ICS13.060.01Z16DB23黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB23/T2750—2020前言 II III 12規(guī)范性引用文件 13方法原理 14試劑和材料 15儀器設(shè)備 26測(cè)定 27結(jié)果計(jì)算與表示 38方法的精密度 3附錄A（資料性附錄）結(jié)果判定參考內(nèi)容 4DB23/T2750—2020本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由黑龍江省生態(tài)環(huán)境廳提出并歸口。本文件參與起草單位：黑龍江省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心。本文件主要起草人：王鵬杰、曹勝、邢延峰、孟慶慶、李博、胡麗娜、張蕊、楊宏坤、姜景陽(yáng)、關(guān)吉鑫、李經(jīng)緯、王國(guó)梁、李海智、蘆旭峰、蘇曉慧、于宗靈、柏廣宇、李慧。DB23/T2750—2020為貫徹《中華人民共和國(guó)環(huán)境保護(hù)法》和《中華人民共和國(guó)水污染防治法》等法律法規(guī)，保護(hù)和改善生態(tài)環(huán)境，保障人體健康，制定本文件。DB23/T2750—20201水質(zhì)生物毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌快速測(cè)定法本文件規(guī)定了水質(zhì)生物毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌快速測(cè)定法的方法原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、測(cè)定、結(jié)果計(jì)算和表示及方法的精密度。本文件適用于工業(yè)廢水，納污水體及實(shí)驗(yàn)室條件下可溶性化學(xué)物質(zhì)的水質(zhì)急性毒性監(jiān)測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T15441-1995水質(zhì)急性毒性的測(cè)定發(fā)光細(xì)菌法3方法原理水樣在一定的時(shí)間和條件下與發(fā)光細(xì)菌接觸后，發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度變化與水樣中毒性組分總濃度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，通過(guò)生物發(fā)光光度計(jì)測(cè)定水樣與發(fā)光細(xì)菌接觸一定時(shí)間后的發(fā)光抑制率來(lái)表征水樣的急性毒性水平。4試劑和材料4.1所有的試劑除另有說(shuō)明外，均應(yīng)為符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭麴s水或同等純度的水。4.2超純水，常溫保存。4.3氯化汞母液（2000mg/L）。4.5復(fù)蘇稀釋液（0.85%的氯化鈉溶液）。4.6滲透壓液（17%的氯化鈉溶液）。4.7青?；【鶴67。注：菌株凍干粉封裝于透明小玻璃瓶中，于-18℃至-20℃下儲(chǔ)存。使用前，添加復(fù)蘇DB23/T2750—202025儀器設(shè)備生物發(fā)光光度計(jì)技術(shù)規(guī)格：可探測(cè)光譜范圍，320nm～1000nm；探測(cè)結(jié)果范圍，0～65535RLU；最快檢測(cè)時(shí)間，5min；相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度，0-200%；可進(jìn)行ATP測(cè)試；測(cè)試試管，規(guī)格為5ml的反應(yīng)試管和10ml的測(cè)試試管。6測(cè)定6.1測(cè)定條件6.1.1室溫室溫20-25℃,同一批樣品在測(cè)試過(guò)程中要求溫度波動(dòng)不超過(guò)±1℃。且所有測(cè)試器皿及試劑，溶液測(cè)前1h均置于控溫的測(cè)試室內(nèi)。6.1.2pH若需測(cè)定包括pH影響在內(nèi)的急性毒性，不應(yīng)調(diào)節(jié)水樣pH。若需測(cè)定排除pH影響在內(nèi)的急性毒性，需將水樣和復(fù)蘇液（氯化鈉0.85g/100ml）pH測(cè)前調(diào)至下值：主要含銅的水樣為4.5，主要含其他金屬水樣為5.4，主要含有機(jī)化合物水樣為7.0。6.2測(cè)定步驟6.2.1試管的排列與塑料或鐵制試管架上按以下要求排列試管架：第一排，依次為反應(yīng)管01-標(biāo)準(zhǔn)品、反應(yīng)管02-陰性/陽(yáng)性質(zhì)控和反應(yīng)管03-水樣；第二排，依次為測(cè)試管01-標(biāo)準(zhǔn)品、測(cè)試管02-陰性/陽(yáng)性質(zhì)控和測(cè)試管03-水樣。6.2.2青?；【鶴67凍干粉劑復(fù)蘇從冷凍環(huán)境（-18℃)中取出青海弧菌Q67凍干粉（含量約為0.0015-0.0018g）小瓶，在常溫環(huán)境（25℃左右）下放置15min后，啟開(kāi)并輕敲小瓶，確保凍干細(xì)菌充分落在小瓶底部。移取0.5mL0.85%的復(fù)蘇液或3%的復(fù)蘇液至菌種中，搖勻，放置10min后可以使用。6.2.3儀器的預(yù)熱和調(diào)零打開(kāi)生物發(fā)光光度計(jì)電源，預(yù)熱15min，調(diào)零，備用。6.2.4測(cè)試的步驟按下列步驟進(jìn)行測(cè)試：a）分別往三支反應(yīng)試管中加入2ml的標(biāo)準(zhǔn)品（稀釋液），2ml（1:19-稀釋液：樣品）的陰性質(zhì)控及2ml（1:19-稀釋液：樣品）的被測(cè)水樣；b）待凍干粉復(fù)蘇時(shí)間到后，分別往反應(yīng)管中加入50μl凍干粉復(fù)蘇試劑（注意混勻）；c）混勻后，等待15min反應(yīng)時(shí)間；d）分別從反應(yīng)試管中移取350μl混合液至測(cè)試管中（注意盡量不要濺到瓶壁上）；e）將測(cè)試試管按順序分別放入到主機(jī)中，最終結(jié)果以RLI%發(fā)光強(qiáng)度表示。DB23/T2750—202037結(jié)果計(jì)算與表示7.1計(jì)算結(jié)果計(jì)算結(jié)果以發(fā)光強(qiáng)度來(lái)表示。相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度的表達(dá)式：7.2結(jié)果表示用氯化汞表達(dá)樣品毒性，見(jiàn)表1。表1氯化汞表達(dá)樣品毒性CHg＜0.030.03≤CHg＜0.050.05≤CHg＜0.090.09≤CHg＜0.120.12≤CHg＜0.16CHg≥0.167.3原始記錄表原始記錄表，見(jiàn)表2。表2原始記錄表8方法的精密度樣品3次重復(fù)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)不大于15%