2025年臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案(三)一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.檢測抗核抗體（ANA）最常用的方法是A.間接免疫熒光法（IIF）B.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）C.免疫印跡法（IBT）D.化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）答案：A解析：間接免疫熒光法因能觀察熒光核型（如均質(zhì)型、斑點(diǎn)型等），是ANA檢測的經(jīng)典金標(biāo)準(zhǔn)，其他方法多作為補(bǔ)充。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測T細(xì)胞亞群時(shí)，CD3+CD4+細(xì)胞代表的是A.細(xì)胞毒性T細(xì)胞B.輔助性T細(xì)胞C.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞D.記憶性T細(xì)胞答案：B解析：CD3是T細(xì)胞共有的表面標(biāo)志，CD4是輔助性T細(xì)胞（Th）的特征性標(biāo)志，CD8則為細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Tc）標(biāo)志。3.雙抗體夾心法ELISA檢測抗原時(shí)，若包被抗體為鼠源性，酶標(biāo)抗體應(yīng)為A.鼠源性抗原特異性抗體B.兔抗鼠IgG抗體C.人源性抗原特異性抗體D.生物素標(biāo)記的抗原特異性抗體答案：A解析：雙抗體夾心法需兩種針對(duì)抗原不同表位的抗體，包被抗體和酶標(biāo)抗體均為抗原特異性抗體，通常來自不同種屬以避免交叉反應(yīng)，但本題未強(qiáng)調(diào)種屬差異，故選擇同抗原特異性抗體。4.血清補(bǔ)體C3降低最常見于A.系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）活動(dòng)期B.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）穩(wěn)定期C.過敏性紫癜D.多發(fā)性骨髓瘤答案：A解析：SLE活動(dòng)期因免疫復(fù)合物形成激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，導(dǎo)致C3消耗性降低；RA穩(wěn)定期補(bǔ)體多正常；過敏性紫癜主要涉及IgA和血管炎，補(bǔ)體變化不顯著；多發(fā)性骨髓瘤為漿細(xì)胞病，補(bǔ)體水平多正常或升高。5.體外過敏原篩查的主要檢測指標(biāo)是A.血清總IgEB.血清特異性IgE（sIgE）C.嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)D.皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)答案：B解析：總IgE升高可見于寄生蟲感染、過敏性疾病等，特異性IgE（sIgE）是過敏原篩查的核心指標(biāo)，直接反映對(duì)特定變應(yīng)原的致敏狀態(tài)。6.免疫固定電泳（IFE）主要用于檢測A.單克隆免疫球蛋白（M蛋白）B.多克隆免疫球蛋白C.C反應(yīng)蛋白（CRP）D.降鈣素原（PCT）答案：A解析：IFE通過電泳分離蛋白后，用特異性抗血清固定目標(biāo)蛋白，可清晰顯示單克隆條帶，是M蛋白檢測的金標(biāo)準(zhǔn)。7.抗雙鏈DNA抗體（抗dsDNA）對(duì)下列哪種疾病診斷特異性最高A.干燥綜合征（SS）B.系統(tǒng)性硬化癥（SSc）C.SLED.混合性結(jié)締組織?。∕CTD）答案：C解析：抗dsDNA抗體是SLE的特異性標(biāo)志抗體，與疾病活動(dòng)度及腎損傷密切相關(guān)，其他自身免疫病中極少陽性。8.免疫比濁法測定免疫球蛋白時(shí)，最易受哪種因素干擾A.樣本溶血B.樣本脂血C.樣本黃疸D.樣本放置時(shí)間過長答案：B解析：脂血樣本中的乳糜顆粒會(huì)散射光線，導(dǎo)致濁度測定結(jié)果假性升高；溶血主要影響血紅蛋白相關(guān)檢測，黃疸影響膽紅素，樣本放置過長可能導(dǎo)致蛋白降解，但免疫比濁法對(duì)脂血更敏感。