高級中學名校試卷PAGEPAGE1山東省聊城市2024-2025學年高二下學期期中第I卷（選擇題共45分）一、單項選擇題（本題共15小題，每小題2分，共30分。每題只有一個選項符合題目要求）1.傳統(tǒng)發(fā)酵技術大大豐富了食品種類。下列關于傳統(tǒng)發(fā)酵技術及其應用的敘述，錯誤的是（）A.傳統(tǒng)發(fā)酵以混合菌種的固體發(fā)酵及半固體發(fā)酵為主B.制作豆豉、醬油、豆腐等食品均利用了傳統(tǒng)發(fā)酵技術C.泡菜腌制全過程需保持密封，以利于菌種的厭氧呼吸D.果酒發(fā)酵控制的溫度一般要比果醋發(fā)酵控制的溫度低【答案】B〖祥解〗參與腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。腐乳制作的原理：毛霉產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質分解成小分子肽和氨基酸；脂肪酶將脂肪分解為甘油和脂肪酸?！驹斘觥緼、傳統(tǒng)發(fā)酵過程中，由于微生物來源的自然性，多以混合菌種的固體發(fā)酵及半固體發(fā)酵為主，這種發(fā)酵方式較為常見且符合傳統(tǒng)發(fā)酵的特點，A正確；B、制作豆豉、醬油利用了傳統(tǒng)發(fā)酵技術，但豆腐的制作主要是豆?jié){凝固的過程，并沒有利用傳統(tǒng)發(fā)酵技術，B錯誤；C、泡菜腌制利用的是乳酸菌等厭氧菌，全過程需保持密封，為菌種的厭氧呼吸創(chuàng)造條件，C正確；D、果酒發(fā)酵控制的溫度一般為18-30℃，果醋發(fā)酵控制的溫度一般為30-35℃，所以果酒發(fā)酵控制的溫度一般要比果醋發(fā)酵控制的溫度低，D正確。故選B。2.用“麥汁酸化”法釀造的酸啤酒既有麥芽清香，又酸甜適口。它是通過微生物發(fā)酵將麥汁中的麥芽糖和其他糖類轉化為乳酸，再結合酒精發(fā)酵制作而成。下列敘述錯誤的是（）A.利用大麥作原料時，需浸泡大麥并加入赤霉素有助于淀粉酶的形成B.發(fā)酵過程中需將乳酸菌和酵母菌同時接種以有利于同時進行乳酸發(fā)酵和酒精發(fā)酵C.達到一定酸度后需將麥汁蒸煮以殺死乳酸菌，同時加入啤酒花產(chǎn)生風味組分D.為延長啤酒的保存期，可采用過濾消毒法去除啤酒中的部分微生物【答案】B〖祥解〗果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發(fā)酵?！驹斘觥緼、用適量赤霉素溶液浸泡大麥種子可以有效促進淀粉酶形成，淀粉酶分解淀粉，促進大麥種子發(fā)芽，A正確；B、在發(fā)酵的不同過程中，需要控制不同的發(fā)酵溫度，以確保微生物的活性達到最佳狀態(tài)，所以麥汁酸化的過程不是在同一容器中同時進行的，即發(fā)酵過程中不能將乳酸菌和酵母菌同時接種，B錯誤；C、達到一定酸度后需將麥汁蒸煮，蒸煮時加入糖漿、啤酒花等可產(chǎn)生一些風味成分并同時也對糖漿滅菌，C正確；D、過濾能除去啤酒中部分微生物，消毒能殺死啤酒中部分微生物，防止雜菌污染，延長其保存期，D正確。故選B。3.微生物的純培養(yǎng)既需要適宜的培養(yǎng)基，又要防止雜菌污染。下列敘述錯誤的是（）A.根據(jù)微生物對碳源需求的差別，使用含有不同碳源的培養(yǎng)基B.接種前后．接種環(huán)都要在酒精燈火焰上灼燒滅菌C.微生物的純培養(yǎng)物就是不含有代謝廢物的微生物培養(yǎng)物D.固體培養(yǎng)基表面生長的一個菌落一般是由單個微生物繁殖形成的【答案】C〖祥解〗（1）培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質；根據(jù)物理性質分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因為它們來源于動物原料，含有糖、維生素和有機氮等營養(yǎng)物質。另外，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質和氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調至酸性，培養(yǎng)細菌時需將pH調至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件。（2）獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵。無菌技術應圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括消毒和滅菌。消毒是指使用較為溫和的物理、化學和生物等方法，僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。滅菌是指使用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子?！驹斘觥緼、不同微生物對碳源的需求不同，比如自養(yǎng)型微生物可利用無機碳源（如CO2），異養(yǎng)型微生物需要有機碳源（如葡萄糖），所以根據(jù)微生物對碳源需求的差別，使用含有不同碳源的培養(yǎng)基可篩選不同微生物，A正確；B、接種前后，接種環(huán)都要在酒精燈火焰上灼燒滅菌，接種前滅菌是為了殺死接種環(huán)上的雜菌，接種后滅菌是為了防止污染環(huán)境和感染操作者，B正確；C、微生物的純培養(yǎng)物是指由單一微生物繁殖形成的培養(yǎng)物，即使是純培養(yǎng)物，微生物在生長過程中也會產(chǎn)生代謝廢物，C錯誤；D、在固體培養(yǎng)基表面，單個微生物繁殖形成的肉眼可見的子細胞群體就是菌落，一般一個菌落是由單個微生物繁殖形成的，D正確。故選C。4.雙層平板法是先在培養(yǎng)皿中倒入底層固體培養(yǎng)基，凝固后形成底層平板；再倒入由宿主細菌、噬菌體以及瓊脂含量較低的培養(yǎng)基組成的混合液，形成上層平板。培養(yǎng)一段時間后，在上層平板上可觀察到由噬菌體侵染周圍細菌而形成的噬菌斑（通常一個噬菌斑來自一個噬菌體），根據(jù)噬菌斑的數(shù)目可計算噬菌體的數(shù)量。