(12)發(fā)明專利(10)授權(quán)公告號(hào)CN116716204B(65)同一申請(qǐng)的已公布的文獻(xiàn)號(hào)(83)生物保藏信息(73)專利權(quán)人山東碧藍(lán)生物科技有限公司地址271000山東省泰安市寧陽(yáng)經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)區(qū)磁窯立交橋南2000米陶寧孟潔韓廣泉張國(guó)珍張文娟申小冉(74)專利代理機(jī)構(gòu)濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司37221專利代理師王磊A23KA23KA23KA23K30/18(2016.01)1/125(2006.01)一株枯草芽孢桿菌亞種及其在降解木質(zhì)素中的應(yīng)用(57)摘要本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一株枯草芽孢桿菌亞種及其在降解木質(zhì)素中的應(yīng)用。命名為枯草芽孢桿菌亞種(Bacillussubtilissubsp.)NBL-B12058,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏時(shí)間為2022年10月17日，保藏編號(hào)為CCTCCNO:M20221574,保藏地址為中國(guó)·武漢·武漢大學(xué)。本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌亞種對(duì)農(nóng)作物秸稈以及造紙廠黑水中的木質(zhì)素具有21.一株枯草芽孢桿菌亞種，其特征是，命名為枯草芽孢桿菌亞種(Bacillussubtilissubsp.)NBL-B12058,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏時(shí)間為2022年10月24日，保藏2.一種枯草芽孢桿菌亞種的培養(yǎng)方法，其特征是，將權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌亞種加入至培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。3.如權(quán)利要求2所述的枯草芽孢桿菌亞種的培養(yǎng)方法，其特征是，所述培養(yǎng)基為NA培養(yǎng)基。4.如權(quán)利要求3所述的枯草芽孢桿菌亞種的培養(yǎng)方法，其特征是，所述NA培養(yǎng)基中，蛋5.一種枯草芽孢桿菌亞種的菌劑，其特征是，包括權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌亞種。6.如權(quán)利要求5所述的枯草芽孢桿菌亞種的菌劑，其特征是，還包括纖維素酶、木聚糖酶和/或蛋白酶。7.一種權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌亞種和/或權(quán)利要求5或6所述的枯草芽孢桿菌亞種的菌劑在降解木質(zhì)素中的應(yīng)用。8.一種權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌亞種和/或權(quán)利要求5或6所述的枯草芽孢桿菌亞種的菌劑在秸稈發(fā)酵還田或發(fā)酵青貯飼料中的應(yīng)用。9.一種權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌亞種和/或權(quán)利要求5或6所述的枯草芽孢桿菌亞種的菌劑在降解造紙黑液中木質(zhì)素的應(yīng)用。10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征是，將所述枯草芽孢桿菌亞種接種于造紙黑液中進(jìn)行培養(yǎng)；或，將枯草芽孢桿菌亞種的菌劑施加至造紙黑液進(jìn)行降解處理。