白芨多糖對兩種常見致病菌抑菌活性和機(jī)制的研究摘要：以白芨為原材料，通過堿水提取法提取白芨多糖，經(jīng)木瓜蛋白酶精制后采用苯酚-硫酸法測定提取物中白芨多糖含量，采用濾紙片擴(kuò)散法對大腸桿菌和沙門氏菌進(jìn)行系列濃度梯度的抑菌試驗(yàn)，確定白芨多糖對兩種常見致病菌的抑菌效果，之后分別通過測白芨多糖處理過的大腸桿菌培養(yǎng)液的電導(dǎo)率、堿性磷酸酶和蛋白質(zhì)含量推斷白芨多糖的抑菌機(jī)制。結(jié)果表明：白芨多糖對大腸桿菌和沙門氏菌均有抑菌作用，其對大腸桿菌的抑菌機(jī)制包括但不限于破壞菌體的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)。可為白芨潛在價值的開發(fā)和利用提供依據(jù)。關(guān)鍵字：白芨；多糖；濾紙片擴(kuò)散法；抑菌活性；抑菌機(jī)制StudyonantibacterialactivityandmechanismofbletillastriatapolysaccharideontwocommonpathogenicbacteriaAbstract:With

bletilla

as

raw

materials,

bletilla

polysaccharide

was

extracted

by

alkaline

extraction

method,

after

the

refined

papain

by

phenol

-

sulfuric

acid

method

of

bletilla

polysaccharide

content

in

the

extract,

then

using

filter

diffusion

method

for

e.

coli

and

salmonella

series

concentration

gradient

bacteriostatic

test,

determine

the

bletilla

polysaccharide

bacteriostatic

effect

of

two

kinds

of

common

pathogens.then

the

antibacterial

mechanism

of

bletilla

polysaccharide

was

deduced

by

measuring

the

electrical

conductivity

alkaline

phosphatase

and

protein

content

of

e.

coli

culture

solution

treated

with

bletilla

polysaccharide.

