GB/T31270.11-XXXX

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件是GB/T31270《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》的第1部分。GB/T31270已經(jīng)發(fā)布了以下

部分：

——第1部分：土壤代謝試驗(yàn)；

——第2部分：水解試驗(yàn)；

——第3部分：水中直接光解試驗(yàn)；

——第4部分：土壤吸附/解吸試驗(yàn)；

——第5部分：土壤淋溶試驗(yàn)；

——第6部分：揮發(fā)性試驗(yàn)；

——第7部分：生物富集試驗(yàn)；

——第8部分：水-沉積物系統(tǒng)代謝試驗(yàn)；

——第9部分：鳥類短期飼喂毒性試驗(yàn)；

——第10部分：蜜蜂急性毒性試驗(yàn)；

——第11部分：家蠶急性毒性試驗(yàn)；

——第12部分：魚類急性毒性試驗(yàn)；

——第13部分：溞類急性活動(dòng)抑制試驗(yàn)；

——第14部分：藻類生長抑制試驗(yàn)；

——第15部分：蚯蚓急性毒性試驗(yàn)；

——第16部分：土壤微生物毒性試驗(yàn)；

——第17部分：天敵赤眼蜂急性毒性試驗(yàn)；

——第18部分：天敵兩棲類急性毒性試驗(yàn)；

——第19部分：非靶標(biāo)植物影響試驗(yàn)；

——第20部分：家畜短期飼喂毒性試驗(yàn)；

——第21部分：大型甲殼類生物毒性試驗(yàn)；

——第22部分：土壤表面光解試驗(yàn)；

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GB/T31270.11-XXXX

——第23部分：鳥類急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)。

本文件代替GB/T31270.11-2014《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則第11部分：家蠶急性毒性試

驗(yàn)》，與GB/T31270.11-2014相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化如下：

a)增加了規(guī)范性引用文件一章（見第2章）；

b)更改了術(shù)語與定義中半致死濃度的表述（見3.1，2014版的2.1），刪除了供試物、化學(xué)農(nóng)藥、

原藥、制劑、有效成分、參比物質(zhì)的相關(guān)規(guī)定（見2014版的2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7）；

c)更改了試驗(yàn)原理，刪除了浸葉法毒性試驗(yàn)的概述，增加了噴霧法毒性試驗(yàn)的方法表述（見4和

4.1，2014版本的3和3.1）；

d)增加了試驗(yàn)所需的試劑、供試桑葉的要求（見第6章，2014年版的4.1.1）；

e)更改了被試物的要求（見第8章，2014年版的4.1.2）；

f)更改了試驗(yàn)步驟，刪除了浸葉法毒性試驗(yàn)，增加了噴霧法毒性試驗(yàn)的操作描述（見第9章和9.1，

2014版的4.2.1）；

g)更改了試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理方法（見第10章，2014年版的4.3）。

h)刪除了農(nóng)藥對家蠶的急性毒性等級(jí)劃分（2014年版的附錄A）。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。

本文件由中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出并歸口。

本文件起草單位：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所。

本文件主要起草人：袁善奎、張燕、周艷明、陳朗、曲甍甍、周欣欣、劉亮、趙秀振、朱麗珍、陳

思琪、高歆越、李江宇。

本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：

——GB/T31270.11-2014；

——本次為第一次修訂。

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GB/T31270.11-XXXX

化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則

第11部分：家蠶急性毒性試驗(yàn)

警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問題。

使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧⒈ＷC符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。

1范圍

本文件規(guī)定了噴霧法和熏蒸法測定化學(xué)農(nóng)藥家蠶急性毒性的試驗(yàn)條件、試劑或材料、儀器設(shè)備、樣

品、試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、質(zhì)量控制以及試驗(yàn)報(bào)告等的基本要求。

本文件適用于為化學(xué)農(nóng)藥登記而進(jìn)行的家蠶急性毒性試驗(yàn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

