超高效液相色譜儀使用說明書超高效液相色譜儀（Ultra-HighPerformanceLiquidChromatograph，UHPLC）憑借高壓驅(qū)動、細(xì)粒徑色譜柱及高靈敏度檢測技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品的快速、高效分離分析，廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、食品檢測、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。本說明書將從儀器操作、維護(hù)及故障排查等方面，為您提供專業(yè)且實(shí)用的指導(dǎo)。一、儀器組成與工作原理（一）核心組件1.高壓輸液泵：提供穩(wěn)定且高壓的流動相輸送動力，確保流動相流速精準(zhǔn)可控，壓力范圍通?？蛇_(dá)1000bar以上，以適配細(xì)粒徑色譜柱的分離需求。2.自動進(jìn)樣器：實(shí)現(xiàn)樣品的精準(zhǔn)定量進(jìn)樣，進(jìn)樣體積精度高，且具備樣品溫控或避光功能，防止樣品降解。3.色譜柱：采用粒徑1.7-2.5μm的硅膠或聚合物基質(zhì)填料，柱長多為50-150mm，通過固定相和流動相的相互作用實(shí)現(xiàn)樣品組分分離。4.檢測器：常見類型有紫外-可見檢測器（UV-Vis）、二極管陣列檢測器（DAD）、質(zhì)譜檢測器（MS）等，可根據(jù)分析需求選擇，用于檢測分離后組分的信號響應(yīng)。5.柱溫箱：精準(zhǔn)控制色譜柱溫度，穩(wěn)定保留時間與分離效率，控溫范圍一般為室溫+5℃至80℃。6.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：通過工作站軟件采集、處理檢測信號，實(shí)現(xiàn)峰積分、定性定量分析及報(bào)告生成。（二）工作原理基于“相似相溶”原理，樣品隨流動相在高壓驅(qū)動下通過色譜柱，不同組分因與固定相的吸附、分配、離子交換等作用差異，在柱內(nèi)實(shí)現(xiàn)分離，隨后依次進(jìn)入檢測器產(chǎn)生信號，經(jīng)數(shù)據(jù)處理后得到色譜圖，據(jù)此對樣品進(jìn)行定性（保留時間）和定量（峰面積/峰高）分析。二、前期準(zhǔn)備工作（一）環(huán)境要求溫度：保持在15-30℃，避免溫度劇烈波動，可通過空調(diào)或恒溫設(shè)備調(diào)控。濕度：相對濕度≤80%，防止儀器電路受潮或色譜柱填料水解。電源：配備穩(wěn)壓電源，電壓波動≤±10%，接地良好，避免電磁干擾。（二）試劑與溶劑流動相：選用色譜純級別試劑（如水、甲醇、乙腈、緩沖鹽等），使用前需經(jīng)0.22μm（或更細(xì)）濾膜過濾，去除顆粒雜質(zhì)；若含緩沖鹽，需用超聲脫氣10-15分鐘，或使用在線脫氣機(jī)，避免流動相中的氣泡影響泵的穩(wěn)定性和檢測信號。樣品：固體樣品需用合適溶劑溶解，過0.22μm濾膜（與流動相互溶）；液體樣品可直接過濾或稀釋后過濾，確保無顆粒堵塞色譜柱。（三）色譜柱安裝根據(jù)分析物性質(zhì)選擇色譜柱（如反相柱C18、C8，正相柱硅膠柱等），確認(rèn)柱長、粒徑及pH適用范圍。安裝時，確保色譜柱兩端接頭清潔，按柱上箭頭方向（流動相流向）連接，用手?jǐn)Q緊后再用扳手輕擰1/4圈，避免過度擰緊損壞接頭或柱床。三、操作流程（一）開機(jī)前檢查確認(rèn)溶劑瓶內(nèi)流動相液位充足，廢液桶無溢出。檢查色譜柱連接是否牢固，流動相管路無彎折、漏液。確認(rèn)儀器電源、工作站軟件正常，無報(bào)錯提示。（二）開機(jī)與系統(tǒng)排氣1.依次開啟穩(wěn)壓電源、儀器各模塊（泵、進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測器），等待儀器自檢完成（約3-5分鐘）。2.泵排氣：在工作站軟件中設(shè)置泵流速為5mL/min（或根據(jù)泵說明書），打開泵的排氣閥（通常為旋鈕或按鍵），觀察排氣口流出的流動相無氣泡后，關(guān)閉排氣閥，將流速調(diào)至分析流速（如0.3-1.0mL/min）。（三）方法設(shè)置在工作站軟件中新建方法，設(shè)置以下參數(shù)：流動相比例：如甲醇-水（80:20），可通過梯度或等度模式設(shè)置。