液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)人體血液或尿液中氨基酸通用要求chromatography—massspectr中國(guó)檢驗(yàn)檢測(cè)學(xué)會(huì)發(fā)布1前言 II 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14基本要求 1 14.2實(shí)驗(yàn)室環(huán)境 24.3儀器設(shè)備 2 24.5方法學(xué)驗(yàn)證 25分析方法 25.1樣品采集及處理 25.2色譜分離條件 3 35.4數(shù)據(jù)處理 3 36.1室內(nèi)質(zhì)控 36.2室間質(zhì)評(píng) 47結(jié)果報(bào)告 4參考文獻(xiàn) 52本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院、國(guó)軍標(biāo)(北京)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)研究院提出。本文件由中國(guó)檢驗(yàn)檢測(cè)學(xué)會(huì)歸口。本文件起草單位：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院、國(guó)軍標(biāo)(北京)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)研究院、南通大學(xué)附屬醫(yī)院、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第六醫(yī)院、上海市臨床檢驗(yàn)中心、上海市第一人民醫(yī)院、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院、四川大學(xué)華西第四醫(yī)院、上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院(上海市實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究院臨床質(zhì)譜研究所)、中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心、上海市東方醫(yī)院(同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院)、河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院、四川省腫瘤醫(yī)院、廣元市中心醫(yī)院、上海?？瞪锟萍加邢薰?、深圳華大基因股份有限公司、北京實(shí)安科技有限公司、北京醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)、北京中檢體外診斷工程技術(shù)研究中心、成都順康源醫(yī)療器械有限公司、上海拜譜生物科技有限公司、上?？迫A生物工程股份有限公司、蘇州藥明澤康生物科技有限公司。本文件主要起草人：陸秋涯、劉萬(wàn)陽(yáng)、戴菁、賀曉雙、趙珺濤、王旭東、馮磊光、高海燕、金中淦、王琳、劉靜、張靜、陸優(yōu)麗、孫健、楊術(shù)生、劉傳鑫、鄒海民、李政東、戴輝、任哲、李娜、穆紅、戴其全、韓祿、呼建文、戴捷、楊超、趙洪、韓穎鑫。3本文件規(guī)定了液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)人體血液或尿液中氨基酸的通用要求，包括基本要求、分析方法、質(zhì)量控制和結(jié)果報(bào)告。本文件適用于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室采用液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法開(kāi)展人體血液或尿液中氨基酸的檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14710醫(yī)用電氣設(shè)備環(huán)境要求及試驗(yàn)方法GB17681危險(xiǎn)化學(xué)品重大危險(xiǎn)源安全監(jiān)控技術(shù)規(guī)范GB/Z35959-2018液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用分析方法通則WS/T415無(wú)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)時(shí)的臨床檢驗(yàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)YY/T1740.1醫(yī)用質(zhì)譜儀第1部分：液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀JJF1317液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范T/CITS233液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用用于脂溶性維生素檢測(cè)通用技術(shù)要求3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用liquidchromatography-massspectrometry;LC-MS用作分離功能的液相色譜與具有定性定量功能的質(zhì)譜實(shí)現(xiàn)在線相聯(lián)的一種分析技術(shù)。4基本要求4.1.1醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室(以下簡(jiǎn)稱(chēng)實(shí)驗(yàn)室)內(nèi)部應(yīng)明確各崗位人員的職責(zé)和工作流程，建立培訓(xùn)計(jì)劃和考核機(jī)制，并保存相應(yīng)記錄。應(yīng)按照培訓(xùn)考核的項(xiàng)目種類(lèi)和儀器類(lèi)型授權(quán)上崗。4.1.2實(shí)驗(yàn)室技術(shù)負(fù)責(zé)人應(yīng)具備色譜、質(zhì)譜理論知識(shí)、實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)及組織協(xié)調(diào)能力，應(yīng)根據(jù)相關(guān)規(guī)定和實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況建立和制定質(zhì)量管理體系及管理規(guī)范、實(shí)驗(yàn)室各類(lèi)制度等。