The

results

showed

that

bletilla

striata

polysaccharide

had

antibacterial

effect

on

both

escherichia

coli

and

salmonella,its

antibacterial

mechanism

against

escherichia

coli

includes

but

is

not

limited

to

the

destruction

of

cell

membrane

and

cell

wall

structure,whichcanprovideabasisforthedevelopmentandutilizationofbletillae.Keywords:Bletilla;Polysaccharide;Ffilterdiffusion;Bacteriostaticactivity;Antibacterialmechanism白芨為多年生草本植物，屬蘭科白芨屬，主要產(chǎn)地在我國廣西、貴州、四川、云南、陜西南部等，具有廣泛的藥用價值和觀賞價值。在我國，白芨入藥已有上千年的歷史，中藥白芨是白芨的干燥塊莖，而其發(fā)揮藥效的主要成分是白芨膠質(zhì)。已有研究表明，白芨膠質(zhì)主要成分為大分子雜多糖，由葡萄糖和甘露糖以一定比例通過β-糖苷鏈聚合而成，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具有較強(qiáng)粘性的物理性質(zhì)，并具有抑菌，止血，抗腫瘤，抗氧化，免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)創(chuàng)面愈合等生物學(xué)活性。作為一種廉價易得的高分子材料，白芨多糖在許多領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用，例如，在食品領(lǐng)域可用作藥膳，也可通過制成復(fù)合液利用其抗氧化性用于水果的運(yùn)輸和儲藏，保持果實(shí)的良好品質(zhì)；在臨床方面可用于止血和促進(jìn)術(shù)后創(chuàng)面愈合；在化妝品領(lǐng)域也可利用其抗氧化活性制成相關(guān)產(chǎn)品；同時，白及膠具有的較強(qiáng)粘性使其在新型高分子材料方面也有很好的應(yīng)用前景。近年來，關(guān)于白芨多糖的研究增多，但主要還是其在臨床和作為高分子材料方向的應(yīng)用，而對白芨多糖抑菌活性的研究較少。本文主要研究白芨多糖對兩種常見致病菌的抑菌活性及其對大腸桿菌的抑菌機(jī)制，可對白芨在抑菌方向的開發(fā)利用提供參考。1.儀器、材料與試劑1.1儀器恒溫干燥箱、小型粉碎機(jī)、分析天平、恒溫水浴鍋、電爐、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、電導(dǎo)率儀、分光光度儀均由成都市青羊區(qū)疾病預(yù)防控制中心提供。1.2材料云南白芨，取自云南省文林市古木鎮(zhèn)，大腸桿菌和沙門氏菌由成都市青羊區(qū)疾病預(yù)防控制中心提供。1.3試劑蒸餾水，實(shí)驗(yàn)室自制；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品、木瓜蛋白酶；硫酸、苯酚、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鉀、氯化鈉、乙醇均為AR級；普通營養(yǎng)瓊脂；LB液體培養(yǎng)基；諾福殺菌劑；堿性磷酸鹽試劑盒；考馬斯亮藍(lán)G-250；磷酸二氫鉀；磷酸氫二鈉；氯化鈉；氯化鉀。2.方法2.1材料的準(zhǔn)備取完整無損的白芨種球于流水下洗凈，切片后置于恒溫干燥箱中，52℃下烘48h至無水分。將干燥后的白芨片經(jīng)小型粉碎機(jī)粉碎后得白芨粉。2.2白芨多糖提取稱取白芨粉80g，加20倍量體積ph=10的氫氧化鈉溶液，在恒溫水浴鍋中于80℃下浸提4h。提取液濾過之后取上清，蒸發(fā)濃縮至稠膏狀，加1倍體積的85%乙醇4℃沉淀8h，過濾之后55℃干燥，即得粗多糖。2.3多糖精制稱取白芨粗多糖12g，溶于200ml蒸餾水中，加入精密稱取的0.060g木瓜蛋白酶，將待水解液調(diào)成ph=7，在恒溫水浴鍋中于55℃水解3h。