豆芽中甲硝唑的快速檢測膠體金免疫層析法國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布1本方法規(guī)定了豆芽中甲硝唑的快速檢測膠體金免疫層析法。本方法適用于綠豆芽、黃豆芽等豆芽中甲硝唑的快速定性測定。本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中甲硝唑經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和檢測線(T線)上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線(T線)顏色深淺的變化。通過檢測線(T線)與控制線(C線)顏色深淺比較，對樣品中甲硝唑進(jìn)行定性判定。3試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的三級水。3.1.2鹽酸(HCl,37%)。3.1.3三羥甲基氨基甲烷(C?H?NO?),即Tris堿。3.2試劑配制3.2.1鹽酸溶液(2mol/L):量取鹽酸(3.1.2)16.7mL,用水稀釋至100mL。3.2.2提取液(pH=8.0,0.1mol/L):稱取12.1gTris堿(3.1.3),加約900mL水溶解，混勻，用鹽酸溶液(3.2.1)調(diào)節(jié)pH至8.0,用水定容至1L。甲硝唑(C?H?N?O?,CAS號：443-48-1):純度≥99%,或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)3.4.1甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1000μg/mL):準(zhǔn)確稱取甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)品(3.3)10mg,用甲醇(3.1.1)溶解，全部轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻，配制成濃度為1000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液?！?8℃及以下避光保存，有效期6個(gè)月。3.4.2甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)中間液(10μg/mL):準(zhǔn)確移取甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)儲備液(3.4.1)100μL置于10mL容量瓶中，用甲醇(3.1.1)定容至刻度，搖勻，配制成濃度為10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液?！?8℃及以下避光保3.4.3甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)工作液(100μg/L):準(zhǔn)確移取甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)中間液(3.4.2)100μL置于10mL容量瓶24.1電子天平：感量分別為0.0001g和0.1g。環(huán)境溫度10℃~30℃。稱取2g(精確至0.1g)試樣(6.1)于15mL離心管中，加入3mL提取液(3.2.2),渦旋振蕩1min,4000r/min離心2min,上清液即為待測液。稱取空白試樣，按照6.2和6.3步驟與試樣同3通過對比控制線(C線)和檢測線(T線)的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視結(jié)果示意圖見圖1。含量高于方法檢出限，視為陽性。含量低于方法檢出限，視為陰性。TcTTTcTTTTSSSSSSSSSSS49.5交叉反應(yīng)率：地美硝唑、洛硝噠唑、羥基甲硝唑、羥甲基甲硝咪唑≤10%,異丙硝唑、2-硝基咪唑9.6假陰性率：≤5%。9.7假陽性率：≤10%。本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不作限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，應(yīng)對其進(jìn)行考察，以滿足或優(yōu)于本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。本方法參比方法為現(xiàn)行有效的食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)或食品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法。5(規(guī)范性)定性方法性能指標(biāo)計(jì)算表定性方法各個(gè)性能指標(biāo)計(jì)算方法見表A.1。表A.1定性方法性能指標(biāo)計(jì)算表陽性陰性陽性陰性N=N?.+N2.或N?+N.?顯著性差異(X2)自由度(df)=1靈敏度(p+)/%pf-=Ni?/N1.×100=100—靈敏度pf+=N?/N?×100=100—特異性有的第一行，N.2表示所有的第二列；N??表示第一行，第二列。膠體金試紙條得到的結(jié)果。靈敏度的計(jì)算使用確認(rèn)后的結(jié)“為方法的檢測結(jié)果相對準(zhǔn)確性的結(jié)果，與一致性分析和濃度檢測趨勢情況綜合評價(jià)。本方法負(fù)責(zé)起草單位：