3一株枯草芽孢桿菌亞種及其在降解木質(zhì)素中的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一株枯草芽孢桿菌亞種及其在降解木質(zhì)素中的應(yīng)用。背景技術(shù)[0002]公開(kāi)該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。[0003]在自然界中，能降解木質(zhì)素并產(chǎn)生相應(yīng)酶類的生物只占少數(shù)。其中研究最多的真菌有：黃孢厚毛平革菌(Phanerochetechrysosporium)、彩絨草蓋菌(Coridusversicolor)、變色栓菌(Thametesversicolor)、射脈菌(Phlebia子菌亞門(mén)，無(wú)隔擔(dān)子菌亞綱、無(wú)褶菌目的多孔菌科。降解木質(zhì)素的放線菌主要有鏈霉菌屬(Streptomyces)、節(jié)桿菌屬(Arthrobaeter)、小單孢菌屬(Micromonospora)和諾卡氏菌不動(dòng)桿菌(Acinetobacter)和芽孢桿菌(Bacillus)等也具有木質(zhì)素降解效果。[0004]目前在微生物降解木質(zhì)素的研究中，利用真菌降解木質(zhì)素的研究多于細(xì)菌，但是限制性調(diào)控較強(qiáng)；此外，真菌酶的穩(wěn)定性相對(duì)細(xì)菌較差。由于以上多種原因，使得真菌在工業(yè)化應(yīng)用中仍然較少，目前存在木質(zhì)素較多的廢物主要包括農(nóng)作物秸稈、造紙廠黑水，降解農(nóng)作物秸稈、造紙廠黑水中的木質(zhì)素的環(huán)境不同，導(dǎo)致無(wú)法采用同一種微生物對(duì)農(nóng)作物秸稈、造紙廠黑水中的木質(zhì)素進(jìn)行降解。發(fā)明內(nèi)容[0005]為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一株枯草芽孢桿菌亞種及其在降解木質(zhì)素中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌亞種對(duì)農(nóng)作物秸稈以及造紙廠黑水中的木質(zhì)素具有良好的降解效果。[0007]一方面，一株枯草芽孢桿菌亞種，命名為枯草芽孢桿菌亞種(Bacillussubtilissubsp.)NBL-B12058,保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏時(shí)間為2022年10月17日，保藏[0008]另一方面，一種枯草芽孢桿菌亞種的培養(yǎng)方法，將上述枯草芽孢桿菌亞種加入至培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。[0009]所述培養(yǎng)基可以為NA培養(yǎng)基、苯胺藍(lán)-BM培養(yǎng)基、木質(zhì)素磺酸鈉培養(yǎng)基、羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基、無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基(赫奇遜氏(Hutchinson)培養(yǎng)基(g/L))。[0010]進(jìn)一步地，所述培養(yǎng)基為NA培養(yǎng)基。更進(jìn)一步地，所述NA培養(yǎng)基中，蛋白胨9.5~410.5g/L、牛肉浸粉2.5～3.5g/L、NaCl4.5～5.5g/L、瓊脂19.[0011]第三方面，一種枯草芽孢桿菌亞種的菌劑，包括上述枯草芽孢桿菌亞種、上述枯草芽孢桿菌亞種的發(fā)酵物和/或上述枯草芽孢桿菌亞種的代謝產(chǎn)物。[0013]第四方面，一種上述枯草芽孢桿菌亞種和/或枯草芽孢桿菌亞種的菌劑在降解木質(zhì)素中的應(yīng)用。