2025年大學(xué)《醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)-分子與細(xì)胞實驗操作實訓(xùn)》考試備考題庫及答案解析單位所屬部門：________姓名：________考場號：________考生號：________一、選擇題1.在進(jìn)行PCR實驗時，以下哪項是錯誤的（）A.模板DNA的濃度會影響PCR擴增效率B.引物二聚體的形成會降低PCR特異性C.dNTPs的缺失會導(dǎo)致PCR無法進(jìn)行D.退火溫度過高會抑制PCR反應(yīng)答案：C解析：PCR實驗需要四種dNTPs（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）作為合成新鏈的原料，如果dNTPs缺失，PCR反應(yīng)將無法進(jìn)行。模板DNA濃度、引物二聚體形成和退火溫度都會影響PCR的特異性和效率，但它們本身并不會導(dǎo)致PCR完全無法進(jìn)行。2.以下哪種方法最適合用于分離純化蛋白質(zhì)（）A.凝膠過濾層析B.離子交換層析C.凝膠電泳D.親和層析答案：A解析：凝膠過濾層析（也稱為尺寸排阻層析）是根據(jù)分子大小不同進(jìn)行分離純化的方法，非常適合用于分離純化蛋白質(zhì)。離子交換層析是根據(jù)蛋白質(zhì)表面電荷不同進(jìn)行分離，親和層析利用特定配體與目標(biāo)蛋白質(zhì)的結(jié)合進(jìn)行分離，凝膠電泳主要用于蛋白質(zhì)的鑒定和分子量測定，而不是分離純化。3.在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，以下哪項操作是錯誤的（）A.使用無菌的細(xì)胞培養(yǎng)皿和試劑B.在超凈工作臺中操作C.定期更換細(xì)胞培養(yǎng)液D.將細(xì)胞置于強光照環(huán)境中答案：D解析：細(xì)胞培養(yǎng)需要在無菌條件下進(jìn)行，使用無菌的細(xì)胞培養(yǎng)皿和試劑，并在超凈工作臺中操作，以防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)液需要定期更換，以提供新鮮的營養(yǎng)物質(zhì)并去除代謝廢物。細(xì)胞對光照敏感，強光照會損害細(xì)胞，應(yīng)將其置于避光環(huán)境中培養(yǎng)。4.以下哪種試劑常用于細(xì)胞固定（）A.乙醇B.TritonX-100C.PBSD.DAPI答案：A解析：細(xì)胞固定是指使用化學(xué)試劑使細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，常用的固定劑有乙醇、甲醇、甲醛等。TritonX-100是細(xì)胞通透劑，PBS是磷酸鹽緩沖液，DAPI是熒光染料，用于染色細(xì)胞核。5.在進(jìn)行WesternBlot實驗時，以下哪項步驟是錯誤的（）A.將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚丙烯酰胺凝膠上B.用特異性抗體進(jìn)行孵育C.用辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行孵育D.使用化學(xué)發(fā)光劑檢測條帶答案：A解析：WesternBlot實驗是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯（PVDF）膜或硝酸纖維素膜上，而不是聚丙烯酰胺凝膠上。蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上后，用特異性抗體進(jìn)行孵育，然后用辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行孵育，最后使用化學(xué)發(fā)光劑或熒光底物檢測條帶。6.以下哪種方法常用于檢測基因表達(dá)（）A.RT-PCRB.RFLP分析C.DNA測序D.等電聚焦答案：A解析：RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后進(jìn)行PCR擴增，常用于檢測基因表達(dá)水平。RFLP分析（限制性片段長度多態(tài)性分析）是利用限制性內(nèi)切酶識別和切割DNA片段，用于基因分型。DNA測序是測定DNA序列的方法。等電聚焦是根據(jù)蛋白質(zhì)等電點不同進(jìn)行分離的方法。7.在進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）時，以下哪項步驟是錯誤的（）A.將抗原包被在微孔板上B.用酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行孵育C.加入底物溶液進(jìn)行顯色D.用熒光顯微鏡觀察結(jié)果答案：D解析：ELISA實驗是將抗原或抗體包被在微孔板上，然后用特異性抗體或抗原進(jìn)行孵育，接著用酶標(biāo)記的二抗或一抗進(jìn)行孵育，最后加入底物溶液進(jìn)行顯色。