演講人：日期:病理科疾病組織標(biāo)本取材技巧CATALOGUE目錄01取材前準(zhǔn)備02常規(guī)標(biāo)本取材規(guī)范03特殊標(biāo)本處理技巧04定向與標(biāo)記要求05質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)06取材后處理流程01取材前準(zhǔn)備標(biāo)本接收與信息核對(duì)標(biāo)本完整性檢查接收標(biāo)本時(shí)需確認(rèn)容器密封性、標(biāo)簽清晰度及標(biāo)本量是否充足，避免因運(yùn)輸或保存不當(dāng)導(dǎo)致的組織變性或污染。核對(duì)申請(qǐng)單與標(biāo)本編號(hào)、患者姓名、取材部位等關(guān)鍵信息的一致性，防止樣本混淆或誤診風(fēng)險(xiǎn)。030201臨床信息整合結(jié)合影像學(xué)報(bào)告、病史摘要及手術(shù)記錄等資料，明確取材重點(diǎn)區(qū)域（如腫瘤邊緣、壞死灶交界處），確保病理診斷的精準(zhǔn)性和全面性。特殊標(biāo)本處理針對(duì)微小組織、鈣化灶或易碎標(biāo)本，需優(yōu)先標(biāo)記并采用專用容器分裝，避免后續(xù)處理過程中丟失關(guān)鍵病變組織。取材工具消毒根據(jù)標(biāo)本體積配置足量中性緩沖福爾馬林（通常為標(biāo)本體積的10倍），確保組織固定充分。對(duì)特殊病例（如淋巴瘤）需額外準(zhǔn)備RNA保存液或低溫保存設(shè)備。固定液配置輔助設(shè)備校準(zhǔn)電子天平、組織脫水機(jī)等設(shè)備需定期校驗(yàn)，確保試劑濃度、溫度參數(shù)符合標(biāo)準(zhǔn)流程，避免因設(shè)備誤差影響后續(xù)制片質(zhì)量。手術(shù)刀、鑷子、剪刀等器械需經(jīng)高溫高壓滅菌或一次性使用，確保無菌操作。針對(duì)不同組織類型（如脂肪、骨組織）配備專用刀具，以提高取材效率并減少人為損傷。器械設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)化準(zhǔn)備穿戴一次性防水隔離衣、N95口罩、護(hù)目鏡及雙層手套，防止甲醛蒸氣、血液或體液接觸。高危標(biāo)本（如結(jié)核、HIV陽性組織）需在生物安全柜內(nèi)操作。個(gè)人防護(hù)裝備穿戴基礎(chǔ)防護(hù)措施工作臺(tái)旁配置銳器盒、消毒噴劑及急救包，以應(yīng)對(duì)刀具劃傷或化學(xué)品濺灑等突發(fā)情況。定期檢查防護(hù)用品有效期，確保其防護(hù)效能。應(yīng)急處理準(zhǔn)備取材室需維持負(fù)壓通風(fēng)，甲醛濃度監(jiān)測(cè)儀實(shí)時(shí)報(bào)警，避免長(zhǎng)期暴露對(duì)工作人員健康造成累積性損害。環(huán)境安全管控02常規(guī)標(biāo)本取材規(guī)范組織定位與剖面方向解剖結(jié)構(gòu)識(shí)別保留關(guān)鍵結(jié)構(gòu)剖面角度選擇取材前需明確標(biāo)本的解剖學(xué)標(biāo)志（如黏膜層、漿膜層或腫瘤邊界），確保剖面方向與組織學(xué)結(jié)構(gòu)一致，避免斜切導(dǎo)致診斷誤差。根據(jù)病變性質(zhì)選擇縱切或橫切，如管狀器官（腸管、血管）需縱切以觀察全層浸潤(rùn)情況，而結(jié)節(jié)性病變宜采用多平面剖面以評(píng)估三維特征。對(duì)含重要解剖標(biāo)志的組織（如淋巴結(jié)門部、腫瘤包膜），需保留完整結(jié)構(gòu)以輔助病理分期和鑒別診斷。代表性病變區(qū)域選擇多區(qū)域聯(lián)合取材針對(duì)異質(zhì)性病變（如混合型腫瘤），需在中心區(qū)、邊緣區(qū)及交界區(qū)分別取材，避免遺漏微小病灶或浸潤(rùn)灶。對(duì)照正常組織每例標(biāo)本應(yīng)包含至少1塊毗鄰正常組織，用于對(duì)比分析病變的形態(tài)學(xué)差異及浸潤(rùn)范圍。壞死與存活組織平衡優(yōu)先選取病變活躍區(qū)（如腫瘤細(xì)胞密集區(qū)），但需保留部分壞死組織以評(píng)估治療反應(yīng)或腫瘤生物學(xué)行為。