畢業(yè)論文題目不同激素對廣東石斛生根壯苗的影響1．畢業(yè)論文任務(wù)要求：任務(wù)總體要求本實驗探究了不同激素配比對廣東石斛生根壯苗的影響，篩選出適宜廣東石斛生根壯苗的激素濃度配比，為探索有效的廣東石斛快速繁殖技術(shù)，進一步深入研究廣東石斛和規(guī)?；N植提供借鑒。二、論文寫作的具體任務(wù)1.選題綜述廣東石斛產(chǎn)自福建、湖北、湖南、廣東、廣西、四川、貴州、云南等地。生于海拔1000-1300米的山地闊葉林中樹干上或林下巖石上。喜溫暖濕度較大而陰涼的環(huán)境，植株不耐寒。由于原始森林資源的極度破壞，導(dǎo)致野生廣東石斛已經(jīng)瀕臨滅絕。在重慶市石斛資源的調(diào)查中[4]，廣東石斛被評為瀕臨消亡的石斛之一。2.選題的研究目的和方法研究目的：目前，國內(nèi)外對于廣東石斛的研究報道還很缺乏，為了更好保護廣東石斛野生資源，探究廣東石斛有效的人工快速繁育技術(shù)。研究方法：本實驗通過在廣東石斛幼苗在生根壯苗的組織培養(yǎng)過程中，加入不同濃度配比的植物激素NAA（0、0.50、1.00、1.05、2.00mg/L）和6-BA（0、0.50、1.00、1.50、2.00mg/L），篩選適宜廣東石斛生根壯苗的NAA與6-BA濃度配比。3.研究結(jié)果0.50mg/LNAA與1.00mg/L6-BA配比的培養(yǎng)基，適宜廣東石斛幼苗生根壯苗，該濃度配比下培養(yǎng)的廣東石斛株高、生根數(shù)、根長、莖粗都有大幅度增加，促進生根壯苗的效果十分顯著。4.結(jié)論濃度為1.00mg/L的NAA和濃度為0.50mg/L的6-BA，更適宜廣東石斛生根壯苗的培養(yǎng)。具體表現(xiàn)在該濃度下培養(yǎng)150d后植株的株高、根長、根數(shù)、整體長勢都比空白組和其他處理組有明顯的優(yōu)勢。因此NAA1.00mg/L、6-BA0.50mg/L最適宜廣東石斛幼苗生根壯苗培養(yǎng)。三、論文寫作規(guī)范性方面的要求1.論文任務(wù)量適中，文本格式按照《中南大學(xué)網(wǎng)絡(luò)教育本科畢業(yè)論文（設(shè)計）撰寫規(guī)范》要求執(zhí)行。2.論文寫作中要求條理清楚，邏輯嚴(yán)密，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，分析透徹，結(jié)論正確，理論能夠聯(lián)系實際，有一定的個人見解。2．主要參考資料：期刊文獻書寫規(guī)范：作者，論文篇名，刊物名，出版年，卷（期），論文在刊物中的頁碼。圖書文獻書寫規(guī)范：作者，書名，出版地，出版社，出版日期。[1]趙菊潤.黃草石斛的藥源變遷[J].內(nèi)蒙古林業(yè)調(diào)查設(shè)計，2018，v.37;No.152，105-107..[2]王昌華;劉翔;張植瑋等.重慶市石斛屬資源及生態(tài)調(diào)查研究[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2019，v.16，186-191.[3]萬發(fā)令;溫英萍;李曙我等.江西蘭科藥用植物資源的利用與保護[J].江西林業(yè)科技，2017，43-45.[4]付志惠;李洪林;楊波.廣東石斛的組織培養(yǎng)[J].植物生理學(xué)通訊，2018，83.[5]詹啟成;李雪;祁英等.廣東石斛快速繁殖及種苗移栽技術(shù)[J].北方園藝，2018，No.223，145-147.[6]樊萍.植物生長調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用現(xiàn)狀及前景[J].新農(nóng)業(yè)，2019，No.836，27-30.[7]李云海;李潤菊;陳麗華.不同濃度NAA對紫皮石斛壯苗的影響[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2019，No.749，73+76.[8]劉建美.霍山石斛組培培養(yǎng)基篩選[J].