酶解完成后在水解液中加入2倍體積85%乙醇4℃沉淀8h，過濾干燥后得白芨多糖。2.4多糖含量測定2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作準(zhǔn)確稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，配制成2.5g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9ml于比色管中，再各加1ml的5%苯酚溶液和5ml濃硫酸，用蒸餾水定容至25ml刻度線，震蕩搖勻后靜置30min，在490nm波長下測其OD值。以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（X，ug/ml）為橫坐標(biāo)，以O(shè)D值（Y）為縱坐標(biāo)，得出線性方程與相關(guān)系數(shù)分別為Y=0.010X+0.006，R2=0.999，表明線性關(guān)系良好。2.4.2白芨多糖含量測定精密稱取干燥的白芨多糖3.00g，加入適量蒸餾水溶解后定容至100ml，配成樣品溶液。吸取1ml樣品溶液于比色管中，再加1ml的5%苯酚溶液和5ml濃硫酸，用蒸餾水定容至25ml刻度線，震蕩搖勻后靜置30min，在490nm波長下測其OD值。將OD值帶入回歸方程，得其濃度。通過白芨多糖含量計算公式W（%）=（樣品濃度×樣品定容體積/樣品質(zhì)量）×100求得精制后的白芨多糖中多糖含量。2.5抑菌活性試驗(yàn)2.5.1菌懸液的制備取大腸桿菌和沙門氏菌菌株，接種到兩支普通營養(yǎng)瓊脂斜面上，37℃培養(yǎng)24h后，以1.0號麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管為對照，用接種環(huán)從斜面上挑菌至20ml無菌生理鹽水中制成菌懸液，菌懸液中細(xì)菌數(shù)約為3×108個/ml。2.5.2濾紙片的制備用打孔器制作直徑為1cm的濾紙片，置于錐形瓶中高壓滅菌。精密稱取精制后的白芨多糖2.00g溶于20ml無菌生理鹽水中，稀釋成1:1、1:10、1:100、1:500的濃度梯度，同時用無菌生理鹽水做陰性對照，用稀釋10倍的諾福殺菌劑做陽性對照。將滅菌后的濾紙片置于上述濃度梯度的白芨多糖溶液和陰陽性對照中，于冰箱中浸泡過夜后取出瀝干多余溶液，密封保存?zhèn)溆谩?.5.3接種在無菌條件下吸取0.5ml菌液，注入普通營養(yǎng)瓊脂平板中，用無菌涂布器涂勻，將不同濃度多糖溶液浸泡過及陰陽性對照的濾紙片置于平皿上，用鑷子按壓，使濾紙片緊貼于培養(yǎng)基上。每個濃度梯度設(shè)置一個平行，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，觀察菌落生長情況，有無抑菌圈的形成。2.6抑菌機(jī)制試驗(yàn)2.6.1對數(shù)生長期細(xì)菌的培養(yǎng)用接種環(huán)挑取一環(huán)復(fù)蘇后培養(yǎng)的大腸桿菌菌液（因2.5抑菌活性試驗(yàn)結(jié)果表明白芨多糖對大腸桿菌的抑菌活性較好，所以抑菌機(jī)制試驗(yàn)采用大腸桿菌做目標(biāo)菌）于Luria-Bertani液體培養(yǎng)基（以下簡稱LB液體培養(yǎng)基）中，搖床震蕩培養(yǎng)2h后，以LB液體培養(yǎng)基做空白對照，每隔30min測其OD600，其OD600在0.35-0.6之間的時期為大腸桿菌的對數(shù)生長期。2.6.2細(xì)胞膜通透性試驗(yàn)將白芨多糖用適量蒸餾水溶解后過濾除菌，加入到LB液體培養(yǎng)基中使其濃度為50mg/ml。將處于對數(shù)生長期的大腸桿菌菌液通過1.0號麥?zhǔn)蠞岫裙芎蚅B液體培養(yǎng)基調(diào)整其菌液濃度為3×108CFU/ml后，轉(zhuǎn)入上述白芨多糖-LB液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)，分別于0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h時通過電導(dǎo)率儀測其電導(dǎo)率，同時以不加白芨多糖的培養(yǎng)基為對照。