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文件編號：V—***文件類別：驗證方案

文件名稱20A高效液相色譜儀驗證方案

起草人審核人批準(zhǔn)人

起草日期年月曰審核日期年月曰批準(zhǔn)日期年月日

頒發(fā)部門GMP辦公室頒發(fā)日期年月曰生效日期年月日

分發(fā)部門驗證小組、QA/QC版本號1

1.驗證范圍

本方案適用于20A高效液相色譜儀的驗證。

2.驗證依據(jù)

JJG705-2002《液相色譜儀檢定規(guī)程》國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

3.概述：

液相色譜儀（以下簡稱儀器）是由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、色譜柱（柱溫箱）、檢測器和數(shù)據(jù)處

理裝置等部分組成的分析儀器，圖1是其組成的方框圖。液相色譜儀利用式樣中各組分在色譜柱

內(nèi)固定相和流動相間分配或吸附特性的差異，由流動相將試樣帶入色譜柱中進(jìn)行分離，經(jīng)檢測

器檢測，依據(jù)組分的保留時間和響應(yīng)值（峰面積或峰高）進(jìn)行定性和定量分析。

圖1液相色譜儀組成方框圖

基本情況：

儀器編號：QC-J-***

儀器名稱：高效液相色譜儀

型號：20A

生產(chǎn)廠家：***************

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文件編號：V—***文件類別：驗證方案

供貨廠家:*****木********有限公司

使用部門：******

聯(lián)系人：******明^系電話********木木***木*求

傳真：****************郵政編碼：*********

4.驗證目的

為確認(rèn)該儀器能夠正常運(yùn)行，儀器各項性能指標(biāo)符合設(shè)計要求，特制訂本驗證方案，對該

儀器進(jìn)行驗證。

5.職責(zé)

5.1.驗證小組

5.I.I.負(fù)責(zé)驗證方案的審批。

5.1.2.負(fù)責(zé)驗證的協(xié)調(diào)工作，以保證本驗證方案規(guī)定項目的順利實(shí)施。

5.1.3.負(fù)責(zé)驗證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核。

5.1.4.負(fù)責(zé)驗證報告的審批。

5.1.5.負(fù)責(zé)發(fā)放驗證證書。

5.1.6.負(fù)責(zé)高效液相色譜儀驗證周期的確認(rèn)。

5.2.QA/QC

5.2.1.負(fù)責(zé)儀器的安裝、調(diào)試，并做好相應(yīng)的記錄。

5.2.2.負(fù)責(zé)建立儀器檔案。

5.2.3.負(fù)責(zé)儀器的校正。

5.2.4.負(fù)責(zé)擬定高效液相色譜儀驗證周期。

5.2.5.負(fù)責(zé)收集各項驗證、試驗記錄，報驗證小組。

5.2.6.負(fù)責(zé)起草高效液相色譜儀操作、維護(hù)保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

5.2.7.負(fù)責(zé)高效液相色譜儀的維護(hù)保養(yǎng)。

5.2.8.負(fù)責(zé)起草驗證方案，負(fù)責(zé)小組協(xié)調(diào)。

5.2.9.負(fù)責(zé)組織驗證的實(shí)施。

5.2.10.負(fù)責(zé)完成驗證報告。

6.驗證合格標(biāo)準(zhǔn)（如下表）

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驗證項目合格標(biāo)準(zhǔn)

泵的耐壓檢測保持5min無泄漏

0.5ml/LSsW5%

采流量設(shè)定值誤差1.0ml/LSs<3%

2.0ml/LSsW2%

0.5ml/LSRW3%

泵流量穩(wěn)定性誤差1.Oml/LSRW2%

2.0ml/LSRW2%

基線噪聲WO.5mAli

檢測器基線漂移W5mAu/h

最小檢測濃度WO.lug/ml

定性重復(fù)性RSDWI.5%

整機(jī)性能

定量重復(fù)性RSDW3.0%

7.驗證條件的確認(rèn)

