演講人：日期:檢驗科血液學(xué)常見檢驗指導(dǎo)手冊目錄CATALOGUE01標(biāo)本采集與處理規(guī)范02血常規(guī)檢驗項目03凝血功能檢測要點04血型與輸血檢驗05質(zhì)量控制管理06生物安全與維護(hù)PART01標(biāo)本采集與處理規(guī)范靜脈采血標(biāo)準(zhǔn)操作流程010203采血前準(zhǔn)備核對患者信息及檢驗項目，確保采血管標(biāo)簽與申請單一致。選擇合適靜脈（肘正中靜脈、貴要靜脈等），消毒范圍直徑不小于5cm，待消毒液自然干燥后再穿刺。穿刺技術(shù)要求使用真空采血系統(tǒng)時保持針頭與皮膚呈15-30度角進(jìn)針，見回血后固定針翼，依次連接采血管。多管采集時按血培養(yǎng)→凝血→血清→血漿順序操作，避免抗凝劑交叉污染。采血后處理拔針后立即用無菌棉簽按壓穿刺點3-5分鐘，血樣輕柔顛倒混勻5-8次（抗凝管需混勻8-10次）。觀察采血管內(nèi)血液是否達(dá)到標(biāo)記線，不足量需重新采集?？鼓齽┻x擇與比例要求EDTA抗凝應(yīng)用適用于血常規(guī)、血型鑒定等檢測，紫頭管中EDTA-K2濃度為1.5-2.2mg/mL血液。需注意采血后30分鐘內(nèi)完成混勻，超過4小時可能引起血小板腫脹變形。肝素抗凝特性綠頭管中肝素鋰適用于生化檢測，抑制凝血酶活性但不影響電解質(zhì)結(jié)果。禁止用于血涂片檢查，可能引起白細(xì)胞聚集和染色背景加深。枸櫞酸鈉比例藍(lán)頭管用于凝血檢測時，抗凝劑與血液比例為1:9（3.2%濃度）。特殊人群（血細(xì)胞比容>55%或<35%）需按公式調(diào)整抗凝劑用量，避免假性PT/APTT延長。標(biāo)本保存與轉(zhuǎn)運條件特殊處理流程血氨檢測需冰浴送檢并在30分鐘內(nèi)完成檢測，血培養(yǎng)瓶需保持直立狀態(tài)轉(zhuǎn)運。微生物標(biāo)本如懷疑布魯菌感染，需使用雙層容器并標(biāo)注生物危害標(biāo)識。離心參數(shù)規(guī)范生化檢測標(biāo)本需3000rpm離心10分鐘，凝血標(biāo)本需1500g離心15分鐘。溶血敏感項目（LDH、鉀離子等）需嚴(yán)格控制離心速度和時間。溫度控制要求血常規(guī)標(biāo)本室溫保存不超過4小時，凝血標(biāo)本需2-8℃冷藏轉(zhuǎn)運。血糖檢測專用灰頭管應(yīng)在采血后1小時內(nèi)分離血清，否則需置于冰水混合物中暫存。PART02血常規(guī)檢驗項目全血細(xì)胞計數(shù)檢測原理電阻抗法原理通過細(xì)胞在電解液中通過微孔時產(chǎn)生的電阻變化計數(shù)細(xì)胞數(shù)量，可區(qū)分紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板體積差異，是血細(xì)胞分析儀的基礎(chǔ)檢測技術(shù)。校準(zhǔn)與質(zhì)控要求每日需使用配套校準(zhǔn)品進(jìn)行儀器線性校準(zhǔn)，同時運行三個水平質(zhì)控品（低、中、高值）以監(jiān)控儀器精密度和準(zhǔn)確度。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合熒光染色利用激光散射和熒光標(biāo)記技術(shù)對白細(xì)胞亞群（如中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）進(jìn)行精準(zhǔn)分類，提高幼稚細(xì)胞或異常細(xì)胞的檢出靈敏度。血紅蛋白測定原理采用氰化高鐵血紅蛋白比色法，通過波長540nm處的吸光度計算血紅蛋白濃度，需注意高脂血癥或異常血紅蛋白病可能干擾結(jié)果。血涂片制備與染色標(biāo)準(zhǔn)載玻片與推片夾角保持30°-45°，推片速度需均勻，血滴直徑約2mm，制備的涂片應(yīng)呈現(xiàn)“舌形”漸變薄區(qū)，尾部不超出玻片1/3。甲醇固定1分鐘→瑞氏染液染色3分鐘→緩沖液（pH6.4-6.8）稀釋并孵育5分鐘→流水沖洗后晾干，染色過深或過淺需調(diào)整緩沖液比例或時間。