三明市人民醫(yī)院基因測序技術(shù)考核一、單選題（共10題，每題2分，共20分）1.下列哪種技術(shù)不屬于高通量測序（HTS）的范疇？A.Illumina測序B.IonTorrent測序C.Sanger測序D.PacBio測序2.在基因測序過程中，用于去除樣本中PCR抑制劑的是？A.DNA提取試劑盒B.蛋白酶K處理C.磁珠純化技術(shù)D.熱變性處理3.三明市人民醫(yī)院常用的腫瘤基因檢測項(xiàng)目中，哪一項(xiàng)主要針對(duì)非小細(xì)胞肺癌？A.BRCA1/BRCA2檢測B.EGFR檢測C.HER2檢測D.MLH1檢測4.實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行基因測序時(shí)，以下哪項(xiàng)操作可能導(dǎo)致測序數(shù)據(jù)質(zhì)量下降？A.優(yōu)化PCR擴(kuò)增條件B.提高DNA模板濃度C.使用低質(zhì)量接頭D.增加測序讀長5.在基因測序數(shù)據(jù)分析中，用于評(píng)估序列比對(duì)準(zhǔn)確性的指標(biāo)是？A.GC含量B.Q值C.覆蓋率D.片段長度6.三明地區(qū)常見的遺傳病之一是地中海貧血，其檢測主要依賴哪種技術(shù)？A.基因芯片B.基因測序C.PCR擴(kuò)增D.電泳分析7.Illumina測序平臺(tái)的建庫過程中，需要將打斷后的DNA片段進(jìn)行？A.連接接頭B.熱變性C.蛋白酶K消化D.磁珠純化8.基因測序中，"覆蓋度"指的是？A.序列長度B.檢測到的基因數(shù)量C.每個(gè)堿基被測序的次數(shù)D.PCR擴(kuò)增效率9.在臨床基因檢測中，"NGS"通常指的是？A.PCR檢測B.基因芯片檢測C.高通量測序D.Sanger測序10.三明市人民醫(yī)院開展遺傳病篩查時(shí)，常使用哪種方法檢測染色體異常？A.基因測序B.FISH檢測C.KaryotypingD.電泳分析二、多選題（共5題，每題3分，共15分）1.基因測序前的DNA提取需要滿足哪些要求？A.高純度B.高濃度C.無抑制物D.長片段完整性2.以下哪些屬于基因測序數(shù)據(jù)分析的常見工具？A.SamtoolsB.GATKC.IGVD.Primer33.三明市人民醫(yī)院開展腫瘤靶向治療時(shí)，常檢測哪些基因？A.KRASB.ALKC.ROS1D.TP534.基因測序過程中，可能導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差的因素包括？A.PCR擴(kuò)增偏好性B.底物消耗不均C.接頭連接效率D.軟件算法誤差5.臨床基因檢測報(bào)告中，常見的變異類型包括？A.SNV（單核苷酸變異）B.INDEL（插入/缺失）C.CNV（拷貝數(shù)變異）D.SV（結(jié)構(gòu)變異）三、判斷題（共10題，每題1分，共10分）1.Sanger測序是目前最高通量的測序技術(shù)。（×）2.基因測序前的文庫構(gòu)建需要精確控制片段長度。（√）3.地中海貧血的基因檢測只能通過基因測序進(jìn)行。（×）4.Illumina測序平臺(tái)的通量高于PacBio測序平臺(tái)。（√）5.基因測序數(shù)據(jù)分析中，"覆蓋度"越高越好。（√）6.臨床基因檢測報(bào)告中的"hotspot"通常指高突變率區(qū)域。（√）7.PCR擴(kuò)增可以提高DNA模板濃度，但可能導(dǎo)致偏差。（√）8.基因測序前的DNA提取需要去除RNA污染。（√）9.Karyotyping可以用于檢測染色體微缺失。（×）10.基因測序數(shù)據(jù)不需要質(zhì)量控制。（×）四、簡答題（共5題，每題5分，共25分）1.簡述Illumina測序的基本原理。2.解釋基因測序中"覆蓋度"的概念及其臨床意義。3.列舉三明市人民醫(yī)院可能開展的遺傳病篩查項(xiàng)目。4.說明基因測序數(shù)據(jù)分析的基本流程。5.描述PCR擴(kuò)增在基因測序前的作用及潛在問題。五、論述題（共2題，每題10分，共20分）1.結(jié)合三明市人民醫(yī)院的實(shí)際情況，論述基因測序技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值。2.闡述基因測序數(shù)據(jù)分析中常見的質(zhì)量控制方法及其重要性。答案與解析一、單選題答案與解析1.C-解析：Sanger測序?qū)儆诘谝淮鷾y序技術(shù)，通量低，不屬于HTS范疇。