ICS65.020.01

CCSB25

15

內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T2600—2022

苜蓿中粗蛋白、粗纖維、酸性洗滌纖維、

中性洗滌纖維、酸性洗滌木質(zhì)素的快速測(cè)

定近紅外光譜法

Methodfordeterminationofcrudeprotein，crudefiber，acid

determinationfiber，neutraldeterminationfiberandaciddetergent

fiberinalfalfa—Near-infraredspectroscopy

2022-06-24發(fā)布2022-07-24實(shí)施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T2600—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC19）歸口。

本文件起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所、內(nèi)蒙古自治區(qū)質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化研究院、內(nèi)蒙古自治區(qū)

農(nóng)牧業(yè)技術(shù)推廣中心、錫林郭勒盟農(nóng)牧業(yè)科學(xué)研究所。

本文件主要起草人：常春、付慧、姚繼紅、盈盈、馬金霞、吳洪新、王川、林克劍、戴雅婷、云穎、

韓夢(mèng)琪、張曉宇、徐文麗、包立高、石泉、劉洪林、降曉偉、黃奕穎、李潤(rùn)航、劉宇寧、張燕東、王文

曦、李坤娜、趙志惠、劉江英、湖日爾、李薇、衛(wèi)媛。

I

DB15/T2600—2022

苜蓿中粗蛋白、粗纖維、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、酸性洗滌

木質(zhì)素的快速測(cè)定近紅外光譜法

1范圍

本文件規(guī)定了用近紅外光譜法的術(shù)語(yǔ)和定義、原理、儀器和設(shè)備、試樣制備、分析步驟、樣品的檢

測(cè)和結(jié)果、異常檢測(cè)結(jié)果的確認(rèn)和處理以及校正模型的升級(jí)。

本文件適用于用近紅外光譜法大批量快速測(cè)定苜蓿中粗蛋白、粗纖維、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖

維、酸性洗滌木質(zhì)素。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6432飼料中粗蛋白的測(cè)定凱氏定氮法

GB/T6434飼料中粗纖維的含量測(cè)定過(guò)濾法

GB/T20805飼料中酸性洗滌木質(zhì)素(ADL)的測(cè)定

GB/T20806飼料中中性洗滌纖維(NDF)的測(cè)定

NY/T1459飼料中酸性洗滌纖維的測(cè)定

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

馬氏距離mahalanobisdistence

廣義上為度量未知樣品與特定樣品之間的距離。

注：常用于光譜的判別分析待測(cè)樣品指標(biāo)含量是否在校正模型范圍內(nèi)。

殘差deviation

樣品近紅外光譜測(cè)定值與理化方法測(cè)定值（現(xiàn)行有效的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定值）的差值。

相對(duì)分析誤差relativepercentdeviation（RPD）

驗(yàn)證集樣品標(biāo)準(zhǔn)差與預(yù)測(cè)殘差均方根的比值，常用來(lái)評(píng)定校正模型的可用性。

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DB15/T2600—2022

交互驗(yàn)證殘差均方根root-mean-squareofcross-valiation（RMSECV）

用來(lái)衡量校正模型的理化方法測(cè)定值的準(zhǔn)確性，該值越小，說(shuō)明建立模型所使用的理化方法測(cè)定值

越準(zhǔn)確。

相關(guān)系數(shù)correlationcoefficient

近紅外光譜測(cè)定值與理化測(cè)定值的相關(guān)性，該值越大，表明二者的相關(guān)性越好。

異常樣品outliersample

儀器掃描報(bào)警樣品，表示該樣品可能與校正模型使用的樣品差異較大。

4原理

利用苜蓿產(chǎn)品中含氫、碳、氧（X-H、X-C、N、O）等化學(xué)鍵在780nm～2500nm波長(zhǎng)下震動(dòng)的合頻

或倍頻所產(chǎn)生的吸收譜圖，通過(guò)多元校正方法建立粗蛋白、粗纖維、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、酸

性洗滌木質(zhì)素的定量分析校正模型，然后將檢測(cè)樣品的近紅外光譜導(dǎo)入校正模型，實(shí)現(xiàn)苜蓿中粗蛋白、

粗纖維、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、酸性洗滌木質(zhì)素含量的同步快速檢測(cè)。

5儀器和設(shè)備

近紅外光譜儀

帶有可連續(xù)掃描單色器以及積分球漫反射掃描部件的近紅外光譜儀或其他類似產(chǎn)品，掃描范圍400

nm～2500nm，波長(zhǎng)準(zhǔn)確度小于等于0.5nm，波長(zhǎng)重現(xiàn)性為小于等于0.04nm。

軟件

采用具備積分球漫反射的分析條件，或者具有近紅外光譜數(shù)據(jù)的收集，存儲(chǔ)、加工等功能的其他同

類型軟件。

電熱恒溫干燥箱

調(diào)溫范圍50℃～200℃。

粉碎機(jī)

滿足樣品制備成0.42mm試樣的粉碎機(jī)。

電子臺(tái)秤

最大量程500g，感量為0.1g的電子臺(tái)秤。

6試樣制備

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DB15/T2600—2022

鮮樣放入103℃的干燥箱（30±5）min進(jìn)行殺青，裝紙袋，經(jīng)65℃烘干24h，取出室溫冷卻4h，

稱取其質(zhì)量約250g（M1）（紙袋和草樣），重復(fù)烘干至恒重M2（g），（兩次稱樣結(jié)果的相對(duì)偏差不超

過(guò)1.0%）。烘干并恒重的試樣利用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎、全部過(guò)孔徑0.42mm篩，混合均勻，待測(cè)。干樣無(wú)

