圖6）。圖SEQ圖\*ARABIC6轉(zhuǎn)基因匍匐翦股穎植株的鑒定注：a.植株潮霉素鑒定部分圖片，M為Trans2KDNAMarker；b.部分生根的抗性植株；c.移栽出來待進(jìn)一步鑒定的抗性植株；d.野生型和轉(zhuǎn)基因翦股穎的qRT-PCR。ZjRVE2過表達(dá)翦股穎的表型分析水培18天翦股穎生長(zhǎng)表型對(duì)水培18天后的野生型和過表達(dá)翦股穎進(jìn)行表型分析，分別統(tǒng)計(jì)野生型以及過表達(dá)的翦股穎植株的的匍匐莖總長(zhǎng)、匍匐莖節(jié)數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者間存在在顯著差異，水培的過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎的匍匐莖長(zhǎng)度，總節(jié)數(shù)，都顯著大于野生型。對(duì)其根系進(jìn)行掃描，統(tǒng)計(jì)它們的根總長(zhǎng)度和根表面積，轉(zhuǎn)基因的翦股穎的平均根總長(zhǎng)度和根表面積卻是小于野生型翦股穎的。圖SEQ圖\*ARABIC7WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎的表型差異（水培18天）注：a.WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎的表型差異；b.WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎水培18天的匍匐莖長(zhǎng)度；c.WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎水培18天的根總長(zhǎng)度度。WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎水培18天的根表面積。誤差棒表示三個(gè)生物學(xué)重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)，圖中星號(hào)表示處理組與對(duì)照組在0.01<P<0.05(*)或P<0.01(**)水平上差異顯著，P<0.001(***)表示極顯著差異。圖SEQ圖\*ARABIC8WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎的表型差異（水培18天）注：WT為野生型作陰性對(duì)照，OX表示過表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥株系。a.WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎的根的表型差異；b.WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎水培18天的總根長(zhǎng)；c.WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎水培18天的根表面積。誤差棒表示三個(gè)生物學(xué)重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)，圖中星號(hào)表示處理組與對(duì)照組在0.01<P<0.05(*)或P<0.01(**)水平上差異顯著，P<0.001(***)表示極顯著差異?；?cái)U(kuò)繁后生長(zhǎng)表型及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)將過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因翦股穎移栽后置于學(xué)校第五教學(xué)樓后的基地進(jìn)行擴(kuò)繁，定時(shí)澆水施肥管理，兩個(gè)月之后統(tǒng)計(jì)相關(guān)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在基地陽光充足的自然生長(zhǎng)狀態(tài)下，過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎的匍匐莖長(zhǎng)度，總節(jié)數(shù)，都和野生型形成了顯著的差異。這說明，轉(zhuǎn)基因的翦股穎在相同的條件下，生長(zhǎng)的可能更為迅速，在較短的時(shí)間內(nèi)能夠更快更好地形成致密的草坪。也說明了，ZjRVE2基因在翦股穎中的過表達(dá)確實(shí)促進(jìn)了匍匐莖的生長(zhǎng)。圖SEQ圖\*ARABIC9WT和過表達(dá)ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎的表型差異（基地生長(zhǎng)60天）注：WT為野生型作陰性對(duì)照，OX表示過表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥株系。a：基地自然條件下生長(zhǎng)兩個(gè)月的WT和ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎：b.