組織塊尺寸控制標(biāo)準(zhǔn)厚度標(biāo)準(zhǔn)化常規(guī)組織塊厚度控制在2-3mm，過厚易導(dǎo)致固定不充分或脫水不良，過薄則可能破壞組織結(jié)構(gòu)連續(xù)性。面積適配包埋盒脂肪或骨組織需適當(dāng)增厚（4-5mm）并延長(zhǎng)脫水時(shí)間，而脆性組織（如腦組織）應(yīng)減小厚度至1-2mm以防切片碎裂。單塊組織面積不超過包埋盒內(nèi)徑的80%，避免擠壓變形；大標(biāo)本需分塊時(shí)需標(biāo)記解剖關(guān)系（如A1、A2序列編號(hào)）。特殊組織處理03特殊標(biāo)本處理技巧微小組織的夾取方法010203使用精細(xì)鑷子與放大輔助工具選擇尖端細(xì)密的無齒鑷或生物夾持鑷，配合解剖顯微鏡或放大鏡操作，避免夾取時(shí)組織碎裂或丟失。粘附載體輔助轉(zhuǎn)移將微小組織置于濕潤(rùn)的濾紙、海綿或瓊脂片上，通過載體整體轉(zhuǎn)移至包埋盒，減少直接夾取造成的機(jī)械損傷。低溫冷凍預(yù)處理對(duì)極脆弱的組織可短暫冷凍硬化后再夾取，但需控制冷凍時(shí)間以避免冰晶形成影響后續(xù)制片質(zhì)量。鈣化/骨組織處理要點(diǎn)分級(jí)脫鈣技術(shù)根據(jù)鈣化程度選擇弱酸（如甲酸）或螯合劑（EDTA）分階段脫鈣，定期針刺測(cè)試軟化程度，避免過度脫鈣導(dǎo)致組織形態(tài)破壞。定向包埋與切片優(yōu)化脫鈣后組織需按力學(xué)方向包埋，切片時(shí)采用鎢鋼刀或金剛石刀低速推進(jìn)，減少骨組織切片時(shí)的碎裂風(fēng)險(xiǎn)。特殊染色輔助診斷針對(duì)部分鈣化病變，需保留未脫鈣切片進(jìn)行VonKossa染色或偏振光檢查，以鑒別鈣鹽沉積類型。囊性病變防塌陷策略負(fù)壓抽吸與固定同步穿刺抽取囊液前先注入適量中性福爾馬林，維持囊內(nèi)壓力平衡，防止囊壁塌陷粘連導(dǎo)致結(jié)構(gòu)扭曲。立體定向取材法對(duì)大型囊性標(biāo)本采用“十字切開”或“多象限取材”，確保囊壁全層及鄰近實(shí)質(zhì)區(qū)域均被覆蓋，避免遺漏微小病灶。凝膠支撐填充技術(shù)向囊腔內(nèi)注入低熔點(diǎn)瓊脂或明膠，待凝固后整體取材，可完整保留囊壁的立體構(gòu)象及內(nèi)表面特征。04定向與標(biāo)記要求切緣標(biāo)記染色技術(shù)采用無毒、高對(duì)比度的染色劑（如印度墨水或?qū)Ｓ檬中g(shù)標(biāo)記染料），確保染色均勻且不干擾后續(xù)病理檢測(cè)，染色范圍需覆蓋整個(gè)切緣斷面。染色劑選擇與操作規(guī)范針對(duì)復(fù)雜標(biāo)本（如腫瘤切除組織），使用不同顏色標(biāo)記不同切緣（如藍(lán)色代表近端切緣，紅色代表遠(yuǎn)端切緣），便于病理醫(yī)師精準(zhǔn)定位病變與安全邊界的空間關(guān)系。多色標(biāo)記區(qū)分法染色后需充分晾干以避免染料擴(kuò)散，隨后立即放入中性緩沖福爾馬林固定液，防止染色區(qū)域因固定不充分導(dǎo)致標(biāo)記模糊或脫落。染色后干燥與固定處理三維空間定位標(biāo)注通過解剖標(biāo)志或縫合線標(biāo)注組織的原始方位（如皮膚表面朝向、黏膜層方向），并在申請(qǐng)單附示意圖，確保包埋時(shí)能還原組織的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)。組織包埋方向標(biāo)識(shí)微小標(biāo)本定向技巧對(duì)活檢或穿刺標(biāo)本，使用濾紙或海綿槽固定其方向，并在包埋盒外標(biāo)注“上/下”或“左/右”方位，避免切片時(shí)因方向錯(cuò)誤遺漏關(guān)鍵病變。多組織塊分層標(biāo)識(shí)同一標(biāo)本含多層組織（如腸壁全層）時(shí)，需在包埋盒上注明層次順序（如“漿膜面朝下”），保證切片能完整顯示各層病理變化。免疫組化/分子檢測(cè)預(yù)留要求若臨床需后續(xù)檢測(cè)（如PD-L1、HER2），應(yīng)在申請(qǐng)單明確標(biāo)注“保留剩余組織”并指定保存條件（如冷凍或石蠟包埋），避免取材過度消耗珍貴標(biāo)本。