ICS65.020.20

B61

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/XXXXX—2020

構(gòu)樹組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationfortissuecultureofBroussonetiapapyrifera

2020-XX-XX發(fā)布2020-XX-XX實(shí)施

江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/TXXXX—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省林業(yè)局提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院起草。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳慶生、黃婧、張敏、蔣澤平、周鵬、陸青、薛歡。

I

DB32/XXXXX—2020

構(gòu)樹組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了構(gòu)樹組織培養(yǎng)的母株選擇、外植體選擇與滅菌、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、瓶外生根培

養(yǎng)、增殖苗扦插、插后管理和記錄。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于構(gòu)樹的組織培養(yǎng)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的

修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用

于本標(biāo)準(zhǔn)。

LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

NY/T393—2013綠色食品農(nóng)藥使用準(zhǔn)則

3母株選擇

選取生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害的構(gòu)樹單株。

4外植體選擇與滅菌

4.1外植體采集

在4月~7月，選擇連續(xù)3d以上的晴天，采集母株上萌發(fā)的嫰枝作為外植體。

4.2外植體表面滅菌

4.2.1清洗

用中性洗潔精將外植體洗凈，并用自來(lái)水沖洗15min~20min。

4.2.2滅菌

在超凈工作臺(tái)上，用75%乙醇溶液消毒外植體5s~10s，無(wú)菌水漂洗1次~2次；再用10%次氯酸

鈉溶液浸泡外植體6min~8min，無(wú)菌水漂洗4次~6次，每次5min；將漂洗后的外植體置于無(wú)菌濾紙

上吸干表面水分。

5誘導(dǎo)培養(yǎng)

5.1培養(yǎng)基

誘導(dǎo)培養(yǎng)基參見附錄A。培養(yǎng)基制備按照LY/T1882—2010規(guī)定進(jìn)行。

5.2接種

1

DB32/XXXXX—2020

將外植體修剪為2cm的帶芽莖段，垂直接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

5.3培養(yǎng)條件

誘導(dǎo)培養(yǎng)的溫度控制在23℃~25℃，光照強(qiáng)度為1500lx~3000lx，光照時(shí)間為8h/d~12h/d，培養(yǎng)室

濕度為70%~80%。

5.4轉(zhuǎn)接

誘導(dǎo)培養(yǎng)25d~30d后，轉(zhuǎn)接到6.1增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)。

6增殖培養(yǎng)

6.1培養(yǎng)基

增殖培養(yǎng)基參見附錄A。培養(yǎng)基制備按照LY/T1882—2010規(guī)定進(jìn)行。

6.2接種

將誘導(dǎo)培養(yǎng)的試管苗剪成1cm~2cm的帶芽莖段，接種到增殖培養(yǎng)基上。

6.3培養(yǎng)條件

增殖培養(yǎng)的溫度控制在23℃~25℃，光照強(qiáng)度為1500lx~3000lx，光照時(shí)間為10h/d~16h/d，培養(yǎng)室

濕度為70%~80%。

6.4繼代培養(yǎng)

增殖培養(yǎng)25d~35d后，轉(zhuǎn)接至新鮮的增殖培養(yǎng)基。

7瓶外生根培養(yǎng)

7.1設(shè)施

宜在溫室進(jìn)行培養(yǎng)。

7.2容器

宜采用塑料穴盤，穴孔呈倒錐形，口徑約4.5cm，高約5cm。舊穴盤需經(jīng)消毒后才可使用。

7.3基質(zhì)

基質(zhì)選用pH6.2~pH6.8的草炭，用0.1%高錳酸鉀溶液將基質(zhì)淋透消毒，分裝到穴盤內(nèi)。

8增殖苗扦插

8.1插條處理

選擇生長(zhǎng)健壯、高6cm~8cm且葉片展開的增殖苗，清水洗凈，剪去芽苗根部膨大部分，按單株剪

下，每株剪成3cm~4cm帶芽莖段作為插條。插條基部（0.5cm~1.0cm）速蘸1000mg/L萘乙酸（NAA）

溶液5s以促進(jìn)生根。

2

DB32/XXXXX—2020

8.2扦插

用鑷子將插條基部插入基質(zhì)，扦插深度以1cm為宜。

8.3覆膜

扦插后澆透水，在穴盤上方覆蓋塑料薄膜或保鮮膜。

9插后管理

9.1環(huán)境管理

穴盤置于溫室中培養(yǎng)，溫度為20℃~30℃，以25℃為宜，光照強(qiáng)度為2000lx~2500lx，光照時(shí)間

為12h/d～13h/d，空氣濕度75%~80%。

9.2揭膜

培養(yǎng)10d~15d后撤去塑料薄膜或保鮮膜。

9.3水肥管理

每隔3d澆水1次，每?jī)芍車娨淮稳~面肥。

9.4病蟲害防治

每月噴1次藥劑，宜采用75%百菌清可濕性粉劑700~800倍液，50%馬拉松乳劑1000倍液。防治方法

按照NY/T393—2013規(guī)定執(zhí)行。

9.5出苗

苗高15cm~20cm，活葉片數(shù)4片以上，根系生長(zhǎng)健壯，無(wú)病蟲害，即可出苗。

10記錄

根據(jù)組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程內(nèi)容進(jìn)行記錄，按時(shí)填寫，做到準(zhǔn)確無(wú)誤，記錄保存2年以上。

3

DB32/XXXXX—2020

附錄A

（規(guī)范性附錄）

構(gòu)樹組織培養(yǎng)基配方

表A.1構(gòu)樹組織培養(yǎng)基配方表

母液名稱藥品名稱誘導(dǎo)培養(yǎng)基（mg/L）增殖培養(yǎng)基（mg/L）

KNO318001800

NH4NO3720720

大量元素KH2PO4500500

CaCl2·2H2O100100

MgSO4·7H2O370370

MgSO4·4H2O22.322.3

ZnSO4·7H2O8.658.65

H3BO36.26.2

微量元素NaMoO4·2H2O0.250.25

KI0.830.83

CuSO4·5H2O0.0250.025

CoCl2·6H2O0.0250.025

FeSO4·7H2O27.827.8

鐵鹽

Na2EDTA37.237.2

氨基乙酸2.02.0

鹽酸硫胺素（VB1）0.10.1

有機(jī)質(zhì)鹽酸吡哆醇（VB6）0.50.5

煙酸（VB3）0.50.5

肌醇100100

糖