三明市中醫(yī)院酶聯(lián)免疫技術(shù)專項(xiàng)考核一、單選題（每題2分，共30題）請(qǐng)選擇最符合題意的選項(xiàng)。1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的基本原理是利用酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)樣本結(jié)合后，通過底物顯色來(lái)檢測(cè)目標(biāo)物質(zhì)。以下哪項(xiàng)描述不正確？A.酶標(biāo)記物通常使用辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）B.顯色反應(yīng)的強(qiáng)度與樣本中目標(biāo)物質(zhì)的濃度成正比C.ELISA操作過程中需嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間D.酶標(biāo)記物可直接與抗原結(jié)合，無(wú)需抗體介導(dǎo)2.在ELISA檢測(cè)中，以下哪種方法屬于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合模式？A.雙抗體夾心法B.間接法C.雙位點(diǎn)夾心法D.競(jìng)爭(zhēng)抑制法3.以下哪種緩沖液常用于ELISA的洗滌步驟？A.pH9.6的碳酸鹽緩沖液B.pH7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）C.pH3.0的甘氨酸緩沖液D.pH11.0的Tris緩沖液4.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)板的封板目的是什么？A.增加樣本與固相的結(jié)合面積B.阻止非特異性結(jié)合C.提高酶的活性D.增強(qiáng)顯色效果5.以下哪種試劑用于終止ELISA的顯色反應(yīng)？A.過氧化氫（H?O?）B.氫氧化鈉（NaOH）C.氨基酸溶液D.蛋白質(zhì)溶液6.在ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪種情況會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果？A.封板不充分B.抗體稀釋度過高C.底物濃度過低D.洗滌不徹底7.ELISA檢測(cè)中，常用的酶底物包括哪些？A.TMB（3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺）B.ABTS（2,2′-連氮-二（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸））C.OPD（鄰苯二胺）D.以上都是8.以下哪種方法可用于提高ELISA檢測(cè)的靈敏度？A.增加抗體濃度B.降低樣本稀釋倍數(shù)C.使用更長(zhǎng)的孵育時(shí)間D.以上都是9.ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪種情況會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果？A.抗體與抗原結(jié)合不充分B.底物反應(yīng)時(shí)間過短C.洗滌次數(shù)過多D.以上都是10.以下哪種試劑用于ELISA的洗滌？A.PBS-T（含吐溫20的磷酸鹽緩沖液）B.Tris-HCl緩沖液C.甘氨酸溶液D.尿素溶液11.ELISA實(shí)驗(yàn)中，抗體和抗原的結(jié)合親和力受哪些因素影響？A.溫度B.pH值C.抗體濃度D.以上都是12.在ELISA檢測(cè)中，以下哪種方法屬于非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合模式？A.競(jìng)爭(zhēng)抑制法B.雙抗體夾心法C.間接法D.捕獲法13.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)板的孔徑通常為多少？A.6.5mm×8.0mmB.8.0mm×8.0mmC.10.0mm×10.0mmD.12.0mm×12.0mm14.以下哪種試劑用于配制ELISA的封閉液？A.牛血清白蛋白（BSA）B.脫脂奶粉C.蛋清溶液D.以上都是15.ELISA實(shí)驗(yàn)中，以下哪種情況會(huì)導(dǎo)致結(jié)果重復(fù)性差？A.樣本處理不均一B.加樣誤差C.溫度波動(dòng)D.