生物學(xué)實驗細則一、實驗準備

（一）實驗材料準備

1.實驗器材：

(1)顯微鏡（配備不同倍數(shù)物鏡）

(2)移液器（1mL、5mL、10mL規(guī)格）

(3)磁力攪拌器

(4)恒溫水浴鍋

(5)電子天平（精度0.01g）

(6)離心機

(7)培養(yǎng)皿、試管、燒杯等

2.實驗試劑：

(1)無菌生理鹽水

(2)蛋白質(zhì)染液（如考馬斯亮藍G-250）

(3)DNA提取試劑盒

(4)酶溶液（如PCR反應(yīng)酶）

(5)緩沖液（pH7.4PBS）

3.生物樣本：

(1)植物葉片（新鮮或凍存）

(2)微生物菌種（如大腸桿菌）

(3)動物細胞系（如HeLa細胞）

（二）實驗環(huán)境準備

1.無菌操作：

(1)使用超凈工作臺進行樣品處理

(2)手部消毒（75%酒精擦拭）

(3)環(huán)境滅菌（紫外燈照射30分鐘）

2.溫濕度控制：

(1)實驗室溫度維持在22±2℃

(2)相對濕度控制在50%-60%

二、實驗操作流程

（一）樣品處理

1.植物樣品：

(1)葉片剪?。哼x取健康葉片，大小約1cm×1cm

(2)液氮速凍：立即放入液氮中保存

(3)研磨處理：加入預(yù)冷研磨液，冰浴條件下研磨成勻漿

2.微生物樣品：

(1)活化培養(yǎng)：37℃恒溫培養(yǎng)12小時

(2)振蕩收集：1200rpm離心5分鐘取沉淀

(3)洗滌步驟：用生理鹽水重懸菌體

（二）實驗方法實施

1.蛋白質(zhì)定量實驗（考馬斯亮藍法）：

(1)樣品制備：取勻漿液100μL，加入5mL染液

(2)混勻顯色：避光靜置10分鐘

(3)測吸光度：酶標儀讀取595nm波長吸光度值

(4)數(shù)據(jù)計算：使用標準曲線法計算蛋白質(zhì)濃度

2.DNA提取實驗（試劑盒法）：

(1)細胞裂解：加入裂解緩沖液，渦旋振蕩60秒

(2)納米磁珠吸附：室溫孵育5分鐘

(3)洗滌步驟：依次加入洗滌液、無水乙醇

(4)收集產(chǎn)物：離心后吸取DNA溶液，置于-20℃保存

三、實驗結(jié)果分析與記錄

（一）數(shù)據(jù)整理

1.定量實驗：

(1)繪制標準曲線（已知濃度標準品系列）

(2)比較不同樣品的吸光度差異

2.理化檢測：

(1)電泳檢測DNA條帶完整性（1%瓊脂糖凝膠）

(2)分光光度計測定OD260/280比值

（二）安全注意事項

1.個人防護：

(1)必須佩戴實驗服、手套、護目鏡

(2)涉及強酸堿時需額外佩戴耐腐蝕手套

2.廢物處理：

(1)化學(xué)廢液分類收集（有機溶劑/無機鹽分開）

(2)生物樣本需高壓滅菌后丟棄

（三）異常情況處理

1.若出現(xiàn)溶液變色異常：

(1)檢查試劑是否過期

(2)確認樣品無污染

2.儀器讀數(shù)波動：

(1)重新校準儀器參數(shù)

