第1課時微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

課堂互動探究案

課程標準

1.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提。

2.闡明無菌技術(shù)是在操作過程中保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微

生物污染的技術(shù)。

3.概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實驗室進行微生物分離和

純化的常用方法。

素養(yǎng)達成

1.根據(jù)微生物的代謝類型分析培養(yǎng)基的組成。（科學思維）

2.討論并掌握無菌技術(shù)的實驗操作方法；討論并掌握微生物的純

培養(yǎng)的方法。（科學探究）

同學們，右圖中正在進行科學研究的老人是誰？他是法國微生物

學家和化學家巴斯德！19世紀中期的法國，葡萄酒釀成后的變酸問題,

一直困擾著釀酒業(yè)主。巴斯德研究證明，酒質(zhì)變酸是發(fā)酵液體中的細

菌在搗鬼。他經(jīng)過一次又一次試驗，最終發(fā)現(xiàn)把葡萄酒加溫到55攝氏

度，既消滅了細菌，又保持了酒的美味不變，一個困擾釀酒業(yè)的難題

終于解決了。由此人們認識到保持培養(yǎng)物純凈的重要性。

防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物，是研究和應用微生物的前提。

在實驗室培養(yǎng)微生物，一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和

環(huán)境條件，另一方面需要確保其他微生物無法混入。本節(jié)課我們將通

過酵母菌的純培養(yǎng)實驗，學習微生物培養(yǎng)的基本技術(shù)。

4川川川出川"川"〃"川川川川“川川川川川出川川］川山川川"川川/HE1,陽圖?■陶琳對川川川川川囿川川川川卅川川州川川川川川囿川川八

探究點一培養(yǎng)基的配制

【師問導學】

1.下表是培養(yǎng)兩種細菌的培養(yǎng)基的配方，據(jù)此回答問題。

表一培養(yǎng)基A

KHPMgSO-7葡萄尿瓊

成分2Na2Hpe)44

04H2O糖素脂

含量/g1.42.10.210.01.015.0

將上述物質(zhì)溶解后，加蒸儲水定容至1000mL

表二培養(yǎng)基B(牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基)

成分牛肉膏蛋白陳NaCl

含量/g5.010.05.0

將上述物質(zhì)溶解后，添加蒸儲水，定容至1000mL,調(diào)節(jié)pH

為7.0?7.2,并加入15?20g瓊脂

(1)表一中的碳源是，氮源是o表二中的氮源是

，瓊脂(填"提供”或“不提供”)營養(yǎng)

成分，其作用是作為o

(2)由上表可以看出，雖然培養(yǎng)不同微生物的具體配方不同，但一

般都要有、、、這四類物質(zhì)。請

從活細胞的元素組成方面說明其原因。

(3)不同培養(yǎng)基還要滿足不同微生物生長對

以及的要求。

2.能夠利用無機碳源的微生物的同化作用類型是什么？

3.牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基是一種常見的細菌培養(yǎng)基，其中牛肉膏、

蛋白陳能夠提供哪些營養(yǎng)成分？

4.在科研和生產(chǎn)上，研究和應用微生物的前提是什么？在實驗室

中培養(yǎng)微生物應注意哪些問題？

【智涂筆記】

［易錯提醒］

有關培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)的四點提醒

(1)培養(yǎng)不同的微生物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)可能不同。

①自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基中可不添加有機碳源，因其可利用C02

等無機碳源。

②異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基中必須添加有機碳源。

(2)對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、0、N的化合物既是碳源，又是

氮源、能源。

(3)微生物需要補充生長因子，是由于缺乏合成生長因子所需要的

酶或合成能力有限。

(4)微生物需要量最大的營養(yǎng)物質(zhì)是碳源。能合成含碳有機物的是

自養(yǎng)型，反之則為異養(yǎng)型。

【師說核心】

1.培養(yǎng)基的配制原則

(1)目的要明確：不同的微生物需求不同，根據(jù)培養(yǎng)目的進行配制。

(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。

(3)pH要適宜：為維持pH的相對恒定，可在培養(yǎng)基中加入緩沖劑,

常用K2HPO4—KH2Po4。

2.培養(yǎng)基的成分及功能

營養(yǎng)

作用功能主要來源

物質(zhì)

