ICS點擊此處添加ICS號

CCS點擊此處添加CCS號

GDPMAA

廣東省精準醫(yī)學應(yīng)用學會團體標準

T/GDPMAAXXXX—2024

缺血性腦卒中動物模型評價技術(shù)規(guī)范第1

部分：嚙齒類動物

Standardforestablishmentofanimalmodelsforcerebralischemicstroke

Part1:Rodents

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

202X-XX-XX發(fā)布202X-XX-XX實施

廣東省精準醫(yī)學應(yīng)用學會??發(fā)布

T/GDPMAAXXXX—2024

缺血性腦卒中動物模型評價技術(shù)規(guī)范第1部分：嚙齒類動物

1范圍

本標準規(guī)定了實驗小鼠、大鼠缺血性腦卒中模型制備的動物質(zhì)量、飼養(yǎng)要求、制備方法、評價方法

和結(jié)果判定。

本標準適用于嚙齒類動物缺血性腦卒中模型構(gòu)建及應(yīng)用評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB14922實驗動物微生物、寄生蟲學等級及監(jiān)測

GB/T14924.2實驗動物配合飼料衛(wèi)生標準

GB14924.3實驗動物配合飼料營養(yǎng)成分

GB14925實驗動物環(huán)境及設(shè)施

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

缺血性腦卒中cerebralischemicstroke

是指各種原因?qū)е碌哪X組織血液供應(yīng)障礙，并由此產(chǎn)生的缺血缺氧性壞死，進而出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙

的一類臨床綜合征。

3.2

神經(jīng)功能評價量表neurologicalfunctionassessmentscale

用于評估動物模型神經(jīng)功能缺損程度和恢復(fù)情況的工具，評價內(nèi)容包括意識水平、感覺系統(tǒng)、運動

系統(tǒng)和骨骼肌協(xié)調(diào)等。

3.3

動物行為評價annimalbehavioralassessment

以實驗動物為對象，在自然界或?qū)嶒炇覂?nèi)，以觀察和實驗方式對動物的行為信息進行采集、分析和

處理，評價動物行為信息的生理和病理意義。

3.4

運動能力評價motorfunctionassessment

利用不同動物運動評價設(shè)備，如步態(tài)分析系統(tǒng)等，觀察動物在不同情境下的運動行為變化，用于測

試和評價動物的運動能力。

4動物質(zhì)量及飼養(yǎng)要求

4.1動物質(zhì)量應(yīng)符合GB14922的要求。

4.2飼養(yǎng)環(huán)境應(yīng)符合GB14925的要求。

4.3飼料應(yīng)符合GB/T14924.2和GB14924.3的要求。

5模型制備方法

1

T/GDPMAAXXXX—2024

實驗嚙齒類動物缺血性腦卒中模型制備方法包括栓塞法、光化學法和電凝法等。

5.1栓塞法

實驗小鼠/大鼠缺血性卒中模型構(gòu)建的經(jīng)典方法，通過頸外動脈插入線栓或血栓等，導致大腦中動

脈阻塞和再灌注。具體操作如下：

1)術(shù)前準備。選擇小鼠（體重控制在25-30g）、大鼠（體重控制在250至300g），術(shù)前

動物禁食12小時，自由飲水。進行麻醉、備皮、消毒等準備工作。

2)麻醉。通常采用吸入類麻醉劑進行麻醉，手術(shù)過程中保溫。

3)手術(shù)。從頸部正中切開皮膚，利用鑷子鈍性分離頸部腺體組織、筋膜，暴露并分離頸總

動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內(nèi)動脈（ICA）。使用血管夾夾閉CCA和ICA分叉的