2.6.3細(xì)胞壁通透性試驗(yàn)將白芨多糖用適量蒸餾水溶解后過濾除菌，加入到LB液體培養(yǎng)基中使其濃度為50mg/ml。將處于對數(shù)生長期的大腸桿菌菌液通過1.0號麥?zhǔn)蠞岫裙芎蚅B液體培養(yǎng)基調(diào)整其菌液濃度為3×108CFU/ml后，轉(zhuǎn)入上述白芨多糖-LB液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)，分別于0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h時按照堿性磷酸酶試劑盒說明書進(jìn)行處理，在410nm波長下測其吸光度值，同時以不加白芨多糖的培養(yǎng)基為對照。2.6.4菌液蛋白質(zhì)濃度試驗(yàn)2.6.4.1Bradford濃染液的配制將100mg考馬斯亮藍(lán)G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后用蒸餾水補(bǔ)充至1000ml。于4℃冰箱中凍存?zhèn)溆谩?.6.4.2蛋白質(zhì)濃度測定將白芨多糖用適量蒸餾水溶解后過濾除菌，加入到LB液體培養(yǎng)基中使其濃度為50mg/ml。將處于對數(shù)生長期的大腸桿菌菌液通過1.0號麥?zhǔn)蠞岫裙芎蚅B液體培養(yǎng)基調(diào)整其菌液濃度為3×108CFU/ml后，轉(zhuǎn)入上述白芨多糖-LB液體培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)，分別于0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h時取3ml菌液加入2ml按1:5用蒸餾水稀釋的Bradford濃染液結(jié)合溶液，作用2min后，在595nm波長下測其吸光度值，以不加白芨多糖的培養(yǎng)基為對照。同時考慮到前面提取的白芨多糖中可能存在蛋白質(zhì)對試驗(yàn)結(jié)果造成影響，在相同條件下通過Bradford法測白芨多糖的吸光度值做空白以消除影響。3.結(jié)果3.1白芨多糖提取及含量測定3.1.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線表1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)系列試劑0123456789葡萄糖濃度0102030405060708090吸光度0.00130.10550.22100.32660.44680.52830.64750.74890.85040.9561圖1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線3.1.2多糖含量采用堿水提取法從80g白芨粉中提取白芨粗多糖13.27g，經(jīng)木瓜蛋白酶精制后得白芨多糖10.78g,通過苯酚-硫酸法測得精制后的白芨多糖含量為53.2%。3.2抑菌活性采用濾紙片法對大腸桿菌和沙門氏菌進(jìn)行白芨多糖的抑菌活性試驗(yàn)，以稀釋10倍的諾福殺菌劑做陽性對照，以無菌生理鹽水做陰性對照。試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)白芨多糖在53.2mg/ml即多糖溶液1:1稀釋時對兩種菌均有抑制作用，均出現(xiàn)明顯的抑菌環(huán)，且兩種細(xì)菌的抑菌環(huán)大小不同。當(dāng)白芨多糖在5.3mg/ml及更低濃度時，培養(yǎng)基上未出現(xiàn)明顯的抑菌環(huán)。推斷白芨多糖在高濃度時對細(xì)菌的生長有抑制作用，且抑菌活性隨著濃度的降低而減弱，并且對不同的細(xì)菌抑菌活性表現(xiàn)不同。（因白芨多糖對大腸桿菌的抑菌活性強(qiáng)于沙門氏菌，所以后續(xù)試驗(yàn)采用大腸桿菌）圖2.陽性對照圖3.陰性對照圖4.大腸桿菌（1:1稀釋度）圖5.沙門氏菌（1:1稀釋度）3.3細(xì)胞膜通透性試驗(yàn)細(xì)菌細(xì)胞膜是細(xì)菌的保護(hù)屏障。當(dāng)細(xì)菌遇到不利生長條件或是抑菌劑的作用時，細(xì)菌細(xì)胞膜會遭受破壞導(dǎo)致其半透性喪失，菌體內(nèi)部電解質(zhì)如K+大量滲入至培養(yǎng)液使培養(yǎng)液的電導(dǎo)率上升，因此，菌液電導(dǎo)率的變化反映了細(xì)菌細(xì)胞膜通透性的變化情況。