天然藥物化學(xué)的分離方法天然藥物化學(xué)是運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)理論與方法研究天然藥物中化學(xué)成分的一門(mén)學(xué)科，其核心任務(wù)之一便是對(duì)天然藥物中的化學(xué)成分進(jìn)行分離和純化。以下將詳細(xì)介紹天然藥物化學(xué)中常見(jiàn)的分離方法。溶劑提取法溶劑提取法是天然藥物化學(xué)成分提取中最常用的方法之一，其原理是根據(jù)天然藥物中各種化學(xué)成分在不同溶劑中的溶解性能差異，選用合適的溶劑將所需成分從藥材中溶解出來(lái)。常用溶劑根據(jù)極性大小，常用溶劑可分為水、親水性有機(jī)溶劑和親脂性有機(jī)溶劑。水是一種強(qiáng)極性溶劑，能溶解糖類(lèi)、氨基酸、蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽等極性成分。親水性有機(jī)溶劑如乙醇、甲醇等，具有較強(qiáng)的極性，能與水以任意比例混合，可溶解苷類(lèi)、生物堿鹽、鞣質(zhì)等多種成分。親脂性有機(jī)溶劑如石油醚、苯、氯仿、乙醚等，極性較小，常用于提取油脂、揮發(fā)油、游離甾體等親脂性成分。提取方法-浸漬法：將藥材粗粉置于容器中，加入適量的溶劑，在常溫或溫?zé)釛l件下浸泡一定時(shí)間，使有效成分溶解于溶劑中。該方法適用于遇熱易破壞或含多糖較多的藥材，但提取效率較低，提取時(shí)間較長(zhǎng)，且提取液易發(fā)霉變質(zhì)。-滲漉法：將藥材粗粉裝于滲漉筒中，不斷添加新鮮溶劑，使其自上而下滲透過(guò)藥材，從滲漉筒下端出口流出提取液。滲漉法提取效率高于浸漬法，提取較完全，但溶劑消耗量大，操作時(shí)間長(zhǎng)。-煎煮法：將藥材加水加熱煮沸，使有效成分溶解于水中。該方法簡(jiǎn)便易行，成本低廉，但不適用于含揮發(fā)性成分或遇熱易破壞的成分提取。-回流提取法：將藥材粗粉置于圓底燒瓶中，加入有機(jī)溶劑，加熱回流一定時(shí)間，使有效成分不斷被提取出來(lái)?；亓魈崛》ㄌ崛⌒瘦^高，但有機(jī)溶劑消耗量大，且操作過(guò)程中存在安全隱患。-連續(xù)回流提取法：采用索氏提取器進(jìn)行提取，利用溶劑的回流和虹吸原理，使藥材不斷與新鮮溶劑接觸，提高提取效率。該方法溶劑用量少，提取較完全，但提取時(shí)間較長(zhǎng)。兩相溶劑萃取法兩相溶劑萃取法是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的差異而達(dá)到分離的目的。分配系數(shù)分配系數(shù)（K）是指在一定溫度和壓力下，某一成分在兩種互不相溶的溶劑中達(dá)到平衡時(shí)，該成分在兩相溶劑中的濃度之比。K值越大，說(shuō)明該成分在萃取相中的溶解度越大，越容易被萃取出來(lái)。萃取方法-簡(jiǎn)單萃取法：將含有待分離成分的溶液與適當(dāng)?shù)妮腿∪軇┲糜诜忠郝┒分?，振搖使兩相互相混合，靜置分層后，分離出萃取相。反復(fù)多次萃取，可提高分離效果。-逆流分配法：是一種連續(xù)的液-液萃取方法，利用多層分液漏斗進(jìn)行多次萃取，使混合物在兩相溶劑中進(jìn)行多次分配，從而達(dá)到分離的目的。該方法適用于分離性質(zhì)相似的成分，但操作繁瑣，設(shè)備復(fù)雜。-液滴逆流分配法：是一種新型的液-液分配色譜技術(shù)，以液滴形式使流動(dòng)相通過(guò)固定相，實(shí)現(xiàn)混合物的分離。該方法分離效率高，可分離極性相近的成分。