結(jié)果可以通過酶標(biāo)儀進(jìn)行定量檢測，而不是用熒光顯微鏡觀察。8.以下哪種試劑常用于核酸雜交（）A.SDSB.SDSC.形成交叉雙鏈的核酸探針D.聚乙二醇答案：C解析：核酸雜交是指單鏈核酸分子間形成雙鏈的過程，常使用核酸探針（一段已知序列的單鏈核酸）與目標(biāo)核酸進(jìn)行雜交。SDS（十二烷基硫酸鈉）是去污劑，SDS是聚丙烯酰胺凝膠電泳，聚乙二醇是濃縮劑，這些試劑不直接參與核酸雜交。9.在進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)實驗時，以下哪項操作是錯誤的（）A.將細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液B.用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞C.將細(xì)胞樣品加入流式細(xì)胞儀的樣品管中D.用顯微鏡觀察細(xì)胞答案：D解析：流式細(xì)胞術(shù)實驗需要將細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，并用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞，然后將細(xì)胞樣品加入流式細(xì)胞儀的樣品管中。流式細(xì)胞儀會逐個檢測細(xì)胞的光學(xué)信號，而不是用顯微鏡觀察細(xì)胞。10.以下哪種方法常用于構(gòu)建基因表達(dá)載體（）A.限制性內(nèi)切酶消化和連接B.凝膠電泳C.PCR擴增D.DNA測序答案：A解析：構(gòu)建基因表達(dá)載體需要使用限制性內(nèi)切酶消化外源基因和載體DNA，然后通過DNA連接酶將它們連接起來。凝膠電泳用于分離和鑒定DNA片段。PCR擴增用于獲得目的基因。DNA測序用于測定基因序列。11.在PCR反應(yīng)體系中，以下哪種物質(zhì)是必需的（）A.模板RNAB.DNA連接酶C.dNTPsD.RNA聚合酶答案：C解析：PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是利用DNA聚合酶在體外擴增DNA片段的技術(shù)，其反應(yīng)體系必需包含模板DNA、引物、DNA聚合酶、dNTPs（脫氧核糖核苷三磷酸）和緩沖液。模板RNA不是PCR的必需底物。DNA連接酶用于連接DNA片段，不是PCR反應(yīng)必需的。RNA聚合酶用于RNA合成，不是PCR反應(yīng)必需的。12.以下哪種方法常用于分離不同大小的蛋白質(zhì)（）A.離子交換層析B.凝膠過濾層析C.親和層析D.凝膠電泳答案：B解析：凝膠過濾層析（也稱為尺寸排阻層析）是根據(jù)分子大小不同進(jìn)行分離純化的方法，非常適合用于分離不同大小的蛋白質(zhì)。離子交換層析是根據(jù)蛋白質(zhì)表面電荷不同進(jìn)行分離，親和層析利用特定配體與目標(biāo)蛋白質(zhì)的結(jié)合進(jìn)行分離，凝膠電泳主要用于蛋白質(zhì)的鑒定和分子量測定，而不是分離純化。13.在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，以下哪項是細(xì)胞貼壁生長的必要條件（）A.溫度B.CO2濃度C.胰酶消化D.細(xì)胞因子答案：A解析：細(xì)胞貼壁生長是指細(xì)胞附著在固體表面并伸展生長的現(xiàn)象，其必要條件包括適宜的溫度、pH值、氣體環(huán)境（如CO2濃度）和培養(yǎng)基等。胰酶消化是用于從培養(yǎng)瓶中分離細(xì)胞的酶處理方法，不是貼壁生長的必要條件。細(xì)胞因子是影響細(xì)胞生長和分化的信號分子，但不是貼壁生長的必要條件。雖然CO2濃度對維持適宜的pH值很重要，但溫度是細(xì)胞進(jìn)行所有生命活動的基礎(chǔ)，對貼壁生長尤為關(guān)鍵。14.以下哪種試劑常用于蛋白質(zhì)變性（）A.尿素B.PBSC.TrisD.甘氨酸答案：A解析：蛋白質(zhì)變性是指蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞，導(dǎo)致其生物活性喪失的過程。尿素是一種常用的化學(xué)變性劑，可以通過破壞氫鍵和疏水作用來使蛋白質(zhì)變性。PBS（磷酸鹽緩沖鹽溶液）和Tris（三羥甲基氨基甲烷）是緩沖液，用于維持溶液的pH穩(wěn)定。甘氨酸是一種氨基酸，通常不用于蛋白質(zhì)變性。15.在進(jìn)行SouthernBlot實驗時，以下哪項步驟是錯誤的（）A.將DNA電泳分離后轉(zhuǎn)移到膜上B.用放射性標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交C.用特異性抗體進(jìn)行孵育D.