紅細(xì)胞呈粉紅色無重疊，白細(xì)胞核染色質(zhì)清晰（紫色），中性粒細(xì)胞胞漿顆粒可見，血小板分散無聚集，背景無染料沉淀。高脂血癥標(biāo)本需延長甲醇固定時間，冷凝集標(biāo)本需37℃溫育后重新制片，避免假性血小板減少或紅細(xì)胞緡錢狀排列干擾。推片厚度控制瑞氏-吉姆薩染色流程染色質(zhì)量評估標(biāo)準(zhǔn)異常標(biāo)本處理異常細(xì)胞形態(tài)識別要點靶形紅細(xì)胞（地中海貧血）、裂紅細(xì)胞（DIC）、球形紅細(xì)胞（遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥），需結(jié)合紅細(xì)胞分布寬度（RDW）和病史綜合判斷。01040302紅細(xì)胞異常形態(tài)中性粒細(xì)胞毒性顆粒（感染）、Pelger-Huet畸形（假性核左移）、Auer小體（急性髓系白血?。枧c骨髓穿刺結(jié)果聯(lián)動分析。白細(xì)胞病態(tài)造血表現(xiàn)EDTA依賴性假性血小板減少時，血小板圍繞中性粒細(xì)胞形成“衛(wèi)星現(xiàn)象”，應(yīng)改用枸櫞酸鈉抗凝管復(fù)查。血小板聚集與衛(wèi)星現(xiàn)象瘧原蟲環(huán)狀體需在厚血膜中查找，巴貝斯蟲易與血小板混淆，微絲蚴需夜間采血并采用姬姆薩染色增強(qiáng)檢出率。寄生蟲篩查要點PART03凝血功能檢測要點采用3.2%枸櫞酸鈉抗凝管（藍(lán)帽）采集靜脈血，嚴(yán)格保持血液與抗凝劑比例9:1。采集后立即輕柔顛倒混勻5-8次，30分鐘內(nèi)以3000rpm離心15分鐘獲得乏血小板血漿。標(biāo)本采集與處理建立三級審核制度，對異常結(jié)果需結(jié)合臨床信息、用藥史進(jìn)行相關(guān)性分析，對PT/APTT延長超過參考區(qū)間50%的樣本需加做混合血漿糾正試驗。結(jié)果審核與報告包括凝血酶原時間（PT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶時間（TT）和纖維蛋白原（FIB）檢測。各項目需嚴(yán)格遵循CLSI指南，使用配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，儀器需每日進(jìn)行光學(xué)通道檢查和液路維護(hù)。檢測項目標(biāo)準(zhǔn)化操作010302凝血四項檢測流程特別注意樣本溶血、脂血、黃疸對光學(xué)法檢測的干擾，室溫放置超過4小時的樣本需重新采集，冷凍保存樣本需37℃快速復(fù)融后檢測。影響因素控制04抗凝治療監(jiān)測指標(biāo)華法林治療監(jiān)測采用國際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）作為主要指標(biāo)，治療范圍根據(jù)適應(yīng)證調(diào)整（如房顫2.0-3.0，機(jī)械瓣膜2.5-3.5）。需注意維生素K依賴性凝血因子半衰期差異導(dǎo)致的INR波動，合并肝病患者需聯(lián)合檢測蛋白C/S活性。01肝素治療監(jiān)測普通肝素采用APTT（延長1.5-2.5倍）或抗Xa活性（0.3-0.7IU/ml），低分子肝素需檢測抗Xa活性（峰值0.5-1.0IU/ml）。注意APTT試劑對肝素敏感性差異，推薦使用肝素治療范圍校準(zhǔn)曲線。02直接口服抗凝藥監(jiān)測常規(guī)凝血功能檢測可能呈現(xiàn)非特異性改變，推薦采用稀釋凝血酶時間（dTT）檢測達(dá)比加群，抗Xa活性檢測利伐沙班/阿哌沙班。急診手術(shù)前需評估藥物殘留量。03抗血小板藥物監(jiān)測采用血小板聚集試驗（LTA、Multiplate等）或血栓彈力圖（TEG）評估阿司匹林、氯吡格雷療效，注意CYP2C19基因多態(tài)性對氯吡格雷代謝的影響。04危急值報告閾值設(shè)定PT/INR危急值INR>5.0提示嚴(yán)重出血風(fēng)險，INR>9.0需緊急處理；PT超過正常3倍伴活動性出血應(yīng)立即報告。