Illumina、IonTorrent和PacBio均屬于HTS技術(shù)。2.C-解析：磁珠純化技術(shù)可以有效去除PCR抑制劑，提高測序質(zhì)量。其他選項(xiàng)均與去除抑制劑無關(guān)。3.B-解析：EGFR檢測主要針對(duì)非小細(xì)胞肺癌，是三明市人民醫(yī)院常用的腫瘤基因檢測項(xiàng)目之一。其他選項(xiàng)分別針對(duì)乳腺癌、胃癌和遺傳性腫瘤。4.C-解析：低質(zhì)量接頭可能導(dǎo)致測序接頭污染或接頭脫落，影響數(shù)據(jù)質(zhì)量。其他選項(xiàng)均有助于提高測序效果。5.B-解析：Q值用于評(píng)估測序堿基的準(zhǔn)確性，Q值越高，準(zhǔn)確性越高。其他選項(xiàng)與質(zhì)量評(píng)估無關(guān)。6.B-解析：地中海貧血的檢測主要依賴基因測序技術(shù)，可以檢測α-或β-鏈基因突變。其他選項(xiàng)為輔助檢測手段。7.A-解析：Illumina測序需要將DNA片段打斷后連接接頭，以便進(jìn)行后續(xù)擴(kuò)增和測序。其他選項(xiàng)為后續(xù)步驟。8.C-解析："覆蓋度"指每個(gè)堿基被測序的次數(shù)，越高表示測序越均勻。其他選項(xiàng)與覆蓋度無關(guān)。9.C-解析：NGS即高通量測序，是基因檢測的主流技術(shù)。其他選項(xiàng)為傳統(tǒng)檢測方法。10.C-解析：Karyotyping（核型分析）是檢測染色體異常的經(jīng)典方法，常用于遺傳病篩查。其他選項(xiàng)為分子檢測方法。二、多選題答案與解析1.A、B、C-解析：DNA提取需要高純度、高濃度且無抑制物，但長片段完整性并非必須。2.A、B、C-解析：Samtools、GATK和IGV是常用的測序數(shù)據(jù)分析工具。Primer3主要用于PCR設(shè)計(jì)。3.A、B、C-解析：KRAS、ALK和ROS1是三明市人民醫(yī)院常用的腫瘤靶向治療檢測基因。TP53雖重要，但更多用于預(yù)后判斷。4.A、B、C、D-解析：PCR偏好性、底物消耗不均、接頭連接效率及軟件算法誤差均可能導(dǎo)致數(shù)據(jù)偏差。5.A、B、C、D-解析：SNV、INDEL、CNV和SV是常見的基因變異類型。三、判斷題答案與解析1.×-解析：Sanger測序是第一代測序技術(shù)，通量低，而HTS（如Illumina）才是最高通量技術(shù)。2.√-解析：文庫構(gòu)建時(shí)需精確控制片段長度，以保證測序效率。3.×-解析：地中海貧血也可通過基因芯片或PCR檢測。4.√-解析：Illumina測序通量遠(yuǎn)高于PacBio測序。5.√-解析：高覆蓋度通常意味著更準(zhǔn)確的測序結(jié)果。6.√-解析："hotspot"指基因突變頻率較高的區(qū)域。7.√-解析：PCR擴(kuò)增可能導(dǎo)致某些片段擴(kuò)增效率過高，影響測序數(shù)據(jù)均衡性。8.√-解析：RNA污染會(huì)干擾測序，需去除。9.×-解析：Karyotyping檢測宏觀染色體異常，微缺失需FISH或測序。10.×-解析：測序數(shù)據(jù)必須經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控，否則結(jié)果不可靠。四、簡答題答案與解析1.Illumina測序的基本原理-解析：Illumina測序采用"邊合成邊測序"技術(shù)，通過熒光標(biāo)記的脫氧核苷酸（dNTP）進(jìn)行DNA鏈延伸，每個(gè)堿基的延伸都會(huì)產(chǎn)生特定熒光信號(hào)，通過成像系統(tǒng)記錄信號(hào)，最終確定序列。2.覆蓋度的概念及其臨床意義-解析：覆蓋度指測序深度，即每個(gè)堿基被測序的次數(shù)。高覆蓋度可提高檢測準(zhǔn)確性，但需平衡成本。臨床中用于評(píng)估腫瘤基因突變檢出率。3.三明市人民醫(yī)院可能開展的遺傳病篩查項(xiàng)目-解析：地中海貧血、唐氏綜合征、PKU（苯丙酮尿癥）等是常見篩查項(xiàng)目。4.基因測序數(shù)據(jù)分析的基本流程-解析：質(zhì)量控制→序列比對(duì)→變異檢測→變異注釋→臨床解讀。5.PCR擴(kuò)增的作用及潛在問題-解析：PCR用于擴(kuò)增DNA模板，但可能導(dǎo)致偏好性擴(kuò)增或引入錯(cuò)誤。五、論述