ICS19.020CCSN5043液相色譜-串聯(lián)質譜法Determinationofpopulationmarkercotinineinwaterenvironmentwithliquidchromatography-tandemmassspectrometryIDB43/T2192—2021前言 Ⅲ 2規(guī)范性引用文件 4方法原理 5試劑和材料 6儀器和設備 7樣品制備和保存 8分析步驟 9結果計算與表示 10方法檢出限和定量限 附錄A（資料性）可替寧(Cotin DB43/T2192—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由湖南省市場監(jiān)督管理局提出并歸口。本文件起草單位：湖南省產(chǎn)商品質量檢驗研究院和湖南省毒品檢驗分析室（長沙市公安局毒品檢驗本文件主要起草人：劉紅梅、肖蓉、李欣、張旭東、陸世雄、錢榮敬、張蕾、唐超群、陳實、葉小蘭、李志豐。DB43/T2192—20211水環(huán)境中人口標記物可替寧含量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法本文件規(guī)定了水環(huán)境樣品中可替寧的測定方法。本文件適用于水環(huán)境樣品中可替寧含量的測定。2規(guī)范性引用文件GB/T603化學試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法HJ/T91.1污水監(jiān)測技術規(guī)范DB43/T2199水環(huán)境中12種毒品及其代謝物、人口標記物檢驗方法總則3定義3.1水環(huán)境waterenvironment水環(huán)境是指自然界中水的形成、分布和轉化所處空間的環(huán)境，是指圍繞人群空間及可直接或間接影響人類生活和發(fā)展的水體，其正常功能的各種自然因素和有關的社會因素的總體。本文件中的水環(huán)境指的是生活污水、工業(yè)廢水和自然水體（地表水和地下水）。3.2人口標記物populationmarker人口標記物是經(jīng)過人類身體代謝產(chǎn)生和排出體外的物質，在污水流行病學中，它能夠用于服務人口數(shù)的估算。4方法原理向樣品中添加同位素內(nèi)標，樣品中的毒品及其代謝物經(jīng)離線或在線固相萃取柱富集，采用液相色譜5試劑和材料5.1試劑5.1.1通用要求實驗用水符合GB/T6682相關規(guī)范，除非另有說明，所用試劑均為分析純試劑。本標準中所用試劑2DB43/T2192—2021和溶液的配制，在未注明規(guī)格和配制方法時，均應按GB/T603之規(guī)定執(zhí)行。5.1.2可替寧標準溶液(ρ=1mg/mL可用標準物質配制或直接購買有證標準溶液，使用標準物質配制時應根據(jù)標準物質的純度和鹽型進行換算，于-20℃避光、密封保存，有效期為1年。5.1.3可替寧標準儲備溶液(ρ=10mg/L將可替寧的標準溶液用甲醇稀釋，配制成濃度為10mg/L的標準儲備溶液。于-20℃避光、密封保存，有效期為6個月，使用時應恢復至室溫，并搖勻。5.1.4可替寧氘代內(nèi)標標準溶液(ρ=0.1mg/mL可用標準物質配制或直接購買有證標準溶液，使用標準物質配制時應根據(jù)標準物質的純度和鹽型進行換算，于-20℃避光、密封保存，有效期為1年。5.1.5可替寧氘代內(nèi)標儲備溶液(ρ=1mg/L將可替寧的氘代內(nèi)標標準溶液用甲醇稀釋，配制成濃度為1mg/L的氘代內(nèi)標儲備溶液，于-20℃避光、密封保存，有效期為6個月，使用時應恢復至室溫，并搖勻。5.1.6可替寧氘代內(nèi)標使用液①(ρ=400μg/L將可替寧氘代內(nèi)標儲備溶液用甲醇稀釋，配制成濃度為400μg/L的氘代內(nèi)標使用液，于0℃~4℃避光、密封保存，有效期為1個月，使用時應恢復至室溫，并搖勻。5.1.7可替寧氘代內(nèi)標使用液②(ρ=4μg/L將可替寧氘代內(nèi)標儲備溶液用甲醇稀釋，配制成濃度為4μg/L的氘代內(nèi)標使用液，于0℃~4℃避光、密封保存，有效期為1個月，使用時應恢復至室溫，并搖勻。5.1.8甲醇：質譜級。5.1.9乙腈：質譜級。5.1.10濃鹽酸：優(yōu)級純。5.1.11甲酸：質譜級。5.1.125％氨水甲醇溶液：將濃氨水與甲醇（5.1.8）以5∶95的體積比混勻。5.1.1310％甲醇溶液：將甲醇（5.1.8）與水以1∶9的體積比混5.1.140.1％甲酸水溶液：將甲酸（5.1.11）和水以1∶999的體積比混勻。5.1.15磷酸鹽緩沖溶液：稱取3.024g磷酸二氫鉀和4.053g磷酸氫二鉀，到20mL水中，混勻，0~5.1.165％甲醇溶液：將甲醇（5.1.8）與水以5∶95的體積比混勻。5.1.17甲酸-甲醇溶液：將500mL甲醇（5.1.8）與500mL水混合，同時加入1mL甲酸（5.1.115.1.18異丙醇+乙腈（1+1將異丙醇和乙腈（5.1.9）以1∶1的體積5.1.19氮氣：純度≥99.99％。