ICS65.020.20

CCSB30

DB36

江西省地方標準

DB36/T1869—2023

香菇菌種生產技術規(guī)程

TechnicalregulationforspawnproductionofLentinulaedodes

2023-11-08發(fā)布2024-05-01實施

江西省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB36/T1869—2023

目??次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術語和定義.........................................................................1

4菌種生產要求.......................................................................2

5母種生產...........................................................................3

6原種、栽培種生產...................................................................5

7貯存與菌種生產檔案.................................................................9

I

DB36/T1869—2023

前??言

本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。

本文件由江西省農業(yè)農村廳提出并歸口。

本文件起草單位：江西省農業(yè)科學院農業(yè)應用微生物研究所。

本文件主要起草人：王赟萍、張誠、馬吉平、鐘國祥、王素貞、肖銀潤、熊小文，李偉紅。

II

DB36/T1869—2023

香菇菌種生產技術規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了香菇（Lentinulaedodes）菌種的術語和定義、菌種生產要求、母種生產、原種與栽

培種生產、貯存與菌種生產檔案等內容。

本文件適用于江西省區(qū)域香菇母種、原種和栽培種菌種生產要求。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB9688食品包裝用聚丙烯成型品衛(wèi)生標準

GB19170香菇菌種

GH/T1013香菇

NY/T528食用菌菌種生產技術規(guī)程

NY/T1284食用菌菌種中雜菌及害蟲的檢驗

NY/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范

NY/T1742食用菌菌種通用技術要求

NY/T1935食用菌栽培基質質量安全要求

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

香菇Lentinulaedodes

香菇又名香孽、香信、香苑、冬菇、椎茸(日本)。屬擔子菌門（Basidiomycota）、傘菌亞門

（Agaricomycotina）、傘菌綱（Agaricomycetes）、傘菌目（Aganicales）、光茸菌科(Omphalotaceae)、

小香菇屬（Lentinula）的一類木腐菌，子實體肉質或近肉質。

[來源：GH/T1013-2015，3.1，有改動]

3.2

菌種spawn

通過生產試驗具有特異性、均一性和穩(wěn)定性，且豐產性好、抗逆性強，生長在適宜基質上的培養(yǎng)物，

包括母種、原種和栽培種。

3.3

母種stockculture

1

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經分離、雜交、誘變等各種方法選育得到的具有結實性的香菇菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，以

玻璃試管為培養(yǎng)容器和使用單位，也稱為一級種、試管種。

[來源：GB19170-2003，3.1，有改動]

3.4

原種motherspawn

由母種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶或（12～17）cm×（22～

28）cm×（0.004～0.005）cm聚丙烯塑料袋為容器，也稱為二級種。

3.5

栽培種plantingspawn

由原種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以菌種瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或（15～17）cm×

（33～35）cm×（0.004～0.005）cm聚丙烯塑料袋為容器。栽培種只能用于栽培，不可再次擴大繁殖菌

種，也稱為三級種。

3.6

固體菌種solidspawn

以富含木質素、纖維素和淀粉等天然有機物為主要原料，添加適量的有機氮源和無機鹽類，具一定

水分含量的固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的純菌絲體。

3.7

液體菌種liquidspawn

指采用與母種營養(yǎng)成份相似但不添加瓊脂的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)而得到的純菌絲體，菌絲體在培養(yǎng)基中

呈絮狀或球狀，液體菌種可以作為原種或栽培種使用。

4菌種生產要求

4.1人員要求

香菇菌種生產所需要的技術人員和檢驗人員應經過專業(yè)培訓、掌握香菇基礎知識及香菇菌種生產技

術規(guī)程要求。

4.2場所和廠房要求

香菇菌種生產應選擇地勢高、通風良好、空氣清新、水源近、排水通暢和交通便利的場所。周邊無

污染源。

香菇菌種生產廠房要求有各自隔離的攤曬場、原材料庫和配料分裝庫。配套有配料室、攪拌室、裝

袋（瓶）室、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室（通風好，有紗窗）、菌種檢測室及菌種冷藏庫等各環(huán)

節(jié)的設施。冷卻室、接種室和培養(yǎng)室都應要有凈化設施和無菌設施。

4.3生產設備要求

2

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香菇菌種生產需要電子秤、攪拌機、裝袋（瓶）機、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、臭氧離子發(fā)生器、

