牡丹江市人民醫(yī)院組織勻漿技術(shù)考核一、單選題（共10題，每題2分，合計20分）1.在牡丹江市人民醫(yī)院進行組織勻漿時，最適合的勻漿工具是？A.磨砂研缽B.高速攪拌機C.超聲波勻漿器D.手動搗碎器2.對于牡丹江地區(qū)冬季采集的凍存組織樣本，勻漿前應(yīng)優(yōu)先采取哪種預(yù)處理方法？A.直接解凍后勻漿B.室溫融化后勻漿C.溫水浴解凍后勻漿D.冰水浴解凍后勻漿3.在勻漿過程中，為避免細胞結(jié)構(gòu)破壞，以下哪種方法最適用？A.高速剪切力B.短時超聲處理C.低速攪拌D.酶解輔助勻漿4.牡丹江市人民醫(yī)院病理科常用的組織勻漿緩沖液pH值應(yīng)為？A.6.0-7.0B.7.4-8.0C.8.0-9.0D.9.0-10.05.若勻漿后的組織樣本出現(xiàn)沉淀，可能的原因是？A.緩沖液濃度過高B.勻漿時間過長C.組織未充分破碎D.低溫操作不當(dāng)6.對于含脂肪量高的組織樣本（如肝臟），勻漿時應(yīng)優(yōu)先加入？A.生理鹽水B.蛋白酶KC.脂肪酶D.甘油7.在勻漿過程中，以下哪種現(xiàn)象提示勻漿過度？A.液體變渾濁B.組織碎片完全消失C.出現(xiàn)氣泡D.液體變透明8.牡丹江市人民醫(yī)院檢驗科常用的組織勻漿比例（組織:緩沖液）是？A.1:5B.1:10C.1:20D.1:509.若勻漿后的樣本需用于WesternBlot實驗，應(yīng)避免加入哪種試劑？A.PMSF（蛋白酶抑制劑）B.SDS（十二烷基硫酸鈉）C.甘油D.乙二醇10.對于勻漿后的樣本進行高速離心，目的是？A.純化目標(biāo)蛋白B.沉淀細胞核C.去除細胞碎片D.以上都是二、多選題（共5題，每題3分，合計15分）1.牡丹江市人民醫(yī)院病理科進行組織勻漿時，應(yīng)優(yōu)先考慮哪些因素？A.組織類型B.勻漿工具選擇C.緩沖液成分D.勻漿溫度E.實驗人員手部衛(wèi)生2.若勻漿效果不佳，可能的原因包括？A.組織預(yù)處理不當(dāng)B.勻漿時間不足C.緩沖液pH值不適宜D.勻漿工具不匹配E.組織含水量過高3.在勻漿過程中，為保護目標(biāo)蛋白，可加入哪些試劑？A.PMSFB.甘油C.疊氮化物D.磷酸酶抑制劑E.脂肪酸4.對于牡丹江地區(qū)夏季采集的新鮮組織樣本，勻漿前應(yīng)優(yōu)先采取哪些措施？A.立即置于冰上B.快速研磨C.加入RNA酶抑制劑D.預(yù)冷勻漿工具E.避免反復(fù)凍融5.勻漿后的樣本若需用于酶活性測定，應(yīng)避免加入哪些物質(zhì)？A.金屬離子螯合劑B.乙二醇C.DTT（二硫蘇糖醇）D.甘油E.脂肪酸三、判斷題（共10題，每題1分，合計10分）1.勻漿時加入甘油的主要目的是降低緩沖液黏度。（√）2.凍存組織樣本在勻漿前無需解凍，可直接進行研磨。（×）3.勻漿后的樣本若需長期保存，應(yīng)立即置于-80℃冷凍。（√）4.高速攪拌機適用于所有類型組織樣本的勻漿。（×）5.勻漿過程中應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，否則可能影響實驗結(jié)果。（√）6.若勻漿液出現(xiàn)分層，提示組織未充分破碎。（√）7.牡丹江市人民醫(yī)院檢驗科常用勻漿緩沖液為TRIS-EDTA緩沖液。（×）8.勻漿工具使用后無需徹底清潔，可直接重復(fù)使用。