金華市人民醫(yī)院細(xì)胞分離技術(shù)考核一、選擇題（每題2分，共20題）1.細(xì)胞分離技術(shù)中，不屬于物理方法的是（）。A.密度梯度離心B.免疫磁珠分離C.電動分離D.離子交換層析2.在金華市人民醫(yī)院血液科，分離外周血造血干細(xì)胞常用的方法是（）。A.梯度離心法B.免疫磁珠法C.光學(xué)篩選法D.電泳分離法3.以下哪種細(xì)胞分離技術(shù)最適合分離單個核細(xì)胞？（）A.活細(xì)胞攝取法B.梯度離心法C.流式細(xì)胞術(shù)分選D.捕獲式磁珠法4.細(xì)胞分離過程中，EDTA的作用是（）。A.細(xì)胞固定B.蛋白質(zhì)變性C.金屬離子螯合D.細(xì)胞活化5.金華市人民醫(yī)院腫瘤科在進(jìn)行腫瘤細(xì)胞分離時，常選用（）。A.PBS緩沖液B.FBS培養(yǎng)基C.乙二醇溶液D.胰蛋白酶6.以下哪種方法適用于分離貼壁細(xì)胞？（）A.離心沉降B.沉降分離C.消化酶解D.磁珠捕獲7.細(xì)胞分離后，細(xì)胞活力應(yīng)維持在多少以上？（）A.70%B.80%C.90%D.95%8.在金華市人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室，分離CD34+造血干細(xì)胞的常用抗體是（）。A.CD3B.CD19C.CD34D.CD459.細(xì)胞分離過程中，Dounce勻漿器主要用于（）。A.細(xì)胞裂解B.細(xì)胞固定C.細(xì)胞計(jì)數(shù)D.細(xì)胞培養(yǎng)10.流式細(xì)胞術(shù)分選的原理是（）。A.沉降速率差異B.表面標(biāo)記差異C.體積差異D.密度差異二、填空題（每空1分，共10空）1.細(xì)胞分離技術(shù)中，常用的緩沖液是______、______和______。2.金華市人民醫(yī)院輸血科在進(jìn)行白細(xì)胞分離時，常用______法。3.細(xì)胞分離過程中，______是常用的細(xì)胞固定劑。4.免疫磁珠法的原理是利用______與細(xì)胞表面標(biāo)記的特異性結(jié)合。5.細(xì)胞分離后，應(yīng)使用______檢測細(xì)胞活力。6.在金華市人民醫(yī)院，分離血小板常用的方法是______。7.細(xì)胞分離前，需使用______酶去除細(xì)胞間質(zhì)。8.流式細(xì)胞術(shù)分選的分辨率可達(dá)______個細(xì)胞。9.細(xì)胞分離過程中，______是常用的細(xì)胞裂解劑。10.細(xì)胞分離技術(shù)的關(guān)鍵步驟包括______、______和______。三、簡答題（每題5分，共5題）1.簡述密度梯度離心法分離細(xì)胞的原理及其在金華市人民醫(yī)院的應(yīng)用場景。2.比較免疫磁珠法和流式細(xì)胞術(shù)分選法的優(yōu)缺點(diǎn)。3.細(xì)胞分離過程中，如何避免細(xì)胞損傷？4.在金華市人民醫(yī)院，分離外周血單個核細(xì)胞（PBMC）的步驟有哪些？5.細(xì)胞分離技術(shù)的質(zhì)量控制指標(biāo)有哪些？四、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合金華市人民醫(yī)院的實(shí)際情況，論述細(xì)胞分離技術(shù)在臨床科研中的應(yīng)用價(jià)值。2.闡述細(xì)胞分離技術(shù)中常見的問題及解決方案，并舉例說明其在金華市人民醫(yī)院的具體應(yīng)用。答案與解析一、選擇題答案1.D2.A3.B4.C5.B6.C7.C8.C9.A10.B解析：1.免疫磁珠法和電動分離屬于物理方法，密度梯度離心和離子交換層析為化學(xué)方法。2.梯度離心法是分離外周血造血干細(xì)胞的經(jīng)典方法。3.梯度離心法能有效分離單個核細(xì)胞。4.EDTA螯合Ca2+和Mg2+，破壞細(xì)胞間連接。5.腫瘤細(xì)胞分離常用FBS培養(yǎng)基提供支持。6.貼壁細(xì)胞需用消化酶解去除。7.細(xì)胞分離后應(yīng)保持90%以上活力。8.CD34+是造血干細(xì)胞的特異性標(biāo)記。9.Dounce勻漿器用于制備單細(xì)胞懸液。10.流式細(xì)胞術(shù)分選基于表面標(biāo)記差異。二、填空題答案1.PBS、DMEM、RPMI16402.梯度離心3.多聚甲醛4.抗體5.MTT法6.梯度離心7.胰蛋白酶8.10009.胰蛋白酶10.細(xì)胞裂解、細(xì)胞分離、細(xì)胞純化三、簡答題答案1.密度梯度離心法原理：利用細(xì)胞密度差異，在密度梯度介質(zhì)中分離細(xì)胞。金華市人民醫(yī)院常用此法分離PBMC和血小板。應(yīng)用場景：血液科、腫瘤科等。2.免疫磁珠法：特異性高，操作簡便，但純化度有限。流式細(xì)胞術(shù)分選：分辨率高，可同時檢測多指標(biāo)，但成本較高。3.避免細(xì)胞損傷措施：使用溫和緩沖液、控制離心力、快速操作、避免固定過度。4.分離PBMC步驟：細(xì)胞裂解→密度梯度離心（如Ficoll-Hypaque）→PBMC收集→洗滌純化。5.質(zhì)量控制指標(biāo)：細(xì)胞活力（MTT法）、純度（流式檢測）、數(shù)量（計(jì)數(shù)板）、形態(tài)學(xué)觀察。四、論述題答案1.應(yīng)用價(jià)值：-臨床：分離腫瘤細(xì)胞、干細(xì)胞用于治療；-科研：研究細(xì)胞功能、藥物篩選。金華市人民醫(yī)院可結(jié)合地方腫瘤高發(fā)特點(diǎn)，優(yōu)化分離技術(shù)。2.常見問題及解決