[0014]第五方面，一種上述枯草芽孢桿菌亞種和/或枯草芽孢桿菌亞種的菌劑在秸稈發(fā)酵還田或發(fā)酵青貯飼料中的應(yīng)用。[0015]第六方面，一種上述枯草芽孢桿菌亞種和/或枯草芽孢桿菌亞種的菌劑在降解造紙黑液中木質(zhì)素的應(yīng)用。[0016]具體地，將所述枯草芽孢桿菌亞種接種于造紙黑液中進(jìn)行培養(yǎng)。[0017]具體地，將所述枯草芽孢桿菌亞種的菌劑施加至造紙黑液進(jìn)行降解處理。[0018]本發(fā)明的有益效果為：[0019]本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌亞種NBL-B12058,能同時(shí)降解半纖維素、纖維素和木質(zhì)素的降解率分別達(dá)到18.88%、23.22%和44.28%,具有較高的應(yīng)用價(jià)值。[0020]經(jīng)過(guò)研究表明，本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌亞種NBL-B12058具有較高的木質(zhì)素過(guò)氧化物酶、錳過(guò)氧化物酶、纖維素酶和漆酶的活性，因而可應(yīng)用于秸稈發(fā)酵還田、發(fā)酵青貯飼料等。[0021]本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌亞種NBL-B12058搭配使用纖維素酶、木聚糖酶及蛋白酶，降解效果更佳，對(duì)木質(zhì)素的降解率高達(dá)40.08%。[0022]本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌亞種NBL-B12058接種于造紙黑液中仍能保持其對(duì)木質(zhì)素的降解效果，30d時(shí)，對(duì)木質(zhì)素的降解率為29.87%。附圖說(shuō)明[0023]構(gòu)成本發(fā)明的一部分的說(shuō)明書(shū)附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定。[0026]圖3為本發(fā)明實(shí)施例中枯草芽孢桿菌亞種NBL-B12058的形態(tài)特征圖。具體實(shí)施方式[0027]為了使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠更加清楚地了解本發(fā)明的技術(shù)方案，以下將結(jié)合具體的實(shí)施例與對(duì)比例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。[0028]實(shí)施例[0032]土樣和水樣采集后，回實(shí)驗(yàn)室立即放于-20℃保存，以殺死土壤中的昆蟲(chóng)和植物組織及一些病毒。處理10小時(shí)之后，于4℃解凍，土樣需除去植5[0033]2.培養(yǎng)基配制用過(guò)濾器加入苯胺藍(lán)溶液，苯胺藍(lán)最終在培養(yǎng)基中的濃度為0.1g/L。[0036](3)木質(zhì)素磺酸鈉培養(yǎng)基：木質(zhì)素磺酸鈉2g/L、K?HPO?1g/L、KH?PO?1g/L、(NH[0037](4)羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基：檸檬酸鈉1.5g/L、(NH?)?2PO?5g/L、KH?PO?10g/L、MgSO?·H?00.2g/L、羧甲基纖維素鈉CMC-Na1g/L,p[0038](5)無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基(赫奇遜氏(Hutchinson)培養(yǎng)基(g/L)):KH?PO?1.0g/L、NaCl為7.2。[0039]3.菌株分離純化[0040]取5g樣品放入裝有100mL無(wú)菌水的三角瓶中浸泡，低速震蕩0.5h后取樣品水樣梯[0041]4.