2025年微生物學(xué)微生物培養(yǎng)與鑒定技能考核及答案解析一、單項選擇題（每題1分，共30分）1.在血瓊脂平板上出現(xiàn)β溶血、菌落呈灰白色、直徑1～2mm、觸酶陰性的革蘭陽性球菌，最可能的鑒定步驟是A.直接報告為A群鏈球菌B.做桿菌肽敏感試驗(yàn)C.做CAMP試驗(yàn)D.做Optochin敏感試驗(yàn)答案：B解析：β溶血、觸酶陰性的革蘭陽性球菌首先考慮化膿鏈球菌，桿菌肽敏感試驗(yàn)陽性即可初步報告。2.懷疑厭氧菌感染，采集標(biāo)本后最佳運(yùn)送方式是A.注入需氧轉(zhuǎn)運(yùn)管B.注入含半胱氨酸的厭氧轉(zhuǎn)運(yùn)管并立即送檢C.直接冷藏于4℃D.注入含枸櫞酸鈉的普通試管答案：B解析：厭氧菌對氧敏感，需專用厭氧轉(zhuǎn)運(yùn)管并盡快培養(yǎng)。3.麥康凱瓊脂上形成無色透明菌落、氧化酶陽性、不發(fā)酵乳糖、OF葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的革蘭陰性桿菌，下一步應(yīng)選A.做靛基質(zhì)試驗(yàn)B.做氧化酶試驗(yàn)（已做）C.做動力試驗(yàn)并接種SS瓊脂D.做API20NE答案：D解析：已排除腸桿菌科，需用非發(fā)酵菌鑒定系統(tǒng)。4.在沙氏葡萄糖瓊脂上25℃培養(yǎng)3天后出現(xiàn)絨毛狀菌落，鏡檢可見45°分枝、有隔菌絲，最可能的真菌屬是A.曲霉屬B.毛霉屬C.青霉屬D.念珠菌屬答案：A解析：45°分枝、有隔菌絲為曲霉典型特征。5.對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）進(jìn)行確認(rèn)，首選分子靶基因是A.mecAB.blaZC.vanAD.tetM答案：A解析：mecA編碼PBP2a，是MRSA的分子標(biāo)志。6.下列哪種培養(yǎng)基最適合分離百日咳鮑特菌A.鮑-金培養(yǎng)基B.巧克力瓊脂C.羅-琴培養(yǎng)基D.慶大霉素血瓊脂答案：A解析：鮑-金培養(yǎng)基含馬鈴薯甘油血液，營養(yǎng)要求高且可抑制雜菌。7.懷疑腸出血性大腸桿菌O157:H7，應(yīng)選用的選擇性培養(yǎng)基是A.SMACB.TCBSC.XLDD.CLED答案：A解析：SMAC（山梨醇麥康凱）可區(qū)分不發(fā)酵山梨醇的O157:H7。8.對艱難梭菌毒素檢測，細(xì)胞培養(yǎng)中和試驗(yàn)使用的抗毒素是A.抗毒素A+B混合抗體B.僅抗毒素AC.僅抗毒素BD.抗毒素CDT答案：A解析：需同時中和A、B毒素才能確認(rèn)細(xì)胞病變被完全抑制。9.在液體培養(yǎng)基中呈“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象的是A.產(chǎn)氣莢膜梭菌B.脆弱擬桿菌C.艱難梭菌D.諾維梭菌答案：A解析：產(chǎn)氣莢膜梭菌分解糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣劇烈，形成洶涌發(fā)酵。10.懷疑布魯菌感染，實(shí)驗(yàn)室操作必須在A.生物安全二級+負(fù)壓罩B.生物安全三級C.生物安全一級D.普通潔凈臺答案：B解析：布魯菌為三類病原，需BSL-3防護(hù)。11.對肺炎鏈球菌奧普托欣敏感試驗(yàn)，抑菌圈直徑≥mm判為敏感A.6B.9C.14D.20答案：C解析：≥14mm為敏感，<14mm需做膽汁溶菌確認(rèn)。12.懷疑淋病奈瑟菌，采集宮頸標(biāo)本后應(yīng)A.直接冷藏B.接種改良Thayer-Martin平板，5%CO?35℃C.接種血瓊脂并放厭氧袋D.注入肉湯增菌答案：B解析：淋球菌需高營養(yǎng)、高濕、5%CO?環(huán)境。13.下列哪項不是真菌KOH壓片鏡檢的目的A.溶解角質(zhì)B.