用X射線膠片檢測條帶答案：C解析：SouthernBlot實驗是將DNA片段通過瓊脂糖凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到尼龍膜或硝酸纖維素膜上，然后用標(biāo)記有放射性同位素或其他報告分子的核酸探針進(jìn)行雜交，最后通過autoradiography（放射自顯影）或化學(xué)發(fā)光等方法檢測雜交信號。特異性抗體是用于WesternBlot實驗檢測蛋白質(zhì)的試劑。因此，在SouthernBlot中用抗體孵育是錯誤的。16.以下哪種方法常用于檢測基因突變（）A.基因測序B.RFLP分析C.RT-PCRD.ELISA答案：B解析：RFLP（限制性片段長度多態(tài)性）分析是利用限制性內(nèi)切酶識別和切割DNA片段，如果基因發(fā)生突變導(dǎo)致限制性內(nèi)切酶識別位點改變或消失，就會產(chǎn)生不同長度的DNA片段，從而可以檢測基因突變?；驕y序是測定DNA序列的方法，可以精確鑒定基因突變，但通常步驟更復(fù)雜。RT-PCR主要用于檢測基因表達(dá)水平。ELISA主要用于檢測蛋白質(zhì)。17.在進(jìn)行免疫熒光實驗時，以下哪項操作是錯誤的（）A.用固定劑固定細(xì)胞B.用封閉液封閉非特異性結(jié)合位點C.用熒光二抗標(biāo)記一抗D.用抗熒光淬滅封片劑封片答案：C解析：免疫熒光實驗通常需要先用固定劑（如甲醇、丙酮或多聚甲醛）固定細(xì)胞，以固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)和抗原；然后用封閉液（如牛血清白蛋白或脫脂奶粉）封閉非特異性結(jié)合位點，防止背景染色；接著用特異性一抗孵育，結(jié)合目標(biāo)抗原；再用熒光標(biāo)記的二抗孵育，結(jié)合一抗；最后用抗熒光淬滅封片劑封片，以增強熒光信號并保護(hù)樣品。錯誤在于，應(yīng)該用熒光二抗標(biāo)記一抗，而不是用抗熒光淬滅封片劑標(biāo)記一抗?？篃晒獯銣绶馄瑒┦窃谧詈笠徊接糜诜馄?。18.以下哪種方法常用于制備單克隆抗體（）A.化學(xué)合成B.PCR擴增C.細(xì)胞融合D.DNA測序答案：C解析：單克隆抗體是利用雜交瘤技術(shù)制備的，該技術(shù)將能夠產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體。因此，細(xì)胞融合是制備單克隆抗體的關(guān)鍵步驟。化學(xué)合成是人工合成多肽或小分子，PCR擴增是獲得DNA片段，DNA測序是測定DNA序列，這些方法不用于制備單克隆抗體。19.在進(jìn)行電鏡觀察時，以下哪種樣品制備方法是錯誤的（）A.截取組織塊進(jìn)行固定B.脫水后直接包埋C.超薄切片D.蒸發(fā)碳膜答案：B解析：電鏡觀察需要制備非常薄的樣品（超薄切片，厚度通常為幾十納米），以便電子束能夠穿透。樣品制備過程通常包括：取材、固定、脫水、浸透（包埋）、聚合、超薄切片、染色等步驟。電鏡樣品的包埋是為了使組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定并便于切片，但簡單的脫水后直接包埋是不夠的，還需要浸透劑使樣品完全充滿樹脂，并聚合固化。蒸發(fā)碳膜是透射電鏡觀察樣品（尤其是負(fù)染樣品）時在樣品表面覆蓋一層薄碳膜的方法，不是制備組織樣品內(nèi)部超薄切片的方法。20.以下哪種技術(shù)常用于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白（）A.噬菌體展示B.細(xì)胞融合C.基因工程菌D.PCR擴增答案：C解析：大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白通常使用基因工程菌（也稱為重組表達(dá)系統(tǒng)），將編碼目標(biāo)蛋白的基因構(gòu)建到表達(dá)載體中，然后轉(zhuǎn)化到宿主菌（如大腸桿菌、酵母或哺乳動物細(xì)胞）中，通過培養(yǎng)宿主菌，使目標(biāo)蛋白在體內(nèi)大量表達(dá)。噬菌體展示是用于篩選肽段或蛋白質(zhì)配體的技術(shù)。細(xì)胞融合主要用于制備單克隆抗體。PCR擴增是獲得DNA片段的方法。二、多選題1.PCR實驗中，影響擴增效率的因素包括（）A.模板DNA濃度B.引物濃度C.dNTPs濃度D.退火溫度E.DNA聚合酶活性答案：ABCDE解析：PCR擴增的效率受多種因素影響。模板DNA濃度過高或過低都會影響擴增效率。引物濃度需要適當(dāng)，過高或過低都會導(dǎo)致非特異性擴增或擴增效率降低。dNTPs是合成新鏈的原料，其濃度需要充足。退火溫度影響引物的結(jié)合效率，過高或過低都會降低特異性，從而影響擴增效率。DNA聚合酶是執(zhí)行合成反應(yīng)的酶，其活性直接影響擴增速率和效率。因此，所有選項都是影響PCR擴增效率的因素。2.蛋白質(zhì)分離純化的方法主要有（）A.凝膠過濾層析B.離子交換層析C.親和層析D.凝膠電泳E.超速離心答案：ABCE解析：蛋白質(zhì)分離純化根據(jù)原理和方法可以有多種分類，常用的包括基于分子大小排阻的凝膠過濾層析（A）、基于電荷差異的離子交換層析（B）、基于特異性結(jié)合的親和層析（C）以及基于分子量和形狀的凝膠電泳（D）和超速離心（E）。