演講人：日期:醫(yī)院感染采樣方法CATALOGUE目錄01空氣微生物采樣02物體表面采樣03醫(yī)務(wù)人員手部采樣04醫(yī)療用水采樣05侵入性器械采樣06樣本處理與送檢01空氣微生物采樣沉降平板法操作流程采樣前準(zhǔn)備選擇適宜的培養(yǎng)基平板（如血瓊脂平板或沙氏培養(yǎng)基），確保平板表面干燥無污染，并在平皿底部標(biāo)記采樣時(shí)間、地點(diǎn)及編號(hào)。采樣位置確定根據(jù)監(jiān)測(cè)需求選擇具有代表性的采樣點(diǎn)，通常位于離地面1.2-1.5米高度，避免通風(fēng)口或人員頻繁活動(dòng)區(qū)域，每個(gè)采樣點(diǎn)至少放置3個(gè)平板。暴露時(shí)間控制平板暴露時(shí)間一般為5-30分鐘，具體時(shí)間需根據(jù)環(huán)境潔凈度調(diào)整，潔凈區(qū)域可延長(zhǎng)至30分鐘，污染高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域縮短至5-10分鐘。采樣后處理暴露結(jié)束后立即蓋好平皿，倒置放入恒溫培養(yǎng)箱（細(xì)菌37℃培養(yǎng)48小時(shí)，真菌25℃培養(yǎng)5-7天），避免震動(dòng)和二次污染。撞擊式采樣器使用規(guī)范設(shè)備校準(zhǔn)與調(diào)試使用前需用流量計(jì)校準(zhǔn)采樣器進(jìn)氣流量（通常為28.3L/min），檢查撞擊頭是否清潔無殘留物，并確保電池電量充足或電源連接穩(wěn)定。01采樣參數(shù)設(shè)置根據(jù)ISO14698標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定采樣時(shí)間（常規(guī)為1-5分鐘），采樣高度保持在呼吸帶水平（1.5米），每個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)應(yīng)重復(fù)采樣3次以提高數(shù)據(jù)可靠性。培養(yǎng)基選擇與裝載選用90mm直徑的接觸皿裝載胰蛋白酶大豆瓊脂（TSA）或麥康凱瓊脂，裝載時(shí)確保瓊脂表面平整無氣泡，采樣后立即密封防止脫水。數(shù)據(jù)記錄與分析詳細(xì)記錄采樣時(shí)間、地點(diǎn)、環(huán)境溫濕度及人員活動(dòng)情況，菌落計(jì)數(shù)時(shí)采用專業(yè)菌落計(jì)數(shù)器，結(jié)果按CFU/m3公式換算并評(píng)估生物負(fù)荷等級(jí)。020304氣溶膠采樣注意事項(xiàng)采樣環(huán)境控制避免在極端溫濕度條件下采樣（理想范圍20-25℃，RH40-60%），采樣期間關(guān)閉門窗保持空氣靜止?fàn)顟B(tài)，人員需佩戴口罩并減少走動(dòng)。生物安全防護(hù)在結(jié)核病房等高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域采樣時(shí)，操作人員應(yīng)穿戴N95口罩、護(hù)目鏡及防護(hù)服，采樣器需配備HEPA過濾器防止病原體外泄。交叉污染預(yù)防不同采樣點(diǎn)之間需更換無菌采樣頭或進(jìn)行酒精火焰消毒，采樣器表面用75%乙醇擦拭消毒，廢棄培養(yǎng)基需高壓滅菌后處理。質(zhì)量控制措施每批次采樣需包含陰性對(duì)照（未暴露平板）和陽性對(duì)照（接種標(biāo)準(zhǔn)菌株平板），定期對(duì)采樣器進(jìn)行微生物回收率驗(yàn)證（應(yīng)≥80%）。02物體表面采樣棉拭子涂抹采樣技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化操作流程采用無菌棉拭子蘸取適量生理鹽水或中和劑，在采樣區(qū)域以“Z”字形或“井”字形均勻涂抹，確保覆蓋面積符合規(guī)范要求，避免交叉污染。樣本保存與運(yùn)輸采樣后立即將棉拭子放入含緩沖液的試管中，低溫保存并盡快送檢，防止微生物死亡或繁殖影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。