以上都是二、多選題（每題3分，共10題）請(qǐng)選擇所有符合題意的選項(xiàng)。1.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的洗滌液包括哪些？A.PBS-TB.乙醇溶液C.Tris-HCl緩沖液D.甘氨酸溶液2.以下哪些因素會(huì)影響ELISA檢測(cè)的特異性？A.抗體親和力B.樣本純度C.封板充分性D.底物濃度3.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的抗體類型包括哪些？A.單克隆抗體B.多克隆抗體C.膠體金標(biāo)記抗體D.酶標(biāo)記抗體4.以下哪些方法可用于提高ELISA檢測(cè)的靈敏度？A.增加抗體濃度B.使用更長(zhǎng)的孵育時(shí)間C.優(yōu)化底物濃度D.降低樣本稀釋倍數(shù)5.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的封板液包括哪些？A.脫脂奶粉B.牛血清白蛋白（BSA）C.封閉劑溶液D.蛋清溶液6.以下哪些情況會(huì)導(dǎo)致ELISA結(jié)果重復(fù)性差？A.加樣誤差B.溫度波動(dòng)C.封板不均勻D.底物反應(yīng)時(shí)間不一致7.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的酶標(biāo)板材質(zhì)包括哪些？A.透明聚苯乙烯B.金屬材質(zhì)C.玻璃材質(zhì)D.聚丙烯材質(zhì)8.以下哪些因素會(huì)影響ELISA檢測(cè)的線性范圍？A.抗體濃度B.樣本稀釋倍數(shù)C.底物濃度D.孵育時(shí)間9.ELISA實(shí)驗(yàn)中，常用的終止液包括哪些？A.氫氧化鈉溶液B.硫酸溶液C.鹽酸溶液D.甲醇溶液10.以下哪些方法可用于減少ELISA的非特異性結(jié)合？A.封板充分B.使用封閉液C.優(yōu)化抗體濃度D.降低樣本濃度三、判斷題（每題2分，共20題）請(qǐng)判斷以下說法的正誤。1.ELISA檢測(cè)中，酶標(biāo)記物只能使用辣根過氧化物酶（HRP）。2.ELISA實(shí)驗(yàn)中，洗滌次數(shù)越多越好。3.ELISA檢測(cè)的線性范圍與抗體濃度成正比。4.封板不充分會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加。5.ELISA實(shí)驗(yàn)中，底物反應(yīng)時(shí)間越長(zhǎng)越好。6.競(jìng)爭(zhēng)性ELISA適用于檢測(cè)小分子物質(zhì)。7.ELISA實(shí)驗(yàn)中，pH值對(duì)酶活性影響不大。8.ELISA檢測(cè)的靈敏度受樣本純度影響。9.ELISA實(shí)驗(yàn)中，抗體稀釋度越高越好。10.ELISA檢測(cè)的特異性與抗體親和力無(wú)關(guān)。11.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)板需在室溫避光保存。12.ELISA檢測(cè)的線性范圍受底物濃度影響。13.ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉液只能使用脫脂奶粉。14.ELISA檢測(cè)的重復(fù)性受加樣誤差影響。15.ELISA實(shí)驗(yàn)中，終止液只能使用氫氧化鈉溶液。16.ELISA檢測(cè)的靈敏度受抗體類型影響。17.ELISA實(shí)驗(yàn)中，洗滌液只能使用PBS-T。18.ELISA檢測(cè)的特異性受樣本處理影響。19.ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)板需在4℃保存。20.ELISA檢測(cè)的線性范圍與樣本濃度無(wú)關(guān)。四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）請(qǐng)簡(jiǎn)要回答以下問題。1.簡(jiǎn)述ELISA雙抗體夾心法的原理。2.簡(jiǎn)述ELISA實(shí)驗(yàn)中封閉液的作用。3.簡(jiǎn)述ELISA實(shí)驗(yàn)中洗滌步驟的重要性。4.簡(jiǎn)述ELISA實(shí)驗(yàn)中提高檢測(cè)靈敏度的方法。五、論述題（每題10分，共2題）請(qǐng)?jiān)敿?xì)回答以下問題。1.試述ELISA實(shí)驗(yàn)中常見的誤差來(lái)源及改進(jìn)措施。2.