ICS67.120.99

CCSB45

34

安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB34/T1373—2025

代替DB34/T1373-2011

動物組織中氯丙嗪的殘留測定酶聯(lián)免疫

吸附法

DeterminationofchlorpromazineresiduesinanimaltissuesEnzyme-linked

immunosorbentassay

2025-01-24發(fā)布2025-02-24實施

安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB34/T1373—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件代替DB34/T1373-2011《動物組織中氯丙嗪的殘留測定酶聯(lián)免疫吸附法》，與DB34/T

1373-2011相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性修改外，主要技術(shù)變化如下：

a)增加了“禽蛋中氯丙嗪檢測范圍”（見第1章）；

b)增加了“術(shù)語和定義”（見第3章）；

c)更改了“試樣制備”（見7.1，2011版的7.1）；

d)增加了“禽蛋”制備方法（見7.1.2）；

e)更改了“測定步驟”（見第8章，2011版的第7章）；

f)更改了“結(jié)果判定和表述”（見第9章，2011版的第8章）；

g)更改了“檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度”（見第10章，2011版的第9章）；

h)增加了“資料性附錄”氯丙嗪酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒組成（見附錄A）。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由安徽省獸藥飼料監(jiān)察所提出。

本文件由安徽省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。

本文件起草單位：安徽省獸藥飼料監(jiān)察所、安徽中青檢驗檢測有限公司、安徽賽如分析檢測科技有

限公司、安徽科博產(chǎn)品檢測研究院有限公司、合肥市農(nóng)業(yè)經(jīng)濟技術(shù)服務(wù)管理總站、安徽省水產(chǎn)技術(shù)推廣

總站。

本文件主要起草人：劉發(fā)全、汪秀娟、魏濤、王偉、商魯寧、陳斌、吳昊、許世富、王媛媛、程瑩、

林赤瑜。

本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：

——2011年首次發(fā)布為DB34/T1373-2011，2025年第一次修訂。

I

DB34/T1373—2025

動物組織中氯丙嗪的殘留測定酶聯(lián)免疫吸附法

1范圍

本文件規(guī)定了畜禽肌肉、肝臟、腎臟和禽蛋中氯丙嗪殘留量的酶聯(lián)免疫吸附測定方法。

本文件適用于畜禽肌肉、肝臟、腎臟和禽蛋中氯丙嗪殘留量的快速篩選測定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T33411酶聯(lián)免疫分析試劑盒通則