質(zhì)量控制要點(diǎn)需記錄采樣時(shí)間、位置及環(huán)境條件，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照以排除操作污染，確保數(shù)據(jù)可靠性。接觸碟培養(yǎng)基應(yīng)用培養(yǎng)基選擇原則根據(jù)目標(biāo)微生物類型選用適宜的接觸碟（如TSA用于需氧菌計(jì)數(shù)，SDA用于真菌檢測(cè)），確保培養(yǎng)基活性及無菌狀態(tài)。培養(yǎng)條件優(yōu)化采樣后立即密封接觸碟，置于恒溫培養(yǎng)箱中，按標(biāo)準(zhǔn)溫度和時(shí)間培養(yǎng)（如細(xì)菌37℃培養(yǎng)48小時(shí)），避免環(huán)境干擾。規(guī)范壓貼操作將接觸碟輕壓于物體表面10-15秒，避免滑動(dòng)或傾斜，壓力需均勻以保證微生物有效轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基。高頻接觸區(qū)域選擇標(biāo)準(zhǔn)重點(diǎn)采樣門把手、床欄、呼叫按鈕、醫(yī)療設(shè)備按鍵等患者和醫(yī)務(wù)人員頻繁接觸的表面，這些區(qū)域微生物負(fù)荷通常較高。感染風(fēng)險(xiǎn)優(yōu)先級(jí)空間分布代表性動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)需求需覆蓋不同功能區(qū)域（如病房、護(hù)士站、治療室），并兼顧水平與垂直表面（如桌面、墻面），以全面評(píng)估污染狀況。針對(duì)ICU、手術(shù)室等高危科室增加采樣頻次，結(jié)合醫(yī)院感染暴發(fā)調(diào)查靈活調(diào)整采樣點(diǎn)位。03醫(yī)務(wù)人員手部采樣手套印跡法實(shí)施步驟無菌手套穿戴與處理采樣前需佩戴無菌手套，確保手套內(nèi)外表面無污染，采樣時(shí)用無菌生理鹽水濕潤(rùn)手套內(nèi)壁以增強(qiáng)細(xì)菌吸附效果。規(guī)范按壓操作樣本培養(yǎng)與記錄將戴手套的手掌均勻按壓在瓊脂培養(yǎng)基表面，施加恒定壓力并保持?jǐn)?shù)秒，確保指尖、指縫及掌心區(qū)域充分接觸培養(yǎng)基。按壓后立即將培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，記錄采樣部位、壓力參數(shù)及環(huán)境溫濕度等關(guān)鍵數(shù)據(jù)以保障結(jié)果準(zhǔn)確性。123采用含中和劑的無菌采樣液，揉搓時(shí)五指并攏浸入液體，通過反復(fù)旋轉(zhuǎn)摩擦確保指縫、甲緣等隱蔽區(qū)域細(xì)菌充分釋放。五指揉搓采樣方案采樣液配制與使用遵循“掌心對(duì)掌心→手指交錯(cuò)→拇指旋轉(zhuǎn)”的步驟，持續(xù)揉搓至少1分鐘，確保動(dòng)作覆蓋手部所有解剖學(xué)關(guān)鍵部位。標(biāo)準(zhǔn)化揉搓流程將采樣液倒入無菌離心管，經(jīng)渦旋震蕩后取上清液接種培養(yǎng)，避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致微生物損失或污染。樣本轉(zhuǎn)移與處理消毒效果評(píng)估指標(biāo)細(xì)菌總數(shù)限值根據(jù)醫(yī)療規(guī)范要求，醫(yī)務(wù)人員手部細(xì)菌總數(shù)需低于特定閾值，重癥監(jiān)護(hù)區(qū)域標(biāo)準(zhǔn)更為嚴(yán)格，需定期監(jiān)測(cè)達(dá)標(biāo)率。致病菌檢出率重點(diǎn)監(jiān)測(cè)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等醫(yī)院常見致病菌，單次采樣中檢出即視為消毒不合格，需啟動(dòng)復(fù)測(cè)流程。