超凈工作臺或接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、搖床、菌種發(fā)酵罐、冰箱、空調、顯微鏡等設備。

5母種生產

5.1生產流程

培養(yǎng)基配制→分裝試管→滅菌→冷卻→無菌檢驗→接種→培養(yǎng)→檢驗→母種。

5.2容器

試管一般選用18mm×180mm或者20mm×200mm。

5.3培養(yǎng)基

培養(yǎng)基配方如下：

配方一：PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，加水至

1000mL。如果配方中的葡萄糖替換成蔗糖，稱為PSA培養(yǎng)基。

配方二：CPDA培養(yǎng)基(綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀2g，

硫酸鎂0.5g，瓊脂20g，加水至1000mL。

5.4分裝

分裝培養(yǎng)基至試管1/4～1/3處，用棉塞或硅膠塞封閉試管口，每5支試管為1捆，牛皮紙或報紙包棉

塞，棉線扎緊，棉塞向上放置。棉塞應采用梳棉，不能使用脫脂棉。

5.5滅菌

放入高壓滅菌鍋滅菌，在121℃～124℃（0.11MPa～0.12MPa）下滅菌25min。

5.6冷卻

滅菌后溫度降到55℃～65℃時，在空氣清潔的室內擺斜面，要求斜面長度不超過試管長度的2/3。

5.7無菌檢驗

抽取3%～5%冷卻的試管，在28℃下培養(yǎng)48h，無微生物長出為滅菌合格。

5.8母種制備

5.8.1超凈工作臺消毒

先用75%酒精棉球將超凈工作臺以及接種工具表面擦拭消毒，再打開紫外燈照射30min。

5.8.2香菇菌種分離

挑選生長長勢良好、形狀規(guī)則、未開傘、無蟲蛀的香菇子實體作為種菇，用75%的酒精棉球對種菇

表面擦洗消毒，并用無菌濾紙充分吸干后放置在潔凈的培養(yǎng)皿中。用雙手將菇體掰開，用無菌接種刀，

在菌蓋與菌柄交界處切取10mm×5mm“目”字形組織小塊為接種材料。用接種針挑取一小塊組織片，

迅速地接入試管斜面培養(yǎng)基的中央，然后將試管口和棉塞在酒精燈火焰上過火滅菌后塞好，將接種后的

試管放入25℃的恒溫箱內培養(yǎng)，2d～3d后組織塊及周圍便長出白色的菌絲，待菌絲長滿試管斜面即可。

3

DB36/T1869—2023

5.8.3轉管培養(yǎng)

選取斜面上菌絲茁壯、長勢優(yōu)良的試管，用接種工具挑?。?～5）mm×(3～5)mm的菌塊，按無菌

操作要求，轉接到新的試管培養(yǎng)基中，置于25℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15d～20d，當菌絲長滿培養(yǎng)基表面，

即成母種，可用于生產原種。

5.8.4菌種檢查

接種48h后應做首次檢查，挑揀出未萌發(fā)或污染母種。母種菌落長至直徑2cm左右時，進行第二次

檢查，待菌絲長滿培養(yǎng)基前再檢查一次，剔除或丟棄污染、生長不良的菌種。

5.8.5母種檢查要求

母種形態(tài)要求見表1。

表1香菇母種形態(tài)要求

項目要求檢驗方法

容器完整、無破損、無裂紋、潔凈肉眼觀察

棉塞或硅膠塞干燥、整潔、松緊適度肉眼觀察

菌絲生長量長滿培養(yǎng)基肉眼觀察

菌絲體特征潔白、平整、無角變肉眼觀察

菌落邊緣整齊肉眼觀察

菌絲體分泌物無肉眼觀察

雜菌菌落無肉眼觀察，必要時使用5×放大鏡觀察

斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，顏色均勻，無暗斑、無色素肉眼觀察

6原種與栽培種生產

6.1生產技術流程

培養(yǎng)基配制→裝袋（瓶）→滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)→檢查→原種（栽培種）。

6.2固體菌種生產

6.2.1培養(yǎng)基配方

培養(yǎng)基配方如下：

a）配方一：雜木屑78%、麥麩20%、石膏粉1%、白糖或紅糖1%；

b）配方二：雜木屑78%、麥麩18%、玉米粉2%、石膏1%、白糖或紅糖1%；

c）配方三：雜木屑79%、麥麩20%、石膏1%；

d）配方四：雜木屑63%、棉籽殼15%、麥麩20%、石膏1%、白糖或紅糖1%；

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e）配方五：雜木屑63%、玉米芯粉15%、麥麩20%、白糖或紅糖1%、石膏1%。