近心端，結(jié)扎ECA遠心端和近心端（留長線頭），并從兩個結(jié)扎點中間剪斷ECA。然后在

ECA近分叉處用眼科剪45°剪一小斜口并插入線栓，松開ICA動脈夾，緩慢向ICA推入

線栓，當線栓遇到輕微阻力時即可停止，線栓插入深度一般根據(jù)小鼠和大鼠體重和實驗

需求進行調(diào)整，小鼠常見深度為9-10mm（25-30g），大鼠常見深度為18-22mm（250-300g）。

插入過程中避免用力過猛導致血管破裂或線栓彎曲，同時防止線栓誤入翼腭動脈（PPA）。

當線栓到達位置后松開CCA結(jié)扎，縫合皮膚。阻斷血流造成腦局部缺血60分鐘后，拔出

線栓實現(xiàn)再灌注。術(shù)后，注意保持傷口清潔干燥，防止感染。

4)術(shù)后護理。術(shù)后將動物放置于加熱墊上保暖，直至完全復(fù)蘇。注意觀察小鼠的生命體征

變化，如呼吸、心率等。

5.2光化學法

實驗小鼠/大鼠皮層缺血性腦卒中模型構(gòu)建的常用方法，實驗操作技術(shù)簡單。利用光敏劑（如玫瑰

紅）在特定強度光照下發(fā)生光化學反應(yīng)，在大腦的照射局部產(chǎn)生腦水腫和血小板微血栓，形成局灶性腦

梗死。具體操作如下：

1)術(shù)前準備。術(shù)前動物禁食12小時，自由飲水。進行麻醉、備皮、消毒等準備工作。

2)麻醉。通常采用注射類麻醉劑進行麻醉，手術(shù)過程中保溫。

3)手術(shù)。將小鼠/大鼠頭部固定于腦立體定位儀上，在前囟旁劃定圓形區(qū)域，該區(qū)域以外進

行避光處理。從動物眼底注射玫瑰紅溶液，開啟激光發(fā)射器（532nm），對圓形區(qū)域進行

激光照射8分鐘，形成局部永久缺血，縫合頭皮。

4)術(shù)后護理。術(shù)后將動物放置于加熱墊上保暖，直至完全復(fù)蘇。

5.3電凝法

實驗小鼠和大鼠缺血性腦卒中永久閉塞模型構(gòu)建方法。利用開顱手術(shù)暴露嚙齒類動物腦中動脈并進

行永久性阻斷。具體方法如下：

1)術(shù)前準備。術(shù)前動物禁食12小時，自由飲水。進行麻醉、備皮、消毒等準備工作。

2)麻醉。通常采用吸入類麻醉劑進行麻醉，手術(shù)過程中保溫。

3)手術(shù)。在無菌條件下進行手術(shù)操作，切開小鼠/大鼠頭部皮膚，暴露顱骨。使用微型電凝

器，將電凝探頭置于小鼠/大鼠大腦中動脈的適當位置，使大腦中動脈永久性阻斷。注意

控制電凝時間和強度，避免損傷周圍組織。

4)術(shù)后護理。術(shù)后將動物放置于加熱墊上保暖，直至完全復(fù)蘇。注意觀察小鼠的生命體征

變化，如呼吸、心率等。

6評價方法

6.1腦血流檢測

采用激光散斑血流儀檢測動物腦缺血情況。動物麻醉后俯臥，頭部備皮消毒后，切開皮膚，暴露顱

骨，在激光散斑成像儀下，觀察腦血流圖像，選定損傷側(cè)缺血區(qū)域，測定10s內(nèi)平均血流值，同時，選

定非損傷側(cè)相同區(qū)域測定血流值，評價大腦中動脈阻斷后的缺血情況。

6.2神經(jīng)損害嚴重程度評分

2

T/GDPMAAXXXX—2024

造模前先按照附錄A對動物進行神經(jīng)功能評分，排除不滿足評分要求的動物。造模后2小時，動物完

全清醒后，在安靜環(huán)境中，進行神經(jīng)神經(jīng)損害嚴重程度評價。逐項評分，所有單項分數(shù)相加則為動物神

經(jīng)損害程度評分，總分為18分。一般選擇3名觀察人員進行量表評價，統(tǒng)計3名觀察員的平均值作為神經(jīng)

功能評分量值。

6.3運動行為評價

采用疲勞轉(zhuǎn)棒裝置進行運動行為評價。轉(zhuǎn)速設(shè)置從0rpm緩慢加速至40rpm，測試時間為300秒，測試

時將動物置于旋轉(zhuǎn)棒上，記錄動物從旋轉(zhuǎn)棒上掉落的時間。造模前，按照上述參數(shù)設(shè)置對動物進行適應(yīng)