(2)重復(fù)實驗驗證結(jié)果

一、實驗準備

（一）實驗材料準備

1.實驗器材：

(1)顯微鏡（配備不同倍數(shù)物鏡，如4×、10×、40×，及油鏡）

(2)移液器（1mL、5mL、10mL規(guī)格，校準有效期需在有效期內(nèi)）

(3)磁力攪拌器（功率范圍100-500W，轉(zhuǎn)速可調(diào)）

(4)恒溫水浴鍋（控溫精度±0.5℃，溫度范圍0-100℃）

(5)電子天平（精度0.01g，需定期校準）

(6)離心機（轉(zhuǎn)速范圍1000-10000rpm，離心力可調(diào)）

(7)培養(yǎng)皿（90mm/60mm規(guī)格，材質(zhì)需注明，如一次性塑料培養(yǎng)皿）

(8)試管、燒杯（注明材質(zhì)和用途，如玻璃試管、聚丙烯燒杯）

2.實驗試劑：

(1)無菌生理鹽水（0.9%氯化鈉溶液，需注明生產(chǎn)日期和有效期）

(2)蛋白質(zhì)染液（如考馬斯亮藍G-250，需注明配制日期和保質(zhì)期）

(3)DNA提取試劑盒（注明適用樣本類型和儲存條件）

(4)酶溶液（如PCR反應(yīng)酶，需注明儲存溫度和稀釋比例）

(5)緩沖液（pH7.4PBS，需注明配制方法和使用前是否需調(diào)節(jié)pH值）

3.生物樣本：

(1)植物葉片（注明來源植物種類和采集時間，如擬南芥、水稻等）

(2)微生物菌種（注明菌種名稱和保藏方式，如大腸桿菌、枯草芽孢桿菌）

(3)動物細胞系（注明細胞名稱和來源，如HeLa細胞、小鼠成纖維細胞）

（二）實驗環(huán)境準備

1.無菌操作：

(1)使用超凈工作臺進行樣品處理，需提前開啟紫外燈照射30分鐘進行消毒

(2)手部消毒（75%酒精擦拭，需注明酒精體積分數(shù)）

(3)環(huán)境滅菌（紫外燈照射30分鐘，或使用化學(xué)消毒劑如70%乙醇）

2.溫濕度控制：

(1)實驗室溫度維持在22±2℃（需使用溫度計進行監(jiān)測）

(2)相對濕度控制在50%-60%（需使用濕度計進行監(jiān)測）

二、實驗操作流程

（一）樣品處理

1.植物樣品：

(1)葉片剪取：選取健康葉片，大小約1cm×1cm，避免損傷葉肉組織

(2)液氮速凍：立即放入液氮中保存，防止組織自溶

(3)研磨處理：加入預(yù)冷研磨液（如含PVP的提取緩沖液），冰浴條件下研磨成勻漿，研磨時間建議60秒，期間需多次取樣檢測

2.微生物樣品：

(1)活化培養(yǎng)：37℃恒溫培養(yǎng)12小時（需注明培養(yǎng)基種類和培養(yǎng)條件）

(2)振蕩收集：1200rpm離心5分鐘取沉淀，避免劇烈震蕩導(dǎo)致細胞損傷

(3)洗滌步驟：用生理鹽水重懸菌體，1200rpm離心5分鐘，重復(fù)洗滌2次，最后獲得菌體沉淀

（二）實驗方法實施

1.蛋白質(zhì)定量實驗（考馬斯亮藍法）：

(1)樣品制備：取勻漿液100μL，加入5mL染液（考馬斯亮藍G-250乙醇溶液），混勻后靜置10分鐘（需避光環(huán)境）

(2)混勻顯色：避光靜置10分鐘，期間需輕搖混勻

(3)測吸光度：酶標儀讀取595nm波長吸光度值，需使用空白對照調(diào)零

(4)數(shù)據(jù)計算：使用標準曲線法計算蛋白質(zhì)濃度（標準曲線需使用已知濃度的蛋白標準品繪制）

2.DNA提取實驗（試劑盒法）：

(1)細胞裂解：加入裂解緩沖液（含蛋白酶K等），渦旋振蕩60秒，冰浴10分鐘（需注明裂解緩沖液成分）

(2)納米磁珠吸附：室溫孵育5分鐘，期間需輕柔搖晃

(3)洗滌步驟：依次加入洗滌液、無水乙醇，每次洗滌后需離心收集，重復(fù)洗滌2次

(4)收集產(chǎn)物：離心后吸取DNA溶液，置于-20℃保存，需注明DNA濃度和純度檢測方法（如瓊脂糖凝膠電泳、分光光度計測定）

三、實驗結(jié)果分析與記錄

（一）數(shù)據(jù)整理

1.定量實驗：