下列敘述錯誤的是（）A.需先調節(jié)培養(yǎng)基的pH再滅菌，然后進行倒平板B.需使用滅菌后的涂布器將混合液均勻涂布在底層平板上C.利用雙層平板法獲得的噬菌斑不容易出現(xiàn)上下重疊現(xiàn)象D.由于上層培養(yǎng)基較軟形成的噬菌斑較大，故有利于計數(shù)【答案】B〖祥解〗雙層平板法，先在培養(yǎng)皿中倒入底層固體培養(yǎng)基，凝固后再倒入含有宿主細菌和一定稀釋度噬菌體的半固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時間后，計算噬菌斑的數(shù)量。雙層平板法的優(yōu)點：①加了底層培養(yǎng)基后，可使原來底面不平的玻璃皿的缺陷得到了彌補；②所形成全部噬菌體斑都接近處于同一平面上，因此不僅每一噬菌斑的大小接近、邊緣清晰，而且不致發(fā)生上下噬菌斑的重疊現(xiàn)象；③因上層培養(yǎng)基中瓊脂較稀，故形成的噬菌斑較大，更有利于計數(shù)?！驹斘觥緼、配制培養(yǎng)基的步驟，計算→稱量→溶化→調節(jié)pH→分裝→滅菌→倒平板，A正確；B、題干信息可知，由宿主細菌、噬菌體以及瓊脂含量較低的培養(yǎng)基組成的混合液，形成上層平板，而不是用涂布器將混合液均勻涂布在底層平板上，B錯誤；C、雙層平板法所形成全部噬菌體斑都接近處于同一平面上，因此不僅每一噬菌斑的大小接近、邊緣清晰，而且不致發(fā)生上下噬菌斑的重疊現(xiàn)象，C正確；D、雙層平板法因上層培養(yǎng)基中瓊脂較稀，故形成的噬菌斑較大，更有利于計數(shù)，D正確。故選B。5.科研人員采用平板法篩選出淀粉酶高產(chǎn)菌株S458-1，然后對該菌株進行擴大培養(yǎng)，并研究了裝瓶量（培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液的裝有量）、發(fā)酵時間等發(fā)酵條件對該菌株產(chǎn)生的淀粉酶活力的影響，實驗結果如圖所示。下列敘述錯誤的是（）A.篩選時可在平板上噴灑碘液，菌落周圍棕色區(qū)域較大的菌株即為S458-1B.進行擴大培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中不需要添加瓊脂但要以淀粉作為唯一碳源C.裝瓶量增大會降低S458-1的產(chǎn)酶能力，可能是由于培養(yǎng)液中溶解氧的含量降低D.由圖示可知，裝瓶量10%、發(fā)酵時間60h為S458-1的最佳發(fā)酵條件【答案】C〖祥解〗（1）培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質。（2）酶活性是指酶催化特定化學反應的能力，其可用一定條件下酶所催化某一化學反應的速率表示?！驹斘觥緼、淀粉酶高產(chǎn)菌株能分解淀粉，淀粉遇碘變藍。在平板上噴灑碘液后，菌落周圍棕色區(qū)域（淀粉被分解的區(qū)域）較大，說明該菌株分解淀粉的能力強，即為淀粉酶高產(chǎn)菌株S458-1，A正確；B、擴大培養(yǎng)通常使用液體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基不需要添加瓊脂。要篩選和培養(yǎng)淀粉酶高產(chǎn)菌株，應以淀粉作為唯一碳源，這樣只有能利用淀粉的菌株才能生長，B正確；C、由左圖可知，自變量為裝瓶量，因變量為酶活力，當裝瓶量超過10%時，酶活力逐漸下降，但酶活力不等于產(chǎn)酶能力，C錯誤；D、根據(jù)左圖和右圖可知，裝瓶量10%，發(fā)酵時間60h時，酶活力最大，因此為最佳發(fā)酵條件，D正確。故選C。6.海洋杜氏藻是一種單細胞綠藻，具有耐鹽特性；紫球藻是一種單細胞紅藻，是制備重要醫(yī)藥原料花生四烯酸的良好材料．且對青霉素有抗性。通過植物細胞工程技術，培育出了能在高鹽海水中養(yǎng)殖且高產(chǎn)花生四烯酸的雜種藻類。下列敘述錯誤的是（）A.用酶解法獲取原生質體的過程需在等滲或高滲溶液中進行B.用高Ca2+-高pH融合法可人工誘導原生質體的融合C.在高鹽培養(yǎng)基中添加青霉素可篩選出所需的雜種細胞D.雜種細胞需脫分化形成愈傷組織后才能進一步發(fā)育【答案】D〖祥解〗植物體細胞雜交技術：就是將不同種的植物體細胞原生質體在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成完整植物體的技術。過程分析：（1）誘導融合的方法：物理法包括離心、振動、電刺激等．化學法一般是用聚乙二醇（PEG）作為誘導劑。（2）細胞融合完成的標志是新的細胞壁的生成。（3）植物體細胞雜交的終點是培育成雜種植株，而不是形成雜種細胞就結束?！驹斘觥緼、植物細胞去除細胞壁后得到原生質體，原生質體沒有細胞壁的保護和支持。如果在低滲溶液中，原生質體會吸水漲破，所以用酶解法獲取原生質體的過程需在等滲或高滲溶液中進行，A正確；B、人工誘導原生質體融合的方法有物理法（離心、振動、電激等）和化學法（聚乙二醇、高Ca2+

-高pH等），B正確；C、海洋杜氏藻耐鹽，紫球藻對青霉素有抗性，雜種細胞既耐鹽又對青霉素有抗性。在高鹽培養(yǎng)基中添加青霉素，只有雜種細胞既能適應高鹽環(huán)境又能抗青霉素，從而可篩選出所需的雜種細胞，C正確；D、藻類是單細胞生物，雜種細胞直接進行有絲分裂等進一步發(fā)育，不需要脫分化形成愈傷組織，D錯誤。故選D。7.三維細胞培養(yǎng)技術（3D細胞培養(yǎng)技術）是通過人工模擬細胞間質微環(huán)境，允許動物細胞在三維空間中生長和相互作用的技術。與傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)相比，3D細胞培養(yǎng)更接近體細胞的實際生長環(huán)境。下列敘述正確的是（）A.傳統(tǒng)細胞培養(yǎng)時，細胞往往需要貼附于某些基質表面才能生長增殖B.用胰蛋白酶處理傳統(tǒng)培養(yǎng)的貼壁細胞，使其胞間連絲斷裂有利于傳代培養(yǎng)C.3D細胞培養(yǎng)前需要對動物組織進行滅菌處理，培養(yǎng)時需定期更換培養(yǎng)液D.