構(gòu)成生物體的無機碳源：CO2>

能為微生物的細胞物質(zhì)和一NaHCCh等；有

碳源代謝提供碳元些代謝產(chǎn)物，有機碳源：糖類、

素些是異養(yǎng)生物脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、

的能源物質(zhì)有機酸等

氮源能為微生物的合成蛋白質(zhì)、核無機化合物：

【檢測反饋】

1.下列關于制備牛肉膏蛋白膝固體培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是

()

A.操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

B.將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯

C.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時倒平板

D.待培養(yǎng)基冷卻凝固后將平板倒過來放置

2.回答下列與細菌培養(yǎng)相關的問題。

(1)在細菌培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是

(填“蛋白陳”“葡萄糖”或“NaNO3”)o通常，制備培養(yǎng)基

時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,其原因是

硝化細菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上(填“能夠”或“不

能”)生長，原因是

(2)用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板(填“倒置”或

“正置”)。

(3)單個細菌在平板上會形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形

狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是

(4)有些使用后的涪養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過處理，這種處

理可以殺死丟棄物中所有的微生物。

探究點二無菌技術(shù)

【師問導學】

1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染

外，還有什么目的？

2.用于生物消毒的微生物具有什么特點?

3.消毒和滅菌技術(shù)：

⑴消毒和滅菌的原理是什么？

(2)消毒和滅菌都能殺死所有的微生物嗎?

(3)消毒和滅菌是否適用于所有的生物和物品？

(4)選擇以下材料或用具所需的無菌技術(shù)。

①吸管②培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基③培養(yǎng)皿④實驗操作者的雙

手⑤燒瓶⑥接種針⑦試管⑧接種環(huán)⑨玻璃棒

消毒：________________

灼燒滅菌：________________

干熱滅菌：________________

高壓蒸汽滅菌：________________

(5)注射藥液前，常用酒精擦拭注射部位，這是消毒還是滅菌？

體積分數(shù)為70%和95%的酒精，哪種效果更好？為什么？

【智涂筆記】

有關消毒和滅菌的幾點提醒

1.酒精消毒液中酒精濃度對殺菌效果的影響：70%的酒精殺菌效

果最好。原因是濃度過高，菌體表面蛋白質(zhì)變性過快而凝固成一層保

護膜，酒精不能滲入其中：濃度過低，殺菌能力減弱。

2.無菌技術(shù)措施的選擇原則。

(1)考慮效果：滅菌的效果比消毒要好。

(2)考慮操作對象的承受能力：接種環(huán)或接種針等金屬用具一般用

灼燒滅菌；培養(yǎng)皿等玻璃器皿用干熱滅菌；培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌。

操作者雙手一般用酒精擦拭，即化學消毒。牛奶用巴氏消毒法。

【師說核心】

1.無菌技術(shù)的重要性

防止雜菌污染是獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵。防止外來雜菌污染培養(yǎng)

物，離不開無菌技術(shù)；要防止培養(yǎng)物污染人體和環(huán)境，也離不開無菌

技術(shù)。

2.常用滅菌與消毒方法的比較

滅菌和消毒的種類主要方法應用范圍

濕熱滅菌(高

100kPa、121℃維培養(yǎng)基及多種器

壓蒸汽滅菌

持15?30min材、物品

法)

玻璃器皿(如吸管、

培養(yǎng)皿等)、金屬用

干熱滅菌箱160?

干熱滅菌具等凡不適宜用其

滅170℃加熱2?3h

他方法滅菌而又能

菌

耐高溫的物品

微生物接種工具，

如接種環(huán)、接種針

灼燒滅菌酒精燈火焰灼燒或其他金屬用具

等，接種過程中的

試管口或瓶口等

100℃煮沸5?6家庭餐具等生活用

煮沸消毒法

min品

62~65℃煮30min牛奶、啤酒、果酒

巴氏消毒法或80?90℃煮30和醬油等不宜進行

消

s?1min高溫滅菌的液體

母

30W紫外燈照射

紫外線消毒接種室空氣

30min

用體積分數(shù)為皮膚、傷口、動植

化學藥物消毒

70%?75%的乙醇、物組織表面和空

碘酒涂抹，來蘇爾氣、手術(shù)器械、塑

噴灑等料或玻璃器皿等

【檢測反饋】

1.高溫滅菌的原理是()

A.每種微生物生長的最適溫度是一定的

B.微生物對于高溫環(huán)境不適應

C.高溫破壞了微生物的蛋白質(zhì)等生物大分子，影響其生命活動

D.高溫降低了環(huán)境中氧的濃度

2.關于滅菌和消毒的不正確的理解是()

