安徽省pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應(yīng)B.核酸內(nèi)切酶反應(yīng)C.連接酶反應(yīng)D.逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)答案：A2.在PCR反應(yīng)中，起延伸作用的酶是（）A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.限制酶答案：A3.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A4.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)的基本成分（）A.模板DNAB.引物C.脂質(zhì)體D.dNTPs答案：C5.PCR反應(yīng)中引物的作用是（）A.提供起始合成的3'-OHB.提供起始合成的5'-OHC.切斷DNA鏈D.連接DNA鏈答案：A6.對(duì)于一個(gè)常規(guī)的PCR反應(yīng)，循環(huán)次數(shù)通常為（）A.10-15次B.20-30次C.40-50次D.60-70次答案：B7.在PCR產(chǎn)物分析中，瓊脂糖凝膠電泳常用的染色劑是（）A.溴化乙錠B.考馬斯亮藍(lán)C.結(jié)晶紫D.蘇丹紅答案：A8.如果PCR反應(yīng)沒有得到預(yù)期的產(chǎn)物，以下哪項(xiàng)不是可能的原因（）A.引物設(shè)計(jì)錯(cuò)誤B.模板量過多C.退火溫度合適D.酶失活答案：C9.PCR反應(yīng)體系中鎂離子的作用是（）A.激活酶活性B.抑制酶活性C.作為緩沖劑D.提供能量答案：A10.以下關(guān)于PCR的描述，錯(cuò)誤的是（）A.具有高靈敏度B.具有高特異性C.只能用于DNA的擴(kuò)增D.操作相對(duì)簡(jiǎn)便答案：C二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可應(yīng)用于以下哪些方面（）A.基因克隆B.遺傳病診斷C.病原體檢測(cè)D.法醫(yī)學(xué)鑒定答案：ABCD2.以下哪些因素會(huì)影響PCR反應(yīng)的特異性（）A.引物的長度B.引物的GC含量C.退火溫度D.模板的純度答案：ABC3.在PCR反應(yīng)中，dNTPs包括（）A.dATPB.dCTPC.dGTPD.dTTP答案：ABCD4.以下屬于PCR衍生技術(shù)的有（）A.巢式PCRB.反向PCRC.實(shí)時(shí)熒光定量PCRD.多重PCR答案：ABCD5.PCR反應(yīng)中防止污染的措施有（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.定期清潔儀器設(shè)備D.實(shí)驗(yàn)人員操作熟練答案：ABC6.對(duì)于PCR引物的設(shè)計(jì)，以下說法正確的是（）A.引物長度一般為15-30bpB.引物內(nèi)部不應(yīng)形成二級(jí)結(jié)構(gòu)C.兩條引物之間不能互補(bǔ)D.引物的3'端不能錯(cuò)配答案：ABCD7.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要對(duì)以下哪些儀器設(shè)備進(jìn)行校準(zhǔn)（）A.移液器B.離心機(jī)C.基因擴(kuò)增儀D.電泳儀答案：ACD8.以下關(guān)于PCR產(chǎn)物的純化方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳切膠回收B.柱層析法C.磁珠法D.有機(jī)溶劑沉淀法答案：ABCD9.PCR反應(yīng)的質(zhì)量控制指標(biāo)包括（）A.特異性B.靈敏度C.重復(fù)性D.準(zhǔn)確性答案：ABCD10.以下哪些是實(shí)時(shí)熒光定量PCR的特點(diǎn)（）A.可定量分析B.不需要電泳檢測(cè)C.可進(jìn)行高通量檢測(cè)D.靈敏度更高答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以在常溫下進(jìn)行。（）答案：錯(cuò)誤2.引物濃度過高可能會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。（）答案：正確3.在PCR反應(yīng)中，模板DNA的純度越高越好。（）答案：正確4.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤5.瓊脂糖凝膠電泳中，DNA分子向正極移動(dòng)。（）答案：正確6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR只能檢測(cè)DNA。（）答案：錯(cuò)誤7.PCR反應(yīng)中，退火溫度越高，特異性越高。（）答案：錯(cuò)誤8.巢式PCR可以提高檢測(cè)的靈敏度。（）答案：正確9.基因擴(kuò)增儀不需要定期維護(hù)。（）答案：錯(cuò)誤10.只要有合適的引物，任何模板DNA都可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本步驟。答案：PCR反應(yīng)基本步驟包括變性（90-95℃，使模板DNA雙鏈解開）、退火（溫度根據(jù)引物而定，使引物與模板結(jié)合）、延伸（72℃左右，在DNA聚合酶作用下合成新鏈），經(jīng)過20-30個(gè)循環(huán)實(shí)現(xiàn)目的DNA片段的大量擴(kuò)增。2.說出至少三種PCR污染的來源。答案：PCR污染來源有：（1）氣溶膠污染，如反應(yīng)產(chǎn)物形成氣溶膠擴(kuò)散。（2）試劑污染，如試劑被其他DNA污染。（3）標(biāo)本交叉污染，不同標(biāo)本間DNA相互污染。3.簡(jiǎn)述引物設(shè)計(jì)的基本原則。答案：引物設(shè)計(jì)原則：（1）長度15-30bp；（2）GC含量適中；（3）避免引物內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)；（4）兩條引物間不能互補(bǔ)；（5）3'端不能錯(cuò)配。4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR相對(duì)普通PCR有哪些優(yōu)勢(shì)？答案：優(yōu)勢(shì)包括：（1）可對(duì)起始模板定量；（2）不需要電泳檢測(cè)，減少污染風(fēng)險(xiǎn)；（3）可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過程；（4）靈敏度和特異性更高。五、討論題（每題5分，共4題）1.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：可從引物設(shè)計(jì)方面，保證合適長度、GC含量、避免內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)等；調(diào)整退火溫度到合適范圍；提高模板純度；優(yōu)化反應(yīng)體系中的各成分比例等方面提高特異性。2.在PCR實(shí)驗(yàn)過程中，如何確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性？答案：要確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，需嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，包括準(zhǔn)確的移液操作；防止污染，如嚴(yán)格分區(qū)、使用一次性耗材；做好儀器設(shè)備的校準(zhǔn)和維護(hù)；對(duì)反應(yīng)體系的各成分精確配置等。3.討論P(yáng)CR技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值。答案：PCR技術(shù)在臨床診斷中有重要價(jià)值，可用于檢測(cè)病原體，快速診斷