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文檔簡介

54 西藏自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布I II 1 1 1 2 2 3 4 5 6 9 10本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的1NY/T3235羊傳染性膿皰診斷英文全稱PolymeraseChainReaction，縮寫為PCR，由引物選擇性體外擴增DN2不發(fā)光；當DNA通過引物合成時，探針被折斷，釋放出發(fā)光基團和淬滅基團，兩個距離較遠，發(fā)光基團3乳房型表現(xiàn)為乳頭和乳房皮膚出現(xiàn)膿皰，后形成制成懸液，加青霉素、鏈霉素各2000IU/mL，置4℃用無菌注射器抽取丘疹水泡液，置于含2倍體積無菌生理鹽水中的滅菌離心管中，加青霉素、鏈霉微量移液器20μL～200μL、200μL～1000細胞培養(yǎng)瓶、0.22μm濾器、15ml離心管、濾紙、碳支持膜銅網(wǎng)、2%磷鎢酸、無菌移液器槍頭20μL~待6.4中的細胞長成良好的單層后，倒掉細胞培養(yǎng)液。將6.1.1或6.1.2中病料處理4將出現(xiàn)病變的細胞與培養(yǎng)液一起反復(fù)凍融3次，吸出，置于15ml離心管中，3000rpm離心30min，折光性增強、團聚、脫落等細胞病變，于透射電子顯微鏡下觀察到橢圓形病毒粒子，長250nm～280取6.1.1或6.1.2的痂皮或水泡液處理上清液，使用病毒DNA提取試劑盒提取核酸，操作步驟按生物安全柜、高速冷凍離心機、PCR儀、電泳儀、凝膠成像儀、旋渦混合振蕩器波爐、微量移液器2μL～20μL、0.5μL～1——上游引物：5'-GAGGGCGTCGACATCACG-3'；——下游引物：5'-CCGGCACCATCGAGAGCA-3'。按25μL體系配制。取7.1中樣品DNA1μL、PCRMasterMix12制備1.5%電泳瓊脂糖凝膠，取5μl~8μl樣品PCR擴增產(chǎn)物加入上樣孔，同時加入陽性和陰性對照以5陽性對照、樣品PCR擴增產(chǎn)物與預(yù)期片段大小一致，在505b超凈工作臺、高速冷凍離心機、熒光定量PCR儀、旋渦混合振蕩器、電腦、冰箱、微量移液器2雙蒸水、2×qPCRProbeMast——上游引物：5'-GGGGCGGCGTATTCTTCT-3'；——下游引物：5'-GCTGTTCTTGGCGTTCTCG-3'；——TaqMan探針（FAM）5'-ATCGTGCGGTAGAA各0.4μl、TaqMan探針0.2μl、7.1中樣品DNA0.5μl、2×qPCRProbeMasterMix10μl。

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