現(xiàn)代園藝，2017，No.285，20-22.[9]裴海榮;李偉;張蕾等.植物生長調(diào)節(jié)劑的研究與應(yīng)用[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，v.47;No.287，148-152.[10]陳麗華;楊娟;徐艷霞等.不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對馬褂木繼代增殖的影響[J].南方農(nóng)業(yè)，2019，v.8，115-116.目錄TOC\o"1-3"\h\u9130摘要 前言廣東石斛(DendrobiumwilsoniiRolfe.)又名黃草、黃草吊蘭花，來源于蘭科石斛屬，為多年生附生草本植物。為《瀕危野生動植物種國際貿(mào)易公約》公布限制貿(mào)易和我國二級重點保護的瀕危珍貴野生植物。廣東石斛是藥材石斛中黃草石斛的藥源之一，其藥用性味甘、淡、微寒、滋陰養(yǎng)胃、清熱生津。在福建一些種植地，當(dāng)?shù)鼐用襁€用于跌打損傷，具有很高得藥用價值。廣東石斛花純白色，花姿優(yōu)雅，玲瓏可愛，氣味芳香，也具有極高的觀賞價值。廣東石斛產(chǎn)自福建、湖北、湖南、廣東、廣西、四川、貴州、云南等地。生于海拔1000-1300米的山地闊葉林中樹干上或林下巖石上。喜溫暖濕度較大而陰涼的環(huán)境，植株不耐寒。由于原始森林資源的極度破壞，導(dǎo)致野生廣東石斛已經(jīng)瀕臨滅絕。在重慶市石斛資源的調(diào)查中，廣東石斛被評為瀕臨消亡的石斛之一。為了更好的保護物種，擴大藥源，現(xiàn)通過不同激素配比對廣東石斛生根壯苗的影響研究，篩選出較適宜的植物激素濃度，探索有效的廣東石斛快速繁殖技術(shù)，為進一步深入研究廣東石斛和規(guī)?；N植提供借鑒。概述廣東石斛簡介生物學(xué)特性莖直立或斜立，細(xì)圓柱形，不分枝，具少數(shù)至多數(shù)節(jié)。葉革質(zhì)、二列、數(shù)枚，互生于莖的上部，狹長圓形。總狀花序1-4個，從落了葉的老莖上部發(fā)出，具1-2朵花；花大，乳白色，有時帶淡紅色，開展；花瓣近橢圓形，長2.5-4厘米，寬1-1.5厘米，先端銳尖，具5-6條主脈和許多支脈；唇瓣卵狀披針形，比萼片稍短而寬得多，3裂或不明顯3裂，基部楔形，其中央具1個胼胝體?；ㄆ?月。藥用部位和化學(xué)成分廣東石斛全草入藥，其中莖的藥物化學(xué)成分含量更高?；瘜W(xué)成分主要包括石斛堿[C16H25O2N]、石斛次堿[C17H27O3N]、石斛奧克斯堿[C17H25O3N]、石斛胺[C16H25O3N][6]。藥理功效廣東石斛不僅滋陰養(yǎng)胃，還有清熱生津、生咳平喘得功效。目前主要用于熱病傷陰、肺熱咳嗽、口干燥渴等。石斛屬植物組織培養(yǎng)研究進展外植體的選擇選取植物外植體，利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖試管苗，是解決石斛種苗的有效途徑，關(guān)于石斛試管苗移栽成功的報道也日漸增多。目前，可供選擇誘導(dǎo)的外植體主要有種子、種胚、莖段、葉片、花梗、根尖等?；九囵B(yǎng)基目前常用的基本培養(yǎng)基有MS、B5、N6、KC、VW培養(yǎng)基等，不同的培養(yǎng)基有不同的特點，適用于不同的植物和不同的組織培養(yǎng)階段。MS培養(yǎng)基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高，B5培養(yǎng)基是含有較低的銨，N6培養(yǎng)基特別適合于禾谷類植物的花藥和花粉培養(yǎng)，在國內(nèi)外得到廣泛應(yīng)用。碳源碳源是培養(yǎng)基中必不可少的營養(yǎng)物質(zhì)，是含碳化合物。在組織培養(yǎng)過程中，植物正常生長、細(xì)胞分裂，都需要大量的碳源。目前常用于組織培養(yǎng)的碳源有蔗糖、葡萄糖、果糖等。