9.結(jié)核感染T細(xì)胞檢測（T-SPOT.TB）的原理是檢測A.結(jié)核分枝桿菌抗體B.結(jié)核分枝桿菌抗原C.效應(yīng)T細(xì)胞分泌的IFN-γD.自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）活性答案：C解析：T-SPOT.TB通過分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），用結(jié)核特異性抗原（ESAT-6、CFP-10）刺激，檢測活化的效應(yīng)T細(xì)胞分泌的γ干擾素（IFN-γ），從而判斷是否存在結(jié)核感染。10.診斷新生兒溶血?。℉DN）的關(guān)鍵檢測指標(biāo)是A.母親血清中IgG型血型抗體效價(jià)B.新生兒血清總膽紅素C.新生兒直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）D.新生兒血紅蛋白水平答案：C解析：DAT陽性提示新生兒紅細(xì)胞被母體IgG抗體致敏，是HDN的確診依據(jù)；母親抗體效價(jià)可預(yù)測風(fēng)險(xiǎn)，膽紅素和血紅蛋白反映病情嚴(yán)重程度，但非確診指標(biāo)。11.以下哪種自身抗體與原發(fā)性膽汁性膽管炎（PBC）高度相關(guān)A.抗線粒體抗體（AMA）M2型B.抗平滑肌抗體（ASMA）C.抗肝腎微粒體抗體（LKM-1）D.抗核小體抗體（AnuA）答案：A解析：AMA-M2是PBC的特異性抗體，陽性率＞90%；ASMA多見于自身免疫性肝炎（AIH），LKM-1是AIH-2型標(biāo)志，AnuA與SLE相關(guān)。12.流式細(xì)胞術(shù)檢測白血病免疫表型時(shí)，CD34陽性提示細(xì)胞為A.成熟T細(xì)胞B.造血干細(xì)胞/祖細(xì)胞C.成熟B細(xì)胞D.單核細(xì)胞答案：B解析：CD34是造血干/祖細(xì)胞的表面標(biāo)志，常見于急性髓系白血?。ˋML）和部分急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）的原始細(xì)胞。13.化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）中，常用的發(fā)光底物是A.鄰苯二胺（OPD）B.魯米諾（Luminol）C.四甲基聯(lián)苯胺（TMB）D.考馬斯亮藍(lán)答案：B解析：魯米諾及其衍生物是CLIA中最常用的化學(xué)發(fā)光底物，OPD和TMB是ELISA的顯色底物，考馬斯亮藍(lán)用于蛋白染色。14.檢測類風(fēng)濕因子（RF）時(shí)，最易出現(xiàn)假陽性的樣本是A.健康老年人血清B.活動(dòng)性結(jié)核患者血清C.新生兒臍帶血D.高脂血癥患者血清答案：A解析：健康老年人因免疫功能紊亂，可能出現(xiàn)低滴度RF；結(jié)核患者RF陽性率較低，新生兒無IgM型RF，高脂血癥主要影響濁度法但非特異性假陽性。15.免疫熒光技術(shù)中，“亮視野”觀察適用于A.熒光顯微鏡B.普通光學(xué)顯微鏡C.共聚焦顯微鏡D.電子顯微鏡答案：B解析：免疫熒光需在熒光顯微鏡下觀察熒光信號(hào)，普通光學(xué)顯微鏡為亮視野，用于觀察細(xì)胞形態(tài)或非熒光染色樣本。二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共15分，至少2個(gè)正確選項(xiàng)）1.以下屬于自身免疫性肝病相關(guān)抗體的有A.抗核抗體（ANA）B.抗線粒體抗體（AMA）C.抗平滑肌抗體（ASMA）D.抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）答案：ABCD解析：AIH可出現(xiàn)ANA、ASMA、ANCA（p-ANCA）；PBC以AMA為主，也可合并ANA；原發(fā)性硬化性膽管炎（PSC）常伴p-ANCA。2.流式細(xì)胞術(shù)可用于檢測A.細(xì)胞表面抗原B.細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子C.細(xì)胞周期D.血小板活化標(biāo)志物答案：ABCD解析：流式細(xì)胞術(shù)通過熒光標(biāo)記抗體可檢測表面抗原（如CD3、CD4）、胞內(nèi)因子（如IL-2、IFN-γ），通過DNA染料（PI）分析細(xì)胞周期，也可檢測血小板表面P-選擇素（CD62P）等活化標(biāo)志物。