4.1.3實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員及崗位要求如下：a)具備臨床檢驗(yàn)、分析化學(xué)、藥物分析、生物化學(xué)或質(zhì)譜相關(guān)教育背景，完成相關(guān)崗前培訓(xùn)及實(shí)操考核；b)崗位應(yīng)相對(duì)固定，如需輪崗，宜同一崗位在崗時(shí)間不少于半年；4c)離崗半年應(yīng)再次進(jìn)行操作培訓(xùn)及考核；d)離崗超過(guò)一年應(yīng)經(jīng)過(guò)再次理論培訓(xùn)、操作培訓(xùn)及考核。4.1.4結(jié)果報(bào)告審核人員應(yīng)經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的臨床檢驗(yàn)或藥學(xué)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，具備質(zhì)譜分析相關(guān)知識(shí)，并通過(guò)國(guó)家規(guī)定的檢驗(yàn)人員技能考試。4.2實(shí)驗(yàn)室環(huán)境實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件應(yīng)符合GB/T14710的相關(guān)規(guī)定，同時(shí)滿足以下要求：a)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)儀器型號(hào)和配套設(shè)備提供足夠的空間；b)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔、少塵，必要時(shí)配備可凈化實(shí)驗(yàn)室空氣的硬件設(shè)施；應(yīng)遠(yuǎn)擾因素；c)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備良好的通風(fēng)系統(tǒng)，分析區(qū)域應(yīng)有獨(dú)立的排風(fēng)系統(tǒng)；d)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)有穩(wěn)定的溫度和濕度控制；質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合YY/T1740.1的規(guī)定，環(huán)境溫度宜控制在15℃~25℃,相對(duì)濕度控制在40%～60%;溫濕度條件與制造商標(biāo)稱(chēng)的條件不一致時(shí)，以產(chǎn)品規(guī)定的條件為準(zhǔn)；特殊區(qū)域(如恒溫室)的溫度和濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行精確控制；e)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有適配的供電設(shè)施，包括不間斷電源等。4.3.1液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀應(yīng)符合YY/T1740.1的要求，并按照J(rèn)JF1317校準(zhǔn)。4.3.2液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀配置及安裝應(yīng)符合GB/Z35959的規(guī)定。4.4試劑和材料a)實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。b)應(yīng)選用分析純或更高純度的試劑，并標(biāo)明生產(chǎn)商和生產(chǎn)日明文件。使用前應(yīng)檢查試劑的質(zhì)量。c)易受潮或氧化的試劑，應(yīng)在干燥器中儲(chǔ)存。d)危險(xiǎn)化學(xué)品應(yīng)安置在?；饭駜?nèi)，符合GB17681的規(guī)定。e)標(biāo)準(zhǔn)品宜優(yōu)先使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，如無(wú)法獲得，應(yīng)質(zhì)，并附有量值溯源報(bào)告。g)質(zhì)控品宜優(yōu)先選擇商品化的質(zhì)控品，如無(wú)法獲得，可自行配制。h)關(guān)鍵耗材(如色譜柱、沉淀板、固相萃取板、液固萃取板等)應(yīng)根據(jù)分析方法的要求選擇合適的品牌和規(guī)格，更換品牌或者批號(hào)時(shí)應(yīng)進(jìn)行性能驗(yàn)證。i)普通耗材(離心管、收集板等)應(yīng)選擇對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程和實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)干擾、無(wú)污染、無(wú)吸附性的材j)自配試劑應(yīng)充分驗(yàn)證其與預(yù)開(kāi)展氨基酸檢測(cè)的儀器的系統(tǒng)適配性。方法學(xué)評(píng)價(jià)的數(shù)床需求。實(shí)驗(yàn)室自配試劑/商品化試劑盒投入使用前應(yīng)完成方法學(xué)確認(rèn)或驗(yàn)證(包括正確度、精密度、線性范圍、定量下限等),應(yīng)符合T/CITS233的規(guī)定。5分析方法5.1樣品采集及處理采集標(biāo)本。55.1.2采血樣時(shí)首選乙二胺四乙酸鹽(ethylenediaminetetraaceticacid,EDTA)或肝素抗凝管，樣品采集后宜立即放置在冷藏環(huán)境(2℃~8℃),并在4h以?xún)?nèi)離心分離血漿。血漿樣品如不及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)分裝在凍存管中于-20℃冷凍，宜在14d內(nèi)完成檢測(cè)。樣品短期儲(chǔ)存期間宜避免光照和高溫。樣品在運(yùn)輸過(guò)程中宜低溫保存，可使用保溫箱或冰袋等設(shè)備。5.1.3尿液采集宜使用晨尿，使用無(wú)添加的尿液采集管采集尿樣后，宜在2h內(nèi)送檢。尿液樣品如不及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)分裝在凍存管中于-20℃冷凍，宜在7d內(nèi)完成檢測(cè)。樣品短期儲(chǔ)存期間宜避免光照和高溫。樣品在運(yùn)輸過(guò)程中宜低溫保存，可使用保溫箱或冰袋等設(shè)備。