木質(zhì)素降解菌的篩選[0042]采用苯胺藍(lán)平板水解透明圈法篩選木質(zhì)素降解菌，均勻點(diǎn)菌于苯胺藍(lán)-BM培養(yǎng)基平板上，37℃倒置培養(yǎng)1～2d,期間觀察菌落水解圈出現(xiàn)與否及水解圈大小。觀察并記錄透明圈的直徑(D,cm)和菌落直徑(d,cm),計(jì)算其比值，即H=D/d。[0043]5.纖維素降解菌篩選[0044]采用剛果紅染色法篩選纖維素降解菌，點(diǎn)接于培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)2d,用0.1%的剛果紅水溶液浸染30min,棄染液再用1mol/L的NaCl水溶液脫色1h。觀察并記錄透明圈的直徑(D,cm)和菌落直徑(d,cm),計(jì)算其比值，即H=D/d。[0045]6.初篩結(jié)果[0046]從采集的21份樣品中，共分離純化得到87株菌，對(duì)其中的46株芽孢桿菌進(jìn)行苯胺藍(lán)平板水解透明圈法和剛果紅染色法分別篩選木質(zhì)素降解菌和纖維素降解菌。排除致病菌后，有25株菌的苯胺藍(lán)退色效果較好(表1),推測(cè)具有木質(zhì)素降解效果。通過(guò)剛果紅退色實(shí)驗(yàn)，初篩獲得26株具有纖維素降解效果的菌株(表2)。[0047]表1苯胺藍(lán)退色實(shí)驗(yàn)結(jié)果自編號(hào)自編號(hào)6表2剛果紅退色實(shí)驗(yàn)結(jié)果自編號(hào)自編號(hào)7[0055]挑取細(xì)菌接種于種子液中，37℃過(guò)夜培養(yǎng)，以2%接種量接種于NB液體培養(yǎng)基中，10000rpm離心10min,取上清液。[0056]2.錳過(guò)氧化物酶(Manganeseperoxidase,MnP)活力測(cè)定[0057]在4mL反應(yīng)體系中含50mmol/L(pH值4.5)的乳酸鈉緩沖液3.4mL、1.6mmol/L的硫酸錳溶液0.1mL、粗酶液0.4mL,預(yù)熱至37℃時(shí)，加1.6mmol/L的H?O?溶液0.1mL啟動(dòng)反應(yīng)。在3min20s左右時(shí)轉(zhuǎn)移至比色皿，測(cè)定238nm處反應(yīng)4min的吸光光度值(OD)。在對(duì)照組中，以未接菌的NB培養(yǎng)基代替原酶液，以蒸餾水代替H?O?溶液，其他反應(yīng)物不變。錳過(guò)氧化物酶活力定義為每分鐘使1μmol/L的Mn2+轉(zhuǎn)化為Mn3+所需的酶量為1個(gè)酶活力單位(U/L)。測(cè)定結(jié)果如第7d時(shí)錳過(guò)氧化物酶活達(dá)到最高。[0058]表3錳過(guò)氧化物酶活性測(cè)定錳過(guò)氧化物酶酶活力(U/L)[0061]3.木質(zhì)素過(guò)氧化物酶(Ligninperoxidase,LiP)活力測(cè)定[0062]反應(yīng)體系中含酶液0.5mL,4mmol/L藜蘆醇0.4mL,125mmol/L酒石酸緩沖液2.0mL8波長(zhǎng)處測(cè)定反應(yīng)最初3min內(nèi)的吸光度變化。在對(duì)照組中，以未接菌的NB培養(yǎng)基代替原酶液，以蒸餾水代替H?0?溶液，其他反應(yīng)物不變。酶活力定義30℃時(shí)每分鐘使1μmol的藜蘆醇轉(zhuǎn)化質(zhì)素過(guò)氧化物酶Lip活性較高，其中12058酶活在第3天時(shí)最高，為5.45nmol/min/L(表4)。[0063]表4木質(zhì)素過(guò)氧化物酶Lip活性測(cè)定[0065]4.漆酶(Laccase,Lac)活力測(cè)定[0066]3mL反應(yīng)體系，室溫下反應(yīng)。取3mMABTS溶液0.2mL,再加入pH4.5的0.1M緩沖液2.7mL,充分混勻，預(yù)熱至30℃,最后加入粗酶液0.1mL,立即計(jì)時(shí)并迅速混勻，2min20s轉(zhuǎn)移至比色皿，放置于紫外可見(jiàn)或可見(jiàn)分光光度計(jì)中，準(zhǔn)確測(cè)定反應(yīng)液在420nm波長(zhǎng)處反應(yīng)3min的吸光值?？