清除雜質(zhì)C.固定真菌結(jié)構(gòu)D.增強(qiáng)折光答案：C解析：KOH僅起溶解與透明作用，無固定效果。14.對ESBLs確證試驗(yàn)，頭孢他啶/克拉維酸抑菌圈直徑比單藥≥mm為陽性A.3B.5C.8D.10答案：B解析：≥5mm差異提示ESBLs。15.懷疑結(jié)核分枝桿菌，涂片抗酸染色報告“1+”對應(yīng)菌量A.1～2條/300視野B.1～9條/100視野C.1～9條/10視野D.1～9條/每視野答案：B解析：WHO分級標(biāo)準(zhǔn)，1+為1～9條/100視野。16.對銅綠假單胞菌進(jìn)行42℃生長試驗(yàn)，其目的是A.區(qū)分熒光與非熒光株B.區(qū)分銅綠與惡臭假單胞C.區(qū)分產(chǎn)堿與產(chǎn)酸株D.區(qū)分黏液型與非黏液型答案：B解析：惡臭假單胞42℃不生長。17.懷疑李斯特菌，應(yīng)選用A.冷增菌4℃B.45℃熱沖擊C.6.5%NaCl生長D.以上均可答案：D解析：李斯特菌可冷增菌、耐鹽、耐堿。18.對厭氧菌進(jìn)行藥敏，推薦方法是A.紙片擴(kuò)散法B.E-testC.微量肉湯稀釋法D.瓊脂稀釋法答案：C解析：CLSI推薦微量肉湯稀釋法。19.懷疑鼻疽伯克霍爾德菌，實(shí)驗(yàn)室操作需A.BSL-2B.BSL-3C.BSL-1D.普通臺答案：B解析：鼻疽為二類病原，需BSL-3。20.對VRE確證，應(yīng)檢測A.vanA/vanB基因B.vanC基因C.vanD基因D.vanE基因答案：A解析：vanA/B為臨床重要耐藥基因。21.懷疑霍亂弧菌，TCBS上菌落顏色為A.黃色B.綠色C.藍(lán)綠D.無色答案：A解析：霍亂弧菌發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸使指示劑變黃。22.對支原體培養(yǎng)，培養(yǎng)基需添加A.膽固醇與酵母透析液B.血清與淀粉C.血液與萬古霉素D.氯化血紅素與維生素K答案：A解析：支原體需固醇及輔酶。23.懷疑軍團(tuán)菌，培養(yǎng)基需A.BCYE-αB.巧克力C.麥康凱D.CLED答案：A解析：BCYE-α含L-半胱氨酸與鐵，為軍團(tuán)菌生長必需。24.對白色念珠菌進(jìn)行厚膜孢子試驗(yàn)，培養(yǎng)基為A.玉米吐溫80瓊脂B.沙氏瓊脂C.血瓊脂D.巧克力答案：A解析：玉米吐溫80可誘導(dǎo)厚膜孢子。25.懷疑鼠疫耶爾森菌，標(biāo)本采集后需A.室溫放置B.4℃冷藏C.立即床旁接種D.冷凍-70℃答案：C解析：鼠疫菌易自溶，需床旁接種。26.對產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌，首選表型確證試驗(yàn)A.CarbaNPB.ESBL雙紙片C.頭孢西丁紙片D.高濃度慶大答案：A解析：CarbaNP可快速檢測碳青霉烯酶。27.懷疑放線菌，鏡檢可見A.硫磺顆粒B.芽生孢子C.莢膜D.端生鞭毛答案：A解析：放線菌形成典型硫磺顆粒。28.對諾卡菌進(jìn)行弱抗酸染色，脫色劑為A.1%硫酸B.3%鹽酸乙醇C.95%乙醇D.2%氫氧化鈉答案：A解析：諾卡菌弱抗酸，1%硫酸即可脫色。29.懷疑巴爾通體，培養(yǎng)需A.5%CO?35℃B.28℃長時間C.35℃燭缸D.細(xì)胞共培養(yǎng)答案：D解析：巴爾通體為苛養(yǎng)菌，需細(xì)胞共培養(yǎng)。30.對B群鏈球菌篩查，選用A.含慶大霉素血瓊脂B.含萘啶酸血瓊脂C.含疊氮鈉血瓊脂D.含萘啶酸和結(jié)晶紫選擇性肉湯答案：D解析：Lim肉湯含萘啶酸與結(jié)晶紫可抑制雜菌。二、配伍題（每空1分，共20分）A.鮑-金培養(yǎng)基B.羅-琴培養(yǎng)基C.慶大霉素血瓊脂D.改良Thayer-MartinE.TCBSF.SMACG.XLDH.CINI.BCYE-αJ.玉米吐溫80瓊脂31.