凝膠電泳主要用于蛋白質(zhì)的鑒定和分離，但也常用于純化，特別是從復(fù)雜混合物中分離特定蛋白。超速離心可以用于分離不同密度的蛋白質(zhì)組分。因此，A、B、C、E都是蛋白質(zhì)分離純化的常用方法。雖然D也用于分離，但其更側(cè)重于鑒定和純度分析。3.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，需要注意的無菌操作包括（）A.操作環(huán)境使用超凈工作臺B.使用無菌的培養(yǎng)基和試劑C.操作人員洗手消毒D.在酒精燈火焰旁操作E.培養(yǎng)容器滅菌處理答案：ABCDE解析：維持細(xì)胞培養(yǎng)的無菌環(huán)境至關(guān)重要。需要在超凈工作臺（A）內(nèi)操作，以減少空氣中的微生物污染。所有使用的培養(yǎng)基、試劑、pH指示劑、血清等（B）都必須經(jīng)過滅菌處理。操作人員進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室前及操作時需洗手消毒（C），并在酒精燈火焰旁（D）操作，利用火焰產(chǎn)生的無菌區(qū)域。培養(yǎng)容器（如培養(yǎng)瓶、皿）本身（E）也需要經(jīng)過高壓蒸汽滅菌等處理。這些都是保證細(xì)胞培養(yǎng)無菌的重要措施。4.WesternBlot實驗中，涉及蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜步驟的有（）A.將SDS凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上B.使用轉(zhuǎn)膜裝置和電泳緩沖液C.轉(zhuǎn)膜后用封閉液處理膜D.轉(zhuǎn)膜前對凝膠進(jìn)行脫鹽處理E.使用特異性抗體孵育膜答案：ABCD解析：WesternBlot實驗中，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜是將SDS凝膠電泳分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到尼龍膜或PVDF膜等支持膜上的關(guān)鍵步驟（A）。這個過程需要使用專門的轉(zhuǎn)膜裝置（B）和含有電導(dǎo)率調(diào)節(jié)劑的轉(zhuǎn)膜緩沖液（電泳緩沖液）（B）。為了使蛋白質(zhì)更好地吸附在膜上并封閉非特異性位點，轉(zhuǎn)膜完成后需要對膜進(jìn)行封閉處理（C），通常使用封閉液（如BSA、脫脂奶粉）孵育。為了提高后續(xù)抗體結(jié)合的效率，有時會在轉(zhuǎn)膜前對凝膠進(jìn)行脫鹽處理（D），去除SDS。E選項“使用特異性抗體孵育膜”是WesternBlot的后續(xù)步驟（抗體孵育），而不是轉(zhuǎn)膜步驟本身。5.基因表達(dá)調(diào)控的機制涉及（）A.轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控B.翻譯水平的調(diào)控C.mRNA降解的調(diào)控D.蛋白質(zhì)降解的調(diào)控E.染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的調(diào)控答案：ABCDE解析：基因表達(dá)是指基因信息轉(zhuǎn)化為功能性蛋白質(zhì)的過程，其調(diào)控機制非常復(fù)雜，涉及多個層面。轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控（A）是最基本的調(diào)控方式，包括啟動子、增強子等順式作用元件以及轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。翻譯水平的調(diào)控（B）包括mRNA的翻譯起始、延伸和終止過程的調(diào)控。mRNA降解的調(diào)控（C）可以影響基因表達(dá)的半衰期和最終產(chǎn)量。蛋白質(zhì)降解的調(diào)控（D）如泛素-蛋白酶體途徑，決定了蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的調(diào)控（E）如DNAmethylation和組蛋白修飾，可以影響基因的染色質(zhì)狀態(tài)，進(jìn)而調(diào)控基因的可及性和表達(dá)活性。因此，所有選項都是基因表達(dá)調(diào)控的機制。6.下列哪些屬于分子克隆常用的工具酶（）A.限制性內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.DNA聚合酶D.RNA聚合酶E.DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶答案：ABCE解析：分子克隆是指將外源DNA片段導(dǎo)入宿主細(xì)胞并使其穩(wěn)定維持和擴增的技術(shù)，常用工具酶包括：限制性內(nèi)切酶（A），用于切割DNA產(chǎn)生特定位點粘性末端或平末端；DNA連接酶（B），用于連接DNA片段；DNA聚合酶（C），主要用于PCR擴增目的基因或填補缺口；DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶（E），用于解決DNA復(fù)制或重組過程中產(chǎn)生的超螺旋應(yīng)力。