團體標(biāo)準

T/NAIA×××-××××

化妝品中蘆丁等6種黃酮類化合物的測定

高效液相色譜法

DeterminationofRutinandotherflavonoidincosmetics

byHigh-performanceliquidchromatography

××××-××-××發(fā)布××××-××-××實施

寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會發(fā)布

化妝品中蘆丁等6種黃酮類化合物的測定高效液相色譜法

DeterminationofRutinandotherflavonoidincosmeticsby

High-performanceliquidchromatography

1范圍

本文件規(guī)定了高效液相色譜法測定化妝品中蘆丁、楊梅酮、異鼠李素-3-O-β-D-蕓

香糖苷，槲皮素、木樨草素、山奈酚6種黃酮類化合物含量的測定方法。

本文件適用于化妝品水劑類、乳液類、膏霜類、貼面面膜類中蘆丁、楊梅酮、異鼠李素

-3-O-β-D-蕓香糖苷，槲皮素、木樨草素、山奈酚6種黃酮類化合物的定性與定量測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的

版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適

用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4方法提要

樣品經(jīng)80%甲醇水溶液超聲提取后，采用高效液相色譜系統(tǒng)分離，二極管陣列檢測

器（DAD），在波長360nm處檢測，根據(jù)保留時間定性，峰面積定量，以標(biāo)準曲線法計算

含量。

本方法對蘆丁、楊梅酮、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷，槲皮素、木樨草素、山奈

酚6種黃酮類化合物的檢出限均為2ng,定量下限均為10ng，當(dāng)取樣量為0.5g時，檢出

濃度為4μg/g,最低定量濃度為20μg/g。

5試劑與材料

除另有說明外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規(guī)定的一級水。

5.1甲醇：色譜純。

5.2磷酸：H2PO3，CAS號：7664-38-2，色譜純。

2

5.380%甲醇溶液：準確移取800mL甲醇置于適量水中，再加水稀釋至1000mL，混勻。

5.40.1%磷酸溶液：準確移取0.5mL磷酸置于適量水中，再加水稀釋并1000mL，混勻。

5.5標(biāo)準品

蘆?。–AS號153-18-4）、楊梅酮（CAS號529-44-2）、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖

苷（CAS號604-80-8）、槲皮素（CAS號117-39-5）、木樨草素（CAS號491-90-3）、

山奈酚（CAS號520-18-3）標(biāo)準品：純度≥91.0%，或經(jīng)國家認證并授予標(biāo)準物質(zhì)證

書的標(biāo)準物質(zhì)。

5.6標(biāo)準品儲備溶液

5.6.1標(biāo)準儲備溶液：分別準確稱取蘆丁、楊梅酮、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷，槲皮素、木

樨草素、山奈酚的標(biāo)準品各10mg(精確至0.01mg),于不同10mL容量瓶中，用適量甲醇（5.1）

溶解并定容至刻度，配制成1000mg/L標(biāo)準儲備溶液。

5.6.2混合標(biāo)準儲備溶液：準確移取上述標(biāo)準儲備溶液（5.6.1）各2.5mL，置于同一50mL容

量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成50mg/L的混合標(biāo)準儲備溶液。使用時，稀釋至

所需要的質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準工作溶液。

6儀器與設(shè)備

6.1高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器（DAD）。

6.2十萬分之一分析天平，感量0.00001g。

6.3超聲波清洗器。

6.4超純水機。

6.5渦旋混混勻儀。

6.6微孔濾膜：0.45μm，有機系。

7試樣制備

準確稱取化妝品試樣0.5g(精確到0.0001g),于15mL具塞比色管中，若試樣為貼面面

膜類樣品應(yīng)取液體部分，加入80%甲醇水溶液，約6-9mL，渦旋震蕩使試樣與提取溶劑充

分混勻，超聲提取20min，冷卻至室溫。加入80%甲醇水溶液定容至刻度，經(jīng)孔徑為0.45μm

有機微孔濾膜過濾后，濾液作為樣品待測溶液。

3

8測定

8.1高效液相色譜參考條件

色譜柱：C18柱（4.6mm×250mm,5μm），或等效色譜柱。

柱溫：25℃。

流動相：A:0.1%磷酸（5.4），B:甲醇（5.1）。

檢測波長：360nm。

流速：0.8mL/min。

進樣量：10μL。

表1梯度洗脫程序

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）

05149

105149

133070

203070

235149

285149

8.2標(biāo)準曲線的繪制

分別準確量取已配好的混合標(biāo)準儲備溶液（5.6.2）0.2mL、0.4mL、1.0mL、2.0mL

、5.0mL用甲醇稀釋至10mL，得到濃度為1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL

、25.0μg/mL、50μg/mL的混合標(biāo)準工作溶液。取上述系列溶液按“8.1”項下色譜條件

進行測定，記錄峰面積，以對照品溶液濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）準為縱坐標(biāo)，

繪制標(biāo)準曲線。

8.3試樣測定

取樣品制備項下的試樣溶液，進行色譜分析，根據(jù)相對保留時間和紫外光圖譜定性，

色譜圖峰面積外標(biāo)法定量。試樣中各組分的響應(yīng)值均應(yīng)在標(biāo)準曲線范圍內(nèi)，超過線性范

圍時應(yīng)根據(jù)測定濃度進行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進行分析。

9分析結(jié)果的表述

8.1計算

4

試樣中蘆丁、楊梅酮、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷，槲皮素、木樨草素、山奈酚6種黃

酮類化合物的含量按以下公式計算：

ρVD

ω=××

m×1000

其中：ω——試樣中蘆丁等6種黃酮類化合物含量的數(shù)值，單位為毫克每克

（mg/g）；

ρ——代入標(biāo)準曲線測得試樣中蘆丁等6種黃酮類化合物的質(zhì)量濃度，單位為

毫克每升（mg/L）；

m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；

V——試樣中加入并定容的提取溶液體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；

D——為稀釋倍數(shù)；

注：測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

10回收率和精密度

方法回收率為80%-120%，相對標(biāo)準偏差小于10%（n=6）

11其他

蘆丁、楊梅酮、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷，槲皮素、木樨草素、山奈酚6種黃酮類化

合物標(biāo)準溶液色譜圖見附錄A。

5

附錄A

（資料性附錄）

蘆丁、楊梅酮、異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷，槲皮素、木樨草素、山奈酚

6種黃酮類化合物標(biāo)準品色譜圖