3.間接免疫熒光法（IIF）檢測ANA時(shí)，常見的核型包括A.均質(zhì)型B.斑點(diǎn)型C.核仁型D.周邊型（核膜型）答案：ABCD解析：IIF-ANA的典型核型包括均質(zhì)型（組蛋白）、斑點(diǎn)型（ENA）、核仁型（rRNA）、周邊型（DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ）等，不同核型提示不同自身抗體及疾病關(guān)聯(lián)。4.影響免疫組化染色結(jié)果的因素包括A.組織固定方法B.抗體濃度C.抗原修復(fù)方式D.顯色時(shí)間答案：ABCD解析：組織固定不當(dāng)（如甲醛過度固定）可能掩蓋抗原；抗體濃度過高易非特異性染色，過低則信號(hào)弱；抗原修復(fù)（熱修復(fù)、酶消化）是暴露抗原的關(guān)鍵步驟；顯色時(shí)間過長導(dǎo)致背景過深，過短則信號(hào)弱。5.腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測的意義在于A.提高診斷靈敏度B.提高診斷特異性C.監(jiān)測治療效果D.評(píng)估預(yù)后答案：ABCD解析：單一腫瘤標(biāo)志物靈敏度或特異性有限（如CEA在結(jié)直腸癌中的陽性率約70%），聯(lián)合檢測（如CEA+CA19-9+CA72-4）可提高檢出率；不同標(biāo)志物升高模式（如AFP+PIVKA-Ⅱ?qū)Ω伟┛蓽p少假陽性；治療后標(biāo)志物下降提示有效，持續(xù)升高可能復(fù)發(fā)；某些標(biāo)志物（如CA125）水平與卵巢癌分期相關(guān)，可評(píng)估預(yù)后。三、簡答題（每題8分，共40分）1.簡述流式細(xì)胞術(shù)檢測T細(xì)胞亞群的原理及臨床意義。答：原理：采用熒光素標(biāo)記的抗CD3、CD4、CD8單克隆抗體，與外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）表面相應(yīng)抗原結(jié)合；通過流式細(xì)胞儀激光激發(fā)熒光，檢測細(xì)胞散射光（反映細(xì)胞大小、顆粒度）和熒光信號(hào)（反映抗原表達(dá)強(qiáng)度）；經(jīng)軟件分析，計(jì)算CD3+（總T細(xì)胞）、CD3+CD4+（輔助性T細(xì)胞，Th）、CD3+CD8+（細(xì)胞毒性T細(xì)胞，Tc）的比例及絕對(duì)計(jì)數(shù)。臨床意義：①免疫缺陷?。喝绨滩。ˋIDS）患者CD4+T細(xì)胞顯著減少（＜200/μl），CD4/CD8比值倒置（＜1）；②自身免疫?。篠LE活動(dòng)期CD4+T細(xì)胞功能異常，RA患者CD8+T細(xì)胞可能減少；③器官移植：監(jiān)測CD4/CD8比值可評(píng)估排斥反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)（比值升高提示排斥可能）；④腫瘤：惡性腫瘤患者常伴CD4+T細(xì)胞減少，提示細(xì)胞免疫功能低下。2.簡述間接免疫熒光法（IIF）檢測抗核抗體（ANA）的操作步驟及結(jié)果判讀要點(diǎn)。答：操作步驟：①制備底物片（常用Hep-2細(xì)胞或鼠肝切片）；②加待測血清（1:100稀釋），37℃孵育30分鐘，洗片去除未結(jié)合抗體；③加熒光素（如FITC）標(biāo)記的抗人IgG二抗，37℃孵育30分鐘，洗片；④熒光顯微鏡下觀察，記錄核型及滴度（最高陽性稀釋度）。結(jié)果判讀要點(diǎn)：①陽性標(biāo)準(zhǔn)：Hep-2細(xì)胞出現(xiàn)典型核熒光（如均質(zhì)型、斑點(diǎn)型等），鼠肝片出現(xiàn)核熒光；②滴度意義：低滴度（＜1:100）可見于健康老年人或感染，高滴度（≥1:320）提示自身免疫病可能；③核型分析：均質(zhì)型常見于SLE（抗組蛋白抗體），斑點(diǎn)型見于混合性結(jié)締組織?。笶NA抗體），核仁型多見于系統(tǒng)性硬化癥（抗Scl-70抗體），周邊型與抗dsDNA抗體相關(guān)（SLE活動(dòng)期）。3.闡述ELISA雙抗體夾心法的原理及關(guān)鍵影響因素。