NY/T2882.5農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估指南第5部分：家蠶

NY/T4195.4農(nóng)藥登記環(huán)境影響試驗(yàn)生物試材培養(yǎng)第4部分：家蠶

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

半致死濃度medianlethalconcentration

在噴霧法毒性試驗(yàn)中，引起50%受試家蠶死亡時(shí)桑葉中的被試物濃度，用LC50表示。

注：單位為毫克被試物每千克桑葉（mg被試物/kg桑葉）或毫克有效成分每千克桑葉（mga.i./kg桑葉）。

4原理

4.1噴霧法毒性試驗(yàn)

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GB/T31270.11-XXXX

以噴霧處理后的桑葉飼喂二齡起蠶，觀察24h、48h、72h、96h后受試家蠶的中毒癥狀及死亡情

況，試驗(yàn)結(jié)束后對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，求出LC50及其95%置信區(qū)間。

4.2熏蒸法毒性試驗(yàn)

針對衛(wèi)生用藥模擬室內(nèi)施藥條件進(jìn)行的試驗(yàn)，應(yīng)在滿足試驗(yàn)要求的熏蒸試驗(yàn)裝置或熏蒸室內(nèi)進(jìn)行。

熏蒸試驗(yàn)裝置或熏蒸室應(yīng)在滿足試驗(yàn)要求的前提下，按照推薦用藥量設(shè)計(jì)相關(guān)參數(shù)。被試物在試驗(yàn)裝置

或熏蒸室中定量燃燒（或電加熱），從熏蒸開始，按0.5h、2h、4h、6h、8h觀察記錄熏蒸試驗(yàn)裝置

內(nèi)家蠶的毒性反應(yīng)癥狀，8h后將試驗(yàn)裝置內(nèi)的家蠶取出，在家蠶常規(guī)飼養(yǎng)條件下繼續(xù)觀察24h及48h

的家蠶死亡情況。

5試驗(yàn)條件

試驗(yàn)溫度為（25±2）℃，相對濕度為70%～85%，光照周期（光暗比）應(yīng)為16h:8h。

6試劑或材料

6.1試劑

除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水。

6.1.1丙酮（C3H6OCAS號(hào)：67-64-1）、二甲基甲酰胺（C3H7NOCAS號(hào)：68-12-2）、二甲基亞砜

（C2H6OSCAS號(hào)：67-68-5）等有機(jī)溶劑。

6.1.2樂果（C5H12NO3PS2CAS號(hào)：60-51-5）。

6.1.3瓊脂（CAS號(hào)：9002-18-0）。

6.2供試生物

選用菁松×皓月等有代表性的家蠶(Bombyxmori)品種，按照NY/T4195.4的要求培養(yǎng)。以二齡起蠶作

為受試家蠶。

6.3供試桑葉

采集蠶桑樹（Morusalba）頂端新鮮、清潔、無污染的嫩葉用于試驗(yàn)。未使用的桑葉可用保鮮膜包

裹葉柄，放入密封袋中冷藏保存，保存時(shí)間最長1周。

7儀器設(shè)備

噴霧設(shè)備（應(yīng)噴霧均勻，可定量計(jì)算）；

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人工氣候室；

恒溫恒濕培養(yǎng)箱；

分析天平（感量0.0001g）；

培養(yǎng)皿（宜選用直徑20cm）；

熏蒸箱等。

8樣品

被試物

農(nóng)藥原（母）藥或制劑。試驗(yàn)開始前，應(yīng)了解被試物的以下信息：

a)水中溶解度；

b)有機(jī)溶劑中的溶解度；

c)代表性制劑的田間推薦施藥量及其使用次數(shù)等。

參比物

宜選用樂果原藥為參比物。

9試驗(yàn)步驟

噴霧法

9.1.1預(yù)試驗(yàn)

按正式試驗(yàn)的條件，以較大的間距設(shè)置4個(gè)～5個(gè)處理組，以確定正式試驗(yàn)的濃度范圍。

9.1.2正式試驗(yàn)