（×）9.勻漿時加入蛋白酶K可防止蛋白降解。（√）10.低速勻漿適用于所有組織樣本，無需調(diào)整參數(shù)。（×）四、簡答題（共5題，每題4分，合計20分）1.簡述牡丹江市人民醫(yī)院病理科進行組織勻漿時，緩沖液應(yīng)包含哪些成分？2.如何判斷組織勻漿是否徹底？3.若勻漿后的樣本出現(xiàn)脂肪污染，應(yīng)如何處理？4.簡述勻漿過程中可能出現(xiàn)的風(fēng)險及應(yīng)對措施。5.對于含水量高的組織（如腦組織），勻漿時應(yīng)注意哪些問題？五、論述題（共2題，每題10分，合計20分）1.結(jié)合牡丹江市人民醫(yī)院的實際工作場景，論述如何優(yōu)化組織勻漿流程以提高實驗效率。2.分析勻漿過程中可能影響目標(biāo)蛋白活性的因素，并提出相應(yīng)的解決方案。答案與解析一、單選題答案1.B2.D3.B4.B5.C6.C7.B8.B9.B10.D解析：1.高速攪拌機適用于大多數(shù)組織勻漿，效率高且適用范圍廣。2.冬季采集的凍存組織需緩慢解凍，冰水浴可避免細胞凍融損傷。3.短時超聲處理能減少熱效應(yīng)，保護蛋白活性。4.病理科常用pH7.4-8.0的緩沖液，接近生理環(huán)境。5.組織未充分破碎會導(dǎo)致沉淀。6.脂肪酶可降解脂肪，避免干擾實驗。7.組織碎片完全消失可能提示勻漿過度，導(dǎo)致蛋白釋放不充分。8.檢驗科常用1:10比例，兼顧效率與緩沖液濃度。9.SDS會破壞蛋白結(jié)構(gòu)，不適用于WesternBlot。10.高速離心可分離不同組分，純化目標(biāo)蛋白。二、多選題答案1.A,B,C,D,E2.A,B,C,D,E3.A,B,D,E4.A,B,D,E5.A,B,C解析：1.勻漿需考慮組織特性、工具選擇、緩沖液及溫度，同時注意手部衛(wèi)生。2.組織預(yù)處理、時間、pH、工具及含水量都會影響勻漿效果。3.PMSF、甘油、磷酸酶抑制劑及脂肪酸可保護蛋白活性。4.夏季樣本需快速冰浴、研磨、預(yù)冷工具，避免反復(fù)凍融。5.金屬離子螯合劑、乙二醇及DTT會抑制酶活性。三、判斷題答案1.√2.×3.√4.×5.√6.√7.×8.×9.√10.×解析：7.檢驗科常用磷酸鹽緩沖液（PBS）或HEPES緩沖液。8.勻漿工具需定期清潔消毒，避免交叉污染。四、簡答題答案1.緩沖液成分：磷酸鹽緩沖液（PBS）、甘油（降低黏度）、蛋白酶抑制劑（PMSF、EDTA）、DTT或β-巰基乙醇（還原劑）、蔗糖（穩(wěn)定作用）。2.判斷標(biāo)準(zhǔn)：組織碎片完全消失、液體變透明且無沉淀、顯微鏡觀察無完整細胞。3.處理方法：加入脂肪酶降解脂肪，或用低脂緩沖液重勻漿。4.風(fēng)險及應(yīng)對：-熱效應(yīng)：短時超聲、冰浴操作；-氧化：加入還原劑（DTT）；-蛋白降解：加入蛋白酶抑制劑。5.注意事項：需加大緩沖液比例、預(yù)冷勻漿工具、分次勻漿避免產(chǎn)熱。五、論述題答案1.優(yōu)化流程：-工具匹配：根據(jù)組織類型選擇勻漿工具（如腦組織用高速攪拌機，肝臟用超聲波）；-參數(shù)優(yōu)化：調(diào)整勻漿時間、頻率、溫度，避免過度勻漿；-緩沖液改進：加入甘油降低黏度，提高勻漿效率；-標(biāo)準(zhǔn)化操作：制定統(tǒng)一流程，減少人為誤差。2.影響蛋白