(2025年)實驗室儀器設備培訓考試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共40分）1.氣相色譜儀使用時，載氣純度要求通常需達到（）A.99.9%B.99.99%C.99.999%D.99.9999%2.高效液相色譜儀（HPLC）流動相使用前需進行的關鍵預處理步驟是（）A.過濾+超聲脫氣B.加熱至30℃C.調節(jié)pH至中性D.加入抗氧化劑3.原子吸收光譜儀（AAS）火焰法測定時，若出現(xiàn)吸光度偏低，最可能的原因是（）A.燈電流過大B.燃氣與助燃氣比例失衡C.比色皿污染D.單色器波長偏移4.實驗室高速離心機使用時，若發(fā)現(xiàn)機身劇烈振動，首先應采取的措施是（）A.立即切斷電源B.降低轉速繼續(xù)觀察C.檢查離心管是否對稱放置D.聯(lián)系維修人員5.PCR儀運行過程中突然斷電，重啟后最可能影響的參數(shù)是（）A.循環(huán)次數(shù)B.變性溫度C.退火時間D.延伸階段的完成度6.電子天平使用時，若稱量結果持續(xù)波動，排除環(huán)境因素后，優(yōu)先檢查（）A.天平水平度B.校準砝碼是否缺失C.稱量物是否吸潮D.傳感器是否老化7.紫外-可見分光光度計測定時，空白對照的作用是（）A.消除溶劑吸收B.提高靈敏度C.延長燈壽命D.校準波長精度8.高壓滅菌鍋（高壓蒸汽滅菌器）滅菌完成后，正確的操作順序是（）A.直接開蓋→取出物品→關閉電源B.待壓力表歸零→緩慢排氣→開蓋取物C.快速排氣降壓→立即開蓋D.關閉電源→自然冷卻30分鐘→開蓋9.旋轉蒸發(fā)儀使用時，若蒸發(fā)效率顯著降低，可能的原因是（）A.水浴溫度過高B.真空度不足C.冷凝管溫度過低D.蒸發(fā)瓶體積過大10.超凈工作臺使用前需提前開啟的功能是（）A.照明燈光B.紫外滅菌燈C.加熱模塊D.排水系統(tǒng)11.傅里葉變換紅外光譜儀（FTIR）測定固體樣品時，常用的制樣方法是（）A.壓片法（KBr）B.直接透射法C.液膜法D.衰減全反射法（ATR）12.酸度計（pH計）校準前需用的標準緩沖溶液通常是（）A.pH4.00、pH6.86、pH9.18B.pH3.50、pH7.00、pH10.00C.pH2.00、pH5.00、pH8.00D.pH1.00、pH7.00、pH13.0013.激光共聚焦顯微鏡使用時，為避免物鏡損壞，關鍵操作是（）A.調節(jié)焦距時緩慢升降載物臺B.使用后立即用酒精擦拭鏡頭C.保持實驗室濕度低于30%D.每次開機預熱1小時14.電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（ICP-OES）炬管安裝時，需確保（）A.炬管與線圈完全接觸B.中心管與霧化器對齊C.冷卻氣流量低于5L/minD.進樣泵速超過10rpm15.生物安全柜操作時，手臂進出操作口的正確方式是（）A.快速插拔B.緩慢水平移動C.垂直上下移動D.傾斜45°角進出16.冷凍干燥機（凍干機）運行結束后，取出樣品的前提是（）A.冷阱溫度升至0℃以上B.真空度恢復至大氣壓C.壓縮機停止運行5分鐘D.冷凝器表面無冰霜17.氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（GC-MS）調諧時，主要校準的參數(shù)是（）A.質量軸精度與靈敏度B.柱溫箱升溫速率C.離子源溫度D.載氣流量穩(wěn)定性18.實驗室通風櫥使用時，操作面風速應保持在（）A.0.1-0.2m/sB.0.3-0.5m/sC.0.6-0.8m/sD.0.9-1.2m/s19.酶標儀測定吸光度時，若某孔結果異常偏高，首先應排查（）A.酶標板是否傾斜B.試劑添加量是否準確C.濾光片是否匹配D.儀器預熱時間是否足夠20.恒溫培養(yǎng)箱溫度波動范圍超過±0.5℃時，可能影響（）A.細胞培養(yǎng)的增殖速率B.玻璃器皿的干燥效果C.試劑的稱量精度D.