所有原料應符合NY/T1935規(guī)定。

6.2.2拌料

按照培養(yǎng)料配方準確稱取生產所需各種原材料。將原料加水混合后充分拌勻。培養(yǎng)料含水量控制在

60%～65%。

6.2.3容器

原種采用850mL以下、瓶口直徑≤4cm、耐126℃高溫的透明玻璃瓶，或采用（12～17）cm×（22～

28）cm×（0.004～0.005）cm的聚丙烯塑料袋。

栽培種采用同原種要求的玻璃瓶子，或（15～17）cm×（33～35）cm×（0.004～0.005）cm的聚丙

烯塑料袋。

以上聚丙烯塑料袋均要求符合GB9688要求。

6.2.4裝袋（瓶）

采用裝袋（瓶）機或人工進行裝袋（瓶），人工裝袋（瓶）需用打孔器在袋口處打孔，孔直徑1cm～

1.5cm，深度為8cm～12cm，每袋（瓶）裝培養(yǎng)基500g～600g。

6.2.5滅菌

培養(yǎng)基質裝袋（瓶）后4h內進行滅菌。高壓滅菌：培養(yǎng)基在121℃～124℃（0.11MPa～0.14MPa）

下滅菌2h。常壓滅菌：在3h之內使滅菌溫度達到100℃，保持100℃10h～12h。

6.2.6冷卻

滅菌完成后取出，置于凈化冷卻區(qū)域冷卻至室溫。

6.2.7接種

6.2.7.1接種前準備

先用75%酒精棉球將接種袋（瓶）以及接種工具表面擦拭消毒，放入接種箱或接種室內，再對接種

箱或接種室進行消毒。

6.2.7.2接種操作

6.2.7.2.1原種

接種前一天備好母種，嚴格按照無菌操作要求，將接種工具在酒精燈火焰上方灼燒滅菌，冷卻后挑

取2cm2左右的菌塊到菌袋(瓶)中，每支母種接原種6～8袋(瓶)。

6.2.7.2.2栽培種

接種前一天備好原種，嚴格按照無菌操作要求，將接種工具在酒精燈火焰上方灼燒滅菌，冷卻后挑

取5g～6g塊狀原種到菌袋(瓶)中，每袋(瓶)原種接栽培種60～100袋(瓶)。

6.2.8培養(yǎng)

溫度控制在22℃～26℃，空氣濕度在60%～75%，通風避光培養(yǎng)。

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6.2.9質量檢查

原種及栽培種在培養(yǎng)期間，按照NY/T1284要求進行檢查。

6.2.10原種和栽培種形態(tài)要求

原種和栽培種形態(tài)要求見表2。

表2香菇原種、栽培種形態(tài)要求

項目要求檢驗方法

容器完整、無破損、無裂紋肉眼觀察

棉塞或無棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和濾菌要求肉眼觀察

培養(yǎng)基上表面距袋（瓶）

50mm±5mm肉眼觀察

口的距離

菌絲生長量長滿培養(yǎng)基肉眼觀察

菌絲體特征菌絲體潔白、濃密、粗壯，生長均勻，無高溫抑制線肉眼觀察

菌落邊緣緊貼瓶（袋）壁、無干縮肉眼觀察

菌絲分泌物允許少量無色至棕黃色水珠肉眼觀察

肉眼觀察，必要時使用5×

雜菌菌落無

放大鏡觀察

子實體原基無肉眼觀察

6.3液體菌種生產

6.3.1搖瓶液體菌種生產

6.3.1.1培養(yǎng)基配方

培養(yǎng)基配方如下：

1）配方一：葡萄糖20g，蛋白胨5g，酵母膏3g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂1.5g，維生素B15mg，

加水至1000mL，pH6.0～6.5；

2）配方二：玉米粉20g，葡萄糖20g，酵母膏5g，牛肉膏4g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂1g，維