消毒劑殘留檢測(cè)通過高效液相色譜法分析手部消毒劑殘留量，確保其在安全范圍內(nèi)且不影響后續(xù)微生物培養(yǎng)結(jié)果判定。04醫(yī)療用水采樣透析液采集規(guī)范采樣前準(zhǔn)備使用無菌容器采集透析液，確保采樣人員穿戴無菌手套和口罩，避免人為污染。采樣點(diǎn)應(yīng)覆蓋透析液入口、出口及循環(huán)管路關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)。采樣量及時(shí)機(jī)每次采集至少100mL透析液，采樣時(shí)間選擇在透析治療開始后30分鐘內(nèi)或治療中期，以反映實(shí)際使用狀態(tài)下的微生物負(fù)荷。運(yùn)輸與保存樣本需在4℃條件下冷藏運(yùn)輸，2小時(shí)內(nèi)送檢，若延遲需記錄時(shí)間并說明原因，避免樣本變質(zhì)影響檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)血液透析相關(guān)感染控制規(guī)范》，透析液細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100CFU/mL，內(nèi)毒素含量≤0.25EU/mL。滅菌用水檢測(cè)流程采樣點(diǎn)選擇無菌操作要求檢測(cè)項(xiàng)目與方法結(jié)果判定重點(diǎn)監(jiān)測(cè)滅菌器進(jìn)水口、蒸汽冷凝水出口及儲(chǔ)存罐出水口，確保覆蓋生產(chǎn)、儲(chǔ)存和使用全流程。采樣前用75%酒精擦拭采樣閥，排放初始水流2分鐘后采集，避免管道殘留物干擾檢測(cè)結(jié)果。需進(jìn)行微生物限度檢查（薄膜過濾法）和化學(xué)污染物檢測(cè)（如pH值、重金屬離子），必要時(shí)增加內(nèi)毒素鱟試驗(yàn)。滅菌用水應(yīng)符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，細(xì)菌總數(shù)≤10CFU/100mL，不得檢出致病菌，化學(xué)指標(biāo)需符合醫(yī)用純化水標(biāo)準(zhǔn)。儲(chǔ)水系統(tǒng)污染監(jiān)測(cè)點(diǎn)定期對(duì)醫(yī)院中央供水系統(tǒng)的高位水箱、分支管道末端進(jìn)行采樣，檢測(cè)生物膜形成情況及軍團(tuán)菌污染風(fēng)險(xiǎn)。高位水箱與末端出水口濕化罐用水需每周采樣，牙科綜合治療臺(tái)水路應(yīng)每月檢測(cè)，重點(diǎn)關(guān)注銅綠假單胞菌和分枝桿菌污染。建立水質(zhì)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)，通過季度比對(duì)分析污染趨勢(shì)，對(duì)異常數(shù)據(jù)觸發(fā)預(yù)警機(jī)制并啟動(dòng)管道消毒程序。呼吸機(jī)濕化罐與牙科水路熱水回水管道是軍團(tuán)菌易滋生區(qū)域，需在55℃以上高溫點(diǎn)及常溫使用點(diǎn)同步采樣，對(duì)比溫差對(duì)微生物的影響。熱水系統(tǒng)監(jiān)測(cè)01020403數(shù)據(jù)記錄與趨勢(shì)分析05侵入性器械采樣內(nèi)鏡腔道采樣方法內(nèi)鏡腔道沖洗采樣活檢通道刷檢采樣內(nèi)鏡表面擦拭采樣使用無菌生理鹽水或?qū)Ｓ脹_洗液對(duì)內(nèi)鏡工作腔道進(jìn)行充分沖洗，收集沖洗液并立即送檢，確保樣本不受環(huán)境污染。沖洗時(shí)需控制流速和壓力，避免損傷內(nèi)鏡結(jié)構(gòu)。采用無菌棉拭子對(duì)內(nèi)鏡外表面及操作部件（如按鈕、閥門）進(jìn)行系統(tǒng)擦拭，重點(diǎn)覆蓋高頻接觸區(qū)域。采樣后需將拭子置于無菌轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中，防止樣本干燥或污染。使用一次性無菌細(xì)胞刷深入內(nèi)鏡活檢通道，旋轉(zhuǎn)刷取管壁附著物。