9.1.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)確定的濃度范圍按一定比例間距（幾何級(jí)差≤2.2）設(shè)置5個(gè)～7個(gè)濃度組，并設(shè)空白對

照，被試物使用溶劑助溶時(shí)，還需設(shè)溶劑對照。每個(gè)處理組和對照組均設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20頭二齡

起蠶。

9.1.2.2試驗(yàn)藥液配制

將被試物用水配制成不同濃度的試驗(yàn)藥液。對于難溶于水的可用少量對家蠶毒性小的有機(jī)溶劑（如

丙酮、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜等）、乳化劑或分散劑助溶，其用量不得超過0.1mL（g）/L，且各

處理組用量一致。

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9.1.2.3染毒

9.1.2.3.1選取大小和重量盡量一致的供試桑葉，宜保留1cm~2cm的葉柄，每片葉重范圍為2.0g～3.0

g。采用噴霧設(shè)備將試驗(yàn)藥液噴于桑葉的背面。噴藥前稱量桑葉的重量，噴藥后立即再次稱量桑葉重量，

以確定每片桑葉上噴施被試物的準(zhǔn)確量。待桑葉晾干后，在每個(gè)培養(yǎng)皿中放置3片桑葉作為1個(gè)重復(fù)。同

時(shí)可將桑葉的葉柄插入裝有1%瓊脂培養(yǎng)基的離心管中，以保持葉片新鮮。

9.1.2.3.2選擇健康、大小一致的二齡起蠶，隨機(jī)移入培養(yǎng)皿中的桑葉上。試驗(yàn)期間持續(xù)飼喂染毒桑葉，

如出現(xiàn)葉片枯萎，應(yīng)及時(shí)更換染毒桑葉。

9.1.2.4觀察與記錄

在染毒后24h、48h、72h和96h觀察并記錄家蠶中毒癥狀及死亡數(shù)。若試驗(yàn)72h～96h家蠶的死

亡率增加10%以上，應(yīng)換喂未染毒的新鮮桑葉并延長觀察時(shí)間，直至24h內(nèi)死亡率增加<10%。

9.1.3限度試驗(yàn)

限度濃度為5000mg被試物/kg桑葉或按NY/T2882.5計(jì)算出的PEC的70倍（取高值）。限度濃度下未

見家蠶死亡，則無需進(jìn)行正式試驗(yàn)。

9.1.4參比物試驗(yàn)

每批蠶卵進(jìn)行一次參比物試驗(yàn)，同批蠶卵至少每兩個(gè)月進(jìn)行一次參比物試驗(yàn)。

熏蒸法

熏蒸試驗(yàn)可在熏蒸箱或其他可滿足試驗(yàn)要求的試驗(yàn)裝置內(nèi)進(jìn)行。供試物在試驗(yàn)裝置內(nèi)定量燃燒（或

電熱片加熱），從熏蒸開始，按0.5h、2h、4h、6h、8h觀察并記錄熏蒸試驗(yàn)裝置內(nèi)家蠶的毒性反應(yīng)癥

狀，8h后，將熏蒸試驗(yàn)裝置內(nèi)的家蠶取出，在家蠶常規(guī)飼養(yǎng)條件下繼續(xù)觀察24h及48h的家蠶死亡

情況。每個(gè)處理組設(shè)置9個(gè)重復(fù)，同時(shí)設(shè)置空白對照（設(shè)3個(gè)重復(fù)）。觀察記錄家蠶攝食情況（減少或