肝病患者INR解讀需結(jié)合肝功能分級。01APTT危急值超過正常上限3倍或>100秒（不同試劑有差異），特別是新發(fā)異常延長需警惕獲得性凝血因子抑制物（如狼瘡抗凝物）或DIC。血小板計數(shù)危急值<30×10?/L自發(fā)出血風(fēng)險顯著增加，<10×10?/L需緊急輸注；>1000×10?/L需排查骨髓增殖性疾病并預(yù)防血栓。纖維蛋白原危急值<1.0g/L提示嚴(yán)重低纖維蛋白原血癥，見于DIC、嚴(yán)重肝病等；>7.0g/L需排查炎癥或腫瘤性疾病。所有危急值需15分鐘內(nèi)電話通知并記錄臨床反饋。020304PART04血型與輸血檢驗ABO/Rh血型鑒定步驟樣本采集與處理01使用EDTA抗凝靜脈血樣本，確保無溶血或凝塊，離心后分離血漿與紅細(xì)胞懸液備用。需嚴(yán)格標(biāo)記樣本信息以避免混淆。正向定型（紅細(xì)胞抗原檢測）02將患者紅細(xì)胞懸液分別與抗-A、抗-B及抗-D試劑反應(yīng)，觀察凝集現(xiàn)象以判定ABO血型及RhD抗原表達(dá)。反向定型（血漿抗體檢測）03將患者血漿與已知A型、B型紅細(xì)胞試劑反應(yīng)，驗證ABO抗體是否存在，確保正反向結(jié)果一致。結(jié)果判讀與記錄04根據(jù)凝集強(qiáng)度分級（0-4+），結(jié)合國際輸血協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)判定血型，雙人核對后錄入信息系統(tǒng)并簽發(fā)報告。交叉配血試驗規(guī)范評估供者血漿中抗體對受者紅細(xì)胞的潛在影響，尤其適用于大量輸血或特殊成分輸血場景。次側(cè)配血（受者紅細(xì)胞+供者血漿）抗球蛋白試驗（Coombs試驗）緊急情況簡化流程將供血者紅細(xì)胞與受血者血漿混合，檢測是否存在IgM或IgG類抗體介導(dǎo)的溶血反應(yīng)，需孵育后離心觀察凝集或溶血。若鹽水介質(zhì)配血陰性但臨床懷疑抗體存在，需進(jìn)行間接抗球蛋白試驗以檢出不完全抗體。在急救輸血時，可優(yōu)先完成ABO/Rh同型確認(rèn)及主側(cè)配血，但需后續(xù)補(bǔ)全完整試驗并記錄風(fēng)險評估。主側(cè)配血（供者紅細(xì)胞+受者血漿）不規(guī)則抗體篩查方法篩查細(xì)胞選擇采用2-3組譜細(xì)胞覆蓋常見血型系統(tǒng)抗原（如Duffy、Kell、Kidd等），確保對高頻及低頻抗體的檢出敏感性。多介質(zhì)檢測技術(shù)結(jié)合鹽水法、酶處理法及聚凝胺法，增強(qiáng)對IgG類不規(guī)則抗體的捕獲能力，減少漏檢風(fēng)險。抗體特異性鑒定若篩查陽性，需通過譜細(xì)胞反應(yīng)格局分析及吸收放散試驗確定抗體靶抗原，必要時進(jìn)行分子分型輔助判斷。臨床意義評估與輸血建議根據(jù)抗體特性（如補(bǔ)體激活能力、效價）及患者病史，制定個性化輸血方案（如選擇抗原陰性血液或洗滌紅細(xì)胞）。PART05質(zhì)量控制管理質(zhì)控品準(zhǔn)備與保存每日使用前需檢查質(zhì)控品有效期及儲存條件，確保質(zhì)控品處于穩(wěn)定狀態(tài)。溶解后需充分混勻，避免分層或沉淀影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。質(zhì)控數(shù)據(jù)采集與分析按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序運行質(zhì)控樣本，記錄檢測結(jié)果并繪制質(zhì)控圖。采用Westgard多規(guī)則對數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)性分析，識別潛在誤差來源。失控處理與糾正措施當(dāng)出現(xiàn)失控情況時，需立即暫停檢測，排查儀器狀態(tài)、試劑批號、環(huán)境因素等可能原因。實施糾正措施后需重新運行質(zhì)控直至結(jié)果在控。