(1)繪制標準曲線（已知濃度標準品系列，建議5個點，濃度梯度為0、0.5、1.0、1.5、2.0μg/mL）

(2)比較不同樣品的吸光度差異，需注明實驗重復(fù)次數(shù)（建議重復(fù)3次）

2.理化檢測：

(1)電泳檢測DNA條帶完整性（1%瓊脂糖凝膠，電壓5V/cm，電泳時間30分鐘）

(2)分光光度計測定OD260/280比值（需使用空白對照調(diào)零，建議測定3次取平均值）

（二）安全注意事項

1.個人防護：

(1)必須佩戴實驗服、手套、護目鏡，避免試劑接觸皮膚和眼睛

(2)涉及強酸堿時需額外佩戴耐腐蝕手套（如丁腈手套）

2.廢物處理：

(1)化學(xué)廢液分類收集（有機溶劑/無機鹽分開，需使用指定的廢液桶）

(2)生物樣本需高壓滅菌后丟棄（壓力121kPa，時間15分鐘）

（三）異常情況處理

1.若出現(xiàn)溶液變色異常：

(1)檢查試劑是否過期或儲存不當(dāng)

(2)確認樣品無污染，必要時重新制備樣品

2.儀器讀數(shù)波動：

(1)重新校準儀器參數(shù)（如酶標儀的波長、溫度計的校準）

(2)重復(fù)實驗驗證結(jié)果，確保實驗條件的一致性

一、實驗準備

（一）實驗材料準備

1.實驗器材：

(1)顯微鏡（配備不同倍數(shù)物鏡）

(2)移液器（1mL、5mL、10mL規(guī)格）

(3)磁力攪拌器

(4)恒溫水浴鍋

(5)電子天平（精度0.01g）

(6)離心機

(7)培養(yǎng)皿、試管、燒杯等

2.實驗試劑：

(1)無菌生理鹽水

(2)蛋白質(zhì)染液（如考馬斯亮藍G-250）

(3)DNA提取試劑盒

(4)酶溶液（如PCR反應(yīng)酶）

(5)緩沖液（pH7.4PBS）

3.生物樣本：

(1)植物葉片（新鮮或凍存）

(2)微生物菌種（如大腸桿菌）

(3)動物細胞系（如HeLa細胞）

（二）實驗環(huán)境準備

1.無菌操作：

(1)使用超凈工作臺進行樣品處理

(2)手部消毒（75%酒精擦拭）

(3)環(huán)境滅菌（紫外燈照射30分鐘）

2.溫濕度控制：

(1)實驗室溫度維持在22±2℃

(2)相對濕度控制在50%-60%

二、實驗操作流程

（一）樣品處理

1.植物樣品：

(1)葉片剪?。哼x取健康葉片，大小約1cm×1cm

(2)液氮速凍：立即放入液氮中保存

(3)研磨處理：加入預(yù)冷研磨液，冰浴條件下研磨成勻漿

2.微生物樣品：

(1)活化培養(yǎng)：37℃恒溫培養(yǎng)12小時

(2)振蕩收集：1200rpm離心5分鐘取沉淀

(3)洗滌步驟：用生理鹽水重懸菌體

（二）實驗方法實施

1.蛋白質(zhì)定量實驗（考馬斯亮藍法）：

(1)樣品制備：取勻漿液100μL，加入5mL染液

(2)混勻顯色：避光靜置10分鐘

(3)測吸光度：酶標儀讀取595nm波長吸光度值

(4)數(shù)據(jù)計算：使用標準曲線法計算蛋白質(zhì)濃度

2.DNA提取實驗（試劑盒法）：

(1)細胞裂解：加入裂解緩沖液，渦旋振蕩60秒

(2)納米磁珠吸附：室溫孵育5分鐘

(3)洗滌步驟：依次加入洗滌液、無水乙醇

(4)收集產(chǎn)物：離心后吸取DNA溶液，置于-20℃保存

三、實驗結(jié)果分析與記錄

（一）數(shù)據(jù)整理

1.定量實驗：

(1)繪制標準曲線（已知濃度標準品系列）

(2)比較不同樣品的吸光度差異

2.理化檢測：

(1)電泳檢測DNA條帶完整性（1%瓊脂糖凝膠）

(2)分光光度計測定OD260/280比值

（二）安全注意事項

1.個人防護：

(1)必須佩戴實驗服、手套、護目鏡

(2)涉及強酸堿時需額外佩戴耐腐蝕手套

2.廢物處理：

(1)化學(xué)廢液分類收集（有機溶劑/無機鹽分開）

(2)生物樣本需高壓滅菌后丟棄

（三）異常情況處理

1.若出現(xiàn)溶液變色異常：

(1)檢查試劑是否過期

(2)確認樣品無污染

2.儀器讀數(shù)波動：

(1)重新校準儀器參數(shù)