由于不同植物的具有不同個體特性，對碳源吸收轉(zhuǎn)化能力不一，不同的碳源種類和不同濃度的碳源對組培的效果都有一定的影響植物激素植物激素是可調(diào)節(jié)植物生理反應(yīng)的活性物質(zhì)，是由植物細(xì)胞接受某一特定環(huán)境因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的。在細(xì)胞分裂與伸長、組織與器官分化、開花與結(jié)實、成熟與衰老、休眠與萌發(fā)以及離體組織培養(yǎng)等方面，分別或相互協(xié)調(diào)地調(diào)控植物的生長發(fā)育與分化。由植物自身產(chǎn)生的、運往其他部位后能調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育的微量有機物質(zhì)稱為植物激素。人工合成的具有植物激素活性的物質(zhì)稱為植物生長調(diào)節(jié)劑。目前在組織培養(yǎng)方面常用的有NAA、6-BA、GA3、IBA、KT等。有機附加物有機附加物是指氨基酸(如甘氨酸)，水解酪蛋白，酵母汁，椰子乳等，可促進植物的分化。目前組培中常用的有土豆汁、香蕉汁、椰子汁、玉米汁、西瓜汁、荔枝汁、蘋果汁、小麥面粉等。有機附加物內(nèi)含多種復(fù)合物質(zhì)，對于組織培養(yǎng)中的增益作用是十分顯著的，而且不同種類的附加物對不同植物的影響作用不同，使用恰當(dāng)?shù)姆N類和濃度，可以大大促進植物的生長。大量研究表明，在培養(yǎng)基中添加有機附加物可以使植物長勢有非常不錯的增益效果。研究部分目前對于廣東石斛的研究報道還很欠缺，關(guān)于廣東石斛組織培養(yǎng)技術(shù)方面的報道僅有：付志惠等人在廣東石斛的研究中以幼芽為材料，利用不同的培養(yǎng)基和添加劑，得到完整的組培苗；詹啟成等人以野生廣東石斛種子為材料，無菌播種、原球莖增殖培養(yǎng)及植株誘導(dǎo)、瓶苗轉(zhuǎn)移，得到大量的廣東石斛植株。這兩篇報道都只是單條件下對廣東石斛進行組織培養(yǎng)得到植株，并未探究植物激素濃度和配比對于廣東石斛組織培養(yǎng)生根壯苗的具體影響。本實驗設(shè)置了系列梯度濃度的NAA和6-BA分別兩兩配比，濃度范圍較大，可以大致的篩選出適宜的濃度。將測量記錄的數(shù)據(jù)進行方差分析驗證，使得實驗更具有科學(xué)性和說服力。本實驗選取1/2MS為基本培養(yǎng)基，香蕉汁（50g/L）為有機附加物，NAA和6-BA為植物激素。設(shè)置了5個梯度濃度的NAA（0、0.05、1.00、1.50、2.00mg/L）和6-BA（0、0.50、1.00、1.50、2.00mg/L），分別兩兩配比，形成25組不同濃度激素配比的培養(yǎng)基，接種相同情況下長勢均勻的廣東石斛幼苗。經(jīng)培養(yǎng)150d后，測量記錄其葉片數(shù)、株高、莖粗、根數(shù)、根長。將測量的數(shù)據(jù)結(jié)果應(yīng)用方差分析，驗證所有數(shù)據(jù)是否有顯著性差異，以此篩選出適宜廣東石斛幼苗生根壯苗組織培養(yǎng)的植物激素濃度。實驗材料和方法實驗材料采集廣東省清遠(yuǎn)市陽山縣野生廣東石斛近成熟果實，經(jīng)張桂芳副教授鑒定為廣東石斛（DendrobiumwilsoniiRolfe.），消毒后的果實經(jīng)無菌播種90d獲得的幼苗，從中挑選出生長狀況良好、長勢均勻的0.4-1.0cm的幼苗。采用超市購買的香蕉為有機附加物。