RNA聚合酶（D）主要用于RNA的轉(zhuǎn)錄，不是分子克隆中常用的工具酶。7.細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基成分包括（）A.蛋白質(zhì)B.無機鹽C.碳水化合物D.維生素E.氨基酸答案：BCDE解析：細(xì)胞培養(yǎng)基是為了支持細(xì)胞生長和繁殖而設(shè)計的復(fù)雜溶液，通常包含多種成分。無機鹽（B）提供必需的離子，維持滲透壓和pH。碳水化合物（C）如葡萄糖是主要的能量來源。維生素（D）是某些酶的輔酶成分，參與代謝。氨基酸（E）是蛋白質(zhì)合成的基本單位。雖然有些培養(yǎng)基（特別是完全培養(yǎng)基）會添加少量天然成分，如血清（含有蛋白質(zhì)、生長因子等），但血清不是必需的基礎(chǔ)成分，且題目問的是“常用”成分，通常指基礎(chǔ)培養(yǎng)基的必需成分。因此，B、C、D、E是細(xì)胞培養(yǎng)基的常用成分。8.影響核酸雜交效率的因素有（）A.溫度B.雜交緩沖液離子強度C.探針濃度D.雜交時間E.樣品pH值答案：ABCDE解析：核酸雜交是指單鏈核酸分子間形成雙鏈的過程，其效率受多種因素影響。溫度（A）是關(guān)鍵因素，過高會降低特異性，過低則不易形成穩(wěn)定雙鏈。雜交緩沖液離子強度（B）影響核酸鏈間的靜電作用，離子強度過低會降低雜交效率。探針濃度（C）需要適當(dāng)，過高或過低都會影響信號強度。雜交時間（D）需要足夠長，以保證充分雜交。樣品pH值（E）會影響核酸的解離狀態(tài)和電荷，對雜交效率有影響。因此，所有選項都是影響核酸雜交效率的因素。9.下列哪些操作可能導(dǎo)致PCR假陽性結(jié)果（）A.模板DNA污染B.引物二聚體形成C.試劑反復(fù)使用D.交叉污染E.退火溫度過高答案：ACD解析：PCR假陽性結(jié)果是指實驗結(jié)果錯誤地顯示存在目標(biāo)擴增產(chǎn)物。可能導(dǎo)致假陽性的原因包括：模板DNA污染（A），如實驗環(huán)境中存在模板DNA，會導(dǎo)致非特異性擴增。試劑反復(fù)使用（C），特別是含有殘留模板或引物的試劑，可能引入污染。交叉污染（D），如在加樣、混合等操作中，前一個樣本的殘留物污染了下一個樣本，是PCR實驗中常見的導(dǎo)致假陽性的原因。引物二聚體形成（B）雖然會消耗引物和dNTPs，降低目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)量，但通常不會導(dǎo)致完全假陽性（即沒有目標(biāo)產(chǎn)物）。退火溫度過高（E）會使引物結(jié)合效率降低，導(dǎo)致PCR擴增效率降低甚至失敗，一般不會導(dǎo)致假陽性。因此，A、C、D是可能導(dǎo)致PCR假陽性結(jié)果的操作。10.細(xì)胞固定常用的方法有（）A.甲醇B.乙醇C.多聚甲醛D.戊二醛E.冰凍干燥答案：ABCD解析：細(xì)胞固定是指使用化學(xué)試劑使細(xì)胞結(jié)構(gòu)和抗原保持穩(wěn)定，常用的固定方法包括使用有機溶劑，如甲醇（A）和乙醇（B），它們能快速滲透細(xì)胞，使蛋白質(zhì)變性固定。使用醛類化合物，如多聚甲醛（C）和戊二醛（D），通過與蛋白質(zhì)中的氨基酸基團反應(yīng)形成交聯(lián)，使結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定。冰凍干燥（E）是一種通過控制溫度和壓力使細(xì)胞內(nèi)水分升華的方法，主要用于制備細(xì)胞或組織的干燥標(biāo)本，用于長期保存或特殊染色，雖然涉及脫水固定，但通常不作為常規(guī)的即時固定方法。因此，甲醇、乙醇、多聚甲醛、戊二醛是常用的細(xì)胞固定方法。11.PCR實驗中，以下哪些因素會影響引物設(shè)計（）A.引物長度B.G/C含量C.退火溫度D.特異性E.二級結(jié)構(gòu)答案：ABDE解析：設(shè)計PCR引物時需要考慮多個因素以確保引物質(zhì)量和PCR效率。引物長度（A）通常在18-30個核苷酸之間，過長或過短都不理想。G/C含量（B）影響引物的熔解溫度（Tm），通常希望兩條引物的G/C含量和Tm值相近，且在合適范圍（一般50-65℃）。引物設(shè)計的直接目的是獲得特定的退火溫度（C），但這不是設(shè)計時考慮的因素，而是設(shè)計結(jié)果之一。引物特異性（D）至關(guān)重要，必須避免與模板或其他非目標(biāo)序列結(jié)合，這通過選擇高相似度、無重復(fù)序列的引物來實現(xiàn)。二級結(jié)構(gòu)（E），如發(fā)夾結(jié)構(gòu)或引物二聚體，會干擾引物與模板的結(jié)合，需要避免。