利用3D細胞培養(yǎng)技術研究干細胞分化過程時，一定不需要進行分瓶處理【答案】A〖祥解〗動物細胞培養(yǎng)條件：（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌②添加一定量的抗生素③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。（2）營養(yǎng)物質：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質。（3）溫度和pH：哺乳動物多以36.5℃為宜，最適pH為7.2-7.4。（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH。）【詳析】A、在傳統(tǒng)的動物細胞培養(yǎng)中，大多數(shù)細胞具有貼壁生長的特性，即細胞往往需要貼附于某些基質表面才能生長增殖，A正確；B、用胰蛋白酶處理傳統(tǒng)培養(yǎng)的貼壁細胞，是使細胞間的蛋白質分解，從而使細胞相互分離，而不是使胞間連絲斷裂（植物細胞間存在胞間連絲，動物細胞間不存在胞間連絲），這樣有利于傳代培養(yǎng)，B錯誤；C、3D細胞培養(yǎng)前需要對動物組織進行消毒處理，而不是滅菌處理（滅菌會殺死所有微生物包括芽孢和孢子，會破壞組織細胞），培養(yǎng)時為了保證細胞所需營養(yǎng)物質和清除代謝廢物，需定期更換培養(yǎng)液，C錯誤；D、利用3D細胞培養(yǎng)技術研究干細胞分化過程時，如果細胞數(shù)量過多，也可能需要進行分瓶處理以提供足夠的空間和營養(yǎng)等條件，D錯誤。故選A。8.干細胞的培養(yǎng)成功是動物細胞培養(yǎng)領域的重大成就，其應用前景吸引著眾多科學家投入到相關研究中。下列敘述錯誤的是（）A.胚胎干細胞具有可分化為成年動物體內(nèi)任何一種類型的細胞的潛能B.成體干細胞具有組織特異性，不具有發(fā)育成完整個體的能力C.iPS細胞可由成纖維細胞經(jīng)相關因子誘導轉化而來，類似于再分化D.移植來源于患者自身體細胞的iPS細胞理論上可以避免免疫排斥反應【答案】C〖祥解〗干細胞是指動物和人體內(nèi)保留著少量具有分裂和分化能力的細胞。iPS細胞，稱誘導多能干細胞，是具有與胚胎干細胞相似的分化潛力的干細胞?！驹斘觥緼、干細胞分為胚胎干細胞和成體干細胞，胚胎干細胞分化程度低，具有分化為成年動物體內(nèi)的任何一種類型的細胞的潛能，A正確；B、成體干細胞只能分化為特定的組織，不具有分化為成年動物體內(nèi)任何一種類型細胞的潛能，其分化潛能是有一定限度的，B正確；C、小鼠的成纖維細胞轉變?yōu)閕PS細胞，從高度分化的細胞形成分化程度低的細胞，類似于植物組織培養(yǎng)中的脫分化過程，C錯誤；D、iPS細胞可由患者自身體細胞經(jīng)人工誘導獲得，自體細胞獲得的iPS細胞移植，其細胞膜表面的組織相容性抗原物質相同，理論上可避免免疫排斥反應，D正確。故選C。9.HER-2蛋白主要在胎兒期表達，成年以后只在極少數(shù)組織內(nèi)低水平表達。由曲妥珠單抗和藥物DMI連接而成的抗體—藥物偶聯(lián)物T-DMI，對HER-2有很強的靶向性，可用于治療HER-2過度表達的轉移性乳腺癌。下列敘述正確的是（）A.給小鼠反復注射HER-2蛋白，以便在血清中獲取曲妥珠單抗B.用選擇培養(yǎng)基可篩選出產(chǎn)生HER-2抗體的雜交瘤細胞C.DMI與HER-2特異性結合是T-DMI對癌細胞進行選擇性殺傷的關鍵D.用滅活的病毒誘導細胞融合時細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布【答案】D〖祥解〗單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體?！驹斘觥緼、制備單克隆抗體時，需向小鼠多次注射抗原（HER-2），以激活B淋巴細胞，但免疫后的B淋巴細胞應從小鼠的脾臟中獲取，而非血清（血清中含多克隆抗體，而非B細胞），A錯誤；B、選擇培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基）的作用是篩選出雜交瘤細胞（融合的B細胞與骨髓瘤細胞），但無法直接篩選出分泌特定抗體的細胞。分泌抗體的雜交瘤細胞需通過后續(xù)的抗體檢測進一步確認，B錯誤；C、根據(jù)題意信息可知，T-DMI中，曲妥珠單抗（抗體）負責特異性結合HER-2，而DMI是連接的細胞毒藥物。特異性靶向的關鍵在于抗體部分，而非DMI，C錯誤；D、滅活病毒誘導細胞融合的原理是病毒表面的糖蛋白促使細胞膜融合。此過程依賴細胞膜的流動性，導致膜蛋白和脂質分子重新排布，D正確。故選D。10.在胚胎工程技術中，有很多操作步驟都需要“檢查”。下列敘述正確的是（）A.取出的卵母細胞移入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，需檢查其是否分裂到MII中期B.胚胎移植前，需對胚胎進行檢查以確定是否發(fā)育至原腸胚階段C.檢查胚胎性別時，需取樣囊胚內(nèi)細胞團細胞做DNA分析D.胚胎移植前，需對供體和受體進行免疫檢查，避免發(fā)生免疫排斥反應【答案】A〖祥解〗胚胎移植的基本程序主要包括：①對供、受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質和正常繁殖能力的受體。用激素進行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理）；②配種或人工授精；③對胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存（對胚胎進行質量檢查，此時的胚胎應發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段）；④對胚胎進行移植；⑤移植后的檢查。