地自然條件下生長(zhǎng)兩個(gè)月的WT和ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎的匍匐莖長(zhǎng)度；c.地自然條件下生長(zhǎng)兩個(gè)月的WT和ZjRVE2轉(zhuǎn)基因翦股穎的匍匐莖節(jié)數(shù)。誤差棒表示三個(gè)生物學(xué)重復(fù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)，圖中星號(hào)表示處理組與對(duì)照組在0.01<P<0.05(*)或P<0.01(**)水平上差異顯著，P<0.001(***)表示極顯著差異。討論1975年，ADDINNE.Ref.{DC26CF91-86C2-4D00-8103-DDAC068F9F6A}Ahloowalia（1975）成功構(gòu)建了冷季型草坪草多年生黑麥草的再生體系。這一成果為后續(xù)研究提供了重要的基礎(chǔ)。此后，研究者們對(duì)草坪草進(jìn)行了進(jìn)一步的組織培養(yǎng)研究，在結(jié)縷草屬（ZoysiaWilld.）和翦股穎屬（AgrostisL.）等多個(gè)屬中，成功建立了較為完善的植株再生體系，豐富了草坪草組織培養(yǎng)的理論體系。胚性愈傷組織培養(yǎng)因其前處理以及操作較簡(jiǎn)單，對(duì)設(shè)備要求不高，被廣泛應(yīng)用于遺傳轉(zhuǎn)化等方面，傳統(tǒng)草坪草種的種植面積和應(yīng)用廣泛。由于現(xiàn)階段人們對(duì)草種的抗逆性及抗旱性等的需求增加，但是草坪草新品種的選育和開發(fā)時(shí)間較長(zhǎng)，難度較大。因此，通過現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，挖掘草坪草生理活動(dòng)，對(duì)草坪草基因功能進(jìn)行解析，建立一套高效的遺傳轉(zhuǎn)化體系和再生體系，有利于加快其繁育進(jìn)程，節(jié)約研發(fā)的時(shí)間成本，推動(dòng)傳統(tǒng)草坪草種的育種進(jìn)程ADDINNE.Ref.{FD4C5DC0-3284-42ED-BA74-9D8F8EFC24CC}（馬承澤等，2023）。對(duì)于植物來說，適應(yīng)新環(huán)境和不斷變化的氣候的能力至關(guān)重要，為應(yīng)對(duì)地球日常自轉(zhuǎn)產(chǎn)生的明暗和溫度變化，大多數(shù)生物體進(jìn)化出了關(guān)于晝夜節(jié)律的生物時(shí)鐘，植物的許多發(fā)育過程都受到晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)ADDINNE.Ref.{A15647F6-C416-4FB0-AAF9-63EA78002C98}（Doddetal.，2005；Zhangetal.，2007）。而基因表達(dá)的晝夜節(jié)律是許多代謝和發(fā)育過程的基礎(chǔ)，隨著基因組學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，越來越多的MYB家族成員被挖掘鑒定，其功能驗(yàn)證、表達(dá)模式和調(diào)控機(jī)制的相關(guān)信息的也在不斷的除冗推新ADDINNE.Ref.{4627C37F-4D45-4D0E-B361-831528050EBB}（牛義嶺等，2016）。先前對(duì)MYB中RVE家族的研究表明，RVE轉(zhuǎn)錄因子家族的多個(gè)成員有助于控制生物鐘的節(jié)奏ADDINNE.Ref.{C5218D80-3E64-4DCF-AD09-B3DB3A99A5A4}（Grayetal.，2017）。現(xiàn)如今關(guān)于RVE2的研究，發(fā)現(xiàn)RVE2會(huì)抑制夜間低溫響應(yīng)的誘導(dǎo)，黑暗中呈現(xiàn)出開花延遲、下胚軸更長(zhǎng)以及種子萌發(fā)減少等特征ADDINNE.Ref.{FC0F0BD0-D4A2-4573-98E2-45AEF1179BBD}（Zhangetal.，2007）。與先前研究相比，本實(shí)驗(yàn)著重對(duì)匍匐翦股穎表型的觀察，發(fā)現(xiàn)無論是將WT和轉(zhuǎn)基因的匍匐翦股穎水培還是移栽至基質(zhì)，轉(zhuǎn)基因的翦股穎的匍匐莖長(zhǎng)度和節(jié)數(shù)與野生型存在都顯著差異，具體表現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因植株的匍匐莖長(zhǎng)度更長(zhǎng)，節(jié)數(shù)更多。由此可知，在RVE2過表達(dá)的匍匐翦股穎植株中，ZjRVE2基因?qū)︳骞煞f匍匐莖伸長(zhǎng)起促進(jìn)作用。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)從日本結(jié)縷草“Zenith”中克隆出ZjRVE2基因，成功構(gòu)建p1390-ZjRVE2li載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入匍匐翦股穎本