答：原理：包被板孔固相化抗原特異性捕獲抗體（Ab1），加入待測樣本，樣本中抗原（Ag）與Ab1結(jié)合；洗去未結(jié)合成分后，加入酶標(biāo)記的另一抗原特異性檢測抗體（Ab2），形成“Ab1-Ag-Ab2-酶”復(fù)合物；加入底物（如TMB），酶催化底物顯色，吸光度（OD值）與抗原濃度成正比。關(guān)鍵影響因素：①抗體質(zhì)量：Ab1和Ab2需針對(duì)抗原不同表位，避免競爭結(jié)合；②包被條件：抗體濃度、pH（常用碳酸鹽緩沖液，pH9.6）、包被時(shí)間（4℃過夜或37℃2小時(shí)）影響固相化效率；③封閉效果：未封閉的板孔易非特異性結(jié)合，常用牛血清白蛋白（BSA）或脫脂奶粉封閉；④溫育時(shí)間與溫度：37℃孵育可加速反應(yīng)，但時(shí)間過長（＞1小時(shí)）可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合；⑤洗板徹底性：殘留的未結(jié)合成分會(huì)增加背景值；⑥底物穩(wěn)定性：TMB需避光保存，顯色時(shí)間（15-30分鐘）需嚴(yán)格控制，避免過顯色。4.比較免疫固定電泳（IFE）與血清蛋白電泳（SPE）的區(qū)別，并說明其在多發(fā)性骨髓瘤（MM）診斷中的應(yīng)用。答：區(qū)別：①原理：SPE通過電場分離不同電荷和分子量的蛋白質(zhì)，形成白蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白區(qū)帶；IFE在SPE基礎(chǔ)上，于各泳道加入特異性抗血清（如抗IgG、IgA、IgM、κ、λ），固定目標(biāo)蛋白，未結(jié)合的蛋白被洗去，僅保留抗原-抗體復(fù)合物條帶。②分辨率：SPE僅能顯示γ區(qū)增寬（“M峰”），IFE可明確M蛋白的類型（如IgGκ、IgAλ）及克隆性。③靈敏度：IFE可檢測到0.5g/L的M蛋白，SPE需＞2g/L才能顯示明顯峰。在MM診斷中的應(yīng)用：①確診M蛋白：IFE是MM診斷的必需檢測，可明確M蛋白的重鏈（IgG/IgA/IgM）和輕鏈（κ/λ）類型；②鑒別診斷：SPE顯示γ區(qū)增寬時(shí)，IFE可區(qū)分單克隆（MM）與多克?。匝装Y、肝?。?；③療效監(jiān)測：治療后IFE轉(zhuǎn)陰提示M蛋白消失，持續(xù)陽性提示疾病殘留或復(fù)發(fā)。5.簡述血清補(bǔ)體C3、C4檢測的臨床意義及常見異常情況。答：臨床意義：補(bǔ)體是固有免疫的核心成分，參與免疫防御、免疫清除（如免疫復(fù)合物）和炎癥反應(yīng)，C3、C4是經(jīng)典途徑（CP）和旁路途徑（AP）的關(guān)鍵成分，其水平反映補(bǔ)體激活或消耗狀態(tài)。常見異常情況：①降低：a.消耗增加：SLE活動(dòng)期（免疫復(fù)合物激活CP，C3、C4均降低）、鏈球菌感染后腎小球腎炎（AP激活，C3降低，C4正常）；b.合成減少：肝硬化（肝臟合成補(bǔ)體能力下降，C3、C4均降低）；c.先天性缺陷：C3缺陷易反復(fù)化膿性感染，C4缺陷與SLE樣疾病相關(guān)。②升高：急性炎癥（如細(xì)菌感染、組織損傷）時(shí)，補(bǔ)體作為急性期蛋白合成增加（C3、C4均升高）；某些惡性腫瘤（如淋巴瘤）也可見補(bǔ)體水平升高。四、案例分析題（共15分）患者，女，32歲，因“反復(fù)面部紅斑、關(guān)節(jié)痛3月，加重伴泡沫尿1周”就診。查體：面部蝶形紅斑，雙腕關(guān)節(jié)壓痛，雙下肢輕度水腫。實(shí)驗(yàn)室檢查：尿蛋白（+++），尿紅細(xì)胞15-20/HP；血常規(guī)：Hb98g/L（正常115-150g/L），WBC3.2×10?/L（正常3.5-9.5×10?/L）；腎功能：血肌酐110μmol/L（正常45-84μmol/L）；免疫學(xué)檢測：ANA（+）1:1000（均質(zhì)型），抗dsDNA抗體（+）65IU/ml（正常＜20IU/ml），補(bǔ)體C30.4g/L（正常0.8-1.5g/L），C40.1g/L（正常0.1-0.4g/L），IgG18g/L（正常7-16g/L）。問題：（1）該患者最可能的診斷是什么？依據(jù)是什么？（5分）（2）解釋補(bǔ)體C3、C4降低的機(jī)制。（5分）（3）抗dsDNA抗體在此病中的臨床意義。（5分）答案：（1）最可能診斷：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）活動(dòng)期，合并狼瘡性腎炎（LN）。依據(jù)：①臨