實驗儀器表1實驗儀器儀器名稱規(guī)格、型號廠家超凈工作臺SW-CJ-2F上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠高壓蒸汽滅菌鍋LDZX-50FA上海申安醫(yī)療器械廠PH計PHB-3筆式上海三信儀表廠電磁爐C20-SDHJ07G佛山市宇帆貿(mào)易有限公司電子天平Y(jié)P502N上海恒平科學(xué)儀器有限公司電子天平BSA223S賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司實驗試劑表2實驗試劑試劑名稱規(guī)格廠家鐵鹽溶液配制/大量元素試劑配制/微量元素試劑配制/有機物試劑配制/蔗糖分析純天津市大茂化學(xué)試劑廠瓊脂化學(xué)純/活性炭化學(xué)純/6-BA配制/NAA配制/蒸餾水化學(xué)純/實驗方法配制培養(yǎng)基配制1/2MS基本培養(yǎng)基，香蕉汁（50g/L）為有機附加物，每組配制500ml，加入不同配比的NAA和6-BA，調(diào)節(jié)pH值為5.8，配制成25組不同濃度NAA和6-BA配比的培養(yǎng)基（如表3），每組分為12小瓶。表3NAA和6-BA系列濃度配比表編號基本培養(yǎng)基有機附加物香蕉汁（g/L）6-BA(mg/L)NAA(mg/L)A11/2MS5000A21/2MS5000.50A31/2MS5001.00A41/2MS5001.50A51/2MS5002.00B11/2MS500.500B21/2MS500.500.50B31/2MS500.501.00B41/2MS500.501.50B51/2MS500.502.00C11/2MS501.000C21/2MS501.000.50C31/2MS501.001.00C41/2MS501.001.50C51/2MS501.002.00D11/2MS501.500D21/2MS501.500.50D31/2MS501.501.00D41/2MS501.501.50D51/2MS501.502.00E11/2MS502.000E21/2MS502.000.50E31/2MS502.001.00E41/2MS502.001.50E51/2MS502.002.00轉(zhuǎn)瓶挑選0.4-1.0cm生長狀況良好的幼苗，在超凈臺下轉(zhuǎn)瓶至上述已配制好的25組培養(yǎng)基中，每瓶接種11-13棵幼苗。生根壯苗培養(yǎng)將完成轉(zhuǎn)瓶的培養(yǎng)瓶放至培養(yǎng)實驗室的組培架上，控制溫度24℃~26℃、光照12小時/天、光照強度1500~2000Ix，培養(yǎng)150d。定期檢查是否有染菌情況，及時移除染菌的培養(yǎng)瓶，避免導(dǎo)致其他培養(yǎng)瓶被污染。每隔30d拍照一次，記錄廣東石斛幼苗的生長情況。測量各組數(shù)據(jù)將培養(yǎng)了150d的廣東石斛幼苗從培養(yǎng)瓶中取出，用自來水沖洗干凈，去除每組中長勢最佳的和最差的，挑選長勢均勻且有代表性的幼苗進行測量，測量記錄其葉片數(shù)、生根數(shù)、株高、莖粗、根長，每組測量30棵。煉苗移栽將測量完畢的幼苗及其他剩余的廣東石斛幼苗用自來水沖洗干凈，晾置數(shù)小時后，移栽至以椰糠為基質(zhì)的育苗盆中，放置溫室中培養(yǎng)4周，記錄移栽成活率。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析本實驗利用excel2010記錄原始數(shù)據(jù)，計算平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差；利用GraphPadPrism，多組間比較采用單因素方差分析。P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義，數(shù)據(jù)結(jié)果表示形式為x±s。實驗結(jié)果與分析不同濃度NAA對廣東石斛生根壯苗的影響NAA是一種常用的人工合成植物生長調(diào)節(jié)劑，是生長素的代表物之一。主要作用是誘導(dǎo)和促進細(xì)胞分化，促進側(cè)根和不定根生成等。目前，NAA已經(jīng)廣泛應(yīng)用于石斛類植物的組織培養(yǎng)技術(shù)中，李云海等在研究NAA對紫皮石斛壯苗的影響中發(fā)現(xiàn)，紫皮石斛的壯苗效果隨NAA濃度的增加呈先升高后降低的趨勢，當(dāng)NAA濃度為2.00mg/L時，紫皮石斛試管苗的壯苗效果最佳。劉建美在霍山石斛組培培養(yǎng)基篩選試驗中，各階段培養(yǎng)基均有加入不同濃度的NAA進行探究，篩選出霍山石斛最適宜的培養(yǎng)基。