北京市中醫(yī)院分子雜交技術考核一、選擇題（每題2分，共20題）1.分子雜交技術中，常用的標記探針不包括以下哪一種？A.放射性同位素標記B.生物素標記C.FITC熒光標記D.甲基紫杉醇標記2.在Northernblot實驗中，用于檢測RNA片段大小的凝膠是？A.聚丙烯酰胺凝膠B.瓊脂糖凝膠C.氯化聚乙烯凝膠D.聚氯乙烯凝膠3.以下哪種方法不屬于原位雜交技術？A.脈沖場凝膠電泳（PFGE）雜交B.腳本原位雜交（SISH）C.熒光原位雜交（FISH）D.基因芯片雜交4.在分子雜交實驗中，雜交溫度過高可能導致？A.雜交效率降低B.非特異性結合增加C.探針降解D.以上都是5.以下哪種試劑常用于RNA的固定？A.甲醛B.戊二醛C.甲醇D.乙酸6.在Southernblot實驗中，用于轉移DNA片段的設備是？A.電轉移槽B.離心機C.超聲波儀D.磁力攪拌器7.原位雜交技術中，雜交后常用的洗滌步驟是？A.低溫洗滌B.高溫洗滌C.逐步升溫洗滌D.甲醇洗滌8.在熒光原位雜交（FISH）中，常用的熒光染料是？A.DAPIB.Cy3C.EthidiumbromideD.Hoechst332589.分子雜交技術中，探針的標記方法不包括？A.堿性磷酸酶標記B.辣根過氧化物酶標記C.生物素標記D.金屬離子標記10.在RNA原位雜交中，常用的封阻試劑是？A.膽固醇B.乙醇C.甲醛D.脫氧核糖核酸二、填空題（每空1分，共10空）1.分子雜交技術的基本原理是__________與__________之間的堿基互補配對。2.Northernblot實驗主要用于檢測__________的大小和表達水平。3.原位雜交技術可分為__________和__________兩種主要類型。4.熒光原位雜交（FISH）常用于檢測__________和__________。5.分子雜交實驗中，探針的標記方法主要有__________、__________和__________。6.RNA原位雜交中，常用的固定方法包括__________和__________。7.Southernblot實驗中，DNA片段的轉移方法主要是__________。8.分子雜交技術中，雜交后常用的洗滌試劑是__________和__________。9.原位雜交技術中，雜交溫度的選擇應根據(jù)__________和__________確定。10.脈沖場凝膠電泳（PFGE）雜交主要用于檢測__________。三、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述分子雜交技術的原理及其在醫(yī)學診斷中的應用。2.比較Northernblot和Southernblot實驗的異同點。3.簡述熒光原位雜交（FISH）在腫瘤診斷中的應用。4.分析RNA原位雜交技術在中醫(yī)藥研究中的潛在應用。四、論述題（每題10分，共2題）1.詳細說明分子雜交技術在病原體檢測中的應用及其優(yōu)缺點。2.結合北京市中醫(yī)院的實際情況，探討分子雜交技術在中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究中的意義。答案與解析一、選擇題答案與解析1.D甲基紫杉醇標記不屬于分子雜交技術中常用的探針標記方法。2.BNorthernblot實驗中，RNA片段通常通過瓊脂糖凝膠電泳分離。3.D基因芯片雜交屬于高通量雜交技術，不屬于原位雜交。4.D雜交溫度過高會導致探針與靶序列結合不牢固，降低雜交效率，并增加非特異性結合。5.A甲醛常用于RNA的固定。6.ASouthernblot實驗中，DNA片段通過電轉移轉移到尼龍膜上。7.C原位雜交技術通常采用逐步升溫洗滌以提高特異性。8.BCy3是常用的熒光染料之一。9.D金屬離子標記不屬于探針的常用標記方法。10.D脫氧核糖核酸（DNA）不是RNA原位雜交的封阻試劑。二、填空題答案與解析1.探針；靶序列2.RNA3.脈沖場凝膠電泳雜交；熒光原位雜交4.染色體定位；基因表達分析5.放射性同位素標記；生物素標記；熒光標記6.甲醛固定；甲醇固定7.電轉移8.變性劑（如SSC）；乙醇9.探針的Tm值；靶序列的GC含量10.大片段DNA（如染色體）三、簡答題答案與解析1.分子雜交技術原理及其應用-原理：分子雜交技術基于核酸堿基互補配對原則，利用標記的探針（DNA或RNA）與靶序列（DNA或RNA）結合，通過檢測信號進行分析。-應用：在醫(yī)學診斷中，可用于病原體檢測（如病毒、細菌）、基因表達分析、腫瘤標志物檢測等。2.Northernblot與Southernblot的異同點-相同點：均基于核酸雜交原理，用于檢測核酸片段。-不同點：Northernblot檢測RNA，Southernblot檢測DNA；Northernblot使用瓊脂糖凝膠，Southernblot使用聚丙烯酰胺凝膠；Northernblot需預雜交封閉背景。3.FISH在腫瘤診斷中的應用-FISH可用于檢測染色體數(shù)目異常（如非整倍體）、基因擴增（如HER2基因擴增）、腫瘤靶向治療指導等。4.RNA原位雜交在中醫(yī)藥研究中的應用-RNA原位雜交可分析中藥成分對細胞基因表達的影響，為中藥作用機制研究提供依據(jù)。四、論述題答案與解析1.分子雜交技術在病原體檢測中的應用-應用：可通過核酸雜交檢測病原體DNA或RNA，如PCR-雜交聯(lián)用技術可提高檢測靈敏度。-優(yōu)點：特異性高、靈敏度高。-缺點：操作復雜、耗時