圖6.細(xì)胞膜通透性試驗(yàn)圖6是大腸桿菌經(jīng)白芨多糖處理后其LB液體培養(yǎng)基的電導(dǎo)率變化情況。經(jīng)統(tǒng)計分析，試驗(yàn)組和對照組的電導(dǎo)率值具有顯著性差異（P＜0.05），說明白芨多糖作用于大腸桿菌會破壞其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致胞內(nèi)電解質(zhì)大量滲入胞外。3.4細(xì)胞壁通透性試驗(yàn)細(xì)菌細(xì)胞壁具有抗?jié)B透壓及保持菌體形狀等作用，在細(xì)菌細(xì)胞膜和細(xì)胞壁之間存在堿性磷酸酶，在細(xì)菌的正常生長繁殖過程中，堿性磷酸酶不能通過細(xì)胞壁滲透到胞外。當(dāng)細(xì)胞壁遭受一定程度的破壞后，堿性磷酸酶便能通過透性增加的細(xì)胞壁滲透到胞外。因此，通過檢測細(xì)菌培養(yǎng)液中堿性磷酸酶的含量變化可以判斷細(xì)胞壁受損的情況。圖7.細(xì)胞壁通透性試驗(yàn)圖7反映的是大腸桿菌經(jīng)白芨多糖處理后其LB液體培養(yǎng)基中堿性磷酸酶含量的變化情況。經(jīng)統(tǒng)計分析，試驗(yàn)組和對照組的堿性磷酸酶含量具有顯著性差異（P＜0.05），說明白芨多糖作用于大腸桿菌會破壞其細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞壁通透性增加，從而使堿性磷酸酶通過細(xì)胞壁滲透到胞外。3.5培養(yǎng)液蛋白質(zhì)濃度試驗(yàn)蛋白質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)的大分子物質(zhì)，正常情況下，蛋白質(zhì)不可能通過細(xì)胞膜和細(xì)胞壁滲透到細(xì)胞外。通過檢測大腸桿菌培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)含量的變化，可以反映菌體細(xì)胞膜和細(xì)胞壁的受損情況。圖8.蛋白質(zhì)濃度試驗(yàn)圖8是大腸桿菌經(jīng)白芨多糖處理后其LB液體培養(yǎng)基中蛋白質(zhì)濃度的變化情況，經(jīng)統(tǒng)計分析，試驗(yàn)組和對照組的蛋白質(zhì)含量具有顯著性差異（P＜0.05），說明白芨多糖會使大腸桿菌胞內(nèi)的蛋白質(zhì)外滲，進(jìn)一步說明白芨多糖會對大腸桿菌的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁的通透性造成影響。4.結(jié)論報道表明，很多植物的多糖均具有抑菌作用。本次試驗(yàn)通過濾紙片擴(kuò)散法對常見致病菌大腸桿菌和沙門氏菌進(jìn)行抑菌活性試驗(yàn)，結(jié)果表明，白芨多糖濃度在50mg/ml左右時對兩種致病菌均具有抑菌作用，并且對兩種細(xì)菌的抑菌活性強(qiáng)度不同。藥物的抑菌作用包括損傷細(xì)菌的細(xì)胞膜，干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，抑制細(xì)菌核酸、蛋白質(zhì)的合成，破壞胞內(nèi)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)等。本次試驗(yàn)通過白芨多糖對大腸桿菌LB液體培養(yǎng)基中電導(dǎo)率、堿性磷酸酶和蛋白質(zhì)含量的變化情況分析了白芨多糖對大腸桿菌的抑菌機(jī)制，結(jié)果表明，白芨多糖能通過破壞細(xì)菌細(xì)胞膜和細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)，改變其滲透壓，從而抑制細(xì)菌的生長，與已有的研究結(jié)果基本一致。而白芨多糖是否存在其他的抑菌機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。參考文獻(xiàn):[1]劉長命,王潔.白芨多糖提取的工藝優(yōu)化[J].商洛學(xué)院學(xué)報,2018,32(4):2-4.[2]朱昌玲,張鋒倫.幾種天然產(chǎn)物的抑菌性能研究[J].