百日咳鮑特菌——A32.結(jié)核分枝桿菌——B33.淋病奈瑟菌——D34.霍亂弧菌——E35.O157:H7——F36.小腸結(jié)腸炎耶爾森菌——H37.軍團(tuán)菌——I38.白色念珠菌厚膜孢子——J39.流感嗜血桿菌——C40.志賀菌——G三、填空題（每空1分，共20分）41.厭氧菌培養(yǎng)最常用的指示劑是__________。答案：刃天青42.懷疑厭氧菌感染，標(biāo)本采集后應(yīng)在__________小時內(nèi)送檢。答案：0.543.對MRSA進(jìn)行頭孢西丁紙片試驗(yàn)，抑菌圈直徑≤__________mm為耐藥。答案：2144.真菌血培養(yǎng)推薦使用__________培養(yǎng)瓶以提高檢出。答案：雙相（或樹脂）45.對結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行比例法藥敏，臨界濃度異煙肼為__________μg/mL。答案：0.146.懷疑鼻疽伯克霍爾德菌，氧化酶反應(yīng)為__________。答案：弱陽性或可變47.對VRE進(jìn)行瓊脂篩選，含萬古霉素濃度為__________μg/mL。答案：648.對產(chǎn)氣莢膜梭菌進(jìn)行反向CAMP試驗(yàn)，金黃色葡萄球菌劃線位于培養(yǎng)基__________。答案：中央垂直49.懷疑支原體肺炎，采集標(biāo)本應(yīng)使用__________拭子以避免抑制。答案：滌綸或植絨50.對諾卡菌進(jìn)行16SrRNA測序，通用引物為__________。答案：27F/1492R四、判斷題（每題1分，共10分，正確打“√”，錯誤打“×”）51.所有厭氧菌均對甲硝唑敏感?！?2.白色念珠菌在血清中37℃3小時可形成芽管?！?3.銅綠假單胞菌氧化酶陰性。×54.艱難梭菌毒素A可致細(xì)胞圓縮變方。×55.巴爾通體可在血瓊脂上28℃培養(yǎng)直接見菌落。×56.李斯特菌在室溫下呈周鞭毛運(yùn)動，37℃失去運(yùn)動力?！?7.霍亂弧菌O1群與O139群均對多黏菌素B敏感?！?8.結(jié)核分枝桿菌對吡嗪酰胺耐藥常由pncA突變引起?！?9.諾卡菌為革蘭陽性需氧放線菌?！?0.鼻疽伯克霍爾德菌與類鼻疽伯克霍爾德菌可用glpPCR區(qū)分?！涛?、簡答題（每題6分，共30分）61.簡述從膿液標(biāo)本中分離MRSA的完整流程。答案：1.采集：床旁無菌抽吸膿液注入含SPS的無菌容器；2.接種：立即劃種血瓊脂與含4%NaCl的甘露醇鹽瓊脂；3.培養(yǎng)：35℃18–24h；4.初篩：選金黃色或白色菌落做革蘭染色、觸酶、凝固酶；5.確證：頭孢西丁紙片（30μg），抑菌圈≤21mm為耐藥；6.分子：PCR查mecA；7.藥敏：CLSI微量肉湯稀釋法報MIC；8.注明MRSA并提示隔離。62.說明真菌血培養(yǎng)陽性后分級報告策略。答案：1.一級（陽性報警當(dāng)日）：革蘭染色結(jié)果+鏡檢照片；2.二級（24h）：轉(zhuǎn)種沙氏、顯色瓊脂，報菌落形態(tài)與顯微鏡特征；3.三級（48–72h）：MALDI-TOFMS或ITS測序給出種名；4.四級（藥敏）：對氟康唑、伏立康唑、兩性B、棘白菌素MIC測定；5.五級（臨床溝通）：如熱帶念珠菌提示高毒力，需眼科排查。63.列舉三種檢測碳青霉烯酶表型試驗(yàn)并比較優(yōu)缺點(diǎn)。答案：1.CarbaNP：快（2h），成本低，但低濃度菌易假陰；2.改良Hodge試驗(yàn)：靈敏度90%，可檢測所有類型，但步驟多、生物安全要求高；3.EDTA協(xié)同試驗(yàn)：對金屬酶敏感，操作簡單，但無法區(qū)分KPC與OXA；4.mCIM：CLSI推薦，靈敏度>95%，需過夜；5.分子XpertCarba-R：30min出結(jié)果，可分型，但費(fèi)用高。64.描述艱難梭菌毒素檢測“兩步法”策略。