團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CBJ1109—2025飲料酒飲后血液中酒精代謝速率評價(jià)方法Evaluationmethodforalcoholmetabolicrateinbloodafterdrinkingbeverages2025-09-15發(fā)布2025-10-15實(shí)施中國酒業(yè)協(xié)會中國標(biāo)準(zhǔn)出版社發(fā)布出版ⅠT/CBJ1109—2025前言 Ⅲ 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4原理 5試劑和材料 6實(shí)驗(yàn)步驟 7飲后酒精代謝速率評價(jià) 附錄A（資料性）乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線 ⅢT/CBJ1109—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院有限公司提出。本文件由中國酒業(yè)協(xié)會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)審查委員會歸口。本文件起草單位：中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院有限公司、中國酒業(yè)協(xié)會白酒技術(shù)創(chuàng)新戰(zhàn)略發(fā)展工作委員會、江南大學(xué)、天津科技大學(xué)、江南大學(xué)（舍得酒業(yè)股份有限公司、四川省綿陽市豐谷酒業(yè)有限責(zé)任公司、河南皇溝酒業(yè)有限責(zé)任公司、河北山莊老酒股份有限公司。1T/CBJ1109—2025飲料酒飲后血液中酒精代謝速率評價(jià)方法本文件規(guī)定了飲料酒飲后酒精代謝速率的原理、試劑和材料、實(shí)驗(yàn)步驟、飲后酒精代謝速率評價(jià)。本文件適用于以模式動(dòng)物（大鼠、小鼠）為實(shí)驗(yàn)對象，飲用同類型飲料酒、同酒精度（1%vol以內(nèi)飲后酒精代謝速率評價(jià)，為滿足試驗(yàn)方法的可操作性進(jìn)行了基于酒精度的實(shí)驗(yàn)組別劃分。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2757食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)蒸餾酒及其配制酒GB2758食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)酵酒及其配制酒GB5009.225—2023食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)酒和食用酒精中乙醇濃度的測定GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB14924.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物配合飼料通用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB14925實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施GB/T17204飲料酒術(shù)語和分類GB/T42430血液、尿液中乙醇、甲醇、正GA/T842血液酒精含量的檢驗(yàn)方法GA/T1073生物樣品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙酮和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗(yàn)方法JJF1074—2018酒精密度-濃度測量用表RB/T010實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障和隔離裝置評價(jià)通用要求RB/T018實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利和人員職業(yè)健康安全檢查指南RB/T019實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施性能及環(huán)境參數(shù)驗(yàn)證程序指南SN/T2881化學(xué)品毒理學(xué)安全性評價(jià)良好試驗(yàn)室規(guī)范SN/T3986實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)、運(yùn)輸、使用過程中的動(dòng)物福利規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。飲料酒alcoholicbeverages酒精度在0.5%vol以上的酒精性飲料。2T/CBJ1109—2025飲酒drinking機(jī)體單次攝入飲料酒（3.1從入口下喉開始。飲后酒精代謝速率metabolismrate用單位時(shí)間（h）內(nèi)血液乙醇濃度降低量表示飲酒后酒精代謝速率。模式動(dòng)物（小鼠、大鼠）具有取材容易、操作簡便、能夠嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件、結(jié)果準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好、可比性強(qiáng)的特點(diǎn)，常用于酒精代謝評價(jià)研究。通過給模式動(dòng)物（小鼠、大鼠）攝入適當(dāng)劑量的飲料酒，用頂空-氣相色譜檢驗(yàn)法分析飲后關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)血液乙醇濃度，計(jì)算采樣時(shí)間間隔中單位時(shí)間內(nèi)血液乙醇濃度降低量，得到飲料酒飲后酒精代謝速率。5試劑和材料5.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物5.1.1動(dòng)物品系和數(shù)量小鼠品系和數(shù)量：C57BL/6J小鼠，清潔Ⅱ級及以上，雄性，20g±2g，鼠齡6周~8周；每個(gè)酒樣至少5.1.2飼養(yǎng)條件5.1.2.1喂養(yǎng)環(huán)境應(yīng)符合國家規(guī)定普通研究、試驗(yàn)清潔Ⅱ級環(huán)境及以上，室內(nèi)溫度18℃~26℃,濕度50%~70%，光照150lx，噪音≤60dB，室內(nèi)用排風(fēng)扇通風(fēng)換氣，保證室內(nèi)氨濃度≤14mg/m3，具體應(yīng)符合5.1.2.2所喂飼料需符合GB14924.1規(guī)定。5.1.2.4實(shí)驗(yàn)場所需符合SN/T2881、RB/T010、RB/T019要求。5.1.2.5實(shí)驗(yàn)人員需符合RB/T018要求。5.1.2.6動(dòng)物福利規(guī)范需符合RB/T018、SN/T3986規(guī)范。實(shí)驗(yàn)用水，應(yīng)符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。