2025年上學(xué)期高三生物單克隆抗體制備過程試題一、選擇題（每題3分，共30分）單克隆抗體制備過程中，B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的原理是（）A.細(xì)胞膜的選擇透過性B.細(xì)胞膜的流動性C.細(xì)胞的全能性D.基因重組下列關(guān)于滅活病毒在細(xì)胞融合中作用的敘述，正確的是（）A.保留感染活性，促進(jìn)細(xì)胞融合B.失去感染活性，但保留抗原結(jié)構(gòu)C.破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)細(xì)胞融合D.提供能量，加速融合過程傳統(tǒng)抗體制備方法的缺陷不包括（）A.產(chǎn)量低B.純度低C.特異性差D.無法體外培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞的原理是（）A.阻斷骨髓瘤細(xì)胞的DNA合成途徑B.促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的增殖C.抑制未融合細(xì)胞的代謝D.激活雜交細(xì)胞的抗體合成基因單克隆抗體制備過程中，“克隆化培養(yǎng)”的目的是（）A.獲得多種雜交瘤細(xì)胞B.篩選能無限增殖的細(xì)胞C.保證抗體的單一性和純度D.提高細(xì)胞融合效率下列關(guān)于雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)的敘述，錯誤的是（）A.既能無限增殖，又能產(chǎn)生抗體B.由B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成C.可在體外培養(yǎng)液中大量培養(yǎng)D.產(chǎn)生的抗體具有多種抗原結(jié)合位點(diǎn)單克隆抗體在疾病診斷中的優(yōu)勢不包括（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.可大規(guī)模生產(chǎn)D.對機(jī)體副作用大動物細(xì)胞培養(yǎng)時，培養(yǎng)液中加入5%CO?的主要作用是（）A.提供碳源B.維持培養(yǎng)液pHC.抑制細(xì)菌生長D.促進(jìn)細(xì)胞呼吸下列過程中，不需要利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的是（）A.雜交瘤細(xì)胞的篩選B.單克隆抗體的體外生產(chǎn)C.B淋巴細(xì)胞的免疫激活D.雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)單克隆抗體制備中，第二次篩選的目的是（）A.去除未融合的B淋巴細(xì)胞B.去除未融合的骨髓瘤細(xì)胞C.篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞D.篩選能無限增殖的雜交瘤細(xì)胞二、填空題（每空2分，共40分）單克隆抗體制備的基本原理包括免疫原理、和。誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法有物理法（如__________）、化學(xué)法（如__________）和生物法（如__________）。向小鼠注射特定抗原后，從小鼠的__________中獲取已免疫的B淋巴細(xì)胞。選擇培養(yǎng)基中通常添加__________，以阻斷骨髓瘤細(xì)胞的DNA合成途徑，從而篩選出雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)方法包括__________培養(yǎng)和__________培養(yǎng)。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是__________、和。體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞時，培養(yǎng)液中除基本營養(yǎng)物質(zhì)外，還需添加__________以維持細(xì)胞的生長和增殖。單克隆抗體在治療疾病時，可與藥物結(jié)合形成“__________”，實(shí)現(xiàn)對病變細(xì)胞的特異性殺傷?？乖?抗體雜交技術(shù)的原理是利用抗體與抗原的__________結(jié)合特性，檢測雜交瘤細(xì)胞是否分泌所需抗體。細(xì)胞融合過程中，可能形成的融合細(xì)胞類型有__________、和。三、簡答題（共30分）簡述單克隆抗體制備的完整流程，并說明每一步的目的。（12分）分析單克隆抗體制備過程中“兩次篩選”的具體方法和意義。（8分）舉例說明單克隆抗體在醫(yī)學(xué)診斷和治療中的應(yīng)用，并闡述其優(yōu)勢。（10分）四、分析題（共20分）某研究團(tuán)隊(duì)欲制備抗新冠病毒S蛋白的單克隆抗體，實(shí)驗(yàn)流程如下：①將新冠病毒S蛋白注射到小鼠體內(nèi)，每隔3天注射一次，共注射3次；②取小鼠脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞在PEG誘導(dǎo)下融合；③將融合后的細(xì)胞接種到HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)；④檢測各培養(yǎng)孔上清液中的抗體，篩選出能與S蛋白結(jié)合的陽性孔；⑤將陽性孔中的細(xì)胞稀釋后，每孔接種1個細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)；⑥從培養(yǎng)液中提取單克隆抗體。請回答下列問題：步驟①中，多次注射抗原的目的是什么？（4分）步驟③中使用HAT培養(yǎng)基的原理是什么？（6分）步驟⑤的操作名稱是什么？其目的是什么？（4分）若要大規(guī)模生產(chǎn)該單克隆抗體，可采用何種培養(yǎng)方法？請說明理由。（6分）五、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)題（共20分）某實(shí)驗(yàn)室計(jì)劃制備抗人胰島素單克隆抗體，請?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，包括實(shí)驗(yàn)原理、主要步驟及預(yù)期結(jié)果。參考答案及解析一、選擇題B解析：細(xì)胞融合的原理是細(xì)胞膜具有一定的流動性。B解析：滅活病毒失去感染活性，但保留抗原結(jié)構(gòu)，可誘導(dǎo)細(xì)胞融合。