A.滅菌是指殺死環(huán)境中的一切微生物的細胞、芽胞和抱子

B.消毒和滅菌實質(zhì)上是相同的

C接種環(huán)用灼燒的方法滅菌

D.常用滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌等

3.在生產(chǎn)、生活和科研實踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌

的污染。請回答下列問題：

⑴在實驗室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器具(填“可以”

或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。

(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒

法相比，這兩種方法的優(yōu)點是

(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能

o在照射前，適量噴灑,可強化消毒效果。

(4)水廠供應的自來水通常是經(jīng)過(填“氯氣”“乙醇”

或“高錦酸鉀”)消毒的。

(5)某同學在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達到設定要求，而鍋

內(nèi)并沒有達到相應溫度，最可能的原因是o

探究點三微生物的純培養(yǎng)

【師問導學】

閱讀教材P173內(nèi)容，結(jié)合下圖，回答問題。

/

逑亳/?)

圖一圖二

圖三

1.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰?

2.從防止雜菌污染的角度思考，培養(yǎng)基冷卻凝固后將培養(yǎng)皿倒置

的原因是什么？

3.采用平板劃線法接種菌種時，哪些操作可防止雜菌污染?

4.在做第二次劃線以及其后的操作時，為什么總是從上一次劃線

的末端開始劃線？

5,接種操作時每次劃線接種前與接種后都要灼燒接種環(huán)或接種針,

其目的分別是什么？

6.接種結(jié)束后，為什么要將一個未接種的培養(yǎng)基和一個接種的培

養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)？未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長很關鍵。如

果有菌落生長，說明了什么？

【智涂筆記】

［方法技巧］

單細胞菌落的獲得

(1)利用平板劃線法接種時，單細胞菌落從后劃線的區(qū)域挑取。

(2)利用稀釋涂布平板法接種時，只有合適的稀釋度才能得到單細

胞菌落。

［歸納提升］

倒平板操作的注意事項

(1)培養(yǎng)基滅菌后需要冷卻至50℃左右時才能倒平板。溫度過高,

培養(yǎng)基凝固后皿蓋上冷凝水過多，落入培養(yǎng)基，造成污染；溫度過低,

培養(yǎng)基又會凝固。

(2)將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開，以免雜

菌污染培養(yǎng)基。

(3)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間

的部位，這個平板應棄用，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之

間的培養(yǎng)基上滋生。

(4)整個操作過程要在酒精燈火焰旁進行，避免雜菌污染。

【師說核心】

1.平板劃線法

平板劃線操作及培養(yǎng)結(jié)果：接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，

將聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表面。平板劃線示意圖(A)及培養(yǎng)后

菌落分布示意圖(B)如下圖所示。

AB

2.稀釋涂布平板法

(1)主要操作環(huán)節(jié)：系列稀釋和涂布平板。

(2)系列稀釋和涂布平板后培養(yǎng)結(jié)果如圖所示:

每個平板加I

0.1mL樣品L

159162

菌數(shù)太多難以計數(shù)菌落數(shù)菌落數(shù)菌落數(shù)

3.平板劃線法與稀釋涂布平板法的注意事項

(1)平板劃線法：

①接種環(huán)的灼燒：

a.第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物。

b.每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種來自上次劃線

末端。

c.劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。

②灼燒接種之后，要冷卻后再進行操作，以免溫度太高殺死菌種。

③劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。

④劃線用力要大小適當，防止用力過大劃破培養(yǎng)基。

(2)稀釋涂布平板法：

①稀釋操作時：每支試管及其中的9mL水、移液管等均需滅菌;

操作時，試管口和移液管應在離火焰1?2cm處。

②涂布平板時：

a.涂布器浸在體積分數(shù)為70%的酒精中，取出時，讓多余酒精在

燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。

b.不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的

酒精。

c.酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不接觸任何物體。

4.兩種純化細菌方法的比較

項目優(yōu)點缺點

可以觀察菌落特征，對

平板劃線法不能計數(shù)

混合菌進行分離

稀釋涂布平可以計數(shù)，可以觀察菌吸收量較小，較麻煩，

板法落特征平板不干燥效果不好，

容易蔓延

【檢測反饋】

1.下圖為實驗室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下

列說法錯誤的是()