瞻子梦唇泳腘B培養(yǎng)基代替粗酶液。酶活力定義為：每性較高，其中12058漆酶活在第7天時(shí)最高，為12.64U/kg(表5)。[0067]表5漆酶活性測(cè)定9[0069]5.纖維素酶(Cellulase,Cel)活力測(cè)定[0070]取25mL的具塞刻度試管，加入0.5mL1%的羧甲基纖維素鈉(pH5.5,含有0.1M乙酸鈉緩沖液)溶液，再加入粗酶液0.5mL,充分混勻，50℃水浴，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)10min。取出后加入1.0mLDNS(可調(diào)),搖勻后沸水浴中加熱反應(yīng)液10min,迅速冷卻至室溫，看是否需要稀釋，取適量液體轉(zhuǎn)移至比色皿中，并放置于可見(jiàn)分光光度計(jì)中，測(cè)定反應(yīng)液在550nm波長(zhǎng)處的吸光值。空白用蒸餾水代替。酶活力國(guó)際單位定義為：每分鐘產(chǎn)生1μmol葡萄糖所需的酶量[0071]表6纖維素酶活性測(cè)定纖維素酶酶活力(U/g)4.09±0.17d[0074]將上述篩選到的菌株，挑選4株酶活較高的菌株，即12058、E17、F12和J1進(jìn)行玉米秸稈搖瓶實(shí)驗(yàn)。[0076](1)中性洗滌劑：稱取18.6g乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)和6.8g四硼酸鈉于1L燒杯中，用少量蒸餾水加熱將其溶解后，用水加熱溶解30g十二烷基硫酸鈉(SDS)和10mL乙二醇乙醚(易燃),及4.56g無(wú)水Na?HPO?于另外一個(gè)燒杯中，二者混合后稀釋至1L,調(diào)節(jié)pH為6.9-[0077](2)72%硫酸溶液：將665mL密度為1.84g/mL的濃硫酸倒入裝有800mL水的1L容量[0078](3)2mol/L鹽酸溶液：取167mL密度為1.19g/mL的濃鹽酸于裝有600mL水的1L容量[0079]液體發(fā)酵培養(yǎng)基：5.00g未處理秸稈+赫奇遜氏(Hutchinson)培養(yǎng)液200mL。[0081](1)準(zhǔn)備新鮮秸稈烘干、粉碎、過(guò)篩，準(zhǔn)確稱重5.00g玉米秸稈加入180mL赫奇遜氏[0082](2)活化菌種，并于培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)48h后，按照10%的接種量接入步驟1中的培養(yǎng)基中于37℃、180r/min震蕩培養(yǎng)30d,每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。[0083](3)培養(yǎng)30d時(shí)取樣，于無(wú)菌操作臺(tái)中取出發(fā)酵液，倒入已知重量的網(wǎng)袋中，于烘箱中85℃過(guò)夜烘干后采用改進(jìn)的VanSoest洗滌法測(cè)定秸稈中纖維素、半纖維素、木質(zhì)素含量，以計(jì)算出秸稈各組分的降解率。[0085](1)分別向裝有樣品的中100mL碘瓶中加入70mL中性洗滌劑，置于已沸的高壓鍋中，設(shè)置100℃保溫50min后，取出過(guò)濾，濾渣洗滌至pH在6.5-7.0左右，依次用95%乙醇、無(wú)水乙醇和丙酮反復(fù)洗滌，經(jīng)洗滌2次后，放入烘箱烘干至恒重WO。[0086](2)將殘?jiān)蓸又糜?50mL燒杯中，加入70mL2mol/L的鹽酸溶液，放入已沸騰的高壓鍋中，設(shè)置100℃保溫50min后過(guò)濾，至溶液呈中性，后用95%乙醇、無(wú)水乙醇和丙酮依次反復(fù)洗滌后，放入烘箱中烘干至恒重W1,則半纖維素含量為WO-W1。