需殺青、烘干，直接粉碎過(guò)篩即可。

7分析步驟

光譜采集

在噪聲和波長(zhǎng)準(zhǔn)確性及重現(xiàn)性滿足儀器自檢要求后，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定合適的光譜采集參數(shù)，將混合均

勻的苜蓿試樣裝入樣品杯進(jìn)行光譜采集，結(jié)束后清潔樣品杯，重新裝樣（每次填裝樣品時(shí)注意避免樣品

中出現(xiàn)縫隙或空氣，保證每次裝填樣品的均勻度），進(jìn)行第二次掃描。每次應(yīng)連續(xù)測(cè)量不少于2次，以平

均光譜作為最終測(cè)量光譜。

標(biāo)準(zhǔn)理化分析方法測(cè)定

選取近紅外光譜采集后的苜蓿試樣，分別按照GB/T6432、GB/T6434、NY/T1459、GB/T20806、

GB/T20805規(guī)定的檢測(cè)方法測(cè)定其粗蛋白、粗纖維、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、酸性洗滌木質(zhì)素含

量。

校正模型的建立

取有代表性的苜蓿樣品，粗蛋白、粗纖維、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、酸性洗滌木質(zhì)素含量范

圍應(yīng)涵蓋待測(cè)樣品特性，建模樣品應(yīng)不少于100份，選擇合適的預(yù)處理方法對(duì)近紅外光譜進(jìn)行預(yù)處理，

在選擇合適的波長(zhǎng)、變量數(shù)目及多元校正方法下，結(jié)合對(duì)應(yīng)樣品的標(biāo)準(zhǔn)理化分析值，建立校正模型，并

且校正模型利用相關(guān)系數(shù)（R）、RPD值作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)按照表1。

表1相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)

評(píng)價(jià)項(xiàng)目RPD值相關(guān)系數(shù)（R）

粗蛋白≥3.0≥90

粗纖維≥3.0≥90

酸性洗滌纖維≥3.0≥90

中性洗滌纖維≥3.0≥90

酸性洗滌木質(zhì)素≥3.0≥90

校正模型的驗(yàn)證

利用交叉檢驗(yàn)方法來(lái)驗(yàn)證校正模型，在建模前將已知化學(xué)測(cè)定值的建模樣品進(jìn)行編號(hào)，如100份建

模樣品，依次編號(hào)1～100號(hào)，然后取出編號(hào)為1的樣品，將編號(hào)2～100的樣品建模，用編號(hào)1的樣品進(jìn)行

校正，以此類推，分別取出其它編號(hào)的樣品進(jìn)行驗(yàn)證。交叉檢驗(yàn)方法適用樣品量較少，在樣品量有限時(shí)，

相比外部檢驗(yàn)法更為優(yōu)越，以相關(guān)系數(shù)（R）、RPD值、交互驗(yàn)證殘差均方根（RMSECV）作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，相

關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)按照表2。

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DB15/T2600—2022

表2校正模型驗(yàn)證評(píng)價(jià)指標(biāo)

交互驗(yàn)證殘差均方根

評(píng)價(jià)項(xiàng)目RPD值相關(guān)系數(shù)（R）

（RMSECV）

粗蛋白≥3.0≥90＜2

粗纖維≥3.0≥90＜2

酸性洗滌纖維≥3.0≥90＜2

中性洗滌纖維≥3.0≥90＜2

酸性洗滌木質(zhì)素≥3.0≥90＜2

8樣品檢測(cè)和結(jié)果

樣品檢測(cè)

按照7.1光譜采集方法采集樣品近紅外光譜，儀器和采集條件與建模過(guò)程保持一致，采用7.3建立的

光譜校正模型測(cè)定其粗蛋白、粗纖維、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、酸性洗滌木質(zhì)素含量，記錄測(cè)量

結(jié)果，并保留三位有效數(shù)字。

檢測(cè)結(jié)果

每個(gè)樣品2次檢測(cè)結(jié)果中相對(duì)相差都不應(yīng)超過(guò)10%，計(jì)算平均值作為最終檢測(cè)結(jié)果。注意檢測(cè)結(jié)果應(yīng)

在使用校正模型所覆蓋的粗蛋白、粗纖維、酸性洗滌纖維、中性洗滌纖維、酸性洗滌木質(zhì)素含量范圍內(nèi)。

9異常檢測(cè)結(jié)果的確認(rèn)和處理

異常結(jié)果情況

異常結(jié)果應(yīng)符合如下情況：

——利用馬氏距離來(lái)識(shí)別異常樣品，如果馬氏距離小于等于0.6，則按照近紅外光譜預(yù)測(cè)值直接

給出測(cè)量值，若馬氏距離大于0.6，說(shuō)明該樣品超出校正模型所覆蓋的粗蛋白、粗纖維、酸

性洗滌纖維、中性洗滌纖維、酸性洗滌木質(zhì)素含量范圍，建議將其納入異常樣品；