因此，A、B、D、E是影響引物設(shè)計的關(guān)鍵因素。12.蛋白質(zhì)凝膠電泳技術(shù)包括（）A.SDSB.凝膠過濾層析C.聚丙烯酰胺凝膠電泳D.等電聚焦E.載波藍(lán)電泳答案：ACD解析：蛋白質(zhì)凝膠電泳是分離純化蛋白質(zhì)的常用方法，根據(jù)分離原理和凝膠類型可分為多種。SDS（A）是基于蛋白質(zhì)分子量和SDS變性后帶電性質(zhì)的分離方法，應(yīng)用廣泛。聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）（C）是一種通用的凝膠電泳技術(shù)，可以通過調(diào)整凝膠濃度和緩沖體系實現(xiàn)不同目的，如分離純化、鑒定等。等電聚焦（IEF）（D）是基于蛋白質(zhì)等電點不同在pH梯度中進(jìn)行分離的技術(shù)。凝膠過濾層析（B）是基于分子大小排阻的層析技術(shù)，不屬于凝膠電泳范疇。載波藍(lán)電泳（E）是一種老式的電泳技術(shù)，用于核酸電泳，不常用于蛋白質(zhì)。因此，A、C、D屬于蛋白質(zhì)凝膠電泳技術(shù)。13.細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路常見的元件包括（）A.受體B.第二信使C.蛋白激酶D.負(fù)調(diào)控因子E.細(xì)胞核答案：ABCD解析：細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是指細(xì)胞接收外部信號并將其轉(zhuǎn)化為內(nèi)部響應(yīng)的過程，涉及一系列分子和信號分子。受體（A）是位于細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)，能識別并結(jié)合特定信號分子的蛋白質(zhì)。第二信使（B）如cAMP、Ca2+等，在受體激活后產(chǎn)生，放大信號。蛋白激酶（C）如PKA、PKC、MAPK等，通過磷酸化其他蛋白來傳遞和放大信號。負(fù)調(diào)控因子（D）如磷酸酶、抑癌蛋白等，可以終止或減弱信號通路。細(xì)胞核（E）是許多信號最終傳導(dǎo)的目標(biāo)場所，如調(diào)控基因表達(dá)，但它本身不是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的元件。因此，A、B、C、D是細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路常見的元件。14.WesternBlot實驗中，蛋白質(zhì)印跡的步驟包括（）A.蛋白質(zhì)樣品制備與SDS電泳B.蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上C.膜封閉D.特異性抗體孵育E.化學(xué)發(fā)光或熒光檢測答案：ABCDE解析：WesternBlot（蛋白質(zhì)印跡）是檢測特定蛋白質(zhì)的技術(shù)，其基本步驟包括：首先制備蛋白質(zhì)樣品并進(jìn)行SDS電泳（A），根據(jù)分子量將蛋白質(zhì)分離。然后將蛋白質(zhì)從凝膠上轉(zhuǎn)移（印跡）到固相支持膜上（如PVDF膜或尼龍膜）（B）。為了防止非特異性結(jié)合，轉(zhuǎn)移完成后需要對膜進(jìn)行封閉處理（C），常用封閉液如TBST溶液中的BSA或脫脂奶粉。接下來，用特異性抗體（一抗）進(jìn)行孵育，與目標(biāo)蛋白結(jié)合（D）。最后，用酶標(biāo)二抗（如果一抗是抗體）或直接用標(biāo)記有酶或熒光染料的抗體進(jìn)行孵育，然后用化學(xué)發(fā)光底物（E）或熒光淬滅劑檢測條帶。因此，A、B、C、D、E都是WesternBlot實驗中蛋白質(zhì)印跡的步驟。15.基因測序常用的方法有（）A.Sanger測序法B.Maxam-Gilbert測序法C.基因芯片技術(shù)D.PyrosequencingE.二代測序技術(shù)答案：ABDE解析：基因測序是指測定DNA或RNA分子中核苷酸序列的過程，歷史上和目前常用的方法包括：Sanger測序法（A），基于鏈終止子原理的測序方法，是傳統(tǒng)測序的主要方法。Maxam-Gilbert測序法（B），也是一種早期的測序方法，基于化學(xué)方法切割DNA鏈。Pyrosequencing（D），又稱焦磷酸測序，是一種實時測序技術(shù)。二代測序技術(shù)（E），如Illumina測序平臺，能夠高通量、并行化地測序，是目前主流測序技術(shù)。基因芯片技術(shù)（C）主要用于基因表達(dá)譜分析或基因突變檢測，不直接測定整個基因或DNA序列的長度，因此不屬于測序方法。因此，A、B、D、E是基因測序常用的方法。16.細(xì)胞培養(yǎng)過程中，以下哪些操作可能導(dǎo)致細(xì)胞污染（）A.使用無菌不完善的培養(yǎng)基B.加樣操作不規(guī)范C.實驗室環(huán)境通風(fēng)不良D.操作人員未洗手E.