ICS65.120

CCSB46

DB15

內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T2037—2020

飼料中色氨酸的測定

微波水解-氨基酸自動分析儀法

Determinationoftryptophaninfeeds

microwavehydorolysis-aminoacidautomaticanalyzermethod

2020-11-30發(fā)布2020-12-30實施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T2037—2020

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院提出。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAM/TC19）歸口。

本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院。

本文件主要起草人：宋潔、姚一萍、王麗芳、史培、馮小慧、王雪嬌、張三粉、狄彩霞、景宇鵬、

羿靜、鐘華晨、郭晨陽、云伏雨。

I

DB15/T2037—2020

飼料中色氨酸的測定微波水解-氨基酸自動分析儀法

1范圍

本文件規(guī)定了飼料中色氨酸含量測定的微波水解-氨基酸自動分析儀法。

本文件適用于飼料原料、配合飼料、濃縮飼料和精料補(bǔ)充料中色氨酸的測定。

本方法定量限：0.05%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6433飼料中粗脂肪的測定

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T14699.1飼料采樣

GB/T20195動物飼料試樣的制備

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

飼料中色氨酸經(jīng)微波堿水解后，從蛋白鏈中釋放出來，經(jīng)氨基酸自動分析儀測定色氨酸含量。

5試劑和材料

5.1如無特別說明，本文件所用試劑均為分析純試劑,水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。

5.2氫氧化鈉。

5.3鹽酸：濃度≥36%，優(yōu)級純。

5.4檸檬酸。

5.5檸檬酸鈉。

5.6硼酸。

5.7乙醇。

1

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5.8氫氧化鈉溶液（500g/L）：稱取50g氫氧化鈉，溶于50mL水中，冷卻至室溫后，定容至100mL，

混勻。

5.9氫氧化鈉溶液（0.1mol/L）：稱取0.40g氫氧化鈉，定容至100mL水中，混勻。

5.10氫氧化鈉溶液（5mol/L）：稱取200g氫氧化鈉，溶于200mL水中，冷卻至室溫后，定容至

1000mL，混勻。

5.11鹽酸溶液（6mol/L）：取500mL鹽酸加水定容至1000mL，混勻。

5.12檸檬酸鈉緩沖溶液（0.12mol/LNa+，pH=3.45）：分別稱取11.8g檸檬酸鈉和6.0g檸檬酸，

溶于500mL水中，加入乙醇65mL，濃鹽酸5.6mL，用水定容至1000mL，混勻，用6mol/L鹽酸溶

液（5.10）或500g/L氫氧化鈉溶液（5.7）調(diào)節(jié)pH至3.45，加辛酸0.1mL。

5.13檸檬酸鈉緩沖溶液（0.2mol/LNa+，pH=10.85）：稱取19.6g檸檬酸鈉，3.1g氫氧化鈉，5.0

g硼酸，溶于500mL水中，用水定容至1000mL，混勻，用6mol/L鹽酸溶液或500g/L氫氧化鈉溶

液調(diào)節(jié)pH至10.85，加入辛酸0.1mL。

5.14L-色氨酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度不小于99%。

5.15L-色氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.0μmol/mL）：精確稱取20.4mg色氨酸標(biāo)準(zhǔn)品，加適量水和數(shù)滴0.1

mol/L的氫氧化鈉（5.8）溶解，用水定容至100mL，4℃冷藏保存，有效期1個月。

5.16L-色氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.1μmol/mL）：準(zhǔn)確吸取1.0mL色氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于10.0mL容量

瓶中，用水稀釋至刻度，為色氨酸標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)液，4℃冷藏保存，有效期2周。

5.17針式過濾器：0.45μm水性膜。

6儀器設(shè)備

6.1氨基酸自動分析儀。

6.2微波消解儀：溫度不小于180℃。

6.3天平：感量分別為0.01g和0.0001g。

6.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。

6.5聚四氟乙烯消解管：容積不小于50mL。

6.6pH計。

7分析步驟

7.1試樣制備

按照GB/T14699.1抽取有代表性試樣，四分法縮分制樣。按GB/T20195制備試樣，粉碎后過0.25mm

孔徑篩，充分混勻后裝入密封容器中備用。脂肪含量大于4%的試樣，按照GB/T6433先進(jìn)行脫脂處理。

7.2試樣水解

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準(zhǔn)確稱取0.05g～0.1g（精確至0.0001g）脂肪含量小于4%的試樣，置于聚四氟乙烯消解管中，

加入5mL氫氧化鈉溶液（5.9），充氮氣1min，旋緊密封蓋后放入微波消解儀中進(jìn)行微波水解。水解條

件：功率1200w，升溫時間10min，水解溫度170℃，水解時間30min。取出消解管，冷卻至室溫，將

水解液轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶，用6mol/L鹽酸（5.10）中和，使pH至中性，并用水定容至刻度，10000r/min

離心10min，經(jīng)0.45μm針式過濾器過濾后用氨基酸自動分析儀測定。

7.3氨基酸自動分析儀色譜條件

氨基酸自動分析儀工作條件和洗脫梯度見表1和表2。

表1氨基酸自動分析儀工作條件

儀器條件儀器參數(shù)

色譜柱LCAK06/Na（4.6×150mm）

流動相檸檬酸鈉A：0.12mol/L，pH=3.45；B=0.2mol/L，pH=10.85

檢測波長（nm）570

流動相流速（mL/min）0.45

茚三酮流速（mL/min）0.25

反應(yīng)器溫度（℃）130

柱溫（℃）74

進(jìn)樣體積（μL）50

注：可按照不同氨基酸分析儀的最佳工作條件進(jìn)行優(yōu)化。

表2氨基酸自動分析儀洗脫梯度

時間ABCD流速

序號

（min）（%）（%）（%）（%）（mL/min）

1初始30.070.00.00.00.45

215.030.070.00.00.00.45

315.10.00.00.0100.00.45

418.00.00.00.0100.00.45

518.130.070.00.00.00.45

630.130.070.00.00.00.45

730.230.070.00.00.00.00

注：A為0.12mol/L檸檬酸鈉緩沖液；B為0.2mol/L檸檬酸鈉緩沖液；D為20g/LNaOH溶液。

7.4測定

根據(jù)氨基酸自動分析儀色譜條件調(diào)整好氨基酸自動分析儀參數(shù)，依次吸入0.1μmol/mL色氨酸標(biāo)準(zhǔn)

工作液（5.15）和制備好的試樣水解液，采用外標(biāo)法單點校正測定試樣中色氨酸含量。

7.5平行試驗

按7.2~7.4步驟對同一試樣進(jìn)行平行測定。

7.6空白試驗

除不稱取試樣外，均按7.2~7.4步驟進(jìn)行測定。

3

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8結(jié)果計算

試樣