沉淀法沉淀法是根據(jù)某些化學(xué)成分在特定條件下能生成沉淀的性質(zhì)，通過(guò)加入適當(dāng)?shù)脑噭┗蚋淖內(nèi)芤旱臈l件，使某些成分從溶液中沉淀析出，從而達(dá)到分離的目的。專(zhuān)屬試劑沉淀法利用某些試劑能與特定的化學(xué)成分發(fā)生沉淀反應(yīng)的特性進(jìn)行分離。例如，雷氏銨鹽可與水溶性生物堿生成沉淀，用于分離水溶性生物堿；膽甾醇可與甾體皂苷生成沉淀，用于甾體皂苷的分離。分級(jí)沉淀法通過(guò)改變?nèi)軇┑臉O性或濃度，使混合物中的成分按溶解度的不同依次沉淀析出。例如，在含有多糖的水溶液中，逐漸加入乙醇，隨著乙醇濃度的增加，不同分子量的多糖會(huì)先后沉淀出來(lái)，從而實(shí)現(xiàn)多糖的分級(jí)分離。鹽析法向水溶液中加入一定量的無(wú)機(jī)鹽（如氯化鈉、硫酸銨等），使某些成分的溶解度降低而沉淀析出。鹽析法常用于蛋白質(zhì)、酶、多糖等成分的分離。結(jié)晶法結(jié)晶法是利用混合物中各成分在溶劑中的溶解度差異，通過(guò)控制溫度、溶劑用量等條件，使所需成分以結(jié)晶的形式從溶液中析出，從而達(dá)到分離和純化的目的。結(jié)晶溶劑的選擇選擇合適的結(jié)晶溶劑是結(jié)晶法成功的關(guān)鍵。理想的結(jié)晶溶劑應(yīng)具備以下條件：對(duì)被結(jié)晶成分的溶解度隨溫度變化有較大差異；與被結(jié)晶成分不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；沸點(diǎn)適中，易于揮發(fā)除去；無(wú)毒或低毒。常用的結(jié)晶溶劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。結(jié)晶方法-冷卻法：將待結(jié)晶的溶液加熱至完全溶解，然后緩慢冷卻，使溶液達(dá)到過(guò)飽和狀態(tài)，溶質(zhì)逐漸結(jié)晶析出。該方法適用于溶解度隨溫度變化較大的成分。-蒸發(fā)法：在常溫或加熱條件下，使溶劑不斷蒸發(fā)，溶液濃度逐漸增大，直至達(dá)到過(guò)飽和狀態(tài)，溶質(zhì)結(jié)晶析出。該方法適用于溶解度隨溫度變化較小的成分。-加入晶種法：在過(guò)飽和溶液中加入少量的晶種，誘導(dǎo)溶質(zhì)結(jié)晶析出。晶種的加入可加快結(jié)晶速度，提高結(jié)晶的純度。色譜分離法色譜分離法是一種分離效率高、應(yīng)用廣泛的分離方法，根據(jù)分離原理可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠過(guò)濾色譜等。吸附色譜-原理：吸附色譜是利用吸附劑對(duì)混合物中各成分的吸附能力不同而進(jìn)行分離的方法。常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、活性炭等。硅膠是一種應(yīng)用廣泛的吸附劑，適用于分離酸性和中性成分；氧化鋁分為堿性、中性和酸性三種，堿性氧化鋁適用于分離堿性成分，中性氧化鋁適用于分離中性成分，酸性氧化鋁適用于分離酸性成分；活性炭是一種非極性吸附劑，常用于分離水溶性成分，如糖類(lèi)、氨基酸等。-操作方法：將吸附劑裝填于色譜柱中，制成吸附柱色譜。將混合物樣品溶解后上柱，然后用適當(dāng)?shù)南疵搫┻M(jìn)行洗脫，根據(jù)各成分在吸附劑上的吸附和解吸能力的差異，依次被洗脫下來(lái)，從而實(shí)現(xiàn)分離。分配色譜-原理：分配色譜是利用混合物中各成分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同而進(jìn)行分離的方法。根據(jù)固定相和流動(dòng)相的極性不同，可分為正相分配色譜和反相分配色譜。