【詳析】A、卵母細胞培養(yǎng)到MII中期才具有受精能力，因此取出的卵母細胞移入培養(yǎng)液中培養(yǎng)，需檢查其是否分裂到MII中期，A正確；B、哺乳動物的體外受精主要包括卵母細胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能和受精等幾個主要步驟。精子與卵子在體外受精后，應將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，以檢查受精狀況和受精卵的發(fā)育能力，并將其培養(yǎng)至桑葚胚或囊胚進行胚胎移植，所以胚胎移植前，要對胚胎進行檢查以確定其是否發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段，B錯誤；C、在胚胎移植前，若要對胚胎的性別進行鑒定，應取囊胚的滋養(yǎng)層細胞做DNA分析，C錯誤；D、受體對移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應，因此胚胎移植入受體母畜的子宮前，不需對受體母畜進行胚胎免疫檢查，D錯誤。故選A。11.下列關于重組DNA技術的基本工具的敘述，錯誤的是（）A.E．coliDNA連接酶既能“縫合”黏性末端，也能“縫合”平末端B.限制性內(nèi)切核酸酶主要來自原核生物，一般不切割自身DNAC.載體上要有一個至多個限制酶切割位點，供外源DNA片段插入D.DNA連接酶能將單個脫氧核苷酸加到DNA片段末端，形成磷酸二酯鍵【答案】D〖祥解〗DNA連接酶：（1）根據(jù)酶的來源不同分為兩類：E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶。這二者都能連接黏性末端，此外T4DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時的效率比較低。（2）DNA連接酶連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（3）DNA連接酶和DNA聚合酶的區(qū)別：①DNA連接酶是在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，而DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯鍵；②DNA連接酶是同時連接雙鏈的切口，而DNA聚合酶只是在單鏈上將一個個脫氧核苷酸連接起來；③DNA連接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板。【詳析】A、E.coliDNA連接酶能連接具有互補黏性末端的DNA片段，也能“縫合”平末端，A正確；B、限制性內(nèi)切核酸酶主要來自原核生物，一般不切割自身DNA，B正確；C、載體上要有一個至多個限制酶切割位點，便于切割后與外源DNA片段進行連接，C正確；D、DNA聚合酶能將單個脫氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵，D錯誤。故選D。12.蘋果切開后顏色會加深的現(xiàn)象稱為“褐變”，“褐變”是由于多酚氧化酶催化多酚類物質生成褐色素所致。培育抗褐變轉基因蘋果的操作流程如圖。下列敘述正確的是（）A.圖中的目的基因為多酚氧化酶基因，標記基因為卡那霉素抗性基因B.目的基因的表達依賴上游的啟動子，標記基因的表達則不需要啟動子C.步驟①是獲得轉基因蘋果的核心工作，一般需要限制酶和DNA聚合酶的參與D.可通過PCR技術檢測蘋果的染色體DNA上是否成功插入了目的基因【答案】D〖祥解〗題圖分析：過程①為構建目的基因表達的載體，過程②為獲取受體細胞，過程③為將目的基因導入受體細胞，過程④為脫分化，過程⑤為再分化?！驹斘觥緼、要想獲得抗褐變的轉基因蘋果，應以抑制多酚氧化酶表達的基因作為目的基因，同時以卡那霉素抗性基因作為標記基因，A錯誤；B、啟動子的作用是驅動基因的轉錄，目的基因的表達依賴上游的啟動子，標記基因表達也需要啟動子，B錯誤；C、過程①表示基因表達載體的構建，是基因工程的核心步驟，一般需要限制酶和DNA連接酶的參與，C錯誤；D、檢測蘋果的染色體DNA上是否成功插入了目的基因可利用PCR技術，若插入成功，則可擴增出相應的基因（電泳中有相應的條帶），D正確。故選D。13.目前精子載體法逐漸成為最具誘惑力的制備轉基因動物方法之一，該方法以精子作為外源基因的載體，使精子攜帶外源基因與卵子完成受精。下圖表示利用該方法制備轉基因鼠的基本流程。下列敘述錯誤的是（）A.導入外源基因的精子需放入ATP溶液中進行獲能處理B.②采用體外受精技術，受精完成的標志是雌雄原核融合C.④過程是胚胎移植，需移植到同種的、生理狀態(tài)相同的代孕母鼠子宮中D.精子載體法與顯微注射法相比，對受精卵中核的影響更小【答案】A〖祥解〗分析題圖：圖示表示培育轉基因鼠的基本流程，其中①是篩選獲得導入外源基因的精子的過程，②是體外受精過程，③是早期胚胎培養(yǎng)過程，④是胚胎移植過程?！驹斘觥緼、①過程需將成熟的精子放在一定濃度的肝素或鈣離子載體溶液中，用化學藥物誘導精子獲能，獲能是指獲得受精的能力而不是獲得能量，因此不是放在ATP溶液中，A錯誤；B、受精是精子和卵細胞的結合，②采用體外受精技術，受精完成的標志是雌雄原核融合，B正確；C、④過程是胚胎移植，需移植到同種的、生理狀態(tài)相同的代孕母鼠子宮中，以保證胚胎的正常發(fā)育，C正確；D、與顯微注射法相比，精子載體法對受精卵中核的影響會更小，理由是不需要穿過核膜，雌雄原核自動融合（通過受精作用完成整合），D正確。故選A。14.水蛭素是一種蛋白質，可用于預防和治療血栓。研究發(fā)現(xiàn)，用賴氨酸替換水蛭素第47位天冬酰胺可以提高它的抗凝血活性。下列敘述正確的是（）A.水蛭素的改造屬于蛋白質工程，自然界中的酶也都可通過該工程進行改造B.水蛭素療效提高的根本原因是水蛭素氨基酸的排列順序發(fā)生了改變C.用基因定點突變技術進行堿基的替換可實現(xiàn)水蛭素第47位氨基酸的替換D.