濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸提取技術(shù)考核一、單選題（每題2分，共20題）1.濟(jì)南市人民醫(yī)院使用的核酸提取儀型號(hào)為（）。A.ABI7500B.EppendorfNGSMagstarC.ThermoFisherQuantStudio5D.RocheCobas48002.樣本核酸提取前，需要用哪種試劑進(jìn)行滅活處理？（）A.70%乙醇B.氯仿-異戊醇混合液C.蛋白酶K溶液D.DEPC水3.以下哪種方法不屬于濟(jì)南市人民醫(yī)院常用的核酸提取方法？（）A.磁珠法B.試劑盒法C.苂光定量法D.離心柱法4.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)核酸提取效率的要求是（）。A.≥80%B.≥90%C.≥70%D.≥85%5.核酸提取過(guò)程中，哪個(gè)步驟最容易導(dǎo)致樣本污染？（）A.樣本裂解B.磁珠洗滌C.液體轉(zhuǎn)移D.加樣操作6.濟(jì)南市人民醫(yī)院使用的核酸提取試劑盒主要成分不包括（）。A.蛋白酶KB.超純水C.氯仿D.甘油7.核酸提取后，如何判斷提取物質(zhì)量？（）A.OD260/280比值B.電泳條帶C.紫外燈觀察D.以上都是8.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取純度要求是（）。A.OD260/280比值在1.8-2.0之間B.OD260/280比值在1.5-1.8之間C.OD260/280比值在2.0-2.2之間D.OD260/280比值在1.0-1.5之間9.核酸提取過(guò)程中，哪個(gè)環(huán)節(jié)需要嚴(yán)格避光操作？（）A.樣本裂解B.磁珠洗滌C.試劑添加D.液體轉(zhuǎn)移10.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取回收率要求是（）。A.≥70%B.≥80%C.≥90%D.≥85%二、多選題（每題2分，共10題）1.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的核酸提取試劑包括（）。A.蛋白酶KB.Tris-HCl緩沖液C.氯仿-異戊醇混合液D.乙醇2.核酸提取過(guò)程中，需要注意哪些事項(xiàng)？（）A.樣本充分裂解B.避免交叉污染C.嚴(yán)格控制溫度D.操作規(guī)范3.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取設(shè)備包括（）。A.磁力攪拌器B.高速離心機(jī)C.核酸提取儀D.移液器4.核酸提取后，如何判斷提取物純度？（）A.OD260/280比值B.電泳條帶C.紫外燈觀察D.核酸濃度測(cè)定5.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的核酸提取方法包括（）。A.磁珠法B.試劑盒法C.離心柱法D.苂光定量法6.核酸提取過(guò)程中，哪個(gè)環(huán)節(jié)容易導(dǎo)致樣本損失？（）A.樣本裂解B.磁珠洗滌C.液體轉(zhuǎn)移D.加樣操作7.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)核酸提取效率的要求包括（）。A.回收率B.純度C.穩(wěn)定性D.可重復(fù)性8.核酸提取過(guò)程中，哪個(gè)步驟需要嚴(yán)格控制溫度？（）A.樣本裂解B.磁珠洗滌C.試劑添加D.液體轉(zhuǎn)移9.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的核酸提取試劑盒品牌包括（）。A.QiagenB.ThermoFisherC.RocheD.ABSciex10.核酸提取后，如何判斷提取物完整性？（）A.OD260/280比值B.電泳條帶C.紫外燈觀察D.核酸濃度測(cè)定三、判斷題（每題1分，共10題）1.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取過(guò)程需要嚴(yán)格無(wú)菌操作。（）2.核酸提取過(guò)程中，樣本裂解時(shí)間一般為30-60分鐘。（）3.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取試劑盒均為國(guó)產(chǎn)。（）4.核酸提取過(guò)程中，磁珠洗滌次數(shù)一般為3-5次。（）5.核酸提取后，提取物需要立即進(jìn)行PCR檢測(cè)。（）6.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取設(shè)備均需定期校準(zhǔn)。（）7.核酸提取過(guò)程中，加樣操作需要使用無(wú)菌吸頭。（）8.核酸提取后，提取物需要儲(chǔ)存在-20℃冰箱中。（）9.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取過(guò)程需要避光操作。（）10.核酸提取過(guò)程中，樣本濃度越高，提取效率越高。（）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共5題）1.簡(jiǎn)述濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室核酸提取的流程。2.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的核酸提取方法有哪些？3.核酸提取過(guò)程中，如何避免交叉污染？4.核酸提取后，如何判斷提取物質(zhì)量？5.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)核酸提取有哪些質(zhì)量控制措施？五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合濟(jì)南市人民醫(yī)院的實(shí)際情況，論述核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室核酸提取的重要性。2.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室在核酸提取過(guò)程中可能遇到的問(wèn)題及解決方法。答案及解析一、單選題1.B解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院使用的核酸提取儀型號(hào)為EppendorfNGSMagstar，適用于高通量核酸檢測(cè)。2.C解析：蛋白酶K溶液可以滅活樣本中的蛋白酶，防止核酸降解。3.C解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院常用的核酸提取方法包括磁珠法和試劑盒法，離心柱法較少使用。4.B解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)核酸提取效率的要求是≥90%，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。5.C解析：液體轉(zhuǎn)移過(guò)程中容易導(dǎo)致樣本污染，需要嚴(yán)格操作。