5.1.4樣品處理流程應(yīng)按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定的方法或自建方法進(jìn)行，正式使用前均應(yīng)通過(guò)方法學(xué)評(píng)價(jià)，并建立樣品處理相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程或操作手冊(cè)。5.2.1應(yīng)選擇適用于氨基酸檢測(cè)的色譜柱。柱長(zhǎng)、內(nèi)徑及填料粒徑應(yīng)根據(jù)具體氨基酸種類(lèi)和分離度進(jìn)行選擇。5.2.2應(yīng)使用適宜的流動(dòng)相系統(tǒng)，如無(wú)機(jī)溶液和有機(jī)溶劑的混合物，根據(jù)氨基酸的極性和電離特性確定比例和pH值。5.2.3應(yīng)根據(jù)靈敏度、分離度等要求選擇合適的進(jìn)樣量(一般控制在1μL～20μL)、流速(通常范圍為0.2πL/min~1.0πL/min)以及柱溫(通常柱溫設(shè)定為20℃~40℃)。5.2.4商品化試劑或自配試劑所規(guī)定的色譜柱及色譜條件，經(jīng)過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證(確認(rèn))后，不應(yīng)隨意調(diào)5.3.1應(yīng)根據(jù)氨基酸的性質(zhì)和檢測(cè)需求選擇正離子或負(fù)離子檢測(cè)模式，常用的離子源包括電噴霧離子5.3.2應(yīng)根據(jù)氨基酸檢測(cè)需求選擇合適的質(zhì)譜模式，如全掃描、選擇離子監(jiān)測(cè)、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)等。5.4數(shù)據(jù)處理5.4.2可通過(guò)比對(duì)已知標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖和色譜保留時(shí)間進(jìn)行定性分析。根據(jù)峰面積或峰高與氨基酸濃度的線性關(guān)系進(jìn)行定量分析。宜優(yōu)先采用內(nèi)標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)品選擇同位素標(biāo)記的對(duì)應(yīng)氨基酸。5.4.3可使用經(jīng)驗(yàn)證的自動(dòng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)輔助數(shù)據(jù)處理和報(bào)告的解讀。6質(zhì)量控制6.1室內(nèi)質(zhì)控6.1.1.1質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣品相同或盡可能接近。6.1.1.2質(zhì)控品基質(zhì)應(yīng)具有良好的穩(wěn)定性，存儲(chǔ)或使用過(guò)程中不應(yīng)發(fā)生顯著變化。6.1.2.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定室內(nèi)質(zhì)控品的保存條件和穩(wěn)定性，以下信息應(yīng)文件化：b)標(biāo)定的濃度；6.1.2.2如果質(zhì)控品有凍融循環(huán)，應(yīng)測(cè)定多次凍融循環(huán)后的影響程度，并評(píng)價(jià)樣品準(zhǔn)備和分析的時(shí)間6.1.2.3應(yīng)設(shè)計(jì)評(píng)估室內(nèi)質(zhì)控品的凍融穩(wěn)定性和短期、長(zhǎng)期凍存穩(wěn)定性。質(zhì)控品的處理過(guò)程(如解凍過(guò)程)應(yīng)包括在實(shí)驗(yàn)室程序中。66.1.2.4如果質(zhì)控品制造商提供足夠的關(guān)于穩(wěn)定性要求驗(yàn)證的數(shù)據(jù)，應(yīng)嚴(yán)格遵循制造商提供的保存信息。如果實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品化質(zhì)控品做出改變(如稀釋制備低濃度樣品)或保存條件與制造商要求不符，應(yīng)確認(rèn)其保存要求和穩(wěn)定性。6.1.3.1質(zhì)控品應(yīng)包含所有待測(cè)氨基酸，通常有2個(gè)～3個(gè)濃度，且能覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平和大多數(shù)正6.1.3.2應(yīng)分別在每批次運(yùn)行的起始、結(jié)束處檢測(cè)一套質(zhì)控品。在持續(xù)檢測(cè)狀態(tài)下，應(yīng)按固定頻率分析質(zhì)控品，如每隔50個(gè)樣品檢測(cè)1套質(zhì)控品。若方法較穩(wěn)定可用最低分析頻率(每24h至少檢測(cè)2套質(zhì)控品)。6.1.4判定規(guī)則6.1.4.1應(yīng)通過(guò)質(zhì)控圖及質(zhì)控規(guī)則對(duì)質(zhì)控結(jié)果進(jìn)行分析，識(shí)別可能存在的系統(tǒng)偏倚或趨勢(shì)。當(dāng)質(zhì)控出現(xiàn)失控現(xiàn)象時(shí)應(yīng)查找原因，評(píng)估對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，必要時(shí)重新檢測(cè)樣品。6.1.4.2每月至少統(tǒng)計(jì)1次室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，對(duì)出現(xiàn)的明顯偏差或趨勢(shì)應(yīng)分析原因，并采取相應(yīng)的糾正措施。6.2室間質(zhì)評(píng)6.2.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃。如檢測(cè)項(xiàng)目無(wú)室間質(zhì)評(píng)樣品提供者，可通過(guò)與其他實(shí)驗(yàn)室比對(duì)的方式確定檢驗(yàn)結(jié)果的可接受性，宜參考WS/T415或采用其他替代評(píng)估方式(如檢測(cè)參考物質(zhì)等)。6.2.2室間質(zhì)評(píng)樣品應(yīng)按臨床樣品同樣的操作流程進(jìn)行檢測(cè)。6.2.3如室間質(zhì)評(píng)結(jié)果不合格，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)評(píng)估檢測(cè)過(guò)程，查找原因并予以糾正。7.1結(jié)果報(bào)告應(yīng)包括報(bào)告標(biāo)題、樣品信息、方法描述、結(jié)果數(shù)據(jù)、參考范圍等內(nèi)容。7[1]