①②③④

A.①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行

B.步驟①中待倒入的培養(yǎng)基冷卻后蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋

C.步驟③中，每次劃線前后都需對接種環(huán)進行滅菌處理

D.劃線接種結(jié)束后，將圖④平板倒置后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

2.下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方式，回答相關問題:

甲乙

(1)圖甲是利用法進行微生物接種的，圖乙是利用

法進行微生物接種的。這兩種方法所用的接種工具

分別是和;對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方

法依次是和酒精消毒。

(2)平板劃線時，為保證微生物的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐步減

少，每次劃線都要從開始，平板劃線結(jié)束

后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線o

(3)接種操作為什么一定要在酒精燈火焰附近進行？

(4)下圖是接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是(填“圖

甲”或“圖乙”)所示方法。

(5)假設用圖乙所示方法接種培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成

片，可能的原因是什么？

甲川川川川川川勿勿勿川"川川川川川川川出川川川川h歸納,阻升

【網(wǎng)絡建構(gòu)】

微

生

物

的

基消毒

本

培無菌

養(yǎng)技術(shù)

技

術(shù)

【主干落實】

1.各種培養(yǎng)基都含有水、碳源、氮源和無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。

2.獲得純凈微生物培養(yǎng)物的關鍵是防止雜菌污染。

3.消毒是指使用較為溫和的物理、化學或生物等方法殺死物體表

面或內(nèi)部一部分微生物。

4.滅菌是指使用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包

括芽泡和抱子。

5.由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培

養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng)。

6.菌落是分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖

形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體。

川川川I川川勿川川川川川川川川川川川川IW川勿川川川川川川川兒隨堂時達標I勿川小勿勿勿I川勿勿出川川i川川川I川川川勿川川川I川川川1

1.不同培養(yǎng)基的具體配方不同，但一股都含（）

A.碳源、磷酸鹽和維生素

B.氮源和維生素

C.水、碳源、氮源和無機鹽

D.碳元素、氧元素、氫元素、氮元素

2.采用干熱滅菌、灼燒滅菌、高壓蒸汽滅菌、紫外線照射等幾種

方法，可分別殺死哪些部位的雜菌（）

A.接種環(huán)、吸管、培養(yǎng)基、接種室

B.吸管、接種環(huán)、培養(yǎng)基、接種箱

C.培養(yǎng)基、吸管、接種環(huán)、接種箱

D.培養(yǎng)皿、吸管、培養(yǎng)基、雙手

3.下列有關平板劃線操作的描述，錯誤的是()

A.將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅

B.接種環(huán)在平板上劃線的位置是隨機的

C.在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過酒精燈火焰

D.最后一區(qū)的劃線不能與第一區(qū)相連

4.下列關于微生物實驗操作的敘述，錯誤的是()

A.培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進行高壓蒸汽滅菌

B.接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進行灼燒

C.接種后的培養(yǎng)皿要倒置，以防培養(yǎng)基被污染

D.菌種分離和菌落計數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基

5.下表是培養(yǎng)某微生物的培養(yǎng)基的配方，請回答下列問題：

組牛肉蛋白NaC瓊

水

分膏陳1脂

用1000

10g20g

量5g5gmL

(1)培養(yǎng)基的類型很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、

和無機鹽。上述培養(yǎng)基配方中能充當碳源的成分是o

培養(yǎng)基配制完成以后，一般還要調(diào)節(jié)pH并對培養(yǎng)基進行處

理。

(2)在配制培養(yǎng)基時，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮、

和滲透壓等條件。

(3)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培

養(yǎng)器皿進行(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手需進行

清洗和;空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能

使蛋白質(zhì)，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。

(4)分離純化微生物最常使用的接種方法是和

(5)在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應采用

的檢測方法是

/////.釋國?恩感?國材川川川川川川川川川川川I川川川出川川出川川川川川川Ih

第1小節(jié)

（一）從社會中來

提示：應該先對制作用具和原料進行滅菌處理，再接種純的菌種,

并控制發(fā)酵條件，避免雜菌進入。

（二）旁欄思考題

1.培養(yǎng)基中的氮元素是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的。

2.無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。

（三）探究?實踐

1.在未接種的培養(yǎng)基表面應該沒有菌落生長，如果有，說明培養(yǎng)