答案：1.初篩：GDH抗原檢測（快、靈敏、便宜）；2.若陽性，立即做毒素A/BEIA或細(xì)胞培養(yǎng)中和試驗(yàn)；3.GDH陽性而毒素陰性者，做毒素基因PCR確認(rèn)；4.僅毒素陽性或PCR陽性者報“產(chǎn)毒艱難梭菌感染”；5.陰性者考慮定植或其他原因腹瀉。65.解釋為何巴爾通體血培養(yǎng)常需延長incubation時間至21天。答案：巴爾通體為兼性胞內(nèi)菌，菌量少、生長慢，需血紅素或血紅素前體，且對萬古霉素敏感故需去除血培養(yǎng)瓶中萬古霉素；其倍增時間長達(dá)18–24h，常規(guī)5天系統(tǒng)易漏檢；延長incubation至21天并定期盲種可提高檢出率至80%以上。六、案例分析題（每題10分，共30分）66.患者，男，58歲，糖尿病足潰瘍。床旁接種膿液于血瓊脂、麥康凱、厭氧血瓊脂。24h后血瓊脂見灰白色β溶菌落，革蘭陽性球菌、觸酶陰性；厭氧血瓊脂見相同菌落。問題：1.列出進(jìn)一步鑒定步驟；2.若顯示PYR陽性、6.5%NaCl不生長、CAMP陰性，給出種名；3.藥敏發(fā)現(xiàn)青霉素MIC0.06μg/mL，應(yīng)如何報告？答案：1.做PYR、CAMP、6.5%NaCl、膽汁七葉苷、奧普托欣；2.符合無乳鏈球菌（B群）；3.青霉素MIC≤0.12μg/mL為敏感，報告“B群鏈球菌，青霉素敏感，首選青霉素G”。67.患者，女，32歲，持續(xù)高熱、肝脾大，養(yǎng)貓。血培養(yǎng)瓶7天報警，革蘭陰性小桿菌，需氧瓶僅一瓶陽性，轉(zhuǎn)種血瓊脂無生長，巧克力瓊脂35℃5%CO?亦無生長。問題：1.最可能病原？2.下一步如何處理？3.如何向臨床溝通？答案：1.巴爾通體；2.取血培養(yǎng)物做巴爾通體PCR，并送血至參考實(shí)驗(yàn)室做細(xì)胞共培養(yǎng)；3.報告“血培養(yǎng)革蘭陰性小桿菌，考慮巴爾通體，已啟動分子檢測，建議多西環(huán)素+慶大經(jīng)驗(yàn)治療并排查貓抓傷史”。68.新生兒，出現(xiàn)膿毒癥，母親產(chǎn)道檢出B群鏈球菌?；純貉囵B(yǎng)報陽，轉(zhuǎn)種后見革蘭陽性鏈狀球菌，觸酶陰性，CAMP陽性。問題：1.寫出完整鑒定流程；2.若青霉素MIC0.25μg/mL，是否耐藥？3.列出向NICU的感染控制建議。答案：1.做CAMP、PYR、蘭斯菲爾德分群、MALDI-TOF、血清膽汁七葉苷；2.青霉素MIC0.25μg/mL仍≤0.12敏感折點(diǎn)，但新生兒需高劑量青霉素或氨芐西林聯(lián)合慶大；3.立即接觸隔離、加強(qiáng)手衛(wèi)生、同病房新生兒監(jiān)測血培養(yǎng)、母親接受產(chǎn)時抗生素。七、技能操作題（共40分）69.請寫出“糞便標(biāo)本艱難梭菌培養(yǎng)+毒素檢測”完整SOP（20分）。答案：1.標(biāo)本拒收：成形便、非無菌容器、超過2h未冷藏；2.接種：取稀便2mL加入等量無水乙醇，室溫混勻30min殺滅繁殖體；3.離心：3000g15min，取沉淀接種CCFA（環(huán)絲氨酸頭孢西丁果糖瓊脂）；4.培養(yǎng)：37℃厭氧48h，觀察黃色毛玻璃樣菌落；5.鑒定：革蘭陽性粗大桿菌、芽孢卵圓形、馬尿酸陽性、脯氨酸氨基肽酶陽性；6.毒素：取48h菌落用生理鹽水調(diào)2McF，煮沸10min裂解菌體，EIA測毒素A/B；7.培養(yǎng)陽性且毒素陽性報“產(chǎn)毒艱難梭菌”；培養(yǎng)陽性毒素陰性報“非產(chǎn)毒株”；8.生物安全：BSL-2，廢棄物含氯消毒。70.請設(shè)計一個“多耐藥鮑曼不動桿菌院內(nèi)暴發(fā)調(diào)查”微生物學(xué)方案（20分）。答案：1.病例定義：ICU住院>48h、培養(yǎng)檢出鮑曼不動桿菌且對碳青霉烯耐藥；2.標(biāo)本：患者肛周、咽、氣管插管、靜脈導(dǎo)