生素B15mg，加水至1000mL，pH6.0～6.5。

玉米粉應過20目篩。

6.3.1.2培養(yǎng)基配制

按液體培養(yǎng)基配方配制，玉米粉先用水攪拌均勻，裝入三角瓶中，混合均勻，裝液量為搖瓶容量的

2/5～3/5，封口膜（耐高溫組培封口膜）或棉塞封口，棉塞需用硫酸紙或牛皮紙包扎。

6.3.1.3滅菌

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將分裝好的搖瓶放入滅菌鍋內，鍋內留有一定的空隙。滅菌蒸汽壓力升至0.1MPa～0.12MPa，恒

壓維持35min～40min。

6.3.1.4接種與培養(yǎng)

待培養(yǎng)基冷卻后置于消毒過的超凈工作臺上，用經火焰消毒并冷卻后的接種針挑取5～6塊（3～5）

mm×（3～5）mm的母種塊迅速轉接于待接種搖瓶培養(yǎng)基內。將接種后的三角瓶置于搖床上振蕩培養(yǎng)，

轉速為160rpm，23℃～25℃下培養(yǎng)7d。搖瓶培養(yǎng)期間應定期檢查，及時剔除污染雜菌的三角瓶。

6.3.2發(fā)酵罐液體菌種生產

6.3.2.1煮罐、空消

發(fā)酵罐初次使用、出現(xiàn)雜菌、長期放置、更換品種等情況出現(xiàn)其一時，應煮罐和空消。蒸氣壓力0.15

MPa、溫度126℃，維持40min。

6.3.2.2液體菌種培養(yǎng)基配方

培養(yǎng)基配方如下：

a）配方1：玉米粉20g，葡萄糖20g，酵母膏5g，牛肉膏4g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂1g，維

生素B15mg，消泡劑0.3g，加水至1000mL，PH6.0～6.5。

b）配方2：馬鈴薯100g（煮汁），葡萄糖10g，麥麩40g（煮汁），蛋白胨2g，磷酸二氫鉀2g，

硫酸鎂1g，消泡劑0.3g，加水至1000mL，pH6.0～6.5。

c）配方3：玉米粉20g，麥麩20g（煮汁），葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂1g，

消泡劑0.3g，加水至1000mL，pH6.0～6.5。

玉米粉應過20目篩。

6.3.2.3投料和定容

用水把淀粉、玉米粉等原料攪拌均勻，不能有結塊，通過吸管或漏斗加入罐體，裝液量為罐體容量

的70%～80%，加入0.03%消泡劑，通入空氣攪拌1min～2min，混合均勻，擰緊上料口蓋。

6.3.2.4滅菌

發(fā)酵罐加熱層通入冷水，水位低于排水口20cm，關閉進、排水閥門加熱。待加熱層蒸汽壓力達到

0.05MPa時，緩慢打開排氣閥降壓至0MPa，關閉排氣閥，再次升壓至0.11MPa，待發(fā)罐培養(yǎng)層蒸汽壓

力達到0.05MPa時，緩慢打開排氣閥降壓至0MPa，關閉排氣閥，再次升壓至0.11MPa，同時打開空氣

過濾器滅菌，微開排氣閥，維持50min～60min。

6.3.2.5冷卻

滅菌結束，關閉空氣過濾器滅菌閥與排氣閥，緩慢打開空氣過濾器排水閥降壓至0MPa，加熱層通

入冷水降溫；同時緩慢打開發(fā)酵罐培養(yǎng)層排氣閥降壓，待壓力接近0MPa時向培養(yǎng)層內通入無菌空氣，

調整排氣閥，維持罐壓0.04MPa～0.05MPa，培養(yǎng)液溫度降至25℃以下時，關閉加熱層進水閥。

6.3.2.6接種與培養(yǎng)

接入搖瓶菌種，接種量為2%～4%。將搖瓶接種管和發(fā)罐接種口用75%酒精消毒，用95%酒精的火

焰圈套在接種口上，輕微打開呼吸器閥門，使發(fā)酵罐壓力為0MPa。點燃火焰圈，在火焰保護下用鑷子

7

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去掉接種管上的牛皮紙和瓶塞，打開接種口閥門，將接種管插入接種口，將搖瓶菌種注入發(fā)酵罐。拔出

接種管，關閉接種閥門，去掉火焰圈，打開空氣壓縮機。

根據(jù)菌絲生長情況，適時調節(jié)進氣按鈕，通入適量無菌空氣，同