ICS65.020.20

CCSB15

21

遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB21/T3670—2022

花生抗褐斑病鑒定技術(shù)規(guī)程

Ruleforevaluationofresistancetobrownleafspotinpeanut

2022-12-30發(fā)布2023-01-30實施

遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB21/T3670—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心。

本文件主要起草人：謝瑾卉、林英、梁春浩、臧超群、于舒怡、劉曉舟、安福濤、張海東、辛緒紅、

金迪。

本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，

我們將及時答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實際情況依法進(jìn)行評估及復(fù)審。

歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號），聯(lián)系電話

文件起草單位通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院（沈陽市沈河區(qū)東陵路84號），聯(lián)系電話

I

DB21/T3670—2022

花生抗褐斑病鑒定技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了花生抗褐斑?。–ercosporaarachidicolaHori）鑒定技術(shù)的病原物分離、接種體制備、

室內(nèi)抗性鑒定、田間抗性鑒定、病情調(diào)查、抗性評價、鑒定記載方法等。

本文件適用于花生（ArachishypogaeaL.）品種及種質(zhì)資源對花生褐斑病抗性的室內(nèi)、田間鑒定及

評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T3842東北產(chǎn)區(qū)花生生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件。

PDA馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PotatoDextroseAgarMedium）

OA燕麥瓊脂培養(yǎng)基（OatmealAgarMedium）

5試劑與材料

PDA培養(yǎng)基、OA培養(yǎng)基。

6病原物分離與接種體制備

6.1病原物分離

從花生葉片病斑處挑取花生褐斑病菌分生孢子，置于無菌水中，震蕩3min，將分生孢子懸浮液涂

布于水瓊脂平板上，挑取單孢子，置于PDA培養(yǎng)基上，26℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)。形態(tài)觀察結(jié)合系統(tǒng)進(jìn)化分

析，鑒定為落花生尾孢菌（CercosporaarachidicolaHori），采用柯赫氏法則測定致病性，確定為供接

種用菌株。病原菌于4℃保存，或20%甘油中，-40℃長期保存。

花生褐斑病癥狀及病菌形態(tài)描述見附錄A。

6.2接種體制備

1

DB21/T3670—2022

接種前30d~45d，將病菌接種于PDA培養(yǎng)基平板上，25℃恒溫培養(yǎng)15d，挑取菌落，置于2mL離心

管中，加入無菌水1.5mL，充分震蕩混勻，吸取菌懸液500μL，置于OA培養(yǎng)基中央，均勻涂布整個平

板，25℃恒溫培養(yǎng)10d~15d。于超凈工作臺中刮取分生孢子，置于裝有少量無菌水的燒杯中，靜置20min，

配制成濃度為1×105個/mL孢子懸浮液（如未立即接種使用，可置4℃保存，保存時間≤2d）。接種前在

孢子懸浮液中加入0.1%Tween201μL/mL增加病菌孢子與葉片粘附性，加入蔗糖0.05mg/mL提高孢子

萌發(fā)率。

7室內(nèi)抗性鑒定

7.1室內(nèi)離體葉片準(zhǔn)備

在花盆中播種籽粒飽滿的花生種子3粒，定期澆水，于26℃、12h光暗交替的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至下針

期。剪取底部向上的第3、4片復(fù)葉，用脫脂棉包裹葉柄，插入經(jīng)人工打孔的接種杯（直徑4cm，高4.8cm）

中，杯內(nèi)含清水30mL。

7.2接種

將孢子懸浮液均勻噴施于離體葉片上，光照條件下26℃保濕培養(yǎng)12h，黑暗條件下18℃保濕培養(yǎng)12

h，培養(yǎng)7d~10d。

7.3病情調(diào)查方法

接種后25d~30d，進(jìn)行病情調(diào)查。調(diào)查接種的全部葉片，記錄總?cè)~片數(shù)，各級病葉數(shù)，計算病情指

數(shù)及相對抗病指數(shù)。

∑(s×n)

DI=×100····································································(1)

S×N

式中：

DI——病情指數(shù)；

s——各級代表值；

n——各級葉片數(shù)；

S——發(fā)病最高代表值；

N——調(diào)查總?cè)~數(shù)。

DI

RDI=1?P·········································································(2)

DIS

式中：

RDI——相對抗病指數(shù)；

DIP——品種病情指數(shù)；

DIS——最感品種病情指數(shù)。

7.4病情分級

病情分級及其對應(yīng)的癥狀描述見表1。

表1花生抗褐斑病鑒定病情級別劃分標(biāo)準(zhǔn)