D解析：傳統(tǒng)方法可通過動物體內(nèi)培養(yǎng)獲得抗體，并非無法體外培養(yǎng)。A解析：選擇培養(yǎng)基通過添加氨基喋呤阻斷骨髓瘤細(xì)胞的DNA合成途徑，僅雜交瘤細(xì)胞可利用B淋巴細(xì)胞的S途徑合成DNA。C解析：克隆化培養(yǎng)可保證每個雜交瘤細(xì)胞只產(chǎn)生一種抗體，提高純度。D解析：單克隆抗體由單一B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生，具有單一抗原結(jié)合位點(diǎn)。D解析：單克隆抗體特異性強(qiáng)，對機(jī)體副作用小。B解析：CO?的作用是維持培養(yǎng)液pH穩(wěn)定。C解析：B淋巴細(xì)胞的免疫激活通過抗原注射實(shí)現(xiàn)，無需細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。C解析：第二次篩選通過抗原-抗體雜交技術(shù)篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。二、填空題細(xì)胞融合原理；動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)電融合法；聚乙二醇（PEG）；滅活病毒誘導(dǎo)法脾臟氨基喋呤體外培養(yǎng)液；小鼠腹腔內(nèi)特異性強(qiáng)；純度高；產(chǎn)量大動物血清生物導(dǎo)彈特異性B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞；骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞；雜交瘤細(xì)胞三、簡答題流程及目的：（1）抗原免疫小鼠：使小鼠體內(nèi)產(chǎn)生能分泌特定抗體的B淋巴細(xì)胞；（2）獲取B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞：B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖；（3）誘導(dǎo)細(xì)胞融合：形成雜交瘤細(xì)胞；（4）第一次篩選（選擇培養(yǎng)基）：去除未融合細(xì)胞及自身融合細(xì)胞，保留雜交瘤細(xì)胞；（5）第二次篩選（抗原-抗體雜交）：篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；（6）克隆化培養(yǎng)：保證抗體單一性，擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量；（7）提取單克隆抗體：從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取高純度抗體。兩次篩選：第一次篩選：使用HAT選擇培養(yǎng)基，阻斷骨髓瘤細(xì)胞的DNA合成途徑，僅雜交瘤細(xì)胞存活，目的是獲得雜交瘤細(xì)胞；第二次篩選：采用抗原-抗體雜交技術(shù)，檢測上清液中抗體與特定抗原的結(jié)合能力，目的是篩選能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞，保證抗體的特異性。應(yīng)用及優(yōu)勢：診斷：新冠病毒檢測試劑盒（抗原檢測），利用單克隆抗體與病毒蛋白的特異性結(jié)合，實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確診斷；治療：抗HER2單克隆抗體（如曲妥珠單抗）治療乳腺癌，特異性識別癌細(xì)胞表面抗原，減少對正常細(xì)胞的損傷。優(yōu)勢：靈敏度高、特異性強(qiáng)、可大量制備，降低治療副作用。四、分析題多次注射抗原的目的：增強(qiáng)免疫應(yīng)答，使更多B淋巴細(xì)胞增殖分化為能分泌抗S蛋白抗體的漿細(xì)胞。HAT培養(yǎng)基原理：HAT培養(yǎng)基含次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T）。氨基喋呤阻斷骨髓瘤細(xì)胞的D途徑，而雜交瘤細(xì)胞可利用B淋巴細(xì)胞的S途徑合成DNA，從而在HAT培養(yǎng)基中存活。操作名稱及目的：克隆化培養(yǎng)，目的是保證每個培養(yǎng)孔中僅含一個雜交瘤細(xì)胞，避免抗體混雜，確保抗體的單一性。大規(guī)模生產(chǎn)方法：體外培養(yǎng)（如生物反應(yīng)器），理由是可通過控制培養(yǎng)條件（溫度、pH、營養(yǎng)）實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)量高且易于純化。五、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)題實(shí)驗(yàn)方案實(shí)驗(yàn)原理：免疫原理：注射人胰島素后，小鼠B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗胰島素抗體；細(xì)胞融合：B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞；篩選與培養(yǎng)：通過選擇培養(yǎng)基和抗原-抗體雜交篩選出能產(chǎn)生抗胰島素抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)后提取單克隆抗體。主要步驟：（1）免疫小鼠：將人胰島素蛋白注射到Balb/c小鼠腹腔，每3天一次，共3次；（2）細(xì)胞融合：取小鼠脾臟B淋巴細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞，用PEG誘導(dǎo)融合；（3）篩選雜交瘤細(xì)胞：將融合細(xì)胞接種到HAT培養(yǎng)基，培養(yǎng)1-2周，存活細(xì)胞為雜交瘤細(xì)胞；（4）抗體檢測：采用ELISA法檢測上清液，篩選能與胰島素結(jié)合的陽性雜交瘤細(xì)胞；（5）克隆化培養(yǎng)：陽性細(xì)胞經(jīng)有限稀釋法克隆化，獲得單克隆細(xì)胞株；（6）抗體提?。后w外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，從培養(yǎng)液中純化抗胰島素單克隆抗體。預(yù)期結(jié)果：獲得能穩(wěn)定分泌抗人胰島素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；該抗體可與人胰島素特異性結(jié)合，用于糖尿病的診斷或治療研究。試題設(shè)計(jì)說明緊扣考綱：覆