培養(yǎng)容器未徹底滅菌答案：ABCDE解析：細(xì)胞培養(yǎng)要求嚴(yán)格的無菌環(huán)境，任何不規(guī)范的操作都可能導(dǎo)致細(xì)胞污染。使用無菌不完善的培養(yǎng)基（A）可能含有細(xì)菌或真菌。加樣操作不規(guī)范（B），如直接從培養(yǎng)瓶口倒入培養(yǎng)液，或使用未滅菌的移液器尖端接觸管口，可能導(dǎo)致污染。實驗室環(huán)境通風(fēng)不良（C），空氣中的微生物容易沉降到操作區(qū)域。操作人員未洗手（D）或手臂消毒不徹底，在開蓋操作時容易將微生物帶到培養(yǎng)物上。培養(yǎng)容器未徹底滅菌（E）是明顯的污染源。因此，A、B、C、D、E都是可能導(dǎo)致細(xì)胞污染的操作。17.下列哪些屬于生物安全等級實驗室的防護(hù)特點（）A.高壓滅菌器B.超凈工作臺或生物安全柜C.雙門高壓滅菌服D.嚴(yán)格的人員進(jìn)出管理E.廢物高溫高壓處理答案：ABCDE解析：生物安全等級實驗室（BSL）是為了保護(hù)實驗人員、環(huán)境和公眾免受實驗室中可能存在的生物因子危害而設(shè)計的設(shè)施，其防護(hù)特點包括：必須配備高壓滅菌器（A）用于滅菌設(shè)備和廢物。根據(jù)生物安全等級和實驗操作，需要配備超凈工作臺或生物安全柜（B）來提供局部潔凈環(huán)境或保護(hù)性環(huán)境。人員需要穿戴特定的防護(hù)裝備，如雙門高壓滅菌服（C）等，以防止感染和污染。實驗室有嚴(yán)格的人員進(jìn)出管理（D）和標(biāo)本管理制度。所有產(chǎn)生的廢物必須經(jīng)過滅活處理，通常采用高溫高壓滅菌（E）或其他有效方法。因此，A、B、C、D、E都是生物安全等級實驗室的防護(hù)特點。18.影響蛋白質(zhì)層析分離效果的因素有（）A.柱子尺寸B.流動相組成C.蛋白質(zhì)上樣量D.固定相類型E.操作溫度答案：ABCDE解析：蛋白質(zhì)層析（包括離子交換、親和、凝膠過濾等）的分離效果受多種因素影響。柱子尺寸（A）影響樣品容量和分辨率。流動相組成（B），包括緩沖液成分、pH、離子強度、添加劑（如尿素）等，顯著影響蛋白質(zhì)與固定相的相互作用和洗脫行為。蛋白質(zhì)上樣量（C）需要控制在柱子的負(fù)載能力范圍內(nèi)，過量上樣會降低分辨率和回收率。固定相類型（D），如離子交換樹脂的種類、親和層析的配體、凝膠過濾填料的孔徑等，是決定分離機制和特性的關(guān)鍵。操作溫度（E）會影響蛋白質(zhì)構(gòu)象、溶解度和層析過程中的反應(yīng)速率。因此，A、B、C、D、E都是影響蛋白質(zhì)層析分離效果的因素。19.下列哪些操作屬于核酸提取的基本步驟（）A.細(xì)胞裂解B.去除蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)C.核酸沉淀D.核酸溶解E.純化答案：ABCDE解析：核酸提取是從生物樣本中分離得到純化核酸分子的過程，基本步驟通常包括：首先通過細(xì)胞裂解（A）破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，釋放核酸。然后需要去除蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、多糖等雜質(zhì)（B），常用方法包括酚氯仿抽提或試劑盒法。接下來，通過核酸沉淀（C）步驟，如加入乙醇或異丙醇，使核酸從溶液中析出。沉淀的核酸需要用適當(dāng)?shù)木彌_液溶解（D）。最后，可能需要進(jìn)行進(jìn)一步純化（E），如通過凝膠電泳切膠或?qū)游鲋兓?，以獲得高純度的核酸。因此，A、B、C、D、E都是核酸提取的基本步驟。20.基因工程中，構(gòu)建基因表達(dá)載體通常需要（）A.啟動子B.標(biāo)記基因C.多克隆位點D.終止子E.載體骨架答案：ABCDE解析：基因表達(dá)載體是用于在宿主細(xì)胞中表達(dá)外源基因的質(zhì)?；虿《据d體，其構(gòu)建通常需要包含以下元件：啟動子（A），位于基因上游，是RNA聚合酶結(jié)合的位點，控制基因轉(zhuǎn)錄的起始。標(biāo)記基因（B），如抗生素抗性基因，用于篩選成功轉(zhuǎn)化了載體的細(xì)胞。多克隆位點（MCS）（C），是一段包含多個不同限制性內(nèi)切酶識別位點的區(qū)域，方便外源基因的插入。終止子（D），位于基因下游，信號終止轉(zhuǎn)錄并促進(jìn)RNA轉(zhuǎn)錄本的釋放。載體骨架（E），即質(zhì)粒DNA本身，提供復(fù)制起始位點和復(fù)制相關(guān)基因，確保載體能在宿主細(xì)胞中復(fù)制和維持。因此，A、B、C、D、E都是構(gòu)建基因表達(dá)載體時通常需要的元件。三、判斷題1.PCR反應(yīng)體系中，dNTPs的濃度越高，PCR擴增效率越好。（）答案：錯誤解析：PCR反應(yīng)體系中，dNTPs是合成新DNA鏈的原料。雖然dNTPs濃度需要適宜，但過高并不僅僅意味著效率越好。