肝素鈉溶液（HeparinSodium，濃度2H5OH，CAS1.5mL離心管。5.3儀器與設(shè)備潔凈工作臺。3T/CBJ1109—2025精密電子天平：分度值d=0.001g。超低溫冰箱：-80℃。冰箱：-20℃。氣相色譜儀：配氫火焰離子檢測器（FID配頂空進(jìn)樣器，或相當(dāng)者。6實(shí)驗(yàn)步驟6.1試樣分組每個(gè)酒樣對應(yīng)一組動(dòng)物，每組動(dòng)物至少10只，選擇的飲料酒應(yīng)符合GB/T17204、GB2757和GB2758的規(guī)定。為確保試驗(yàn)對象對飲料酒有明顯的代謝表現(xiàn)，提高可操作性，保證試驗(yàn)結(jié)果有效性，對不同類型和酒精度的飲料酒按下列分類進(jìn)行：——對于啤酒、葡萄酒、黃酒、酒精度≤24%vol的白酒、露酒類型飲料酒，按照《國際理性飲酒聯(lián)盟IARD推薦標(biāo)準(zhǔn)飲酒量規(guī)定》推薦的成年男性標(biāo)準(zhǔn)適量飲酒范圍中的最低酒精攝入劑量，每天——對于24%vol<酒精度≤40%vol的白酒、露酒飲料酒，按照《國際理性飲酒聯(lián)盟IARD推薦標(biāo)準(zhǔn)飲酒量規(guī)定》推薦的成年男性標(biāo)準(zhǔn)適量飲酒范圍中的最高酒精攝入劑量，每天30g酒精，選擇SD大鼠；——對于酒精度>40%vol的白酒、露酒類型飲料酒，按照《國際理性飲酒聯(lián)盟IARD推薦標(biāo)準(zhǔn)飲酒量規(guī)定》推薦的標(biāo)準(zhǔn)飲酒量規(guī)定中的最大攝入酒精劑量，每天60g酒精，選擇C57BL/6J小鼠。不同類型飲料酒在相應(yīng)酒精度下的飲用量按公式（1）計(jì)算：V……………（1）式中：V1——攝入飲料酒量，單位為毫升（mL）。m——乙醇攝入量，依照6.1確定的大鼠或小鼠與人體劑量換算折算，當(dāng)類型為啤酒、葡萄酒、黃酒、酒精度≤24%vol的白酒、露酒類型飲料酒時(shí)，m取0.38g；當(dāng)試樣類型為白酒、露酒且酒精度≤40%vol時(shí)，m取0.57g；當(dāng)試驗(yàn)類型為白酒、露酒且酒精度>40%vol時(shí)，mC——試樣酒精度，單位為%vol。ρ乙醇密度——按照J(rèn)JF1074—2018中附錄D和GB5009.225—2023中表A.1酒精水溶液密度與乙醇計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，推薦使用可保留兩位有效數(shù)字的注射器。6.3繪制標(biāo)曲6.3.1色譜參考條件ration，配氫火焰離子檢測器（FID）或相當(dāng)者。4T/CBJ1109—20256.3.1.2色譜柱：AgilentJ&W?GC型30m×0.53mm×1.00μm硅烷化石英柱或等效色譜柱。6.3.1.3升溫程序：柱溫起始溫度40℃,以10℃/min升到60℃,保持0min，再以20℃/min升到120℃,保持0min，再以40℃/min升到240℃,保持0min。6.3.1.4樣品處理：頂空溫度55℃,時(shí)間30min。6.3.1.7恒流模式：8.0mL/min。6.3.1.8進(jìn)樣量：頂空進(jìn)樣，建議為0.5mL~1.0mL。6.3.1.10載氣流速：N2，8mL/min；H2，45mL/min；空氣，450mL/min。注：以上為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器和不同樣品等實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。6.3.2標(biāo)樣制定參照GB/T42430進(jìn)行，采用校準(zhǔn)曲線法定量，其配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液乙醇質(zhì)量濃度為0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.50mg/mL、0.80mg/mL、1.00mg/mL、2.00mg/mL、3.00mg/mL。配制系列濃度乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度取與樣品等量的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液一份，得到系列濃度的添加樣品，與樣品平行操作。樣品中目標(biāo)物濃度應(yīng)在校準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液乙醇質(zhì)量濃度無需嚴(yán)格一致，相關(guān)系數(shù)（r）不小于0.997即可。若樣品的濃度超出線性范圍，需用水稀釋樣品或重新制作校準(zhǔn)曲線，使樣品的濃度在校準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。6.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線建立根據(jù)乙醇的出峰面積和標(biāo)準(zhǔn)液濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，記錄檢測樣品和添加樣品中乙醇的峰面積值，以添加樣品中乙醇的峰面積為縱坐標(biāo)、添加樣品中乙醇的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到線性方程。乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線見附錄A。6.4血樣采集將灌胃后不同時(shí)間點(diǎn)的鼠尾部取血，每次取50μL全血，放入提前用肝素鈉溶液潤洗的抗凝試管內(nèi)，90min；不同酒樣BACmax出峰時(shí)間雖然有差異，但不會超過飲酒后2h，飲酒后2h~5h血液乙醇濃度呈線性規(guī)律消除。分析酒精消除期內(nèi)（高峰后）2個(gè)關(guān)鍵時(shí)刻（飲酒后2h與飲酒后5h）的動(dòng)物血液乙醇濃度，計(jì)算這2個(gè)時(shí)間點(diǎn)的間隔（3h）內(nèi)酒精代謝速率，既符合酒精代謝動(dòng)力學(xué)規(guī)律，又同時(shí)避免了因取材間隔時(shí)間過長或過短導(dǎo)致的其他生理因素干擾。6.5指標(biāo)檢測用ddH2O將血樣稀釋至0.5mL，放入頂空進(jìn)樣瓶中，采取頂空進(jìn)樣方式，按照6.3.1測定乙醇的出峰面積，根據(jù)6.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出全血中乙醇的濃度。血液中的乙醇的含量檢測方法應(yīng)符合GB/T42430、GA/T842、GA/T1073規(guī)定。5T/CBJ1109—20257飲后酒精代謝速率評價(jià)血液中乙醇的濃度為該實(shí)驗(yàn)組所有樣本檢測結(jié)果平均值，且組內(nèi)誤差≤10%，表示該結(jié)果有效。飲后酒精代謝速率評價(jià)按公式（2）計(jì)算：v……………（2）式中：V——酒精代謝速率，即單位時(shí)間（h）內(nèi)血液中乙醇濃度降低量，單位為毫克每毫升每小時(shí)［mg/（mL·hC