[0087](3)向殘?jiān)蓸又屑尤胫评涞?2%硫酸10mL,放置于室內(nèi)降解4h,隨后加入90mL[0088](4)將殘?jiān)糜隈R弗爐中550℃灰化4h,取出稱重W3,W2-W3即為木質(zhì)11菌株半纖維素含半纖維素降解纖維素含纖維素降解木質(zhì)素含木質(zhì)素降解[0092]秸稈搖瓶實(shí)驗(yàn)表明，以上4株菌對(duì)玉米秸稈中的半纖維素、纖維素和木質(zhì)素均有降解效果。其中12058對(duì)半纖維素和木質(zhì)素的降解效果最佳，降解率分別為18.88%和44.28%,E17對(duì)纖維素的降解效果最好，降解率為30.41%。[0094]稱取長(zhǎng)度為1-2cm左右的干玉米秸稈，按照表8處理接菌，并加自來(lái)水水調(diào)節(jié)至秸稈含水量為65%,充分混勻后將秸稈裝于長(zhǎng)寬高內(nèi)徑約45cm的泡沫箱中，室溫下(10-25℃)以堆積狀態(tài)進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，關(guān)注含水率，若含水率過(guò)低，需及時(shí)補(bǔ)水至60%左右。設(shè)置同等施水量，且不接菌試驗(yàn)組為對(duì)照。秸稈腐熟過(guò)程中半纖維素、纖維素以及木質(zhì)素降解率如表9所示。[0095]表8秸稈腐熟實(shí)驗(yàn)設(shè)置12058(枯草芽孢桿菌亞種)纖維素酶(20萬(wàn)U/g)(20萬(wàn)U/g)蛋白酶(5萬(wàn)U/g)水稈菌株半纖維素降解率%纖維素降解率%木質(zhì)素降解[0099]玉米秸稈腐熟實(shí)驗(yàn)表明，12058在玉米秸稈腐熟過(guò)程中，對(duì)半纖維素、纖維素以及木質(zhì)素有較好降解效果，搭配使用纖維素酶、木聚糖酶及蛋白酶，降解效果更佳，對(duì)木質(zhì)素的降解率高達(dá)40.08%。[0101]將培養(yǎng)好的12058按10%的接種量接入滅菌后的造紙黑液中，37℃、180r/min震蕩培養(yǎng)30d,并以接種等量的NB培養(yǎng)基作為對(duì)照。30d后測(cè)定木質(zhì)素降解率。結(jié)果如表10所示。結(jié)果表明12058在造紙廠黑液中仍能保持其對(duì)木質(zhì)素的降解效果，30d時(shí)，對(duì)木質(zhì)素的降解率為29.87%。[0104]六、低溫條件下玉米秸稈堆肥效果試驗(yàn)菌NBL-B12058處理的秸稈中的纖維素、半纖維素和木質(zhì)素的降解率、秸稈腐熟效果和腐熟秸稈對(duì)種子發(fā)芽效果。[0107]試驗(yàn)于2021年12月5日開(kāi)始，制備玉米秸稈堆肥的長(zhǎng)*寬*高=1m*1.5m*1m,按照秸稈1層、尿素1層、清水1層的方式逐層堆制，調(diào)節(jié)初始堆體的C/N=20-30:1,水分50%-60%的條件，腐熟過(guò)程中適當(dāng)補(bǔ)充水分，并外蓋塑料布，處理組除用降解菌液替代清水外，其它[0108]表11玉米秸稈堆肥實(shí)驗(yàn)設(shè)置(枯草芽孢桿菌亞種)纖維素酶(20萬(wàn)U/g)木聚糖酶(20萬(wàn)U/g)蛋白酶(5萬(wàn)U/g)半纖維素降解率纖維素降解率25天50天75天25天50天75天[0131]由表12可知，各處理秸稈的纖維素、半纖維素和木質(zhì)素降解率隨著腐熟時(shí)間延長(zhǎng)而增加，使用秸稈降解菌液處理的T1和T2的三個(gè)指標(biāo)的降解率顯著大于未使用降解菌劑處理的對(duì)照組CK,從第25天時(shí)，T1和T2處理對(duì)秸稈中三種物質(zhì)的降解速度也顯著快于對(duì)照組CK,說(shuō)明使用降解菌液的秸稈腐熟速度在低溫條件下，能快速啟動(dòng)定殖生長(zhǎng)，降解玉米秸稈，并且使用復(fù)合降解菌液處理的T2組的降解率也顯著大于單株降解菌液T1,說(shuō)明前期優(yōu)化組方后的復(fù)合菌液的降解速率也優(yōu)于單株菌的效果。