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4原理

殘留在畜禽肌肉、肝臟、腎臟和禽蛋中的氯丙嗪經(jīng)三氯乙酸溶液、乙腈溶液提取后用于酶聯(lián)免疫測

定。試樣中的氯丙嗪與包被于微孔板中的抗原同特異性抗體進行競爭性免疫反應(yīng)，加入一定量的顯色底

物和終止液，在450nm處測定吸光度值，在一定濃度范圍內(nèi)，試樣中氯丙嗪的含量與吸光度大小成反

比，換算后可以獲得樣本中氯丙嗪的殘留量。

5試劑和材料

除非另有說明，本法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682的二級水。

氯丙嗪酶聯(lián)免疫試劑盒，應(yīng)符合GB/T33411的規(guī)定，組成見附錄A。

乙腈。

正己烷。

三氯乙酸溶液（2.5％）：稱取2.5g三氯乙酸，加入100mL水，攪拌至完全溶解。

氫氧化鈉溶液（12％）：稱取12.0g氫氧化鈉加入100mL水，溶解混勻。

6儀器和設(shè)備

酶標(biāo)儀：測定波長450nm。

分析天平：感量0.01g。

粉碎機。

1

DB34/T1373—2025

勻質(zhì)器。

離心機：≥4000g。

漩渦混合機。

冰箱。

氮吹儀。

微量加樣器及配套吸頭：（單道20μL，50μL，100μL，多道50μL～300μL）。

7樣品處理

試樣制備

7.1.1畜禽肌肉、肝臟、腎臟去筋膜切成小塊，粉碎機制成糜狀，10000rpm均質(zhì)2min。

7.1.2禽蛋，去殼，將蛋清和蛋黃攪拌均勻。

試樣提取

稱取2.0±0.05g均質(zhì)或攪拌均勻后組織樣品于50mL離心管中，分別加入2mL三氯乙酸溶液

（5.2）、6mL乙腈（5.3），渦動5min，室溫4000g離心5min后，取2mL上層液于另一50

mL離心管中，依次加入2mL氫氧化鈉溶液（5.4）和4.5mL正已烷（5.5），渦動5min，4000g

離心5min，取上層有機相3mL于離心管中，50℃～60℃氮氣吹干，加入0.5mL復(fù)溶工作液（5.1.9），

渦動1min，取50μL用于檢測。

試樣貯存

制備好的試樣按檢樣和備樣置于4℃下可保存3天～4天，或于-18℃以下保存6個月。

8測定步驟

測定在室溫（20℃～25℃）條件下操作，測定之前將試劑盒以及所有試劑恢復(fù)至室溫（約1h～2

h）。

按標(biāo)準(zhǔn)工作液和供試樣品數(shù)量取孔條插入酶標(biāo)板（5.1.1），標(biāo)準(zhǔn)工作液和供試樣品做兩孔平行，

記錄下好對應(yīng)的位置。

分別在各孔中加入50μL標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.1.2）或7.3項下待測試樣溶液，每孔加入50μL抗體

工作液（5.1.3），用蓋板膜封板，輕輕振蕩酶標(biāo)板10s，充分混勻，室溫下避光反應(yīng)60min。

揭開蓋板膜，傾出板孔中的液體，在所有微孔中加260μL洗滌工作液（5.6），輕輕振蕩酶標(biāo)板

15s～30s，充分混勻，傾出微孔中的洗滌液，在吸水紙上拍干，徹底清除微孔中的殘留液和氣泡，重

復(fù)洗板4遍。

每孔加100μL底物A、B混合液（5.7）用蓋板膜封板，輕輕振蕩酶標(biāo)板10s，充分混勻，室溫

下避光反應(yīng)15min～20min。

揭開蓋板膜，每孔加50μL終止液（5.1.8），輕輕振蕩酶標(biāo)板10s，充分混勻，5min內(nèi)在450

nm下測定吸光度值。

9結(jié)果判定和表述

用獲得的標(biāo)準(zhǔn)工作液和供試樣品溶液吸光度值的比值進行計算，見式（1）：

2

DB34/T1373—2025

B

相對吸光度值(%)=100%·········································(1)

B0

式中：

B—標(biāo)準(zhǔn)工作液或供試樣品溶液的平均吸光度值；

B0—0濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液的平均吸光度值。

將計算的相對吸光度值（％）對應(yīng)氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（μg/L）的自然對數(shù)作半對數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)曲

線圖，對應(yīng)的試樣濃度（A）可從校正曲線算出，畜禽肌肉、肝臟、腎臟及禽蛋中氯丙嗪殘留量結(jié)果計

算見式（2）：

?×?×?×1000

X=··················································(2)

?×1000

式中：

X—供試樣中氯丙嗪的含量，單位為微克/千克（μg/kg）；

A—供試樣的相對吸光度值（％）對應(yīng)的氯丙嗪的含量，單位為微克/升（μg/L）；

V—加入復(fù)溶工作液體積，單位為毫升(mL)；

f—稀釋倍數(shù)；

m—試樣的取樣量，單位為克（g）。

注：計算結(jié)果表示到小數(shù)點后三位。

檢測結(jié)果小于檢出限時判為未檢出，大于或等于檢出限時，應(yīng)使用色譜質(zhì)譜聯(lián)用法進行確認(rèn)。

10檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度

靈敏度

本方法在畜禽肌肉、肝臟、腎臟及禽蛋的檢出限為0.5μg/kg。

準(zhǔn)確度

本方法在2～5倍檢出限添加濃度水平上的回收率為80％～120％。

精密度

本方法的批內(nèi)變異系數(shù)CV％≤30％，批間變異系數(shù)CV％≤30％。