為了探究NAA對廣東石斛生根壯苗的單獨影響作用，將6-BA濃度設(shè)置為0，表4記錄了不同濃度NAA對廣東石斛生根壯苗的影響。表4不同濃度NAA對廣東石斛生根壯苗的影響組別6-BA(mg/L)NAA(mg/L)株高莖粗生根數(shù)根長A1001.61±0.180.19±0.034.96±1.101.22±0.20A200.501.86±0.18*0.20±0.005.71±1.30#1.80±0.46##A301.002.22±0.19*0.20±0.007.18±1.30#2.29±0.42##A401.502.11±0.11*0.20±0.007.21±0.93#2.37±0.20##A502.002.60±0.21*0.24±0.05**8.04±1.93#2.69±0.43##注：*P<0.05，各組激素處理組株高與空白組A1相比；**P<0.05，各組激素處理組莖粗與空白組A1相比；#P<0.05各組激素處理組生根數(shù)與空白組A1相比；##P<0.05，各組激素處理組根長與空白組相比A1，具有顯著性差異，具有科學(xué)統(tǒng)計意義。由表4可知，在NAA的單獨作用下，各組激素處理的廣東石斛幼苗的株高、生根數(shù)、根長都隨著NAA濃度的增加呈現(xiàn)增大、增多、增長的趨勢，經(jīng)方差分析顯示，與空白組A1相比，其他組的株高、生根數(shù)、根長均有顯著性差異，而A2、A3、A4莖粗與空白組A1相比并未見差異性。由此可知，0、0.50、1.00、1.50、2.00mg/L濃度的NAA對于廣東石斛的株高、生根數(shù)、根長具有明顯的促進生長的作用，但對于莖粗促進生長作用不明顯。不同濃度6-BA對廣東石斛生根壯苗的影響6-BA是一種人工合成的植物生長調(diào)節(jié)劑，是常用的細(xì)胞分裂素之一，常用于植物組織培養(yǎng)中，與生長素按一定比例的混合[12]。一般情況下，組織培養(yǎng)中6-BA的濃度設(shè)置為0-2.00mg/L，濃度太高反而會抑制根的分化和伸長。目前，植物組織培養(yǎng)中，6-BA的應(yīng)用已經(jīng)很廣泛。陳麗華等，以6-BA為激素之一，研究了不同植物生長調(diào)節(jié)劑組合對馬褂木繼代增殖的影響；乙引等應(yīng)用6-BA在粉花石斛的組織培養(yǎng)和植株再生實驗中取得不錯成果。為了探究6-BA對廣東石斛生根壯苗的單獨影響作用，將NAA濃度設(shè)置為0，如表5記錄了不同濃度6-BA對廣東石斛生根壯苗的影響。表5不同濃度6-BA對廣東石斛生根壯苗的影響組別6-BA(mg/L)NAA(mg/L)株高莖粗生根數(shù)根長A1001.61±0.180.19±0.034.96±1.101.22±0.20B10.5001.96±0.13*0.23±0.04**7.57±1.03#1.94±0.31##C11.0002.32±0.28*0.25±0.05**8.75±1.36#2.13±0.44##D11.5002.08±0.25*0.25±0.05**7.55±1.14#1.59±0.24##E12.0001.89±0.18*0.10±0.00**2**.96±0.88#1.71±0.36##注：*P<0.05，各組激素處理組株高與空白組A1相比；**P<0.05，各組激素處理組莖粗與空白組A1相比；#P<0.05各組激素處理組生根數(shù)與空白組A1相比；##P<0.05，各組激素處理組根長與空白組相比A1，具有顯著性差異，具有科學(xué)統(tǒng)計意義。由表5可知，在6-BA的單獨作用下，各組激素處理的廣東石斛幼苗的株高、莖粗、生根數(shù)、根長隨著6-BA濃度的增加，呈現(xiàn)先促進生長，后促進生長作用減小的趨勢，在E1組中生根數(shù)相比空白組A1還有所減少，出現(xiàn)了抑制生根的情況。經(jīng)方差分析顯示，與空白組A1組相比，B1、C1、D1、E1的株高、莖粗、生根數(shù)、根長均具有顯著性差異，當(dāng)6-BA濃度為1.00mg/L時，促進效果最明顯。