基被雜菌污染。

2.提示：能觀察到單一菌落，這些菌落的顏色、形狀和大小一致。

如果觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純或者無菌操作

不規(guī)范等原因引起的。

3.根據(jù)實際情況回答。

（四）思維訓練

提示：所謂“酵素”，就是“酶”的另一種說法?！敖退亍敝谱?/p>

就是利用微生物進行無氧呼吸的原理，進行像制作泡菜一樣的發(fā)酵。

這樣制作的“酵素”中可能有糖類（包括一些簡單的糖和膳食纖維等）、

蛋白質(zhì)（包括多種酶）、有機酸等成分，不存在它獨有的、特殊的營養(yǎng)

物質(zhì)，其中甚至可能含有微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，食用后可能會

危害人體健康。因此，“吃水果'酵素'可以美容、減肥、促進消化

和提高免疫力”的論點值得懷疑?？梢酝ㄟ^查閱專業(yè)學術(shù)期刊上發(fā)表

的有關研究論文，或親自檢測水果“酵素”中的成分，獲取科學可靠

的證據(jù)進行全面論證。

（五）練習與應用

概念檢測

1.（1）X（2）7⑶X

2.提示：日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低溫儲存等。

干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通過食鹽、糖等制造高滲環(huán)

境，從而抑制微生物的生長和繁殖；低溫則是通過降低微生物的代謝

速率來抑制微生物的生長和繁殖。

拓展應用

1.(1)培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基

(2)提示：接種。

(3)提示：通過實驗結(jié)果可以看到，洗手后手上還有一些微生物，

不能直接進行無菌操作。

可以通過用酒精棉球擦拭雙手，或戴消過毒的手套等方法來避免

手上微生物的污染。

2.(1)意味著培養(yǎng)液中Ch含量不同。

(2)在一定轉(zhuǎn)速范圍內(nèi)，搖床的轉(zhuǎn)速越高酵母菌的種群密度越大。

其原因是搖床轉(zhuǎn)速越高，培養(yǎng)基中。2越充足。

(3)提示：培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)和溶氧量是有限的，此時，酵母菌種

群數(shù)量已經(jīng)達到了環(huán)境容納量，種群密度達到穩(wěn)定。

第1課時微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

互動?探究?智涂

探究點一

【師問導學】

1.(1)葡萄糖尿素牛肉膏、蛋白陳不提供凝固劑

(2)水碳源氮源無機鹽微生物細胞的化學組成與其他生

物的大體相同，也是由C、H、0、N、P、S以及其他元素組成，其中

C、H、0、N占細胞干重的90%以上，這些元素最終來自外界環(huán)境中

的各種無機化合物和有機化合物。這些化合物可以歸納成碳源、氮源、

水、無機鹽四大類。所以，雖然培養(yǎng)不同微生物的具體培養(yǎng)基配方不

同，但一般都要有這四類物質(zhì)

(3)pH特殊營養(yǎng)物質(zhì)。2

2.提示：能利用無機碳源的微生物的同化作用類型是自養(yǎng)型微生

物。

3.提示：牛肉膏、蛋白陳能夠提供碳源、氮源、維生素(生長因

子)和無機鹽。

4.提示：在科研和生產(chǎn)上，研究和應用微生物的前提是防止雜菌

污染，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物。在實驗室中培養(yǎng)微生物，一方面要

為人們需要的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，另一方面要確保其

他微生物無法混入。

【檢測反饋】

1.解析：制備牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基的步驟是計算、稱量、溶

化、滅菌、倒平板，其順序不能顛倒，A錯誤；牛肉膏比較黏稠，所

以稱好后需將稱量紙一同放入燒杯中加熱，當牛肉膏溶化并與稱量紙

分離后，用玻璃棒取出稱量紙，B正確；待培養(yǎng)基冷卻至50c左右，

開始倒平板，C正確；培養(yǎng)基冷卻凝固后需將平板倒置，D正確。

答案：A

2.解析：（1）細菌培養(yǎng)時常用牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基，牛肉骨能提

供碳源、氮源、磷酸鹽、維生素，蛋白膿能提供碳源、氮源、維生素,

而葡萄糖不能提供氮源，NaNCh不能為微生物提供碳源。不同細菌生

長繁殖所需要的最適pH是不同的，應該根據(jù)培養(yǎng)細菌的不同來調(diào)節(jié)