改造水蛭素過程中遺傳信息的流向和天然水蛭素合成過程中的相同【答案】C〖祥解〗蛋白質工程是指以蛋白質分子的結構規(guī)律及其生物功能的關系作為基礎，通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質進行改造，或制造一種新的蛋白質，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求?！驹斘觥緼、自然界中的酶大部分是蛋白質，少數(shù)是RNA，RNA不能通過基因工程進行改造，A錯誤；B、水蛭素療效提高的根本原因是控制水蛭素合成的基因的堿基排列順序發(fā)生了改變，B錯誤；C、改造過程中，用基因定點突變技術對水蛭素基因的堿基對進行替換，從而實現(xiàn)賴氨酸替換水蛭素的第47位的天冬酰胺，C正確；D、蛋白質工程的原理是中心法則逆推，故改造水蛭素的過程中的遺傳信息流向和天然水蛭素合成過程中的有所不同，D錯誤。故選C。15.現(xiàn)代生物技術有著巨大的應用前景，但會涉及到生物安全問題。下列敘述錯誤的是（）A.消除生物武器威脅、防止生物武器擴散是生物安全防控的重要方面B.我國禁止一切與生殖性克隆和治療性克隆有關的研究C.為避免可能產(chǎn)生的基因歧視，基因檢測機構不能隨意泄露基因檢測的結果D.設計試管嬰兒需要經(jīng)過國家有關部門的嚴格審批，不宜推廣【答案】B〖祥解〗生物武器包括致病菌類、病毒類和生化毒劑類等，物武器的致病能力強，攻擊范圍廣。【詳析】A、生物武器的致病能力強，攻擊范圍廣，消除生物武器威脅、防止生物武器擴散是生物安全防控的重要方面，A正確；B、我國不允許進行任何生殖性克隆人實驗，主張對治療性克隆進行有效的監(jiān)控和嚴格審查，B錯誤；C、為避免可能產(chǎn)生的基因歧視，基因檢測機構不能隨意泄露基因檢測的結果，C正確；D、設計試管嬰兒涉及倫理問題，需要經(jīng)過國家有關部門的嚴格審批，不宜推廣，D正確。故選B。二、不定項選擇題（本題共5小題，每小題3分，共15分。每題有一個或多個選項符合題目要求，全對得3分，選對但不全得1分，錯選得0分）16.乳酸鏈球菌素（Nisin）是一種蛋白質類抗生素，對許多革蘭氏陽性菌，包括對食品造成嚴重危害的主要腐敗菌和某些致病菌有強烈的抑制作用。目前獲得Nisin的唯一途徑是通過乳酸鏈球菌發(fā)酵生產(chǎn)。下列敘述正確的是（）A.隨發(fā)酵時間的延長，菌液的pH下降會抑制菌種的生長B.發(fā)酵生產(chǎn)過程中，可用抽樣檢測法對乳酸鏈球菌的數(shù)量進行監(jiān)測C.Nisin的分泌離不開細胞膜、細胞器膜等組成的生物膜系統(tǒng)D.Nisin可被人體消化道中的蛋白酶水解，故對人體無害，可作為食品防腐劑【答案】ABD〖祥解〗分析題意可知，乳酸鏈球菌屬于原核生物，其細胞內(nèi)無以核膜為界限的細胞核，只有核糖體一種細胞器。【詳析】A、隨發(fā)酵時間的延長，由于乳酸鏈球菌無氧呼吸產(chǎn)生乳酸，故菌液的pH下降會抑制菌種的生長，A正確；B、由于微生物數(shù)量較多，發(fā)酵生產(chǎn)過程中，可用抽樣檢測法對乳酸鏈球菌的數(shù)量進行監(jiān)測，B正確；C、Nisin是由乳酸鏈球菌產(chǎn)生的，屬于原核生物，不含生物膜系統(tǒng)，C錯誤；D、Nisin是一種蛋白質類抗生素，可被人體消化道中的蛋白酶水解，對食品造成嚴重危害的主要腐敗菌和某些致病菌有強烈的抑制作用，所以對人體無害，可作為食品防腐劑，D正確。故選ABD。17.嗜鹽單胞菌是一類嗜鹽微生物，能夠在高pH、高溫和高鹽等極端條件下生長。中國科學家運用合成生物學方法構建了一株嗜鹽單胞菌H，其以糖蜜（甘蔗榨糖后的廢棄液，含較多蔗糖）為原料，在實驗室通過發(fā)酵生產(chǎn)出PHA等新型高附加值可降解材料，從而提高了甘蔗的整體利用價值。具體的工藝流程如圖所示。下列敘述錯誤的是（）A.使用嗜鹽單胞菌能夠節(jié)約淡水資源，還能建立抗雜菌污染的開放式發(fā)酵系統(tǒng)B.實驗室用嗜鹽單胞菌H發(fā)酵生產(chǎn)PHA時，需要提供無氧等發(fā)酵條件C.為統(tǒng)計嗜鹽單胞菌H的數(shù)目，在培養(yǎng)過程中應定期取樣并采用平板劃線法進行計數(shù)D.為提高嗜鹽單胞菌H對蔗糖的耐受力，應以蔗糖為唯一碳源，并不斷提高蔗糖濃度【答案】BC〖祥解〗微生物的計數(shù)方法：稀釋涂布平板法可用于微生物計數(shù)，原理是將菌液進行一系列梯度稀釋，涂布到平板上，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)；平板劃線法主要用于微生物的分離純化，不能用于計數(shù)，它是通過劃線將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，以獲得單個菌落?！驹斘觥緼、嗜鹽單胞菌是嗜鹽微生物，能在高鹽環(huán)境生長，使用它可減少對淡水資源的依賴，達到節(jié)約淡水資源的目的；同時高鹽環(huán)境不利于其他雜菌生長，所以能建立抗雜菌污染的開放式發(fā)酵系統(tǒng)，A正確；B、從圖中可以看到發(fā)酵過程有“空氣”通入，說明嗜鹽單胞菌H發(fā)酵生產(chǎn)PHA時需要有氧條件，而不是無氧條件，B錯誤；C、平板劃線法不能用于計數(shù)，因為平板劃線法是將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，無法準確統(tǒng)計菌落數(shù)目，統(tǒng)計微生物數(shù)目常用稀釋涂布平板法，C錯誤；D、以蔗糖為唯一碳源，并不斷提高蔗糖濃度，能篩選出對蔗糖耐受力強的嗜鹽單胞菌H，從而提高其對蔗糖的耐受力，D正確。