性訓練，待動物從旋轉(zhuǎn)棒上掉落的時間穩(wěn)定后，則訓練完成，即可開展造模。造模后，待動物恢復(fù)正常

運動，按照上述參數(shù)設(shè)置開展疲勞轉(zhuǎn)棒試驗，記錄動物從轉(zhuǎn)棒上掉落的時間，每天進行3次試驗，每次

間隔30分鐘。根據(jù)3次測定的平均掉落時間評價動物運動能力。

6.4腦梗死體積測定

采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色評價動物腦梗死體積。動物安樂死后取腦，并在腦模具

中將腦切成厚度相同的切片，隨后將切片置于TTC染液中，避光37℃烘箱孵育。待正常腦組織呈現(xiàn)出鮮

紅色，腦梗部位呈現(xiàn)出蒼白色后，將腦片置于4%多聚甲醛中固定后拍照，并將圖像導入醫(yī)學圖像處理軟

件ImageJ分別計算每張腦切片的面積，所有切片梗死灶所在半腦正常腦組織面積、對側(cè)正常半腦面積

相加后乘以切片厚度，得到梗死灶所在半腦正常腦組織體積及對側(cè)正常半腦體積，并利用公式計算腦梗

死體積比。

6.5組織病理診斷

動物麻醉后放血，分別用生理鹽水和多聚甲醛對腦組織進行灌注，分離腦組織，經(jīng)4%多聚甲醛固定，

梯度酒精脫水，二甲苯透明后進行石蠟包埋制成蠟塊，在組織切片機上將蠟塊切成厚度為4μm的切片，

切片應(yīng)包含整個梗死灶及周邊半暗帶組織，然后進行蘇木素-伊紅或尼氏染色并封片。由實驗動物病理

學專家進行雙盲閱片診斷，觀察梗死灶和半暗帶組織神經(jīng)元壞死及炎癥細胞活化情況。

7結(jié)果判定

7.1模型活體評價指標

1)腦血流。造模后，可見動物腦缺血區(qū)域血管內(nèi)血流信號明顯減弱，表明動物出現(xiàn)腦局部

缺血。

2)神經(jīng)損害嚴重程度評分。神經(jīng)損害嚴重程度評分越高說明損傷越嚴重，其中，1-6分為輕

度損傷，7-12分為中度損傷，13-18分為嚴重損傷。造模后，模型組動物神經(jīng)評分應(yīng)至

少達到輕度損傷或以上。

3)運動功能。造模后，模型組動物從旋轉(zhuǎn)棒上掉落時間平均值應(yīng)顯著低于造模前。

4)磁共振成像。必要時，造模小鼠通過磁共振掃描顯示典型的梗死特征。

7.2腦梗死體積

動物處死后，TTC染色顯示腦梗死部位明顯的蒼白色。可通過下列公式計算動物腦梗死體積百分比，

腦梗死體積比（%）=（對側(cè)正常半腦體積-梗死灶所在半腦正常腦組織體積）×100%÷對側(cè)正常半腦

體積。

7.3組織病理

動物處死后，病理診斷可見梗死灶內(nèi)大量神經(jīng)細胞壞死，神經(jīng)元核固縮、胞漿呈嗜酸性，在半暗帶

區(qū)可見星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞過度活化，膠質(zhì)細胞胞體增大和大量聚集以及炎癥細胞浸潤。

3

T/GDPMAAXXXX—2024

A

A

附錄A

（資料性）

神經(jīng)損害嚴重程度評分表

運動功能測試分數(shù)

從尾部提起動物出現(xiàn)下列表型時，每項計1分

前肢屈曲1

后肢屈曲1

頭部在30s內(nèi)上仰超過10°1

將動物放于平臺上根據(jù)下列表型選擇計分，最高計3分

正常爬行0

無法筆直爬行1

圍繞偏癱側(cè)打轉(zhuǎn)2

向偏癱側(cè)跌倒3

感覺測試出現(xiàn)下列單項表型時，每項計1分

淺感覺測試（視覺和觸覺）1

本體感覺測試（患肢置于桌子邊緣，動物無肢體收縮）1

橫桿平衡測試根據(jù)下列表型選擇計分，最高計6分

平衡0

抓住橫桿一側(cè)1

抱住橫桿，一肢體掉下2

抱住橫桿，兩