拒食）、不適癥狀（逃避、昂頭、晃頭、甩頭、扭曲掙扎、吐水等）及死亡情況等。

10試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

以表格形式總結(jié)數(shù)據(jù)，給出每個(gè)觀察時(shí)間，處理組和對照組中每個(gè)重復(fù)的受試家蠶的死亡數(shù)量、死

亡率和中毒癥狀。以濃度對數(shù)為橫坐標(biāo)，以累積死亡百分率對應(yīng)的概率單位為縱坐標(biāo)，繪制每個(gè)暴露周

期的劑量-效應(yīng)曲線，并選擇適宜的統(tǒng)計(jì)方法和程序估算LC50及其95%置信區(qū)間。

11質(zhì)量控制

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GB/T31270.11-XXXX

質(zhì)量控制條件為：對照組死亡率≤10%；

12試驗(yàn)報(bào)告

試驗(yàn)報(bào)告至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：

a)被試物：

1)通用名、化學(xué)名、化學(xué)文摘登錄號(hào)（CAS號(hào)）、結(jié)構(gòu)式及相關(guān)的理化性質(zhì)；

2)含量及劑型；

b)供試生物：品種名稱、來源、大小及飼養(yǎng)情況；

c)試驗(yàn)條件：

1）試驗(yàn)期間的環(huán)境溫度和濕度；

2）采用的試驗(yàn)方法；

3）試驗(yàn)設(shè)計(jì)描述，包括噴霧設(shè)備（型號(hào)、噴霧壓力、噴霧體積、沉降時(shí)間）、試驗(yàn)容器（大

?。?、試驗(yàn)重復(fù)數(shù)、每重復(fù)蠶數(shù)；

4）母液和試驗(yàn)藥液的制備方法，包括任何溶劑或分散劑的使用情況；

5）試驗(yàn)周期。

d)試驗(yàn)結(jié)果：

1）原始數(shù)據(jù)：各觀察時(shí)間受試家蠶的死亡數(shù)、死亡率和中毒癥狀等；

2）24h、48h、72h及96h的LC50值和95%置信區(qū)間（噴霧法）或8h、24h、48h的死亡率（熏

蒸法），LC50值分別以被試物和有效成分表示，并給出所采用的統(tǒng)計(jì)分析方法；

3）對照組家蠶是否出現(xiàn)死亡及異常反應(yīng)；

4）觀察到的毒性效應(yīng)，如受試家蠶的任何不正常的行為、中毒癥狀等；

5）試驗(yàn)質(zhì)量控制條件描述。

A

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參考文獻(xiàn)

[1]NY/T1154.9—2008《農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗(yàn)準(zhǔn)則》殺蟲劑第9部分：噴霧法.

[2]GB/T13917.10—2009《農(nóng)藥登記用衛(wèi)生殺蟲劑室內(nèi)藥效試驗(yàn)及評價(jià)》第10部分：模擬現(xiàn)場.

[3]NY/T3087-2017《化學(xué)農(nóng)藥家蠶慢性毒性試驗(yàn)準(zhǔn)則》.

9

ICS65.100

CCSB13

GB

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31270.11—XXXX

代替GB/T31270.11-2014

化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則

第11部分:家蠶急性毒性試驗(yàn)

Testguidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemicalpesticides-Part11:

Silkwormacutetoxicitytest

（征求意見稿）

在提交反饋意見時(shí)，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

GB/T31270.11-XXXX

化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則

第11部分：家蠶急性毒性試驗(yàn)

警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問題。

使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧⒈ＷC符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。

1范圍

本文件規(guī)定了噴霧法和熏蒸法測定化學(xué)農(nóng)藥家蠶急性毒性的試驗(yàn)條件、試劑或材料、儀器設(shè)備、樣

品、試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、質(zhì)量控制以及試驗(yàn)報(bào)告等的基本要求。

本文件適用于為化學(xué)農(nóng)藥登記而進(jìn)行的家蠶急性毒性試驗(yàn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

NY/T2882.5農(nóng)藥登記環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估指南第5部分：家蠶

NY/T4195.4農(nóng)藥登記環(huán)境影響試驗(yàn)生物試材培養(yǎng)第4部分：家蠶

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

半致死濃度medianlethalconcentration

在噴霧法毒性試驗(yàn)中，引起50%受試家蠶死亡時(shí)桑葉中的被試物濃度，用LC50表示。

注：單位為毫克被試物每千克桑葉（mg被試物/kg桑葉）或毫克有效成分每千克桑葉（mga.i./kg桑葉）。

4原理

4.1噴霧法毒性試驗(yàn)

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