天津市中醫(yī)院酶聯(lián)免疫技術(shù)專(zhuān)項(xiàng)考核一、單項(xiàng)選擇題（每題1分，共20題）1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的基本原理是利用酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)物結(jié)合后，通過(guò)加入酶底物顯色來(lái)檢測(cè)。以下哪種酶最常用于ELISA檢測(cè)？A.過(guò)氧化物酶（HRP）B.熒光素酶（ALP）C.β-半乳糖苷酶（β-Gal）D.超氧化物歧化酶（SOD）2.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，固相載體最常用的材料是？A.聚丙烯（PP）板B.玻璃纖維膜C.金屬網(wǎng)篩D.聚乙烯（PE）管3.以下哪種方法不屬于ELISA的常用檢測(cè)模式？A.雙抗體夾心法B.間接競(jìng)爭(zhēng)法C.雙位點(diǎn)法D.時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TRFIA）4.ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉液的主要作用是？A.增強(qiáng)抗體與固相的結(jié)合力B.阻止非特異性結(jié)合C.提高酶的活性D.稀釋待測(cè)樣本5.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，洗滌步驟的主要目的是？A.增強(qiáng)顯色反應(yīng)B.去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體C.提高抗體親和力D.增加樣本濃度6.用于ELISA的酶標(biāo)抗體，其酶標(biāo)記量通常用哪個(gè)單位表示？A.U/mLB.OD值C.EnzymeActivityUnits/μg抗體D.ng/mL7.ELISA實(shí)驗(yàn)中，pH值對(duì)酶底物顯色的影響主要體現(xiàn)在？A.酶的穩(wěn)定性B.抗體結(jié)合能力C.底物氧化速率D.固相吸附性8.以下哪種試劑屬于ELISA的終止液？A.H?O?溶液B.氫氧化鈉（NaOH）溶液C.PBS緩沖液D.TritonX-1009.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，背景值過(guò)高可能的原因是？A.樣本濃度過(guò)高B.非特異性結(jié)合C.酶標(biāo)抗體純度低D.底物濃度不足10.用于ELISA的抗體，其特異性通常通過(guò)哪種方法驗(yàn)證？A.WesternBlotB.ELISA交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)C.流式細(xì)胞術(shù)D.免疫熒光染色11.ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣本稀釋液通常使用？A.無(wú)菌水B.生理鹽水C.PBS緩沖液D.乙醇12.酶標(biāo)儀檢測(cè)ELISA板時(shí)，常用的波長(zhǎng)范圍是？A.300-400nmB.450-550nmC.600-700nmD.800-900nm13.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，競(jìng)爭(zhēng)抑制法的原理是？A.待測(cè)物與酶標(biāo)抗體結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗原B.酶標(biāo)抗體與待測(cè)物結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗原C.待測(cè)物與固相抗原結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)抗體D.酶標(biāo)抗體與固相抗原結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合待測(cè)物14.ELISA實(shí)驗(yàn)中，復(fù)孔均值計(jì)算的主要目的是？A.提高檢測(cè)精度B.降低背景值C.增強(qiáng)抗體結(jié)合力D.稀釋樣本濃度15.用于ELISA的酶底物，最常用的有？A.TMB（3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine）B.ABTS（2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)）C.OPD（O-Phenylenediaminedihydrochloride）D.以上都是16.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，抗體稀釋倍數(shù)的選擇依據(jù)是？A.樣本濃度B.抗體效價(jià)C.酶標(biāo)儀靈敏度D.以上都是17.ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣本保存不當(dāng)可能導(dǎo)致？A.抗原降解B.酶失活C.細(xì)胞污染D.以上都是18.用于ELISA的洗滌液，最常用的成分是？A.PBS-T（含0.05%Tween-20的PBS緩沖液）B.Tris-HCl緩沖液C.無(wú)菌水D.乙醇19.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)抗體稀釋液通常使用？A.生理鹽水B.5%脫脂奶粉溶液C.PBS緩沖液D.無(wú)菌水20.ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣本前處理不當(dāng)可能導(dǎo)致？A.背景值升高B.結(jié)合信號(hào)減弱C.抗原失活D.以上都是二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪些屬于常用的洗滌液成分？A.PBS緩沖液B.Tris-HCl緩沖液C.Tween-20D.乙醇2.用于ELISA的抗體，其質(zhì)量要求包括？A.特異性高B.封閉性良好C.酶標(biāo)記均勻D.穩(wěn)定性好3.ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪些屬于常見(jiàn)的干擾因素？A.樣本中的高濃度糖類(lèi)B.樣本中的脂類(lèi)物質(zhì)C.樣本中的蛋白酶D.封閉液不充分4.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪些屬于常用的終止液？A.氫氧化鈉（NaOH）溶液B.硫酸（H?SO?）溶液C.鹽酸（HCl）溶液D.乙醇5.酶標(biāo)抗體在ELISA實(shí)驗(yàn)中的作用包括？A.檢測(cè)待測(cè)抗原B.結(jié)合固相抗原C.發(fā)光或顯色D.提高檢測(cè)靈敏度6.ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪些屬于常用的樣本前處理方法？A.高溫煮沸B.乙醇沉淀C.蛋白酶K消化D.PBS稀釋7.用于ELISA的酶標(biāo)儀，其關(guān)鍵性能指標(biāo)包括？A.波長(zhǎng)精度B.穩(wěn)定性C.重復(fù)性D.讀數(shù)范圍8.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪些屬于常用的封閉液？A.5%脫脂奶粉溶液B.1%BSA溶液C.牛血清白蛋白（BSA）溶液D.乙醇9.ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪些屬于常用的酶底物？A.TMBB.ABTSC.OPDD.BCIP/NBT10.酶標(biāo)抗體在ELISA實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)量控制包括？A.酶活性檢測(cè)B.結(jié)合特異性檢測(cè)C.稀釋梯度測(cè)試D.儲(chǔ)存穩(wěn)定性測(cè)試三、判斷題（每題1分，共10題）1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉液的主要作用是防止非特異性結(jié)合。2.酶標(biāo)抗體在ELISA實(shí)驗(yàn)中可以重復(fù)使用。3.ELISA實(shí)驗(yàn)的洗滌步驟越多越好。4.酶標(biāo)抗體稀釋倍數(shù)越高，檢測(cè)靈敏度越高。5.ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣本保存不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致抗原降解。6.酶標(biāo)儀檢測(cè)ELISA板時(shí)，常用的波長(zhǎng)是450nm。7.ELISA實(shí)驗(yàn)中，背景值越低越好。8.酶標(biāo)抗體在ELISA實(shí)驗(yàn)中必須經(jīng)過(guò)預(yù)雜交處理。9.ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣本前處理不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致結(jié)合信號(hào)減弱。10.酶底物在ELISA實(shí)驗(yàn)中可以無(wú)限量使用。四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述ELISA雙抗體夾心法的原理及其應(yīng)用場(chǎng)景。2.列舉ELISA實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的質(zhì)量控制措施。3.解釋ELISA實(shí)驗(yàn)中背景值過(guò)高的可能原因及解決方法。4.比較ELISA與化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）的優(yōu)缺點(diǎn)。五、論述題（每題10分，共2題）1.詳細(xì)說(shuō)明ELISA實(shí)驗(yàn)中樣本前處理的步驟及注意事項(xiàng)。2.闡述ELISA實(shí)驗(yàn)中酶標(biāo)抗體選擇的關(guān)鍵因素及優(yōu)化方法。答案與解析一、單項(xiàng)選擇題答案與解析1.A解析：過(guò)氧化物酶（HRP）是最常用的ELISA酶標(biāo)記物，因其催化效率高、穩(wěn)定性好。2.A解析：聚丙烯（PP）板是最常用的ELISA固相載體，因其表面惰性好，易包被抗體。3.D解析：TRFIA屬于時(shí)間分辨熒光免疫分析，不屬于ELISA檢測(cè)模式。4.B解析：封閉液的主要作用是封閉固相載體表面非特異性位點(diǎn)，防止非特異性結(jié)合。5.B解析：洗滌步驟的主要目的是去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，降低背景值。6.C解析：酶標(biāo)抗體酶標(biāo)記量通常用EnzymeActivityUnits/μg抗體表示。7.C解析：pH值影響酶底物氧化速率，進(jìn)而影響顯色反應(yīng)強(qiáng)度。8.B解析：氫氧化鈉（NaOH）溶液是常用的ELISA終止液，可終止酶促反應(yīng)。