天平的穩(wěn)定性二、判斷題（每題1分，共10分。正確填“√”，錯誤填“×”）1.原子吸收光譜儀空心陰極燈使用時，燈電流越大，靈敏度越高，因此應盡量調至最大量程。（）2.離心機運行時，若發(fā)現(xiàn)離心管破裂，應立即停機并佩戴手套清理碎片，避免直接接觸。（）3.HPLC色譜柱使用后，若流動相含緩沖鹽，需先用高比例水相（如90%水+10%有機相）沖洗30分鐘，再用純有機相保存。（）4.高壓滅菌鍋滅菌液體時，需將容器蓋完全旋緊，防止液體溢出。（）5.PCR儀使用后，應立即清潔熱蓋和樣品槽，避免殘留液體腐蝕金屬部件。（）6.電子天平校準應在實驗室溫度穩(wěn)定（24小時內溫差≤5℃）的條件下進行。（）7.超凈工作臺紫外燈照射時間越長越好，建議每次使用前照射2小時以上。（）8.氣相色譜儀關機時，應先關閉檢測器（如FID）火焰，再降低柱溫箱溫度，最后關閉載氣。（）9.冷凍干燥機運行中，若突然停電，應立即打開凍干腔取出樣品，避免樣品復溶。（）10.生物安全柜操作時，物品應盡量放置在柜內后緣，避免阻擋氣流循環(huán)。（）三、簡答題（每題8分，共40分）1.簡述高效液相色譜儀（HPLC）日常維護的關鍵步驟（至少列出5項）。2.原子吸收光譜儀（AAS）火焰法與石墨爐法在樣品處理、檢測限和干擾消除方面有何主要區(qū)別？3.實驗室離心機使用時，需遵守哪些安全規(guī)范（至少列出6項）？4.氣相色譜儀（GC）出現(xiàn)“基線漂移大”故障時，可能的原因及排查方法有哪些（至少列出4項）？5.PCR擴增實驗中，若出現(xiàn)“無擴增產物”的結果，可能的原因有哪些（至少列出6項）？四、綜合分析題（每題15分，共30分）1.某實驗室使用氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（GC-MS）分析揮發(fā)性有機物（VOCs），出現(xiàn)“目標峰響應值顯著降低”的問題。請結合儀器組成（進樣口、色譜柱、質譜檢測器）分析可能的原因，并提出對應的解決措施。2.某細胞培養(yǎng)實驗室新購置一臺二氧化碳培養(yǎng)箱，使用1個月后發(fā)現(xiàn)細胞污染率顯著升高。請從儀器操作、維護和環(huán)境控制角度分析可能的原因，并提出改進方案。答案一、單項選擇題1.C2.A3.B4.C5.D6.A7.A8.B9.B10.B11.A12.A13.A14.B15.B16.B17.A18.B19.B20.A二、判斷題1.×（燈電流過大會導致燈壽命縮短、譜線變寬，靈敏度反而下降）2.√3.√（緩沖鹽殘留會堵塞色譜柱，需充分水洗后換有機相保存）4.×（液體滅菌時容器蓋應微松，防止壓力過高導致爆沸）5.√（殘留液體可能引發(fā)電極腐蝕或霉變）6.√（溫度波動會影響天平傳感器精度）7.×（紫外燈照射30分鐘即可達到滅菌效果，過長會加速濾膜老化）8.√（避免檢測器高溫下積碳）9.×（突然停電應保持凍干腔密閉，待恢復供電后繼續(xù)運行，避免外界水分進入）10.×（物品應放置在操作區(qū)中前部，距前緣15cm處，避免阻擋下沉氣流）三、簡答題1.高效液相色譜儀日常維護關鍵步驟：①流動相使用前過濾（0.22μm或0.45μm濾膜）并超聲脫氣30分鐘；②色譜柱使用后根據(jù)流動相類型沖洗（含緩沖鹽時先90%水相沖洗30min，再純有機相保存）；③定期更換在線過濾器濾芯（建議每3個月或壓力升高20%時更換）；④檢查泵密封墊磨損情況（漏液或壓力波動時更換）；⑤清洗進樣閥轉子（用純甲醇超聲10分鐘，避免樣品殘留污染）；⑥每月用異丙醇沖洗系統(tǒng)管路（流速0.2mL/min，2小時），防止微生物滋生。2.原子吸收光譜儀火焰法與石墨爐法的區(qū)別：①樣品處理：火焰法通常直接進樣（液體），需5-20μL；石墨爐法可處理固體或高鹽樣品（需稀釋或消解），進樣量2-50μL。②檢測限：火焰法一般為mg/L級，石墨爐法可達μg/L甚至ng/L級（靈敏度高3-4個數(shù)量級）。