ICS65.020.20

CCSB35

43

湖南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB43/T3128—2024

飼用富鐵釀酒酵母菌液體發(fā)酵技術(shù)規(guī)程

CodeofpracticeforliquidproductionofIron-EnrichedSaccharomycescerevisiaefor

feeding

2024-12-31發(fā)布2025-03-31實(shí)施

湖南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB43/T3128—2024

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義.........................................................................1

4發(fā)酵工藝...........................................................................1

5質(zhì)量檢測(cè)...........................................................................3

6檔案管理...........................................................................3

附錄A（資料性）飼用富鐵釀酒酵母菌液體發(fā)酵生產(chǎn)檔案...................................4

I

DB43/T3128—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。

本文件由湖南農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本文件起草單位：湖南省微生物研究所、常德科雄飼料有限公司。

本文件主要起草人：鄔理洋、曾艷、劉宇波、周冰玉、胡浩、汪彬、王春平、周小玲、李曄、黃利

紅、陳嫻、李翹羽、舒燕、唐少軍、郭照輝。

II

DB43/T3128—2024

飼用富鐵釀酒酵母菌液體發(fā)酵技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了飼用富鐵釀酒酵母菌（iron-enrichedSaccharomycescerevisiae）液體發(fā)酵工藝、質(zhì)量檢

測(cè)和檔案管理等要求。

本文件適用于飼用富鐵釀酒酵母菌液體發(fā)酵生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB4789.15食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)

GB/T13091飼料中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)方法

GB/T13092飼料中霉菌檢驗(yàn)方法

GB/T13885飼料中鈣、銅、鐵、鎂、錳、鉀、鈉和鋅含量的測(cè)定

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4發(fā)酵工藝

工藝流程

工藝流程見(jiàn)圖1。

圖1飼用富鐵釀酒酵母菌液體發(fā)酵工藝流程

1

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菌種保藏與活化

4.2.1菌種保藏

采用30%甘油管將菌種保藏在-80℃超低溫冰箱。

4.2.2菌種活化

發(fā)酵前取出甘油管，自然升溫至常溫，無(wú)菌條件下用接種環(huán)挑取少量菌液到麥芽汁瓊脂平板劃線，

28℃培養(yǎng)。

24h后，挑取生長(zhǎng)旺盛的單菌落至麥芽汁瓊脂平板重新劃線培養(yǎng)，重復(fù)2次～3次以活化釀酒酵母

菌種。

活化好的菌種接種到麥芽汁瓊脂斜面培養(yǎng)管中，培養(yǎng)24h后冷藏備用。

麥芽汁瓊脂配方為麥芽浸粉20g、蛋白胨1g、葡萄糖20g、瓊脂15g、水1000mL、pH自然。

液體菌種制備

4.3.1液體培養(yǎng)基配方

麥芽浸粉20g、蛋白胨1g、葡萄糖20g、氯霉素0.1g、水1000mL、pH自然。

4.3.2裝瓶滅菌

液體培養(yǎng)基裝液量為三角瓶容量的30%～40%，聚丙烯膜或瓶塞封口。在121℃～126℃，0.14

MPa～0.16MPa的壓力下，保持30min。

4.3.3接種培養(yǎng)

將滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至28℃以下，無(wú)菌條件下從釀酒酵母斜面培養(yǎng)管中挑取2環(huán)～3環(huán)菌種，

接種于三角瓶培養(yǎng)基中。

三角瓶置于恒溫?fù)u床，在28℃～30℃、180r/min～220r/min條件下振蕩培養(yǎng)24h。

發(fā)酵罐液體菌種制作

4.4.1發(fā)酵罐檢修

非連續(xù)生產(chǎn)使用的發(fā)酵罐，在使用前應(yīng)檢修與清洗，確認(rèn)設(shè)備的電氣、機(jī)械和控制系統(tǒng)正常。配套

的空氣系統(tǒng)、蒸汽系統(tǒng)均應(yīng)檢修正常。

4.4.2發(fā)酵罐清洗與空消

清洗發(fā)酵罐及管道后，罐內(nèi)注入清水，用NaOH調(diào)節(jié)pH至9.0，浸泡2h后通蒸汽煮沸。冷卻后用

自來(lái)水清洗干凈，確保內(nèi)壁無(wú)任何污垢。

發(fā)酵罐清洗干凈后進(jìn)行空消。蒸汽進(jìn)罐升溫至121℃，控制壓力0.14MPa～0.16MPa、溫度

121℃～126℃，30min后關(guān)閉所有蒸汽，打開(kāi)循環(huán)冷卻水降溫至28℃?zhèn)溆谩?/p>

4.4.3培養(yǎng)基配方

蔗糖50g、尿素4g、酵母膏24g、KH2PO42.5g、MgSO4·7H2O0.5g、FeSO4·7H2O4.5g，水

1000mL，pH4.8。

4.4.4投料與定容

2

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打開(kāi)罐蓋，開(kāi)啟攪拌，將培養(yǎng)基加入罐內(nèi)，加水定容，調(diào)節(jié)pH至4.8，裝液量為發(fā)酵罐總體積的

60%～70%，混合均勻。

4.4.5發(fā)酵罐實(shí)消

夾層通蒸汽預(yù)熱培養(yǎng)基至80℃后，蒸汽進(jìn)罐升溫至121℃，控制壓力0.14MPa～0.16MPa，停

止攪拌，保壓恒溫30min。

保溫滅菌完畢關(guān)閉所有蒸汽，壓力為0.1MPa時(shí)通入無(wú)菌空氣，打開(kāi)循環(huán)冷卻水降溫至28℃?zhèn)?/p>

用。

4.4.6接種

無(wú)菌操作接種，接種量為0.5%～1%（V/V）。

4.4.7發(fā)酵培養(yǎng)

罐溫為28℃～32℃，罐壓為0.05MPa，通氣比為1.08，攪拌速度為180r/min～220r/min，培

養(yǎng)時(shí)間為36h～48h。

4.4.8發(fā)酵終止

pH值小于等于4，溶氧值（DO）為0mg/L時(shí)終止發(fā)酵。

5質(zhì)量檢測(cè)

有效活菌數(shù)的測(cè)定

按GB4789.15規(guī)定執(zhí)行。

Fe2+的測(cè)定

按GB/T13885規(guī)定執(zhí)行。

沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)

按GB/T13091規(guī)定執(zhí)行。

霉菌檢驗(yàn)

按GB/T13092規(guī)定執(zhí)行。

6檔案管理

生產(chǎn)檔案資料記錄完整準(zhǔn)確，檔案內(nèi)容見(jiàn)附錄A。檔案記錄一式2份保存于生產(chǎn)基地和技術(shù)指導(dǎo)單

位，檔案保存3年以上。

3

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A

A

附錄A

（資料性）

飼用富鐵釀酒酵母菌液體發(fā)酵生產(chǎn)檔案

表A.1給出了飼用富鐵釀酒酵母菌液體發(fā)酵生產(chǎn)檔案內(nèi)容。

表A.1飼用富鐵釀酒酵母菌液體發(fā)酵生產(chǎn)檔案

編號(hào)：

基地名稱聯(lián)系人聯(lián)系電話

地址

所屬單位名稱

發(fā)酵技術(shù)情況

時(shí)間發(fā)酵體積

培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配方滅菌條件

記錄人