試述ELISA技術(shù)在三明市中醫(yī)院臨床檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。答案與解析一、單選題答案與解析1.D（酶標(biāo)記物通常需要抗體介導(dǎo)結(jié)合抗原）2.D（競(jìng)爭(zhēng)抑制法屬于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合模式）3.B（PBS是ELISA常用洗滌液）4.B（封板目的是阻止非特異性結(jié)合）5.B（NaOH用于終止TMB等氧化型底物反應(yīng)）6.D（洗滌不徹底會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加）7.D（以上都是常用酶底物）8.D（以上都是提高靈敏度的方法）9.D（以上都是導(dǎo)致假陰性的原因）10.A（PBS-T是常用洗滌液）11.D（以上都是影響因素）12.B（雙抗體夾心法屬于非競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合模式）13.A（6.5mm×8.0mm是標(biāo)準(zhǔn)孔徑）14.D（以上都是常用封閉液）15.D（以上都是導(dǎo)致重復(fù)性差的原因）二、多選題答案與解析1.A,C（PBS-T和Tris-HCl緩沖液是常用洗滌液）2.A,B,D（抗體親和力、樣本純度、底物濃度影響特異性）3.A,B,D（單克隆抗體、多克隆抗體、酶標(biāo)記抗體是常用類型）4.A,B,D（增加抗體濃度、延長(zhǎng)孵育時(shí)間、降低稀釋倍數(shù)可提高靈敏度）5.A,B,D（脫脂奶粉、BSA、蛋清溶液是常用封閉液）6.A,B,C,D（加樣誤差、溫度波動(dòng)、封板不均、反應(yīng)時(shí)間不一致影響重復(fù)性）7.A,C（透明聚苯乙烯和玻璃材質(zhì)是常用材質(zhì)）8.A,B,C,D（抗體濃度、稀釋倍數(shù)、底物濃度、孵育時(shí)間影響線性范圍）9.A,B,C（NaOH、硫酸、鹽酸是常用終止液）10.A,B,C（封板充分、使用封閉液、優(yōu)化抗體濃度可減少非特異性結(jié)合）三、判斷題答案與解析1.錯(cuò)（酶標(biāo)記物也可使用堿性磷酸酶AP）2.錯(cuò)（洗滌次數(shù)過多會(huì)降低信號(hào)）3.對(duì)（抗體濃度越高，線性范圍越寬）4.對(duì)（封板不充分會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合）5.錯(cuò)（過長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間會(huì)導(dǎo)致信號(hào)飽和）6.對(duì)（競(jìng)爭(zhēng)性ELISA適用于小分子檢測(cè)）7.錯(cuò)（pH值對(duì)酶活性影響顯著）8.對(duì)（樣本純度越高，特異性越好）9.錯(cuò)（抗體稀釋度過高會(huì)降低信號(hào)）10.錯(cuò)（抗體親和力越高，特異性越好）11.對(duì)（酶標(biāo)板需避光保存）12.對(duì)（底物濃度影響線性范圍）13.錯(cuò)（封閉液也可使用BSA等）14.對(duì)（加樣誤差影響重復(fù)性）15.錯(cuò)（終止液也可使用硫酸等）16.對(duì)（抗體類型影響靈敏度）17.錯(cuò)（洗滌液也可使用其他緩沖液）18.對(duì)（樣本處理影響特異性）19.錯(cuò)（酶標(biāo)板需室溫保存）20.錯(cuò)（線性范圍與樣本濃度相關(guān)）四、簡(jiǎn)答題答案與解析1.雙抗體夾心法原理：利用已知抗體與抗原結(jié)合，再通過酶標(biāo)記抗體形成“夾心”結(jié)構(gòu)，最后通過底物顯色檢測(cè)。該方法特異性高，適用于檢測(cè)完整抗原。2.封閉液作用：封閉未結(jié)合的孔表面，防止非特異性結(jié)合，提高檢測(cè)特異性。常用封閉液包括脫脂奶粉、BSA等。3.洗滌步驟重要性：去除未結(jié)合的抗體或抗原，減少非特異性結(jié)合，提高檢測(cè)特異性。洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性。4.提高檢測(cè)靈敏度方法：增加抗體濃度、延長(zhǎng)孵育時(shí)間、優(yōu)化底物濃度、降低樣本稀釋倍數(shù)、使用高親和力抗體等。五、論述題答案與解析1.ELISA實(shí)驗(yàn)誤差來(lái)源及改進(jìn)措施：-誤差來(lái)源：抗體/抗原質(zhì)量、封板不充分、洗滌不徹底、加樣誤差、溫度波動(dòng)、底