正相分配色譜的固定相為極性溶劑，流動(dòng)相為非極性溶劑，適用于分離極性較大的成分；反相分配色譜的固定相為非極性溶劑，流動(dòng)相為極性溶劑，適用于分離極性較小的成分。-操作方法：常用的分配色譜有紙色譜和分配柱色譜。紙色譜以濾紙為載體，濾紙纖維上吸附的水為固定相，展開(kāi)劑為流動(dòng)相；分配柱色譜則是將固定相涂漬在載體上，裝填于色譜柱中，進(jìn)行分離操作。離子交換色譜-原理：離子交換色譜是利用離子交換樹(shù)脂與混合物中離子性成分之間的離子交換作用而進(jìn)行分離的方法。離子交換樹(shù)脂分為陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和陰離子交換樹(shù)脂，分別用于分離陽(yáng)離子和陰離子成分。-操作方法：將離子交換樹(shù)脂裝填于色譜柱中，將含有待分離離子性成分的溶液上柱，離子性成分與樹(shù)脂上的離子發(fā)生交換作用而被吸附在樹(shù)脂上，然后用適當(dāng)?shù)南疵搫┻M(jìn)行洗脫，使被吸附的離子性成分依次被洗脫下來(lái)，從而實(shí)現(xiàn)分離。凝膠過(guò)濾色譜-原理：凝膠過(guò)濾色譜又稱(chēng)分子篩色譜，是利用凝膠的分子篩作用，根據(jù)混合物中各成分分子大小的不同進(jìn)行分離的方法。凝膠是一種具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，小分子成分可以進(jìn)入凝膠孔內(nèi)，在柱內(nèi)停留時(shí)間較長(zhǎng)；大分子成分不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi)，直接通過(guò)凝膠顆粒之間的空隙流出柱外，從而實(shí)現(xiàn)分離。-操作方法：將凝膠裝填于色譜柱中，將混合物樣品上柱，然后用適當(dāng)?shù)南疵搫┻M(jìn)行洗脫，根據(jù)各成分分子大小的不同，依次被洗脫下來(lái)，從而實(shí)現(xiàn)分離。大孔吸附樹(shù)脂法大孔吸附樹(shù)脂是一種具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑，具有吸附和篩選的雙重作用。吸附原理大孔吸附樹(shù)脂的吸附作用主要基于范德華力、氫鍵等分子間作用力。其多孔結(jié)構(gòu)使其對(duì)不同大小和極性的分子具有不同的吸附能力，從而實(shí)現(xiàn)混合物的分離。操作方法將大孔吸附樹(shù)脂裝填于色譜柱中，將含有待分離成分的溶液上柱，成分被吸附在樹(shù)脂上，然后用不同濃度的乙醇等洗脫劑進(jìn)行洗脫，根據(jù)成分的吸附和解吸能力的差異，依次被洗脫下來(lái)，從而實(shí)現(xiàn)分離。大孔吸附樹(shù)脂法具有吸附容量大、選擇性好、易于再生等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于天然藥物中有效成分的分離和純化。膜分離法膜分離法是利用天然或人工合成的高分子膜，以外界能量或化學(xué)位差為推動(dòng)力，對(duì)混合物進(jìn)行分離、分級(jí)、提純和富集的方法。分離原理根據(jù)膜的孔徑大小和分離機(jī)制的不同，膜分離可分為微濾、超濾、納濾和反滲透等。微濾主要用于分離懸浮顆粒和細(xì)菌等較大的物質(zhì)；超濾可分離分子量在1000-100000之間的大分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多糖等；納濾用于分離分子量在200-1000之間的小分子物質(zhì)；反滲透則主要用于海水淡化和純水制備等。操作方法將待分離的溶