故選BC。18.野生型草莓一般是二倍體，而平常食用的草莓是八倍體。某生物興趣小組選用八倍體草莓進行了“DNA粗提取與鑒定”實驗。下列有關說法錯誤的是（）A.八倍體草莓細胞中的DNA含量高于野生型草莓細胞B.研磨液用濾紙過濾后，于4℃冰箱中靜置后再取上清液C.向上清液中加入體積分數(shù)為95%的冷酒精，利于DNA析出D.用二苯胺試劑鑒定DNA時，需進行沸水浴加熱并冷卻處理【答案】B〖祥解〗DNA的粗提取與鑒定的實驗原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同，利用這一特點可以選擇適當濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出，從而達到分離的目的；②DNA不容于酒精溶液，細胞中的某些蛋白質可以溶解于酒精，利用這一原理可以將蛋白質和DNA進一步分離；③DNA對于酶、高溫和洗滌劑的耐受性，蛋白酶能水解蛋白質，但是不能水解DNA，蛋白質不能耐受較高溫度，DNA能耐受較高溫度洗滌劑能瓦解細胞膜，但是對DNA沒有影響；④在沸水浴的條件下DNA遇二苯胺會呈現(xiàn)藍色?！驹斘觥緼、DNA位于染色體上，八倍體草莓的細胞中含有八個染色體組，其DNA含量高于野生型二倍體草莓細胞，A正確；B、研磨液用紗布過濾后，于4℃冰箱中靜置后再取上清液，B錯誤；C、向上清液中加入體積分數(shù)為95%的冷酒精，DNA會因不溶于酒精而析出，形成白色的絮狀或絲狀沉淀，C正確；D、在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色，需沸水浴加熱冷卻后再觀察顏色變化，D正確。故選B。19.研究表明，精子進入卵母細胞時帶入的少量miRNA可促進早期胚胎發(fā)育。重構胚不能正常發(fā)育是限制核移植技術的重要因素，為探究其原因科學家進行相關實驗，結果如圖所示。下列說法錯誤的是（）A.重構胚需用電刺激等方法激活后才能完成細胞分裂和發(fā)育進程B.精子miRNA可通過改變重構胚中DNA的遺傳信息促進其正常發(fā)育C.精子miRNA可通過降低重構胚中組蛋白甲基化水平促進其正常發(fā)育D.與正常胚胎相比，重構胚中甲基化水平異常主要發(fā)生在胚胎孵化時期【答案】BD〖祥解〗重構胚需要用物理或化學方法激活，如電刺激等，這樣才能使重構胚完成細胞分裂和發(fā)育進程?！驹斘觥緼、重構胚在核移植后，需用電刺激等方法激活，以促使其完成細胞分裂和發(fā)育進程，這是核移植技術中的常見操作，A正確；B、miRNA是一類非編碼RNA，它不能改變重構胚中DNA的遺傳信息，只是通過影響基因的表達等方式來促進重構胚的正常發(fā)育，B錯誤；C、從圖中可以看出，添加精子miRNA的重構胚組蛋白甲基化水平比重構胚低，且正常胚胎組蛋白甲基化水平也較低，說明精子miRNA可通過降低重構胚中組蛋白甲基化水平促進其正常發(fā)育，C正確；D、由圖可知，與正常胚胎相比，重構胚中甲基化水平異常主要發(fā)生在8細胞時期，而不是胚胎孵化時期（囊胚期），D錯誤。故選BD。20.研究發(fā)現(xiàn)，大豆GmNF-YA19基因在干旱脅迫中有響應?？蒲腥藛T利用PCR擴增GmNF-YA19基因，構建GmNF-YA19基因表達載體并轉化煙草。含GmNF-YA19基因的DNA片段和載體的結構分別如圖1、2所示。下列敘述正確的是（）A.PCR擴增GmNF-YA19基因所需的兩種引物的堿基序列一般不同B.為獲得能正確表達目的基因的重組質粒，應選用限制酶KpnI、EcoRI進行切割C.終止子為一段DNA序列，其作用是使翻譯在所需要的地方停下來D.重組質粒轉化煙草后，可使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基來篩選受體細胞【答案】AD〖祥解〗基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲?。豪肞CR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：PCR技術擴增等。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斘觥緼、PCR擴增GmNF-YA19基因的前提是根據(jù)已知核苷酸序列合成兩種引物，因為子鏈的延伸方向是在引物的3’端連接脫氧核苷酸，因此PCR擴增GmNF-YA19基因所需的兩種引物的堿基序列一般不同，A正確；B、根據(jù)圖中信息，在質粒的啟動子和終止子中間含有的限制酶為PvuⅡ、KpnI和EcoRI三種限制酶切割位點，由于KpnI在質粒中不只一個識別位點，用其切割會丟失終止子，因此最好選用PvuⅡ和EcoRI進行切割。且在目的基因的兩端也存在著兩種酶的識別位點，即選用PvuⅡ和EcoRI兩種限制酶切割含目的基因的DNA片段和載體，這樣可以保證目的基因和質粒正向連接，避免它們發(fā)生自身環(huán)化，B錯誤；C、終止子是位于基因末端的一段特殊的DNA序列，其作用是使轉錄過程在所需要的地方停下來，C錯誤；D、重組質粒轉化煙草后，重組質粒中含有抗氨芐青霉素的基因，該基因可作為標記基因，因而使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基來篩選成功導入重組質粒的目的細胞，D正確。故選AD。第Ⅱ卷（非選擇題共55分）21.產(chǎn)黃青霉菌是一種自然界中廣泛存在的霉菌，是生產(chǎn)青霉素的重要工業(yè)菌種。當產(chǎn)黃青霉菌處于葡萄糖濃度不足的環(huán)境中時，會分泌青霉素。工業(yè)上生產(chǎn)青霉素的流程如圖所示。（1）由圖中分離純化的結果推測，該過程中采用的方法是_____。剛分離獲得的菌種不會直接加入主發(fā)酵罐，而是先進行母種培養(yǎng)，其目的是_____。（2）圖中主發(fā)酵過程中要隨時取樣檢測培養(yǎng)液中微生物數(shù)量、產(chǎn)物濃度等．同時，要嚴格控制_____（答出三點）等發(fā)酵條件。環(huán)境條件不僅會影響微生物的生長繁殖，而且會影響微生物代謝物的形成。（3）隨著主發(fā)酵過程進行，需要適時向發(fā)酵罐內(nèi)“補料”。為使產(chǎn)黃青霉菌處于“半饑餓”狀態(tài)，延長青霉素的合成期，“補料”添加葡萄糖時應采取的方式是_____（從添加的量與頻次角度回答）。青霉素是青霉菌的_____（填“初生”或“次生”）代謝物，一般采取適當?shù)腳____措施來獲得產(chǎn)品?！敬鸢浮浚?）①.稀釋涂布平板法②.增加菌種數(shù)量（2）pH、溫度、溶解氧（3）①.少量、多次添加②.次生③.提取、分離和純化〖祥解〗發(fā)酵工程是指采用現(xiàn)代工程技術手段，利用微生物的某些特定功能，為人類生產(chǎn)有用的產(chǎn)品，或直接把微生物應用于工業(yè)生產(chǎn)過程的一種技術。