中國野生植物資源,2017,36(5):2-3.[3]蔡年春,胡仁火,李亞男,王歡,王娟.六種中草藥提取液的抑菌殺菌作用研究[J].咸寧學(xué)院學(xué)報,2009,2(3):1-2.[4]林福林,楊昌云,楊薇薇,黃美蓉,龐素秋.中藥白芨的現(xiàn)代研究概況[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2013,33(7):571-572.[5]陶阿麗,金耀東,劉金旗,張國升.中藥白芨化學(xué)成分、藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(11):6-9.[6]陳玉,張曉芳,朱劍東.五倍子、白芨、龍膽草對變形鏈球菌影響的研究[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志,2008,24(3):147-148.[7]商晉.白芨多糖提取工藝的研究進(jìn)展及其在食品中的應(yīng)用[J].工藝技術(shù),2018,1(39):124-127.[8]曾志紅,陳玲苗,黃秋蓉.丁香提取物對枝孢霉菌的抑菌效果及抑菌機(jī)理[J].森林與環(huán)境學(xué)報,2019,39(1):77-81.[9]代建麗,周斯荻,劉銘軒,史玉恒,張國彬,吳業(yè)穎.白芨多糖的抑菌作用研究[J].安徽農(nóng)學(xué)通報,2015,21(19):19-21.[10]張雪嬌,劉春葉.苯酚-硫酸比色法測定白芨膠中的多糖含量[J].化學(xué)研究與應(yīng)用.2014,26(5):717-720.[11]韓丹,王艷萍,畢亞靜,劉福強(qiáng).白芨多糖提取方法的優(yōu)選及其理化性質(zhì)的研究[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志,2013,31(1):35-37.[12]劉長命,沙銀花.不同產(chǎn)地野生白芨中白芨膠含量及抑菌活性比較分析[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,63(04):17-20.[13]韓廣權(quán),孫義華,羅曉靜.中藥白及藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志,2004,22(4):215-217.[14]侯偉峰,謝晶,藍(lán)蔚青,朱軍偉.植酸對大腸桿菌抑菌機(jī)理的研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2012,28(2):443-447.[15]謝麗,孫瑞珠,馬玉龍.應(yīng)用電導(dǎo)率儀測定微生物生物量的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(31):19048-19050.[16]MichinoriK,NorikoS,MihoY,etal.ApplicationstudiesofrhizomaBletillae(rhizomesofBletillastriata)onatopicdermatitis[J].Naturemedicine,2013,57(2):55-60.[17]HakimuddinF,PaliyathG,MeclingK,SelectivecytotoxicityofaredwineflavonoidfratetionagainstMCF-7cells[J].BreastCancerResTreatment,2014,85(1):65-70.[18]PENGQ,LIM,XUEF,etal.StructureandimmunobiologicalactivityofanewpolysaccharidefromBletillastriata[J].CarbohydratePolymers,2014,107(8):119-123.致謝:感謝成都市青羊區(qū)疾病預(yù)防控制中心為本次試驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)室及所需的儀器和試劑，感謝成都市青羊區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科老師對本次試驗(yàn)的大力支持以及對本人試驗(yàn)的悉心指導(dǎo)。