鈣化/骨組織預(yù)處理說明對(duì)含鈣化或骨質(zhì)的標(biāo)本，需備注“需脫鈣處理”及建議脫鈣時(shí)間，同時(shí)提醒技術(shù)員注意調(diào)整切片厚度以避免組織碎裂。術(shù)中快速病理的特殊標(biāo)記冰凍切片標(biāo)本需用OCT化合物包埋并標(biāo)注“急檢”，重點(diǎn)區(qū)域（如腫瘤邊緣）需單獨(dú)標(biāo)記，確?？焖僭\斷的準(zhǔn)確性。特殊需求備注規(guī)范05質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)組織厚度均勻性控制邊緣修整技巧在切片前對(duì)組織邊緣進(jìn)行精細(xì)修整，消除不規(guī)則凸起或凹陷，保證整體切面平整，便于后續(xù)染色和顯微鏡觀察。03對(duì)于較大或異質(zhì)性組織，采用分層取材法，確保每一層組織均能代表病變特征，避免遺漏關(guān)鍵病理變化區(qū)域。02分層取材策略標(biāo)準(zhǔn)化切片厚度使用專業(yè)切片機(jī)確保組織標(biāo)本厚度一致，通常控制在3-5毫米范圍內(nèi)，避免過厚導(dǎo)致固定不充分或過薄影響診斷準(zhǔn)確性。01擠壓/人為損傷預(yù)防標(biāo)記與分區(qū)管理對(duì)易混淆的小標(biāo)本進(jìn)行分區(qū)標(biāo)記，避免多次翻找造成的機(jī)械損傷，同時(shí)采用專用容器分隔存放不同病例標(biāo)本?？焖俎D(zhuǎn)移流程從手術(shù)切除到固定液的轉(zhuǎn)移時(shí)間應(yīng)盡量縮短，減少組織暴露于空氣中的時(shí)間，防止干燥收縮或氧化損傷影響后續(xù)分析。輕柔操作規(guī)范使用無齒鑷或鈍頭器械夾取組織，避免用力擠壓導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)變形或人工假象，尤其在處理脆性組織（如腦組織）時(shí)需格外謹(jǐn)慎。預(yù)冷介質(zhì)選擇使用OCT等包埋劑時(shí)需充分浸潤(rùn)組織但避免過量，冷凍后及時(shí)修整包埋塊表面，確保切片時(shí)能完整保留目標(biāo)區(qū)域。包埋劑滲透控制溫度梯度監(jiān)測(cè)實(shí)時(shí)監(jiān)控冷凍過程中的溫度變化，尤其對(duì)脂肪或含水率高的組織需調(diào)整冷凍曲線，防止因溫差過大導(dǎo)致組織裂隙或斷裂。采用異戊烷或液氮預(yù)冷至適宜溫度，確保冷凍速率均勻，避免冰晶形成造成組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞?？焖倮鋬鰳?biāo)本要點(diǎn)06取材后處理流程使用專業(yè)滅菌設(shè)備對(duì)手術(shù)器械進(jìn)行高溫高壓處理，確保殺滅所有微生物，包括細(xì)菌芽孢和病毒，滅菌參數(shù)需符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。高溫高壓滅菌針對(duì)不耐高溫的精密器械，采用戊二醛、過氧乙酸等高效消毒劑浸泡，嚴(yán)格控制濃度和作用時(shí)間，避免器械腐蝕或殘留毒性?；瘜W(xué)消毒劑浸泡對(duì)操作臺(tái)面及空氣環(huán)境進(jìn)行紫外線照射或臭氧消殺，減少交叉污染風(fēng)險(xiǎn)，需定期檢測(cè)紫外線燈管強(qiáng)度以確保有效性。紫外線或臭氧消毒010203器械消毒操作規(guī)范123標(biāo)本保存條件管理固定液選擇與更換根據(jù)不同組織類型選用10%中性緩沖福爾馬林或其他專用固定液，定期監(jiān)測(cè)固定液pH值及滲透壓，及時(shí)更換失效液體。溫濕度環(huán)境控制標(biāo)本儲(chǔ)存室需維持恒定低溫（2-8℃）及適宜濕度（40%-60%），配備連續(xù)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)并設(shè)置異常報(bào)警功能。分區(qū)標(biāo)識(shí)管理按標(biāo)本類型（如腫瘤、炎癥）分區(qū)域存放，標(biāo)簽注明患者信息、取材部位及保存期限，避免混淆或過期使用。注射器針頭、刀片等銳器須