發(fā)酵工程的內(nèi)容包括菌種選育、培養(yǎng)基的配制、滅菌、種子擴大培養(yǎng)和接種、發(fā)酵過程和產(chǎn)品的分離提純（生物分離工程）等方面?！窘馕觥浚?）由發(fā)酵工程流程圖中平板上菌落的分布，可推知分離純化菌種采用的方法是稀釋涂布平板法。當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌，因此稀釋涂布平板法可用于菌落計數(shù)；由于發(fā)酵過程中需要的菌種數(shù)量大，因此將分離后的菌種先進行菌種的擴大化培養(yǎng)，即進行“母種培養(yǎng)”以增加菌種數(shù)量。（2）在發(fā)酵過程中，要隨時檢測培養(yǎng)液中微生物數(shù)量、產(chǎn)物濃度等，以了解發(fā)酵進程。要及時添加必需的營養(yǎng)組分，要嚴格控制溶氧量、pH和溫度等發(fā)酵條件。環(huán)境條件的變化不僅會影響微生物的生長繁殖，也會影響微生物的代謝途徑，影響微生物代謝物的形成。（3）葡萄糖容易被菌體氧化并產(chǎn)生抑制抗生素合成酶形成的物質、一次性添加過量會影響青霉素的合成，因此“補料”添加葡萄糖時易采用多次少量添加的方法。青霉素是青霉菌的次生代謝物，一般采用提取、分離和純化措施來獲得產(chǎn)品。22.多肉植物因其觀賞性和耐旱易培的特點受到人的喜愛。研究人員以葉插繁殖能力強的多肉植物長壽花為實驗材料，通過使用改良的“切-浸-芽”（CDB）方法實現(xiàn)了多肉植物的遺傳轉化和基因編輯，為多肉植物的遺傳改良開辟了新途徑。圖1和圖2分別表示利用常規(guī)轉化法和CDB法在長壽花中遞送基因的示意圖?；卮鹣铝袉栴}。（1）無菌操作是圖1操作成功的關鍵，誘導愈傷組織的固體培養(yǎng)基應采用______法滅菌。若①過程在誘導生芽的培養(yǎng)基上未形成芽但分化出了根，原因可能是生長素與細胞分裂素用量的比值______（填“偏高”或“偏低”），該過程還需要提供光照，目的是_______。（2）為測試CDB法能否對長壽花實現(xiàn)遺傳轉化，研究人員用攜帶增強型綠色熒光蛋白基因（EGFP基因）和除草劑抗性基因（bar基因）的農(nóng)桿菌K599侵染外植體B，再將被侵染的外植體B放入充滿濕潤土壤的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。紫外燈下，實現(xiàn)遺傳轉化的轉基因芽表現(xiàn)為______；農(nóng)桿菌侵染植物細胞時可將外源基因遞送到外植體B細胞中的原因是_____。（3）為確定CDB法能否用于傳遞基因編輯工具，研究人員構建了用于敲除PDS基因的CRISPR/Cas9基因編輯載體，已知PDS蛋白缺失會導致植株白化。鑒定導入轉基因長壽花B中的基因編輯載體是否成功發(fā)揮作用的方法是______，依據(jù)是_____。（4）與常規(guī)轉化法相比，采用CDB法進行基因遞送的優(yōu)點是：______?！敬鸢浮浚?）①.高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）②.偏高③.誘導形成葉綠素，有利于進行光合作用（2）①.發(fā)出綠色熒光②.外源基因插入到農(nóng)桿菌Ti質粒上的T-DNA后可轉移到被侵染的外植體B細胞中，并與外植體B細胞的染色體DNA整合到一起（3）①.觀察植株是否表現(xiàn)出白化性狀②.PDS基因缺失會導致植株白化，出現(xiàn)白化苗則說明通過基因編輯技術實現(xiàn)了PDS基因的敲除（4）不需要植物組織培養(yǎng)技術、操作簡單、培養(yǎng)周期短〖祥解〗植物組織培養(yǎng)原理是植物細胞具有全能性，即已分化的細胞仍然具有發(fā)育成完整植株的潛能。過程：外植體（離體的植物組織、器官或細胞）經(jīng)過脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再經(jīng)過再分化形成根、芽等器官，進而發(fā)育成完整植株。植物激素的比例影響器官分化，生長素與細胞分裂素用量比值偏高利于生根，偏低利于生芽?！窘馕觥浚?）誘導愈傷組織的固體培養(yǎng)基應采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，這是常用的對培養(yǎng)基進行滅菌的方法，可以有效殺滅各種微生物及其芽孢，保證培養(yǎng)基的無菌狀態(tài)。在植物組織培養(yǎng)中，生長素與細胞分裂素用量的比值會影響植物器官的分化。若在誘導生芽的培養(yǎng)基上未形成芽但分化出了根，原因是生長素與細胞分裂素用量的比值偏高。因為當生長素比例相對較高時，有利于根的分化，而抑制芽的形成。該過程提供光照的目的是誘導葉綠素的形成，使植物能夠進行光合作用合成有機物，為植物的生長發(fā)育提供物質和能量基礎。（2）因為農(nóng)桿菌K599攜帶增強型綠色熒光蛋白基因（EGFP基因），所以在紫外燈下，實現(xiàn)遺傳轉化的轉基因芽表現(xiàn)為發(fā)出綠色熒光，這是綠色熒光蛋白基因表達的結果。農(nóng)桿菌侵染植物細胞時可將外源基因遞送到外植體B細胞中的原因是農(nóng)桿菌Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體DNA上。這樣攜帶目的基因的T-DNA就能夠進入植物細胞并穩(wěn)定存在和表達。（3）鑒定導入轉基因長壽花B中的基因編輯載體是否成功發(fā)揮作用的方法是觀察植株是否表現(xiàn)出白化性狀。依據(jù)是已知PDS蛋白缺失會導致植株白化，若導入的基因編輯載體成功發(fā)揮作用，PDS基因被敲除，那么植株就會因為PDS蛋白缺失而表現(xiàn)為白化；若植株未出現(xiàn)白化現(xiàn)象，則說明基因編輯載體未成功發(fā)揮作用。