流速：根據(jù)色譜柱規(guī)格選擇，細(xì)粒徑柱常用0.3-1.0mL/min。柱溫：如30℃，需與柱溫箱設(shè)置一致。檢測波長：根據(jù)樣品最大吸收波長設(shè)置（如254nm），DAD檢測器可設(shè)置波長范圍掃描。進(jìn)樣量：如5μL，根據(jù)樣品濃度和檢測靈敏度調(diào)整。運(yùn)行時間：需覆蓋所有組分出峰時間，可通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。（四）色譜柱平衡設(shè)置初始流動相條件，讓流動相以分析流速通過色譜柱，觀察基線（檢測器信號），待基線平穩(wěn)（噪聲≤0.1mAU，漂移≤0.5mAU/h）后，方可進(jìn)樣。平衡時間通常為10-30分鐘，若流動相為梯度，需運(yùn)行1-2個梯度循環(huán)。（五）樣品分析1.樣品準(zhǔn)備：將過濾后的樣品置于進(jìn)樣小瓶，蓋緊瓶蓋，放入自動進(jìn)樣器樣品盤，設(shè)置樣品位。2.進(jìn)樣與采集：在軟件中選擇樣品位，點(diǎn)擊“進(jìn)樣”或“開始”，儀器自動完成進(jìn)樣、分離及信號采集，過程中可實(shí)時觀察色譜圖。（六）數(shù)據(jù)分析采集完成后，在軟件中對色譜峰進(jìn)行積分（調(diào)整積分參數(shù)如斜率、峰寬等，確保峰積分準(zhǔn)確），通過外標(biāo)法（標(biāo)準(zhǔn)曲線）或內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析，最后生成分析報(bào)告（包含保留時間、峰面積、含量等信息）。（七）關(guān)機(jī)與色譜柱維護(hù)1.沖洗色譜柱：若流動相含緩沖鹽，需先將泵流速調(diào)至1.0mL/min，用10-20倍柱體積的純水（或低有機(jī)相溶液，如5%甲醇-水）沖洗色譜柱，去除鹽殘留；再用10-20倍柱體積的純有機(jī)相（如甲醇或乙腈）沖洗，保存色譜柱（若長期不用，可將柱兩端用堵頭密封，置于原包裝盒）。2.關(guān)機(jī)：依次關(guān)閉檢測器、柱溫箱、進(jìn)樣器、泵，最后關(guān)閉穩(wěn)壓電源和工作站軟件。四、維護(hù)與保養(yǎng)（一）日常維護(hù)流動相：每次實(shí)驗(yàn)前檢查溶劑瓶，及時補(bǔ)充；每周更換一次（或根據(jù)使用頻率），防止溶劑變質(zhì)。進(jìn)樣針：每次進(jìn)樣后，用甲醇或流動相清洗進(jìn)樣針（自動進(jìn)樣器可設(shè)置洗針程序），防止樣品殘留。廢液桶：每周清理一次，避免廢液溢出腐蝕儀器。（二）定期維護(hù)色譜柱：每使用50-100次（或根據(jù)壓力變化），對色譜柱進(jìn)行沖洗維護(hù)；若柱壓升高或分離度下降，可嘗試反向沖洗（需確認(rèn)色譜柱支持反向沖洗）或更換柱芯（部分色譜柱可拆換）。泵密封墊：每使用1000-2000小時（或根據(jù)泵壓力波動），檢查并更換泵密封墊，防止漏液。檢測器：紫外燈每使用2000-3000小時（或根據(jù)能量提示）更換；流通池每季度用10%硝酸（或?qū)Ｓ们逑匆海┙萸逑矗コ廴疚?。五、常見故障排查（一）壓力異常壓力過高：可能因色譜柱堵塞（流動相過濾不良、樣品未過濾）、管路堵塞（如單向閥污染）、流動相黏度大（如低溫或高濃度緩沖鹽）。解決方法：用純水或低有機(jī)相反向沖洗色譜柱；超聲清洗單向閥；調(diào)整環(huán)境溫度或稀釋緩沖鹽。壓力過低：可能因漏液（接頭松動、密封墊損壞）、泵流速設(shè)置錯誤、流動相不足。解決方法：檢查管路接頭，重新擰緊或更換密封墊；確認(rèn)泵流速設(shè)置；補(bǔ)充流動相。（二）基線噪聲大原因：檢測器燈能量低（更換燈）、流通池污染（清洗流通池）、電源干擾（檢查接地或遠(yuǎn)離干擾源）、流動相含氣泡（重新脫氣）。解決：按上述原因逐一排查，更換或清洗相應(yīng)部件，確保流動相脫氣完全。（三）峰形異常峰拖尾/前伸：可能因色譜柱柱效下降（沖洗或更換色譜柱）、進(jìn)樣量過大（減少進(jìn)樣量）、流動相pH不匹配（調(diào)整流動相pH）。峰分裂：可能因進(jìn)樣體積過大（減少進(jìn)樣量）、色譜柱污染（沖洗色譜柱）、管路死體積大（更換短管路或接