文件記錄與歸檔完整記錄質(zhì)控操作過程、結(jié)果數(shù)據(jù)及處理措施，保存原始數(shù)據(jù)和圖表，便于后續(xù)質(zhì)量追溯和周期性趨勢分析。室內(nèi)質(zhì)控操作流程收到質(zhì)評樣本后需核對樣本信息完整性，嚴(yán)格按照規(guī)定條件保存和處理樣本。禁止與其他實驗室交流檢測結(jié)果，確保評價客觀性。采用與常規(guī)檢測相同的儀器和方法進(jìn)行檢測，在規(guī)定時間內(nèi)提交原始檢測數(shù)據(jù)。報告需包含檢測人員、儀器型號、試劑批號等完整信息。收到評價報告后，組織技術(shù)小組分析偏差原因，制定針對性改進(jìn)方案。對持續(xù)不合格項目需開展專項培訓(xùn)或方法學(xué)驗證。將室間質(zhì)評結(jié)果納入實驗室質(zhì)量指標(biāo)管理體系，作為檢測項目持續(xù)改進(jìn)和技術(shù)能力評估的重要依據(jù)。室間質(zhì)評實施要求樣本接收與處理規(guī)范檢測方法與報告要求結(jié)果分析與改進(jìn)措施評價結(jié)果應(yīng)用2014異常結(jié)果復(fù)檢規(guī)則04010203復(fù)檢觸發(fā)條件當(dāng)檢測結(jié)果超出生理范圍、與歷史結(jié)果差異顯著、儀器報警提示異常時，必須啟動復(fù)檢程序。血細(xì)胞計數(shù)中出現(xiàn)的極端值或異常直方圖也需復(fù)檢確認(rèn)。復(fù)檢操作規(guī)范采用原樣本進(jìn)行復(fù)檢，必要時可制備血涂片鏡檢。復(fù)檢需由不同操作者執(zhí)行，使用相同或不同方法學(xué)原理的檢測系統(tǒng)進(jìn)行驗證。結(jié)果比對與報告原始結(jié)果與復(fù)檢結(jié)果差異超過允許范圍時，需進(jìn)行第三次檢測或送參考實驗室確認(rèn)。最終報告需注明復(fù)檢過程及結(jié)果一致性評價。復(fù)檢記錄與追蹤詳細(xì)記錄復(fù)檢原因、操作過程及結(jié)果比對情況，建立異常結(jié)果數(shù)據(jù)庫用于周期性分析和質(zhì)量改進(jìn)。PART06生物安全與維護(hù)個人防護(hù)裝備規(guī)范銳器操作安全管理檢驗人員必須穿戴符合生物安全標(biāo)準(zhǔn)的防護(hù)服、手套、口罩及護(hù)目鏡，接觸高風(fēng)險樣本時需使用N95口罩和面罩，確保皮膚及黏膜無暴露風(fēng)險。嚴(yán)格執(zhí)行針頭防回套操作規(guī)范，使用專用銳器盒存放廢棄針頭，禁止徒手分離針頭與注射器，降低針刺傷發(fā)生率。職業(yè)暴露防護(hù)措施應(yīng)急處理流程建立職業(yè)暴露應(yīng)急預(yù)案，包括傷口沖洗、血清學(xué)檢測、預(yù)防性用藥及上報登記制度，確保暴露后24小時內(nèi)完成專業(yè)評估與干預(yù)。生物安全培訓(xùn)體系實施三級培訓(xùn)制度（崗前、年度、專項），涵蓋病原體傳播途徑、防護(hù)技術(shù)及最新行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，培訓(xùn)考核合格方可上崗。每周使用標(biāo)準(zhǔn)血漿校準(zhǔn)PT/APTT檢測通道，清潔光學(xué)比色系統(tǒng)，確保纖維蛋白原測定波動范圍≤5%。凝血儀光學(xué)通道維護(hù)每月執(zhí)行熒光微球校準(zhǔn)，調(diào)整PMT電壓使CV值<2%，同步驗證前向/側(cè)向散射光靈敏度。流式細(xì)胞儀液路校驗儀器日常校準(zhǔn)規(guī)程采用國際溯源校準(zhǔn)品進(jìn)行每日質(zhì)控，包括白細(xì)胞分類、血紅蛋白線性度及血小板計數(shù)驗證，偏差超過±2SD需執(zhí)行三級校準(zhǔn)程序。血細(xì)胞分析儀校準(zhǔn)每季度使用激光測速儀核查轉(zhuǎn)速偏差，轉(zhuǎn)子不平衡容忍度測試需符合ISO15189標(biāo)準(zhǔn)。