刷頭需剪斷至含中和劑的采樣管中，震蕩混勻后送微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行定量培養(yǎng)。導(dǎo)管尖端處理指南導(dǎo)管尖端半定量培養(yǎng)法無菌截取導(dǎo)管尖端5cm段，在血瓊脂平板上滾動(dòng)4次，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)菌落數(shù)。該方法可有效區(qū)分導(dǎo)管定植與污染，菌落數(shù)≥15CFU/平板具有臨床意義。導(dǎo)管尖端超聲裂解法將導(dǎo)管尖端置入含1ml胰蛋白酶大豆肉湯的試管中，超聲處理1分鐘使生物膜分散，取0.1ml接種培養(yǎng)皿。此方法能提高生物膜內(nèi)微生物的檢出率。導(dǎo)管內(nèi)腔沖洗采樣對(duì)于多腔導(dǎo)管，需分別用無菌生理鹽水沖洗各管腔，離心濃縮沖洗液后接種培養(yǎng)。特別要注意三通閥等連接部位的采樣，這些部位易形成微生物蓄積。植入物無菌檢驗(yàn)技術(shù)植入物超聲振蕩法將取出的植入物置于含中和劑的無菌容器中，經(jīng)40kHz超聲振蕩10分鐘，使表面生物膜脫落。取振蕩液進(jìn)行需氧/厭氧培養(yǎng)，該方法對(duì)低毒性生物膜檢出敏感性達(dá)90%以上。植入物表面印跡培養(yǎng)將植入物直接按壓在選擇性培養(yǎng)基表面，適用于檢測(cè)假體關(guān)節(jié)等大型植入物。采用血瓊脂、巧克力瓊脂和厭氧瓊脂三聯(lián)培養(yǎng)，可同步檢出需氧菌和厭氧菌。植入物研磨培養(yǎng)法對(duì)于骨科螺釘?shù)刃⌒椭踩胛?，可用無菌研磨器粉碎后接種于液體培養(yǎng)基。培養(yǎng)過程中需每日觀察渾濁度變化，陽性樣本應(yīng)轉(zhuǎn)種固體培養(yǎng)基進(jìn)行菌種鑒定。06樣本處理與送檢運(yùn)輸介質(zhì)選擇標(biāo)準(zhǔn)維持樣本活性選擇與樣本類型匹配的運(yùn)輸介質(zhì)（如病毒保存液、細(xì)菌轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基），確保微生物在運(yùn)輸過程中保持存活狀態(tài)，避免假陰性結(jié)果。抑制雜菌生長(zhǎng)針對(duì)特定病原體（如厭氧菌、真菌）添加選擇性抑制劑，減少非目標(biāo)微生物干擾，提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。物理穩(wěn)定性要求運(yùn)輸介質(zhì)需具備緩沖能力，防止pH值劇烈波動(dòng)，同時(shí)避免樣本凝固或溶血（如血培養(yǎng)標(biāo)本需使用抗凝劑）。生物安全合規(guī)性運(yùn)輸介質(zhì)容器應(yīng)符合生物安全等級(jí)要求，密封防漏且標(biāo)注生物危害標(biāo)識(shí)，符合《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》。低溫保存時(shí)效控制分級(jí)溫度管理時(shí)效分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)冷鏈監(jiān)控措施樣本分裝原則根據(jù)病原體特性設(shè)定保存溫度（如4℃用于細(xì)菌標(biāo)本，-70℃用于病毒核酸），避免反復(fù)凍融導(dǎo)致樣本降解。明確不同樣本的保存窗口期（如呼吸道標(biāo)本在4℃下不超過72小時(shí)），超時(shí)需重新采樣以確保檢測(cè)有效性。使用溫度記錄儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)運(yùn)輸箱內(nèi)溫度，異常時(shí)啟動(dòng)應(yīng)急預(yù)案（如轉(zhuǎn)移至備用冷藏設(shè)備）。高風(fēng)險(xiǎn)樣本（如高致病性病原體）需分裝至多支凍存管，避免整批樣本因單次檢測(cè)失效而報(bào)廢。實(shí)驗(yàn)室交接登記要點(diǎn)雙人核對(duì)機(jī)制送檢人員與實(shí)