過高的dNTPs濃度可能會抑制DNA聚合酶的活性，或者導(dǎo)致錯誤延伸，反而降低PCR的特異性和效率。通常，dNTPs的濃度在特定范圍內(nèi)（如各0.2-0.4mM）最為理想。因此，dNTPs濃度越高越好是錯誤的。2.凝膠過濾層析可以根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點不同來分離蛋白質(zhì)。（）答案：錯誤解析：凝膠過濾層析（也稱為尺寸排阻層析）是利用填充床中孔隙的大小來分離分子基于其大小的技術(shù)。大分子不能進(jìn)入孔隙而被排阻，從而先流出柱子；小分子可以進(jìn)入孔隙，路徑更長，從而后流出柱子。分離的依據(jù)是分子大小，而不是蛋白質(zhì)的等電點。根據(jù)等電點不同分離蛋白質(zhì)的方法是等電聚焦。3.細(xì)胞培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中的血清是必需的成分。（）答案：錯誤解析：血清是許多細(xì)胞培養(yǎng)中常用的添加物，它含有多種生長因子、激素、維生素和氨基酸，可以支持細(xì)胞生長。然而，血清并非所有細(xì)胞培養(yǎng)都必需。對于某些能夠自身合成所需生長因子的細(xì)胞，或者為了避免血清可能帶來的污染（如支原體）和免疫原性，研究人員會使用無血清培養(yǎng)基。因此，血清不是所有細(xì)胞培養(yǎng)必需的成分。4.WesternBlot實驗中，一抗和二抗不能同時使用。（）答案：錯誤解析：在WesternBlot實驗中，為了提高檢測靈敏度，常常采用酶標(biāo)二抗（即結(jié)合一抗的抗體）進(jìn)行孵育。這種間接免疫法利用二抗上標(biāo)的酶（如辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶）催化底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。在這種情況下，需要先用封閉液封閉膜上的非特異性位點，然后用一抗孵育，最后用酶標(biāo)二抗孵育，最后用底物顯色。因此，在間接法WesternBlot中，一抗和二抗會先后使用，但并非絕對不能同時使用，只是常規(guī)操作是分開使用。5.DNA測序只能測定雙鏈DNA的序列。（）答案：錯誤解析：絕大多數(shù)DNA測序技術(shù)，無論是傳統(tǒng)的Sanger測序還是現(xiàn)代的高通量測序技術(shù)，都是基于單鏈DNA模板進(jìn)行的。測序反應(yīng)是在單鏈DNA模板上合成互補鏈，并通過檢測合成過程中摻入的脫氧核糖核苷酸的類型來確定模板鏈的序列。因此，DNA測序的對象是單鏈DNA，而不是雙鏈DNA。6.細(xì)胞融合技術(shù)可以用于制備單克隆抗體。（）答案：正確解析：制備單克隆抗體最經(jīng)典和常用的方法是雜交瘤技術(shù)，該技術(shù)將能夠產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞與無限增殖的骨髓瘤細(xì)胞通過細(xì)胞融合方法融合，形成雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生特異性抗體，又能無限增殖，從而可以大量制備單克隆抗體。因此，細(xì)胞融合技術(shù)是制備單克隆抗體的核心步驟之一。7.基因芯片技術(shù)可以用于檢測基因表達(dá)譜。（）答案：正確解析：基因芯片（GeneChip）是一種高通量生物芯片，其表面固定有大量已知的DNA片段、RNA片段或蛋白質(zhì)等生物分子。通過將待測樣本（如mRNA）與芯片上的探針雜交，可以根據(jù)雜交信號的強度檢測基因的表達(dá)水平，從而獲得基因表達(dá)譜。因此，基因芯片技術(shù)廣泛用于檢測基因表達(dá)譜分析。8.蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)是指蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象。（）答案：錯誤解析：蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)是指蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸的排列順序，是蛋白質(zhì)最基本的結(jié)構(gòu)層次。蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象（包括二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)和四級結(jié)構(gòu)）是指氨基酸鏈折疊形成的空間形態(tài)。因此，一級結(jié)構(gòu)不是空間構(gòu)象。9.RNA干擾（RNAi）技術(shù)可以用于基因敲低。（）答案：正確解析：RNA干擾（RNAi）是一種由雙鏈RNA（dsRNA）誘導(dǎo)的、序列特異性的基因沉默現(xiàn)象。其原理是dsRNA在細(xì)胞內(nèi)被切割成小干擾RNA（siRN