9.B解析：背景值過(guò)高通常由非特異性結(jié)合導(dǎo)致，需優(yōu)化封閉或洗滌步驟。10.B解析：ELISA交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)可驗(yàn)證抗體的特異性。11.C解析：PBS緩沖液是常用的ELISA樣本稀釋液，可維持pH穩(wěn)定。12.B解析：450-550nm是ELISA酶標(biāo)儀常用的檢測(cè)波長(zhǎng)范圍。13.A解析：競(jìng)爭(zhēng)抑制法中，待測(cè)物與酶標(biāo)抗體結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗原。14.A解析：復(fù)孔均值計(jì)算可提高檢測(cè)精度，減少偶然誤差。15.D解析：TMB、ABTS、OPD都是常用的ELISA酶底物。16.D解析：抗體稀釋倍數(shù)需根據(jù)樣本濃度、抗體效價(jià)和酶標(biāo)儀靈敏度選擇。17.D解析：樣本保存不當(dāng)可能導(dǎo)致抗原降解、酶失活或細(xì)胞污染。18.A解析：PBS-T（含0.05%Tween-20的PBS緩沖液）是常用的ELISA洗滌液。19.B解析：5%脫脂奶粉溶液是常用的酶標(biāo)抗體稀釋液，可封閉非特異性位點(diǎn)。20.D解析：樣本前處理不當(dāng)可能導(dǎo)致背景值升高、結(jié)合信號(hào)減弱或抗原失活。二、多項(xiàng)選擇題答案與解析1.A、C解析：PBS緩沖液和Tween-20是常用的洗滌液成分。2.A、B、C、D解析：酶標(biāo)抗體需特異性高、封閉性好、酶標(biāo)記均勻且穩(wěn)定性好。3.A、B、C、D解析：樣本中的糖類(lèi)、脂類(lèi)、蛋白酶及封閉不充分均干擾ELISA結(jié)果。4.A、B解析：氫氧化鈉（NaOH）溶液和硫酸（H?SO?）溶液是常用的ELISA終止液。5.A、B、C、D解析：酶標(biāo)抗體可檢測(cè)待測(cè)抗原、結(jié)合固相抗原、發(fā)光或顯色，提高檢測(cè)靈敏度。6.A、B、C解析：高溫煮沸、乙醇沉淀、蛋白酶K消化是常用的樣本前處理方法。7.A、B、C、D解析：波長(zhǎng)精度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和讀數(shù)范圍是酶標(biāo)儀的關(guān)鍵性能指標(biāo)。8.A、B、C解析：5%脫脂奶粉溶液、1%BSA溶液、牛血清白蛋白（BSA）溶液是常用的封閉液。9.A、B、C解析：TMB、ABTS、OPD是常用的ELISA酶底物。10.A、B、C、D解析：酶標(biāo)抗體需檢測(cè)酶活性、結(jié)合特異性、稀釋梯度和儲(chǔ)存穩(wěn)定性。三、判斷題答案與解析1.正確解析：封閉液的主要作用是封閉非特異性位點(diǎn)，防止非特異性結(jié)合。2.錯(cuò)誤解析：酶標(biāo)抗體反復(fù)使用會(huì)導(dǎo)致酶失活或結(jié)合能力下降。3.錯(cuò)誤解析：洗滌步驟過(guò)多會(huì)導(dǎo)致結(jié)合信號(hào)減弱，需控制洗滌次數(shù)。4.錯(cuò)誤解析：抗體稀釋倍數(shù)過(guò)高會(huì)導(dǎo)致結(jié)合信號(hào)減弱，需優(yōu)化稀釋比例。5.正確解析：樣本保存不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致抗原降解，影響檢測(cè)結(jié)果。6.正確解析：450nm是ELISA酶標(biāo)儀常用的檢測(cè)波長(zhǎng)。7.正確解析：背景值過(guò)低可能表示結(jié)合能力不足，需優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。8.錯(cuò)誤解析：酶標(biāo)抗體無(wú)需預(yù)雜交處理，直接包被即可。9.正確解析：樣本前處理不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致結(jié)合信號(hào)減弱或背景值升高。10.錯(cuò)誤解析：酶底物需按說(shuō)明書(shū)使用，過(guò)量使用可能影響結(jié)果。四、簡(jiǎn)答題答案與解析1.ELISA雙抗體夾心法的原理及應(yīng)用場(chǎng)景原理：雙抗體夾心法利用兩份抗體分別結(jié)合抗原的兩個(gè)不同表位，形成“夾心”結(jié)構(gòu)，再通過(guò)酶標(biāo)抗體檢測(cè)。應(yīng)用場(chǎng)景：適用于檢測(cè)完整抗原，特異性高，廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)。2.ELISA實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的質(zhì)量控制措施-校準(zhǔn)酶標(biāo)儀-驗(yàn)證抗體特異性-控制樣本前處理-優(yōu)化洗滌步驟-使用陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照3.ELISA實(shí)驗(yàn)中背景值過(guò)高的可能原因及解決方法原因：非特異性結(jié)合、封閉不充分、洗滌不徹底、抗體純度低。解決方法：優(yōu)化封閉液、增加洗滌次數(shù)、提高抗體純度、調(diào)整pH值。4.ELISA與化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）的優(yōu)缺點(diǎn)ELISA：成本低、操作簡(jiǎn)單，但靈敏度相對(duì)較低。CLIA：靈敏度更高、檢測(cè)速度快，但成本較高。五、論述題答案與解析1.