（4）與常規(guī)轉化法相比，采用CDB法進行基因遞送的優(yōu)點是：不需要植物組織培養(yǎng)技術，直接形成轉基因芽、培養(yǎng)周期短、操作簡單。23.豬細小病毒（PPV）會導致豬患細小病毒傳染病。NS1蛋白參與PPV的復制等生命活動，豬感染PPV后會產(chǎn)生抗NS1蛋白抗體，研究人員開發(fā)了一種通過檢測該抗體以快速檢測PPV的試紙。（1）研究發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）和NS1蛋白均能與抗NS1蛋白抗體特異性結合。為探究它們與抗體的結合位點是否相同，研究人員首先制備了抗NS1蛋白的單克隆抗體，基本思路是：將從注射過_________的小鼠中提取的B淋巴細胞與________細胞融合，再經(jīng)過兩次篩選最終獲得具有________特點的陽性雜交瘤細胞。然后將得到的抗NS1蛋白抗體分為Fab和Fc兩部分，電泳后分別用SPA和NS1蛋白作探針進行雜交，結果如圖1所示，由此得出的實驗結論為________。（2）利用NS1蛋白和SPA制備的PPV檢測試紙，原理如圖2所示。其中PPV多抗IgG可特異性結合包含NS1蛋白在內(nèi)的多種PPV抗原，當膠體金在檢測線、質控線處聚集時，會出現(xiàn)可見條帶。若檢測結果為檢測線和質控線處均出現(xiàn)可見條帶，則說明樣品中含有________，理由是____。（3）研究發(fā)現(xiàn)，只有當PPV在細胞內(nèi)大量繁殖后，才會在豬血清中檢測到抗NS1蛋白抗體。據(jù)此推測，若將滅活的PPV疫苗接種到健康豬體內(nèi)后，取其血清利用上述試紙進行檢測的結果應為________?！敬鸢浮浚?）①.NS1

蛋白②.骨髓瘤③.既能大量增殖又能產(chǎn)生專一抗體④.SPA和NS1蛋白與抗體的結合位點不同（2）①.抗NS1

蛋白抗體②.SPA和NS1蛋白與抗NS1

蛋白抗體的結合位點不同，樣品中的抗NS1

蛋白抗體與與膠體金標記的NS1蛋白結合后，與檢測線上的SPA結合形成可見條帶，過量膠體金標記的NS1蛋白也會與質控線上的抗體結合形成可見條帶（3）質控線處出現(xiàn)可見條帶，檢測線處不出現(xiàn)可見條帶；滅活的PPV不能大量繁殖，血清中檢測不到抗NS1蛋白抗體〖祥解〗單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體?！窘馕觥浚?）在單克隆抗體制備的過程中首先要得到已經(jīng)免疫的B淋巴細胞，因此將從注射了NS1蛋白的小鼠中提取的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，再經(jīng)過兩次篩選最終獲得既能大量增殖又能產(chǎn)生專一抗體特點的陽性雜交瘤細胞。從圖1可以看出，F(xiàn)ab部分只能與NS1蛋白結合，F(xiàn)c部分與SPA結合，不與NS1蛋白結合，說明SPA和NS1蛋白與抗體的結合位點不同。（2）若檢測結果為檢測線和質控線處都出現(xiàn)可見條帶，則說明樣品中含有抗NS1

蛋白抗體，原因是SPA和NS1蛋白與抗NS1

蛋白抗體的結合位點不同，樣品中的抗NS1

蛋白抗體與與膠體金標記的NS1蛋白結合后，與檢測線上的SPA結合形成可見條帶，過量膠體金標記的NS1蛋白也會與質控線上的抗體結合形成可見條帶。（3）由于滅活的PPV不能大量繁殖，所以血清中檢測不到抗NS1蛋白抗體，利用上述試紙進行檢測的結果為質控線處出現(xiàn)可見條帶，檢測線處不出現(xiàn)可見條帶。24.為篩選出能與SARS病毒的S蛋白特異性結合的受體蛋白，研究人員在S蛋白末端添加TAP標簽（能特異性地與人和哺乳動物體內(nèi)IgG類抗體結合），再利用該標簽在病毒敏感細胞中快速純化出S蛋白及其相互作用的蛋白質，部分過程如圖?；卮鹣铝袉栴}。注：XhoI、SmaI、EcoRI、BamHI表示限制酶；PCMV、T7表示啟動子：Kozak序列是調控基因表達的重要序列且不含限制酶識別序列；Ampr表示氨芐青霉素抗性基因；ori表示復制原點。（1）為成功構建pcDNA3．1-S-TAP重組質粒，在利用PCR擴增S基因時，應該在S基因的5'端引入Kozak序列和_______限制酶識別序列，并刪除S基因3'端的________編碼序列；緩沖液中Mg2+的作用是______。（2）S基因和TAP基因的擴增產(chǎn)物通常用________進行初步鑒定，結果顯示兩個片段均得到擴增再經(jīng)測序證實正確后，將這兩個片段經(jīng)限制酶切割并通過_______酶連接導入質粒pcDNA3．1。在重組質粒中，T7的作用是_______。（3）為檢測轉染細胞中是否表達出了S-TAP融合蛋白，科研人員將轉染24h的細胞置于載玻片，洗滌、固定后，滴加帶有熒光標記的_____稀釋液，熒光顯微鏡下觀察。若出現(xiàn)熒光標記，則說明轉染細胞中表達出了S-TAP融合蛋白?！敬鸢浮浚?）①.SmaI②.終止密碼子③.激活TaqDNA聚合酶（2）①.瓊脂糖凝膠電泳②.DNA連接③.是RNA聚合酶識別和結合部位，驅動基因轉錄出mRNA（3）IgG類抗體〖祥解〗基因工程技術的基本步驟：目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定。【解析】（1）構建重組質粒時，要將S基因與含TAP基因的載體連接，從圖中可知載體上S基因插入位點一側有XhoI限制酶識別序列，所以在利用PCR擴增S基因時，應該在S基因的5'端引入Kozak序列和SmaI限制酶識別序列。因為要構建S-TAP融合蛋白，所以需刪除S基因3'端的終止密碼子序列，這樣才能使S基因和TAP基因編碼的蛋白連接起來。緩沖液中Mg2+的作用是作為Taq酶的激活劑，維持Taq酶的活性。（2）S基因和TAP基因的擴增產(chǎn)物通常用瓊脂糖凝膠電泳進行初步鑒定，通過電泳可根據(jù)片段的遷移速率等判斷是否擴增成功。將這兩個片段經(jīng)限制酶切割后，通過DNA連接酶連接導入質粒DNA3.1。在重組質粒中，T7是啟動子，是RNA聚合酶識別和結合的部位，驅動基因轉錄出mRNA。（3）因為TAP標簽能特異性地與人或哺乳動物體內(nèi)IgG類抗體結合，所以為檢測轉染細胞中是否表達出了S-TAP融合蛋白，科研人員將轉染24h的細胞置于載玻片，洗滌、固定后，滴加帶有熒