白芨多糖提取工藝及其抑菌機(jī)制研究進(jìn)展摘要：本文綜述近年來白芨多糖提取工藝及其抑菌機(jī)制的研究進(jìn)展，主要從白芨多糖的提取工藝、抑菌機(jī)制和白芨多糖在其他領(lǐng)域的應(yīng)用三方面展開。

關(guān)鍵字：白芨多糖；提取；抑菌機(jī)制Research

progress

on

extraction

technology

and

antibacterial

mechanism

of

bletilla

striata

polysaccharideAbstract:

this

paper

reviews

the

research

progress

of

bletilla

bletilla

polysaccharide

extraction

technology

and

antibacterial

mechanism

in

recent

years,

mainly

including

the

extraction

technology,

antibacterial

mechanism

and

application

of

bletilla

bletilla

polysaccharide

in

other

fields.Key

words:

bletilla

polysaccharide;

Extraction;

Bacteriostatic

mechanisms白芨為多年生草本植物，屬蘭科白芨屬，主要產(chǎn)地在我國廣西、貴州、四川、云南、陜西南部等，具有廣泛的藥用價值和觀賞價值。在我國，白芨入藥已有上千年的歷史，中藥白芨是白芨的干燥塊莖，而其發(fā)揮藥效的主要成分是白芨膠質(zhì)。已有研究表明，白芨膠質(zhì)主要成分為大分子雜多糖，由葡萄糖和甘露糖以一定比例通過β-糖苷鏈聚合而成，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具有較強(qiáng)粘性的物理性質(zhì)，并具有抑菌，止血，抗腫瘤，抗氧化，免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)創(chuàng)面愈合等生物學(xué)活性。作為一種廉價易得的高分子材料，白芨多糖在許多領(lǐng)域都具有廣泛的應(yīng)用，例如，在食品領(lǐng)域可用作藥膳，也可通過制成復(fù)合液利用其抗氧化性用于水果的運(yùn)輸和儲藏，保持果實(shí)的良好品質(zhì)；在臨床方面可用于止血和促進(jìn)術(shù)后創(chuàng)面愈合；在化妝品領(lǐng)域也可利用其抗氧化活性制成相關(guān)產(chǎn)品；同時，白及膠具有的較強(qiáng)粘性使其在新型高分子材料方面也有很好的應(yīng)用前景。本文從從白芨多糖的提取工藝、抑菌機(jī)制和白芨多糖在其他領(lǐng)域的應(yīng)用三方面展開綜述。1.白芨多糖的提取工藝1.1提取1.1.1水提-醇沉法該方法是白芨多糖提取的常用工藝，方法簡單。首先將白芨塊莖洗凈干燥粉碎，加入蒸餾水?dāng)嚢杈鶆蚝蠓胖眠^夜，次日加水并于60℃水浴鍋中加熱提取。提取完成后將濾液濃縮至粘稠狀加乙醇沉淀，過濾得到沉淀物后洗凈干燥即為白芨粗多糖。1.1.2堿水提取法該方法與水提-醇沉法類似。不同之處是提取液采用ph=10的氫氧化鈉溶液，該方法的提取效率要高于水提-醇沉法。1.1.3醇提法醇提法同樣與水提-醇沉法類似。不同之處是提取液采用80%的乙醇，該方法提取效率優(yōu)于以上兩種方法。1.1.4逆流提取法逆流提取法適合規(guī)?；陌总付嗵翘崛?，單罐容量500L，每批投料30kg。最適的提取工藝為料液比1:14、提取時間3h、提取溫度60℃，提取完成后同樣采用醇沉干燥得粗多糖。在實(shí)驗(yàn)室條件下，逆流提取可通過小型回流裝置實(shí)現(xiàn)。1.1.5超聲波提取法超聲波可造成植物細(xì)胞的破裂，從而有利于植物細(xì)胞內(nèi)有效成分的溶出，相比于傳統(tǒng)浸提法具有操作簡便，提取效率更高的特點(diǎn)。該方法首先用石油醚脫脂，再用蒸餾水超聲提取。后面的步驟與傳統(tǒng)方法類似。該方法的最佳提取參數(shù)為超聲時間50min，溫度60℃，超聲波頻率400W，料液比1:50。1.1.6酶解法該方法主要利用纖維素酶提取白芨多糖，首先將纖維素酶活化，再將一定量的白芨粉末浸泡于兩倍體積的蒸餾水，接著將活化好的酶和浸泡的白芨粉置于磷酸鹽緩沖液中50℃酶解，之后同樣采用醇沉干燥得白芨粗多糖。除了采用纖維素酶酶解外，還可采用酸性蛋白酶、果膠酶等進(jìn)行酶解。