6.C解析：核酸提取試劑盒主要成分包括蛋白酶K、Tris-HCl緩沖液等，氯仿不屬于主要成分。7.D解析：核酸提取物質(zhì)量可以通過(guò)OD260/280比值、電泳條帶和紫外燈觀察等方法判斷。8.A解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取純度要求是OD260/280比值在1.8-2.0之間。9.C解析：試劑添加過(guò)程中需要嚴(yán)格避光操作，防止試劑降解。10.B解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取回收率要求是≥80%。二、多選題1.A,B,C,D解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的核酸提取試劑包括蛋白酶K、Tris-HCl緩沖液、氯仿-異戊醇混合液和乙醇。2.A,B,C,D解析：核酸提取過(guò)程中需要注意樣本充分裂解、避免交叉污染、嚴(yán)格控制溫度和操作規(guī)范。3.A,B,C,D解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取設(shè)備包括磁力攪拌器、高速離心機(jī)、核酸提取儀和移液器。4.A,B,C,D解析：核酸提取后，可以通過(guò)OD260/280比值、電泳條帶、紫外燈觀察和核酸濃度測(cè)定等方法判斷提取物純度。5.A,B,C解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的核酸提取方法包括磁珠法、試劑盒法和離心柱法，熒光定量法不屬于提取方法。6.B,C,D解析：磁珠洗滌、液體轉(zhuǎn)移和加樣操作容易導(dǎo)致樣本損失，需要嚴(yán)格操作。7.A,B,C,D解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)核酸提取效率的要求包括回收率、純度、穩(wěn)定性和可重復(fù)性。8.A,B,C,D解析：樣本裂解、磁珠洗滌、試劑添加和液體轉(zhuǎn)移過(guò)程中需要嚴(yán)格控制溫度。9.A,B,C解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的核酸提取試劑盒品牌包括Qiagen、ThermoFisher和Roche，ABSciex不屬于常用品牌。10.B,C,D解析：核酸提取后，可以通過(guò)電泳條帶、紫外燈觀察和核酸濃度測(cè)定等方法判斷提取物完整性。三、判斷題1.正確解析：核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取過(guò)程需要嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止污染。2.正確解析：樣本裂解時(shí)間一般為30-60分鐘，確保樣本充分裂解。3.錯(cuò)誤解析：濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取試劑盒包括國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口品牌。4.正確解析：磁珠洗滌次數(shù)一般為3-5次，確保洗滌干凈。5.錯(cuò)誤解析：核酸提取后，提取物需要保存并進(jìn)行純化和濃縮，再進(jìn)行PCR檢測(cè)。6.正確解析：核酸提取設(shè)備需要定期校準(zhǔn)，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。7.正確解析：加樣操作需要使用無(wú)菌吸頭，防止污染。8.正確解析：核酸提取物需要儲(chǔ)存在-20℃冰箱中，防止降解。9.正確解析：核酸提取過(guò)程需要避光操作，防止試劑降解。10.錯(cuò)誤解析：樣本濃度過(guò)高可能導(dǎo)致提取效率下降，需要適當(dāng)稀釋。四、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室核酸提取的流程。答案：（1）樣本收集：采集臨床樣本，如咽拭子、鼻拭子等。（2）樣本裂解：加入裂解緩沖液，通過(guò)加熱或酶處理裂解樣本，釋放核酸。（3）核酸純化：使用磁珠法或試劑盒法純化核酸，去除雜質(zhì)。（4）核酸洗脫：洗滌磁珠或離心柱，洗脫純凈的核酸。（5）核酸檢測(cè)：使用核酸濃度測(cè)定儀或PCR儀檢測(cè)核酸濃度和純度。2.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的核酸提取方法有哪些？答案：（1）磁珠法：通過(guò)磁珠吸附核酸，洗滌后洗脫純凈的核酸。（2）試劑盒法：使用商業(yè)試劑盒進(jìn)行核酸提取，操作簡(jiǎn)便。（3）離心柱法：通過(guò)離心柱純化核酸，適用于小批量樣本。3.核酸提取過(guò)程中，如何避免交叉污染？答案：（1）使用一次性吸頭和離心管，避免重復(fù)使用。（2）操作臺(tái)面和設(shè)備定期消毒，防止污染。（3）分離操作區(qū)域，避免不同樣本之間交叉接觸。4.核酸提取后，如何判斷提取物質(zhì)量？答案：（1）OD260/280比值：判斷核酸純度，比值在1.8-2.0之間為純度良好。（2）電泳條帶：通過(guò)電泳觀察核酸條帶，判斷提取物完整性。（3）紫外燈觀察：通過(guò)紫外燈觀察核酸熒光，判斷提取物純度。5.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)核酸提取有哪些質(zhì)量控制措施？答案：（1）使用陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，確保提取過(guò)程無(wú)污染。（2）定期進(jìn)行提取效率檢測(cè)，確保提取率≥80%。（3）使用核酸濃度測(cè)定儀檢測(cè)提取物濃度，確保濃度符合要求。五、論述題1.結(jié)合濟(jì)南市人民醫(yī)院的實(shí)際情況，論述核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室核酸提取的重要性。答案：核酸提取是核酸檢測(cè)的關(guān)鍵步驟，直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。濟(jì)南市人民醫(yī)院作為濟(jì)南市重要的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，承擔(dān)著大量的核酸檢測(cè)任務(wù)，因此核酸提取的效率和質(zhì)量至關(guān)重要。高質(zhì)量的核酸提取可以確保PCR檢測(cè)的靈敏度和特異性，從而提高診斷準(zhǔn)確率。此外，核酸提取過(guò)程的規(guī)范性和安全性可以避免交叉污染，保障檢測(cè)結(jié)果的可靠性。因此，濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室需要嚴(yán)格控制核酸提取過(guò)程，確保提取效率和質(zhì)量，為臨床診斷提供可靠依據(jù)。2.濟(jì)南市人民醫(yī)院核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室在核酸提取過(guò)程中可能遇到的問(wèn)題及解決方法。答案：（1）樣本裂解不充分：解決方法：延長(zhǎng)裂解時(shí)間或