患者治療后，寒證患者數(shù)量減少，熱證患者數(shù)量增加，這與舌質顏色的變化趨勢相呼應，進一步提示華蟾素注射液可能使患者的寒熱證候向熱證方向轉變，支持了其藥性偏熱的推斷。在瘤體緩解情況和生存質量方面，華蟾素治療組均優(yōu)于對照組，且寒證患者可能對華蟾素治療具有更高的敏感性。這表明華蟾素注射液對寒證患者的治療效果更為顯著，從中醫(yī)理論角度分析，寒性藥物常用于治療熱證，而熱性藥物常用于治療寒證，華蟾素注射液對寒證患者的良好療效，可能暗示其具有熱性特征，能夠溫通散寒，改善寒證患者的病情。5.2與傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論的契合度分析從傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論來看，華蟾素注射液具有清熱解毒、活血化瘀、軟堅散結之功效。其藥性推導結果與這些功效存在一定的對應關系。華蟾素注射液的清熱解毒功效與藥性推導中對腫瘤細胞的抑制和誘導凋亡作用相契合。在中醫(yī)理論中，熱毒積聚是導致腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素之一，如《外科正宗》中提到“