由此可知，在五組濃度中，當(dāng)6-BA濃度為1.00mg/L時，廣東石斛生根壯苗效果最佳。不同激素配比對廣東石斛生根壯苗的影響有研究表明，不同種類植物激素組合使用時，濃度相對比例在一定范圍內(nèi)，才有明顯的器官誘導(dǎo)作用。致力于發(fā)掘多種激素組合對植物組織培養(yǎng)的影響，越來越受組織培養(yǎng)研究者的青睞，設(shè)置系列梯度，篩選出多種不同激素共同作用的最佳配比。在石斛類組織培養(yǎng)研究中，已有大量的成功案例。從不同激素配比對鐵皮石斛組織培養(yǎng)的影響研究中可以看出，6-BA或KT與NAA配合使用時有利于鐵皮石斛原球莖增殖，而單一使用某一激素時則出現(xiàn)不增殖或增殖很少的情況，并且當(dāng)配合使用兩種激素達到一定比例時，增殖效果十分顯著。為了探究NAA和6-BA不同配比下對廣東石斛幼苗生根壯苗的情況，本實驗設(shè)置了系列梯度濃度下不同配比的25組處理，試驗結(jié)果如表6和表7所示。表6不同激素配比對廣東石斛生根壯苗的影響組別6-BA(mg/L)NAA(mg/L)莖粗生根數(shù)根長A1000.19±0.034.96±1.101.22±0.20A200.500.20±0.005.71±1.30#1.80±0.46##A301.000.20±0.007.18±1.30#2.29±0.42##A401.500.20±0.007.21±0.93#2.37±0.20##A502.000.24±0.05**8.04±1.93#2.69±0.43##B10.5000.23±0.04**7.57±1.03#1.94±0.31##B20.500.500.25±0.05**7.79±1.41#2.62±0.30##B30.501.000.24±0.05**13.46±2.48#4.38±0.85##B40.501.500.20±0.002.85±0.88#1.66±0.60##B50.502.000.24±0.05**7.38±1.30#2.00±0.35##C11.0000.25±0.05**8.75±1.36#2.13±0.44##C21.000.500.24±0.05**6.70±1.26#1.82±0.32##C31.001.000.22±0.04**6.45±0.96#1.83±0.36##C41.001.500.27±0.07**9.19±1.6#3.59±0.59##C51.002.000.25±0.05**7.30±1.11#2.20±0.36##D11.5000.25±0.05**7.55±1.14#1.59±0.24##D21.500.500.24±0.05**7.37±2.44#2.21±0.37##D31.501.000.20±0.006.08±1.53#2.03±0.61##D41.501.500.20±0.007.27±1.88#2.45±0.49##D51.502.000.24±0.05**6.43±1.04#2.24±0.40##E12.0000.10±0.00**2.96±0.88#1.71±0.36##E22.000.500.13±0.05**5.44±1.08#1.92±0.35##E32.001.000.20±0.00**5.6**7±1.272.76±0.53##E42.001.500.22±0.04**6.15±1.49#2.25±0.32##E52.002.000.23±0.05**6.86±1.85#2.20±0.58##注：**P<0.05，各組激素處理組莖粗與空白組A1相比；#P<0.05各組激素處理組生根數(shù)與空白組A1相比；##P<0.05，各組激素處理組根長與空白組相比A1，具有顯著性差異，具有科學(xué)統(tǒng)計意義。由表6可知，激素濃度、種類、配比對廣東石斛生根壯苗都有不同影響。經(jīng)方差分析，與空白組A1相比，少數(shù)組別莖粗未見顯著差異，但大部分組別均具有顯著性差異，尤其C4組，莖粗生長情況最佳；與空白組A1相比，所有組別的根數(shù)均有顯著性差異，特別是B3組，與A1相比平均根數(shù)差達8.5；與空白組A1相比，所有組別根長均具有顯著性差異，各處理組中，以B3組生長最佳，根長達峰值4.38cm。