培養(yǎng)基的pH。硝化細菌是化能自養(yǎng)型細菌，可以空氣中的CO2為碳源,

因此在沒有碳源的培養(yǎng)基上能夠生長。（2）用平板培養(yǎng)細菌時，一般需

將平板倒置，這樣可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基。（3）不同種類的

細菌所形成的菌落，在大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等

方面具有一定的特征，不同種細菌在一定培養(yǎng)條件下表現(xiàn)出各自穩(wěn)定

的菌落特征，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。（4）使用后的培養(yǎng)基在丟

棄前需進行滅菌處理，以免污染環(huán)境。

答案：（1）蛋白陳不同細菌生長繁殖所需的最適pH不同能夠

硝化細菌可以利用空氣中的CO2作為碳源

（2）倒置

（3）在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特

征

（4）滅菌

探究點二

【師問導學】

1.提示：無菌技術(shù)還能有效避免操作者被微生物感染。

2.提示：用于生物消毒的微生物能產(chǎn)生殺死其他微生物的代謝產(chǎn)

物或是寄生性的微生物。

3.（1）提示：都是使微生物的蛋白質(zhì)變性，借此殺死微生物。

（2）提示：滅菌可殺死處理材料中的全部微生物（包括芽袍知苑子）,

而消毒僅殺死部分微生物（一般不包括芽胞和抱子）。

（3）提示：不是，無菌技術(shù)既要考慮效果，又要考慮操作對象的承

受能力。例如，活體生物材料、操作者的手等只能消毒，而不能滅菌。

（4）?⑥⑧①③⑤⑦⑨②

（5）提示：酒精擦拭屬于消毒，酒精消毒時，70%的酒精殺菌效果

最好。濃度過高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護膜，酒精分子不

能滲入其中；濃度過低，殺菌能力減弱。

【檢測反饋】

1.解析：高溫滅菌主要是使微生物的蛋白質(zhì)等生物大分子發(fā)生不

可逆轉(zhuǎn)的變性。

答案：C

2.解析：消毒是指用溫和的物理、化學或生物等方法殺死物體表

面或內(nèi)部一部分微生物（不包括芽抱和抱子），滅菌則是用強烈的理化

方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽泡和抱子。

答案：B

；解析：（1）在實驗室中，能耐高溫的、需要保持干燥的物品，

如玻璃器皿和金屬材質(zhì)的實驗器具等可以放入干熱滅菌箱中進行干熱

滅菌。（2）巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法與煮沸消毒法相比，其優(yōu)點表

現(xiàn)為在達到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。（3）紫外線照射能消

毒的原因是其能夠破壞微生物細胞中的DNA分子。在利用紫外線照

射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可強化消毒效果。（4）

自來水通常是采用氯氣進行消毒的。（5）采用高壓蒸汽滅菌時，若壓力

達到設定要求，而溫度未達到相應要求，最可能的原因是沒有排盡高

壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的冷空氣。

答案：（1）可以（2）在達到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少

⑶破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液（4）氯氣（5）未將鍋內(nèi)冷空氣排盡

探究點三

【師問導學】

1.提示：對瓶口進行灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

2.提示：培養(yǎng)基冷卻凝固后，培養(yǎng)皿的皿蓋上會凝結(jié)水珠，將培

養(yǎng)皿倒置，可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。

3.提示：（1）接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒。

（2）接種環(huán)蘸取菌液前后，要將試管口通過火焰。

（3）劃線時將培養(yǎng)皿的皿蓋打開一條縫隙，將蘸有菌種的接種環(huán)迅

速伸入平板內(nèi)，劃線后及時蓋上皿蓋。

（4）每次劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，冷卻后再進行下一次劃線。

（5）整個接種過程要在酒精燈火焰旁進行。

4.提示：劃線末端含有的菌體數(shù)目較少，每次從上一次劃線的末

端開始劃線能夠使菌體的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終分

散成單個的菌體。

5.提示：劃線前灼燒是為了殺死上次劃線結(jié)束后殘留的菌種。劃

線結(jié)束后灼燒，能及時殺死接種環(huán)或接種針上殘留的菌種，避免污染

環(huán)境和感染操作者。

6.提示：培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照，未接種的培養(yǎng)基在恒

溫箱中保溫1?2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的。若有

菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制

備。

【檢測反饋】

1.解析：由圖可知，①是倒平板，②是用接種環(huán)蘸取菌液，③是

進行平板劃線，④是培養(yǎng)。①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進

行，防止被雜菌污染，A正確；倒完平板后應立即蓋上培養(yǎng)皿，冷卻

后將平板倒過來放置，B錯誤；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上

次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的

菌種直接來源于上次