5.2材料5.2.1色譜柱：C18反相高效液相色譜柱3.0mm×150mm,2.7μm或其他等效柱。5.2.2固相萃取柱：離線方法固相萃取柱參考型號為MCX3cc/60mg或等效柱，在線方法的參考型號為HLBDirectConnectHP（2.1mmI.D.×30mmL.,20μm）或等效柱。5.2.4有機系濾膜：粒徑0.22μm。6儀器和設備6.1抽濾裝置。6.2固相萃取裝置。DB43/T2192—20213DB43/T2192—20216.3氮吹濃縮或者真空離心濃縮裝置。6.4液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜儀（若采用在線固相萃取方法應配備在線SPE大體積進樣分析系7樣品制備和保存7.1樣品保存若采集的樣品pH不小于2，則應加入濃鹽酸調節(jié)pH至小于2。若樣品在3天內(nèi)進行前處理，則將樣品于0℃~4℃條件下保存，若保存時間超過3天，則將樣品冷凍保存，且在1個月內(nèi)完成分析。離線固相萃取方法中，萃取濃縮后的試樣若不能及時分析，應于0℃~4℃避光、密封保存，并在3天內(nèi)完成分析。7.2樣品制備7.2.1離線固相萃取法將待測樣品恢復至室溫，充分混勻。使用水系濾膜過濾，移取濾液50mL，加入100μL氘代內(nèi)標使用液①（5.1.6混勻后進行固相萃取，固相萃取參數(shù)見下表1，萃取完成后將洗脫液置于濃縮裝置中40℃濃縮至近干，用10％甲醇溶液（5.1.13）200μL復溶，過0.22μm有機濾膜，待測。以實驗用水為空白樣品，空白樣品與樣品同時、同步驟處理。1432水433/14425427.2.2在線固相萃取法將待測樣品恢復至室溫，充分混勻。過水系濾膜，移取10mL過濾后水樣，加入0.5mL磷酸緩沖溶液（5.1.15混勻，準確移取0.9mL混勻水樣，加入4μg/L的氘代內(nèi)標溶液（5.1.7）100μL，混勻后經(jīng)0.22μm有機濾膜過濾，置于樣品瓶中，待測。以實驗用水為空白樣品，空白樣品與樣品同時、同步驟處理。8分析步驟8.1儀器檢測參考條件8.1.1離線固相萃取法儀器參考條件b）流動相A相：0.1％甲酸水溶液；DB43/T2192—20214c）流動相B相：乙腈；d）流速：0.4mL/min；e）進樣量：5μL；f）洗脫：梯度洗脫，梯度洗脫條件見表2；g）掃描方式：正離子掃描；h）檢測方式：多重反應監(jiān)測；i）離子源：電噴霧離子源（ESI）；j）可替寧及其氘代內(nèi)標的定性、定量離子對和碰撞能量條件見表3。表2離線固相萃取法梯度洗脫條件表3可替寧及其氘代內(nèi)標的定性、定量離子對和碰撞能量條件128.1.2在線固相萃取法儀器參考條件b）流動相A相：0.1％甲酸水溶液；c）流動相B相：乙腈；d）流速：0.4mL/min；e）洗脫：梯度洗脫，梯度洗脫條件見表4；f）進樣量：400μL；g）在線固相萃取條件，萃取液A：水；萃取液B：5％甲醇溶液；萃取液C：甲酸-甲醇溶液；萃取液D：異丙醇+乙腈（1+1在線固相萃取程序見表5；5DB43/T2192—2021DBT— 43/2192DBT—h）掃描方式：正離子掃描；i）檢測方式：多重反應監(jiān)測；j）離子源：電噴霧離子源（ESIk）可替寧及其氘代內(nèi)標的定性、定量離子對和碰撞能量條件見表3。表4在線固相萃取法梯度洗脫條件表5在線固相萃取程序8.1.3儀器調試按照儀器使用說明書在規(guī)定時間和頻次內(nèi)對液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質譜儀進行儀器質量數(shù)和靈敏度校正，以確保儀器處于最佳測試條件。8.1.4標準曲線建立取與樣品等量的實驗用水，添加可替寧標準儲備溶液（5.1.3使得可替寧的濃度為1ng/L、5ng/L、DB43/T2192—2021610ng/L、50ng/L、100ng/L、500ng/L、1000ng/L、2500ng/L、5000ng/L，作為標準曲線添加樣品，與樣品平行操作，得到標準曲線溶液，按儀器條件進樣分析，記錄保留時間和峰面積，建立標準曲8.1.5試樣和空白測定試樣和空白樣品按照與繪制標準曲線相同的儀器分析條件進行測定。9結果計算與表示9.1計算含量記錄標準曲線和樣品中目標物與相應氘代內(nèi)標的保留時間和定量離子對峰面積值，以標準曲線中目標物與相應氘代內(nèi)標的定量離子對峰面積比為縱坐標、標準曲線中目標物的含量為橫坐標進行線性回歸，得到線性方程。根據(jù)樣品中目標物及相應內(nèi)標的定量離子對峰面積值，按公式（1）計算出樣品中目標物的含量。pi=(Y-a)/b（1）pi——樣品中目標組分i的質量濃度，ng/L；Y——樣品中目標物與相應內(nèi)標的定量離子對峰面積比；a——線性方程的截距；b——線性方程的斜率。9.2結果表示當測定結果小于100ng/L時，保留三位有效數(shù)字；當測定結果大于或等于100ng/