病情級別病害癥狀描述

0整片復(fù)葉無病癥狀；

2

DB21/T3670—2022

病情級別病害癥狀描述

1病斑面積＜10%；

310%≤病斑面積＜25%；

525%≤病斑面積＜50%；

750%≤病斑面積＜75%；

975%≤病斑面積。

8田間抗性鑒定

8.1抗性鑒定圃設(shè)置

抗性鑒定圃設(shè)置在具備良好的自然發(fā)病環(huán)境條件、灌溉良好、地勢平坦、地力均勻的地塊，發(fā)病條

件一致。

8.2小區(qū)設(shè)計

鑒定材料隨機(jī)區(qū)組排列。小區(qū)面積25m2~30m2，4行區(qū)，行距0.5m~0.6m，小區(qū)保苗80穴左右。每

20份鑒定材料各設(shè)1組抗、感病對照，抗病對照品種為花育20，感病對照品種為白沙1016。

8.3種植要求

鑒定材料播種時間、栽培管理方式應(yīng)符合NY/T3842的要求，整個生長季不施用殺菌劑。

8.4接種

8.4.1接種期

接種期為花針期。

8.4.2接種方法

每個品種隨機(jī)連續(xù)選擇10株，將孢子懸浮液均勻噴施于主莖自上向下第3片至第7片復(fù)葉，保濕培養(yǎng)。

接種期如遇干旱天氣，應(yīng)及時進(jìn)行田間澆灌。

8.5病情調(diào)查方法

接種后15d~20d，進(jìn)行病情調(diào)查。調(diào)查接種的全部植株，統(tǒng)計每株葉數(shù)和各級病葉數(shù)，計算病情指

數(shù)，計算方法同7.3。

9抗性評價

9.1鑒定有效性判別

當(dāng)感病對照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（S級），該批次材料抗褐斑病鑒定視為有效。

9.2抗性評價指標(biāo)

依據(jù)鑒定材料相對抗病指數(shù)確定其抗性水平，劃分指標(biāo)見表2。

表2花生抗褐斑病抗病評價指標(biāo)

3

DB21/T3670—2022

相對抗病指數(shù)抗性評價

1.0免疫（IM）

0.80~0.99高抗（HR）

0.60~0.79抗（R）

0.40~0.59中抗（MR）

0.20~0.39感（S）

＜0.2高感（HS）

10鑒定記載

宜做好花生抗褐斑病鑒定結(jié)果的記載，見附錄B。

4

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附錄A

（資料性）

花生褐斑病癥狀及病菌形態(tài)描述

A.1病名和癥狀描述

A.1.1病名

花生褐斑病Peanutbrownleafspot

A.1.2癥狀描述

花生褐斑病是花生生產(chǎn)上常見的真菌病害，主要為害葉片，也可為害莖和葉柄。發(fā)病初期為褪綠小

點，后擴(kuò)展成近圓形或不規(guī)則形小斑，病斑較黑斑病大而色淺，葉正面呈暗褐或茶褐色，背面呈褐或黃

褐色，病斑周圍有亮黃色暈圈。濕度大時病斑上可見灰褐色粉狀霉層，即病菌分生孢子梗和分生孢子。

葉柄和莖稈染病，病斑長橢圓形，暗褐色?；ㄉ职卟“Y狀圖見圖A.1。

圖A.1花生褐斑病癥狀圖

A.2病原菌學(xué)名和形態(tài)描述

A.2.1病原菌

花生褐斑?。≒eanutbrownleafspot）致病菌為落花生尾孢（CercosporaarachidicolaHori），有性

態(tài)為落花生球腔菌（MycosphaerellaarachidicolaHori）。

A.2.2形態(tài)描述

花生褐斑病菌絲體在燕麥瓊脂培養(yǎng)基（OA）上菌落呈深褐色至黑色，近圓形，粘性較差。分生孢

子梗叢生或散生，淡褐色，有0~2個分隔，大小21~42μm×3~5μm。分生孢子倒棍棒狀，基部膨大，向

上漸尖，淡褐色，具5~8個隔膜，大小40~110μm×3~5μm?；ㄉ职卟【湫螒B(tài)圖見圖A.2?；ㄉ?/p>

斑病菌分生孢子形態(tài)圖見圖A.3。

5

DB21/T3670—2022

圖A.2花生褐斑病菌菌落形態(tài)圖

圖A.3花生褐斑病菌分生孢子形態(tài)圖

6

DB21/T3670—2022

附錄B

（資料性）

花生抗褐斑病鑒定記載

花生抗褐斑病鑒定結(jié)果記載在表B.1中。

表B.1花生抗褐斑病鑒定記載表

各級病葉數(shù)

接種日期調(diào)查日期地點品種病情指數(shù)抗性評價

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