(2)重復(fù)實驗驗證結(jié)果

一、實驗準備

（一）實驗材料準備

1.實驗器材：

(1)顯微鏡（配備不同倍數(shù)物鏡，如4×、10×、40×，及油鏡）

(2)移液器（1mL、5mL、10mL規(guī)格，校準有效期需在有效期內(nèi)）

(3)磁力攪拌器（功率范圍100-500W，轉(zhuǎn)速可調(diào)）

(4)恒溫水浴鍋（控溫精度±0.5℃，溫度范圍0-100℃）

(5)電子天平（精度0.01g，需定期校準）

(6)離心機（轉(zhuǎn)速范圍1000-10000rpm，離心力可調(diào)）

(7)培養(yǎng)皿（90mm/60mm規(guī)格，材質(zhì)需注明，如一次性塑料培養(yǎng)皿）

(8)試管、燒杯（注明材質(zhì)和用途，如玻璃試管、聚丙烯燒杯）

2.實驗試劑：

(1)無菌生理鹽水（0.9%氯化鈉溶液，需注明生產(chǎn)日期和有效期）

(2)蛋白質(zhì)染液（如考馬斯亮藍G-250，需注明配制日期和保質(zhì)期）

(3)DNA提取試劑盒（注明適用樣本類型和儲存條件）

(4)酶溶液（如PCR反應(yīng)酶，需注明儲存溫度和稀釋比例）

(5)緩沖液（pH7.4PBS，需注明配制方法和使用前是否需調(diào)節(jié)pH值）

3.生物樣本：

(1)植物葉片（注明來源植物種類和采集時間，如擬南芥、水稻等）

(2)微生物菌種（注明菌種名稱和保藏方式，如大腸桿菌、枯草芽孢桿菌）

(3)動物細胞系（注明細胞名稱和來源，如HeLa細胞、小鼠成纖維細胞）

（二）實驗環(huán)境準備

1.無菌操作：

(1)使用超凈工作臺進行樣品處理，需提前開啟紫外燈照射30分鐘進行消毒

(2)手部消毒（75%酒精擦拭，需注明酒精體積分數(shù)）

(3)環(huán)境滅菌（紫外燈照射30分鐘，或使用化學(xué)消毒劑如70%乙醇）

2.溫濕度控制：

(1)實驗室溫度維持在22±2℃（需使用溫度計進行監(jiān)測）

(2)相對濕度控制在50%-60%（需使用濕度計進行監(jiān)測）

二、實驗操作流程

（一）樣品處理

1.植物樣品：

(1)葉片剪取：選取健康葉片，大小約1cm×1cm，避免損傷葉肉組織

(2)液氮速凍：立即放入液氮中保存，防止組織自溶

(3)研磨處理：加入預(yù)冷研磨液（如含PVP的提取緩沖液），冰浴條件下研磨成勻漿，研磨時間建議60秒，期間需多次取樣檢測

2.微生物樣品：

(1)活化培養(yǎng)：37℃恒溫培養(yǎng)12小時（需注明培養(yǎng)基種類和培養(yǎng)條件）

(2)振蕩收集：1200rpm離心5分鐘取沉淀，避免劇烈震蕩導(dǎo)致細胞損傷

(3)洗滌步驟：用生理鹽水重懸菌體，1200rpm離心5分鐘，重復(fù)洗滌2次，最后獲得菌體沉淀

（二）實驗方法實施

1.蛋白質(zhì)定量實驗（考馬斯亮藍法）：

(1)樣品制備：取勻漿液100μL，加入5mL染液（考馬斯亮藍G-250乙醇溶液），混勻后靜置10分鐘（需避光環(huán)境）

(2)混勻顯色：避光靜置10分鐘，期間需輕搖混勻

(3)測吸光度：酶標儀讀取595nm波長吸光度值，需使用空白對照調(diào)零

(4)數(shù)據(jù)計算：使用標準曲線法計算蛋白質(zhì)濃度（標準曲線需使用已知濃度的蛋白標準品繪制）

2.DNA提取實驗（試劑盒法）：

(1)細胞裂解：加入裂解緩沖液（含蛋白酶K等），渦旋振蕩60秒，冰浴10分鐘（需注明裂解緩沖液成分）

(2)納米磁珠吸附：室溫孵