4.2秸稈堆肥腐熟表觀情況表13秸稈腐熟表觀情況25天軟化程度50天75天軟化程度軟化程度味硬味軟味軟黑黃色味黑黃色味軟黑黃色味降解菌液處理的T1和T2的秸稈顏色、氣味和軟化程度等均顯著優(yōu)于未使用菌液處理的對(duì)照組CK,且第50天，復(fù)合降解菌液處理的T2秸稈的顏色也優(yōu)于單株菌液處理的T1,說(shuō)明使用菌液處理的秸稈腐熟程度快于未使用的，且復(fù)合菌液處理的腐熟效果也優(yōu)于單株菌液。[0136]4.3種子發(fā)芽率及發(fā)芽指數(shù)[0137]參照NY525-2012有機(jī)肥料標(biāo)準(zhǔn)芽指數(shù)代表有機(jī)物料的腐熟度，由表14可知，三個(gè)組處理的秸稈浸提液的黃瓜種子發(fā)芽指數(shù)均大于70%,符合有機(jī)肥料標(biāo)準(zhǔn)。復(fù)合菌液處理組T2的種子發(fā)芽指數(shù)最高，單株菌液處理的T1次之，秸稈清水對(duì)照組的T3最低，說(shuō)明使用木質(zhì)素降解菌液處理秸稈的腐熟度高與未使用的。[0138]表14秸稈浸提液對(duì)黃瓜種子發(fā)芽的影響處理發(fā)芽率1%/T2-秸稈T2[0140]結(jié)論：在秋收后冬季進(jìn)行的玉米秸稈堆肥腐熟試驗(yàn)中，接種木質(zhì)素降解菌液秸稈中的纖維素、半纖維素、木質(zhì)素的降解率及秸稈顏色、氣味、手感軟化程度等表觀指標(biāo)和浸提液對(duì)種子的發(fā)芽指數(shù)均優(yōu)于未接種菌液的對(duì)照處理，且在低溫條件下，能快速發(fā)揮降解作用，降解速率及腐熟程度也快于對(duì)照。[0142]1.試驗(yàn)?zāi)康模翰捎眯←溄斩捴苯舆€田的方式，研究使用木質(zhì)素降解菌處理耕作土中的秸稈，腐熟一段時(shí)間后對(duì)土壤養(yǎng)分情況和播種下茬作物生長(zhǎng)的效果。[0145]常規(guī)種植試驗(yàn)田，選取條件均勻的地塊，分成3組，每組12m2(長(zhǎng)*寬=2m*6m),將6.5kg粉碎成2-3cm的秸稈均勻平鋪到地面，撒施降解菌液，翻耕入田，澆水使土壤含水量達(dá)到50-60%,腐熟30天，中間可適當(dāng)每組補(bǔ)充等量清水，腐熟完成后，播種玉米，品種“鄭單[0146]試驗(yàn)分組3個(gè)：[0147]CK:秸稈+清水；[0148]T1:秸稈+降解菌液；[0149]T2:秸稈+競(jìng)品腐熟劑；[0150]2.2采樣及指標(biāo)測(cè)定[0151](1)土壤樣品采集及指標(biāo)[0152]在秸稈撒施降解菌液翻耕入田后取土樣作為初始值，和腐熟30天播種時(shí)取土樣作為腐熟結(jié)束值，采用多點(diǎn)取樣法對(duì)各處理植株根際0～25cm深的土樣進(jìn)行采集，裝入無(wú)菌密[0153](2)植株生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定[0155]3數(shù)據(jù)分析[0156]3.1降解菌液處理秸稈直接還田對(duì)土壤養(yǎng)分情況的影響[0157]表15土壤養(yǎng)分情況CN116716204B說(shuō)明書(shū)14/15頁(yè)處理初始30天初始30天2*腐熟30天后較初始含量增加比率將秸稈還田腐熟30天后，土壤中養(yǎng)分情況見(jiàn)表15,可以發(fā)現(xiàn)使用降解菌液組T1組的三種有效養(yǎng)分含量較初始增加最多，競(jìng)品腐熟劑T2組次之，自然腐熟CK組最少，說(shuō)明使用降解菌液處理秸稈后，能將土壤被固定的養(yǎng)分和秸稈中的大分子有機(jī)質(zhì)進(jìn)行降解和礦物質(zhì)化為植物速效營(yíng)養(yǎng)，大幅提高土壤有效養(yǎng)分含量，提升土壤肥力，且對(duì)三種養(yǎng)分含量的增幅效果也遠(yuǎn)大于競(jìng)品腐熟劑和自然腐熟組。[0162]3.2降解菌液