由此可知，B3組廣東石斛幼苗的生根數(shù)和根長生長狀況最佳，而莖粗則C4組最佳，但經(jīng)方差分析顯示，B3組與C4組的莖粗未見顯著差異，所以綜合來看，B3組6-BA濃度0.50mg/L、NAA濃度1.00mg/L更適宜廣東石斛生根壯苗培養(yǎng)。表7不同激素配比對廣東石斛生根壯苗的影響組別6-BA(mg/L)NAA(mg/L)株高葉片數(shù)植株生長狀況A1001.61±0.183.97±0.76植株細(xì)小、葉較小、生根較少A200.501.86±0.18*3.85±0.72植株細(xì)小、葉小、生根較少A301.002.22±0.19*3.87±0.68植株較大、葉較小、生根較多A401.502.11±0.11*3.85±0.82植株較小、葉較小、生根較多A502.002.60±0.21*3.96±0.77植株較粗壯、葉大、生根多B10.5001.96±0.13*3.79±0.73植株較小、葉較小、生根較多B20.500.502.14±0.22*4.10±0.71植株較小、葉較小、生根較多B30.501.002.95±0.24*3.34±0.48###植株粗壯、葉大、生根很多B40.501.501.39±0.16*4.20±0.41植株細(xì)小、葉較小、生根少B50.502.002.20±0.35*3.62±0.62植株較大、葉大、生根較多C11.0002.32±0.28*3.50±0.51###植株較大、葉大、生根多C21.000.501.79±0.20*3.77±0.82植株細(xì)小、葉小、生根較多C31.001.001.92±0.15*3.93±0.60植株較小、葉較小、生根較多C41.001.502.24±0.26*4.08±0.69植株較大、葉大、生根多C51.002.002.17±0.19*3.46±0.69###植株較小、葉較小、生根較多D11.5002.08±0.25*3.63±0.49###植株較小、葉較小、生根較多D21.500.501.99±0.12*4.31±0.76植株較小、葉較小、生根較多D31.501.02.12±0.21*4.11±0.63植株較小、葉較小、生根較多D41.501.501.91±0.22*3.60±0.50###植株較小、葉較小、生根較多D51.502.002.08±0.16*3.54±0.51###植株較小、葉較小、生根較多E12.0001.89±0.18*4.50±0.51###植株細(xì)小、葉較小、生根少E22.000.502.09±0.23*4.00±0.00###植株較小、葉較小、生根較少E32.001.002.53±0.37*4.63±0.84###植株較小、葉較小、生根較少E42.001.501.97±0.19*3.36±0.49###植株較小、葉較小、生根較多E52.002.002.02±0.22*3.66±0.86植株較小、葉較小、生根較多注：注：，*P<0.05，各組激素處理組株高與空白組A1相比；###P<0.05，各組激素處理組葉片數(shù)與空白組相比A1，具有顯著性差異，具有科學(xué)統(tǒng)計意義。由表7可知，不同種類激的素和不同濃度的激素，在不同配比的情況下對廣東石斛幼苗生根壯苗的影響不同。經(jīng)方差分析，與空白組A1相比，各處理組株高均具有顯著性差異，B3組生長最佳，達到峰值2.93cm；與空白組A1相比，大部分葉片數(shù)未見顯著性差異，所有組別的葉片數(shù)都差不多。植株長勢情況以B3組最佳，植株粗壯、葉大、生根很多。綜合表6和表7的結(jié)果可知，在不同激素配比對廣東石斛幼苗生根壯苗組織培養(yǎng)的25組處理中，D3組6-BA0.5mg/L、NAA1.0mg/L為最適宜廣東石斛生根壯苗的濃度配比。在植株測量的過程中，從外觀來看，D3組長勢明顯優(yōu)于其他處理組，生根數(shù)極多，并且有大量的側(cè)根長出，葉片大，植株粗壯，生根壯苗的效果明顯。移栽成活率統(tǒng)計情況本實驗選用椰糠為栽培基質(zhì)，將干燥的椰糠充分浸濕后放入育苗盆中，將煉苗后的廣東石斛組培苗移栽入椰糠中。