7.1.驗證用儀器儀表已校驗且在效期內(nèi)。

7.2.驗證文件20A高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作及維護(hù)規(guī)程已具備。

7.3.驗證相關(guān)人員已培訓(xùn)。

驗證開始前先查閱培訓(xùn)記錄是否齊全，確認(rèn)上崗操作人員已進(jìn)行了各種基本技術(shù)的培訓(xùn)和相

關(guān)管理規(guī)程的培訓(xùn)，能夠勝任并能完成相關(guān)的工作。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：操作人員經(jīng)培訓(xùn)合格上崗操作。

7.4.驗證用物質(zhì)

7.4.1.驗證用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：O.lug/ml的茶/甲醉溶液。

7.4.2.驗證用試劑：HPLC用甲醇。

7.5.環(huán)境條件

7.5.1.溫度：15?30℃,驗證過程中溫度變化

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7.5.2.相對濕度20?85%。

8.驗證實(shí)施內(nèi)容

8.1.泵的耐壓檢測

將儀器各部分連接好，以ID0%甲醇為流動相，流量為Iml/min,按照儀器操作規(guī)程啟動儀器，

壓力平穩(wěn)后保持lOmin,用濾紙檢查各管路接口處應(yīng)無濕跡。卸下色譜柱，堵住泵出口端（壓力

傳感器以下），使壓力達(dá)到最大允許值的90%,保持5分鐘無泄漏。

8.2.泵流量設(shè)定值誤差Ss和泵流量穩(wěn)定性誤差SR：

8.2.1.驗證步驟

按驗證的要求設(shè)定流量，啟動儀器，壓力穩(wěn)定后，在流動相出口處用事先清洗稱重過的容

量瓶收集流動相，同時用秒表計時，收集規(guī)定時間流出的流動相（收集5分鐘），在天平上稱重,

按式（1）、式（2）計算Ss和SR。

5$=停-6）/仆00%⑴

式中：Fm------F?,=（%-叱）/（夕?，），流量實(shí)測值，mL/min；

W2-----容量瓶+流動相的質(zhì)量，g;

W）-----容量瓶的質(zhì)量，g;

P——試驗溫度下流動相的密度，g/mL；

t-----收集流動相的時間，min

Fm---同一組測量的算術(shù)平均值，mL/min:

Fs---流量設(shè)定值，mL/min；

居iux-----同一組測量中流量最大值，mL/min；

產(chǎn)min-----同一組測量中流量最小值，mL.mino

8.3.檢測器的基線噪聲與基線漂移：

8.3.1.驗證步驟

選用C18色譜柱，以10D%甲醇為流動相，流量為1.0mL/min,紫外檢測器的波長選在254nm,

檢測靈敏度調(diào)到最靈敏擋。開機(jī)預(yù)熱，待儀器穩(wěn)定后記錄基線30min,由檢測器的衰減倍數(shù)和

測得的基線峰-峰高對應(yīng)的坐標(biāo)，計算基線噪聲，用檢測器自身的物理量（AU）作單位表示。

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Nd=KB

N”一一檢測器的基線噪聲：K一一衰減倍數(shù)：B一一測得的峰高對應(yīng)的標(biāo)度，AU。

基線漂移用1h內(nèi)基線偏離原點(diǎn)的值(AU/b)表示。8.4.最小檢測濃度的檢定：

8.4.I.驗證步驟

選用C18色譜柱，以10倏甲醇為流動相，流量為1.0mL/min,紫外檢測器的波長選在254nm,

按照儀器操作規(guī)程吸取20ul的lXl(Tg/ml的蔡/甲醇溶液，進(jìn)入高效液相色譜儀，記錄色譜圖.

8.4.2.結(jié)果計算：

色譜峰高和基線噪聲峰峰高，按下式計算最小檢出濃度G..

LHx20

式中：CL---最小檢測濃度，g/ml；

Nd-----基線噪聲峰-峰高，mm；

C一一標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，g/ml；

H一一標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰高，mm；

V-----進(jìn)樣體積，ul;

8.5.定性與定量測量重復(fù)性：

8.5.I