③干擾消除：火焰法通過調節(jié)燃氣/助燃氣比例、使用背景校正（如氘燈）減少化學干擾；石墨爐法需優(yōu)化升溫程序（干燥-灰化-原子化-除殘），添加基體改進劑（如硝酸鈀）抑制基體干擾。3.離心機使用安全規(guī)范：①使用前檢查轉頭是否匹配（轉速不超過轉頭最大允許轉速）；②離心管對稱放置（重量差≤0.1g，高速離心機≤0.01g）；③蓋好離心機蓋后再啟動，運行中禁止打開機蓋；④離心結束待轉子完全停止后再取管，禁止強行制動；⑤腐蝕性樣品需使用密封離心管，防止液體泄漏腐蝕腔體；⑥定期清潔轉子（用中性洗滌劑擦拭，避免有機溶劑腐蝕），檢查轉軸是否松動；⑦長期不用時，轉子應取出干燥存放，防止金屬疲勞。4.氣相色譜基線漂移大的可能原因及排查：①色譜柱未老化：程序升溫至高于使用溫度20℃（不超最高耐受溫度）老化4-8小時；②載氣純度不足：更換高純度載氣（≥99.999%），檢查氣路過濾器是否失效；③檢測器污染（如FID噴嘴積碳）：拆卸檢測器用丙酮超聲清洗，重新安裝后點火測試；④柱溫箱溫度控制不穩(wěn)：校準溫度傳感器，檢查加熱絲是否接觸不良；⑤進樣口隔墊老化：更換新隔墊（建議每50次進樣更換一次）；⑥檢測器氣體流量波動：檢查氫氣、空氣減壓閥壓力是否穩(wěn)定（FID建議H2:30mL/min，Air:300mL/min）。5.PCR無擴增產物的可能原因：①模板DNA降解（如保存不當或反復凍融）：重新提取高質量DNA，檢測OD260/280比值（1.8-2.0為佳）；②引物設計不當（如退火溫度過高、引物二聚體）：用軟件（如Primer-BLAST）驗證引物特異性，優(yōu)化退火溫度（梯度PCR測試）；③Taq酶失活（如反復凍融或保存溫度錯誤）：更換新酶，分裝保存避免多次凍融；④dNTP濃度過低或降解：檢查dNTP保存條件（-20℃避光），重新配制；⑤Mg2+濃度不合適（過高抑制酶活性，過低影響擴增效率）：優(yōu)化Mg2+濃度（通常1.5-2.5mmol/L）；⑥擴增程序錯誤（如變性溫度不足、延伸時間過短）：核對目標片段長度（延伸時間按1kb/min計算）；⑦污染抑制（如酚類、胍鹽殘留）：增加模板純化步驟（如乙醇沉淀），或使用含PCR增強劑的反應體系。四、綜合分析題1.GC-MS目標峰響應值降低的原因及解決措施：進樣口部分：可能原因包括進樣針堵塞（樣品殘留結晶）、襯管污染（隔墊碎屑或高沸點物質附著）、分流比設置錯誤（分流比過大導致目標物流失）。解決措施：用溶劑（甲醇/丙酮）超聲清洗進樣針，更換惰性襯管（如硅烷化處理），檢查分流平板是否堵塞，重新校準分流比（目標物沸點低時降低分流比）。色譜柱部分：可能原因是色譜柱老化（固定相流失）、柱效下降（柱長縮短或內徑匹配錯誤）、柱溫設置過低（目標物保留過強）。解決措施：切割色譜柱前端10-20cm（去除污染段），老化色譜柱（程序升溫至最高使用溫度-20℃保持2小時），確認色譜柱規(guī)格（如內徑0.25mm對應進樣量1μL），優(yōu)化柱溫（初始溫度高于目標物沸點10-20℃）。質譜檢測器部分：可能原因是離子源污染（樣品殘留積碳）、檢測器電壓不足（倍增器老化）、接口溫度過低（目標物在傳輸線冷凝）。解決措施：拆卸離子源用丙酮超聲清洗（注意燈絲和透鏡的保護），進行自動調諧（Autotune）校準質量軸和靈敏度，提高接口溫度（通常高于色譜柱最高溫度20℃），檢查檢測器電壓（超過2000V時建議更換倍增器）。2.二氧化碳培養(yǎng)箱細胞污染率升高的原因及改進方案：操作角度：可能原因包括開箱時間過長（環(huán)境微生物進入）、操作前未用75%乙醇擦拭樣品（帶入雜菌）、取放物品時觸碰箱體內壁（污染培養(yǎng)區(qū)）。改進措施：縮短開箱時間（≤2分鐘），樣品放入前用乙醇噴霧消毒并靜置30秒，操作時保持手部與箱體距離≥10cm。維護角度：可能原因是水盤未定期換水（細菌滋生）、HEPA過濾器失效（無法過濾空氣中的微生物）、紫外滅菌功能未啟用（無法殺滅