移栽完成后放入溫室中，定期澆水，培養(yǎng)4周后，統(tǒng)計成活情況，結(jié)果如表8所示。表8成活率統(tǒng)計情況組別6-BA(mg/L)NAA(mg/L)移栽數(shù)/棵成活數(shù)/棵成活率/%A502.00454395.56B30.51.00454293.33B50.52.00453986.67C11.000605083.33C41.001.504545100.00E32.001.003030100.00注：為減少時間、物資成本及工作量，只統(tǒng)計了長勢較優(yōu)組別的成活率情況。由表8可知，不同組廣東石斛幼苗經(jīng)生根壯苗組織培養(yǎng)后移栽成活率較佳，均達80.00%以上，在實驗過程中發(fā)現(xiàn)，廣東石斛組培苗對于濕度的要求較高，不喜干燥，也不喜高濕度，一旦濕度太大會導(dǎo)致爛根的情況出現(xiàn)，所以要注意控制好濕度，以利于組培苗的成活。組織培養(yǎng)各階段圖片展示圖圖SEQ圖\*ARABIC1廣東石斛組織培養(yǎng)各階段狀態(tài)A廣東石斛幼苗；B轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)30d；C轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)60d；轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)90d；轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)30d；轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)120d；轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)150dABCDEF選取D3組為代表，圖1記錄了廣東石斛從幼芽經(jīng)生根壯苗培養(yǎng)150d成植株的全過程。由圖1-B可知，當(dāng)培養(yǎng)了30d左右，廣東石斛幼苗出現(xiàn)了莖和葉的分化，但未見根的分化；由圖1-C可知，培養(yǎng)至60d左右時，廣東石斛葉片開始增大，植株增高，少量幼苗出現(xiàn)了根的分化；由圖1-D可知，培養(yǎng)至90d左右時，葉片分化已成熟，所有廣東石斛都已經(jīng)分化出少量的根；由圖1-E可知，培養(yǎng)至120d時，植株持續(xù)長高，根數(shù)增加數(shù)倍；由圖1-F可知，當(dāng)培養(yǎng)至150d時，廣東石斛植株叢生芽也不斷長大，根長增長明顯，植株粗壯，葉片深綠，具備了出瓶移栽的條件。討論植物激素對植物組織培養(yǎng)成功與否起決定性作用，基本培養(yǎng)基保證培養(yǎng)物的生存和最低的生理活動，但只有配合恰當(dāng)?shù)募に?，才能達到更好的促進效果。本實驗中，當(dāng)NAA單獨作用于廣東石斛幼苗生根壯苗組織培養(yǎng)時，植株長勢隨著NAA濃度增加呈現(xiàn)逐漸增大的趨勢，即NAA濃度為2.00mg/L時，促進生根壯苗的作用最明顯；當(dāng)6-BA單獨作用于廣東石斛幼苗生根壯苗組織培養(yǎng)時，植株長勢隨著6-BA濃度增加呈現(xiàn)先促進后促進作用減小的情況，在6-BA濃度為1.00mg/L時，促進生根壯苗作用最明顯。而在NAA和6-BA不同濃度配比對廣東石斛生根壯苗的實驗結(jié)果中，得出的結(jié)論是濃度為1.00mg/L的NAA和濃度為0.50mg/L的6-BA，更適宜廣東石斛生根壯苗的培養(yǎng)，相比濃度配比為NAA2.00mg/L、6-BA1.00mg/L的處理組，仍有很大的優(yōu)勢。由此可以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)NAA和6-BA組合使用時，對廣東石斛生根壯苗的促進作用明顯優(yōu)于NAA或6-BA單獨使用時的情