1.2精制精制的主要目的是去除粗多糖中的蛋白質(zhì)。1.2.1三氯乙酸法該方法時往白芨多糖中加入10%的三氯乙酸，將ph調(diào)制3.0后靜置過夜，之后離心取上清透析、干燥的白芨多糖。1.2.2氯仿-正丁醇法于白芨粗多糖溶液中加入氯仿-正丁醇（4:1）試劑，振蕩離心后取水層干燥得白芨多糖。1.2.3蛋白酶精制該方法的蛋白酶加入量為5mg/g底物，水解時間120min,水解體系按所選用蛋白酶的最適合=體系?？捎玫鞍酌赣心竟系鞍酌?，中性蛋白酶，糜胰蛋白酶，堿性蛋白酶等。2.抑菌機(jī)制研究報道表明，很多植物的多糖均具有抑菌作用。藥物的抑菌作用包括損傷細(xì)菌的細(xì)胞膜，干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，抑制細(xì)菌核酸、蛋白質(zhì)的合成，破壞胞內(nèi)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)等。2.1電導(dǎo)率測定細(xì)菌細(xì)胞膜是細(xì)菌的保護(hù)屏障。當(dāng)細(xì)菌遇到不利生長條件或是抑菌劑的作用時，細(xì)菌細(xì)胞膜會遭受破壞導(dǎo)致其半透性喪失，菌體內(nèi)部電解質(zhì)如K+大量滲入至培養(yǎng)液使培養(yǎng)液的電導(dǎo)率上升，因此，菌液電導(dǎo)率的變化反映了細(xì)菌細(xì)胞膜通透性的變化情況。該方法是將白芨多糖處理的細(xì)菌培養(yǎng)液經(jīng)不同培養(yǎng)時間培養(yǎng)后用電導(dǎo)率儀測其電導(dǎo)率，通過繪制電導(dǎo)率變化曲線判斷其細(xì)胞膜受損情況。2.2堿性磷酸酶試驗(yàn)細(xì)菌細(xì)胞壁具有抗?jié)B透壓及保持菌體形狀等作用，在細(xì)菌細(xì)胞膜和細(xì)胞壁之間存在堿性磷酸酶，在細(xì)菌的正常生長繁殖過程中，堿性磷酸酶不能通過細(xì)胞壁滲透到胞外。當(dāng)細(xì)胞壁遭受一定程度的破壞后，堿性磷酸酶便能通過透性增加的細(xì)胞壁滲透到胞外。因此，通過檢測細(xì)菌培養(yǎng)液中堿性磷酸酶的含量變化可以判斷細(xì)胞壁受損的情況。該方法與電導(dǎo)率試驗(yàn)類似，只不過其測定堿性磷酸鹽的方法采用快速試劑盒和或酶標(biāo)儀。2.3培養(yǎng)液蛋白質(zhì)含量試驗(yàn)蛋白質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)的大分子物質(zhì)，正常情況下，蛋白質(zhì)不可能通過細(xì)胞膜和細(xì)胞壁滲透到細(xì)胞外。通過檢測大腸桿菌培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)含量的變化，可以反映菌體細(xì)胞膜和細(xì)胞壁的受損情況。該方法的分析步驟與前兩種方法類似，其蛋白質(zhì)測定方法可采用考馬斯亮藍(lán)法。三種方法可用于論證白芨多糖的抑菌機(jī)制可能為破壞菌體的胞膜和胞壁。3.白芨多糖的應(yīng)用3.1食品領(lǐng)域作為一種傳統(tǒng)的中藥，白芨可入藥，也可用作藥膳。因其具有抗氧化的作用，可將白芨多糖制成試劑用于果蔬的運(yùn)輸和保存。3.2醫(yī)學(xué)領(lǐng)域白芨多糖在臨床、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域也同樣有應(yīng)用。其可促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用使其可用于術(shù)后創(chuàng)口愈合，其抗腫瘤的能力可用于臨床治療癌癥的研究，其具有的免疫調(diào)節(jié)作用使其同樣能應(yīng)用于臨床增強(qiáng)免疫力方面。參考文獻(xiàn)：[1]劉長命,王潔.白芨多糖提取的工藝優(yōu)化[J].商洛學(xué)院學(xué)報,2018,32(4):2-4.[2]朱昌玲,張鋒倫.幾種天然產(chǎn)物的抑菌性能研究[J].中國野生植物資源,2017,36(5):2-3.[3]蔡年春,胡仁火,李亞男,王歡,王娟.六種中草藥提取液的抑菌殺菌作用研究[J].咸寧學(xué)院學(xué)報,2009,2(3):1-2.[4]林福林,楊昌云,楊薇薇,黃美蓉,龐素秋.中藥白芨的現(xiàn)代研究概況[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2013,33(7):571-572.[5]陶阿麗,