小細(xì)胞外囊泡在結(jié)直腸癌診療中的研究進(jìn)展2026結(jié)直腸癌（colorectalcancer，CRC）是全球高發(fā)癌癥，其死亡率位居第3位，給全球衛(wèi)生系統(tǒng)和患者造成沉重負(fù)擔(dān)

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1,2,3］

。除此之外，早發(fā)性結(jié)直腸癌（年齡≤50歲）在全球范圍內(nèi)越來(lái)越受到關(guān)注，結(jié)直腸癌患者的年齡分布現(xiàn)在隨著疾病的患病率逐年上升。據(jù)預(yù)測(cè)，在2040年，中國(guó)將成為結(jié)直腸癌新發(fā)病例和死亡率最高的國(guó)家

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4］

。許多研究表明，腫瘤免疫微環(huán)境（tumorimmunemicroenvironment，TME）在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中以及侵襲轉(zhuǎn)移中均扮演了重要的角色

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5］

，小細(xì)胞外囊泡（smallextracellularvesicles，sEV）作為腫瘤免疫微環(huán)境中的一部分，也發(fā)揮著重要作用。目前，CRC的早期篩查是降低其發(fā)病率和死亡率的關(guān)鍵策略。CRC的診斷主要依賴于病史、體格檢查、影像學(xué)檢查、內(nèi)鏡檢查以及病理學(xué)檢查等多維度的綜合評(píng)估。在治療方面，手術(shù)仍是CRC的主要治療手段，而綜合治療和精準(zhǔn)治療策略也在不斷發(fā)展和完善

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6］

。此外，分子檢測(cè)技術(shù)在CRC的診斷、分型、預(yù)后評(píng)估及個(gè)體化治療中的應(yīng)用日益凸顯，為臨床決策提供了重要的分子生物學(xué)依據(jù)。因此，CRC的早期診斷，精準(zhǔn)治療和預(yù)后評(píng)估是提高患者生存率的關(guān)鍵，而尋找可靠的生物標(biāo)志物對(duì)此有極大幫助，成為目前需要解決的問(wèn)題。細(xì)胞外囊泡（extracellularvesicles，EV）是一組異質(zhì)的膜結(jié)構(gòu)囊泡，幾乎由所有類(lèi)型的細(xì)胞主動(dòng)釋放，存在于各種人體體液中。根據(jù)囊泡的大小來(lái)分類(lèi)，可以分為大細(xì)胞外囊泡和小細(xì)胞外囊泡。小細(xì)胞外囊泡一般是指直徑小于200nm的EV，是一種被廣泛研究的代表性EV類(lèi)型

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7］

。sEV中含有蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)或代謝物等生物活性成分，它們可能與其來(lái)源細(xì)胞相似或不同，具有不同的生物學(xué)功能和調(diào)節(jié)機(jī)制

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8］

。sEV可以將生物活性成分從供體細(xì)胞轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，從而介導(dǎo)細(xì)胞之間的信息交換，成為腫瘤細(xì)胞之間通訊的關(guān)鍵介質(zhì)

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9］

。越來(lái)越多的研究表明，sEV在結(jié)直腸癌的發(fā)生、診斷和治療中發(fā)揮著重要的作用。CRC衍生的sEV作為潛在的生物標(biāo)志物用于結(jié)直腸癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估和治療監(jiān)測(cè)，具有90%的總體準(zhǔn)確性，92%的敏感性以及86.7%的特異性，有較高的臨床價(jià)值

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10］

。然而，sEV在CRC中具體的作用機(jī)制仍不完全清楚，并且檢測(cè)面臨諸多技術(shù)難題，臨床應(yīng)用具有一定局限性

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11］

。一、miRNA微小RNA（microRNA，miRNA）是一類(lèi)非編碼小RNA，參與腫瘤免疫的過(guò)程，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、遷移、侵襲以及血管生成等在內(nèi)的多項(xiàng)生命活動(dòng)

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12］

。小細(xì)胞外囊泡來(lái)源的miRNA（sEV-miRNA）在調(diào)控結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移等過(guò)程中發(fā)揮作用

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13］

。（一）sEV-miRNA在結(jié)直腸癌診斷中的研究研究表明，結(jié)直腸癌患者血清或者血漿中sEV-miRNA的表達(dá)情況與健康的個(gè)體明顯不同，這些特異性的miRNA為CRC的早期診斷提供了檢測(cè)依據(jù)。Liu等

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14］

發(fā)現(xiàn)sEV-miRNA在CRC的復(fù)發(fā)與進(jìn)展中也具有顯著的臨床價(jià)值。他們收集了84名Ⅱ/Ⅲ期結(jié)直腸癌患者腫瘤切除后和輔助治療前的血清樣本，通過(guò)RNA測(cè)序鑒定了血清中小細(xì)胞外囊泡的miRNA表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)miR-4772-3p的表達(dá)降低是Ⅱ期和Ⅲ期CRC患者腫瘤復(fù)發(fā)的生物標(biāo)志物。在一項(xiàng)隊(duì)列驗(yàn)證中，miR-125a-3p和miR-320c在早期CRC患者的血漿的小細(xì)胞外囊泡中顯著上調(diào)，可以作為早期結(jié)直腸癌的生物診斷標(biāo)志物，并且當(dāng)sEV來(lái)源的miR-125a-3與傳統(tǒng)的診斷標(biāo)志物如癌胚抗原（CEA）聯(lián)合使用時(shí)，可以將CEA的受試者工作曲線（areaofunderthecurve，AUC）從0.836提高至0.855

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15］

。研究顯示，在CRC晚期患者中，sEV中miRNA-3937的AUC為0.827，診斷價(jià)值高于CEA和CA199

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16］

。miR-139-3p在CRC患者sEV中的表達(dá)顯著下調(diào)，ROC曲線顯示CRC患者和健康對(duì)照者以及非轉(zhuǎn)移性患者與轉(zhuǎn)移性患者sEV中的miR-139-3p水平具有一定差異

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17］

。此外，sEV在血液、尿液、唾液等體液中表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性，這為基于液體活檢的疾病診斷提供了便利。雖然sEV-miRNA在CRC中的單個(gè)診斷標(biāo)志物有限，但是sEV作為非侵入性生物標(biāo)志物的研究為未來(lái)CRC診斷提供了新的思路和方向。（二）sEV-miRNA在結(jié)直腸癌治療中的研究sEV具有較高的生物相容性和靶向性，因此可以作為天然的藥物運(yùn)輸載體，在疾病的治療中發(fā)揮作用。通過(guò)進(jìn)行工程化地改造和高效地運(yùn)輸改造后的sEV，可增強(qiáng)對(duì)結(jié)直腸癌的治療效果。有研究報(bào)道，通過(guò)工程化的sEV將miR-21抑制劑寡核苷酸與5-氟尿嘧啶聯(lián)合運(yùn)輸至耐藥的CRC細(xì)胞，可以有效地提高治療效果

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18］

。奧沙利鉑和5-氟尿嘧啶是CRC治療的常用藥物，其化療抵抗是主要挑戰(zhàn)之一。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，miR-196b-5p在CRC患者血清的sEV中顯著上調(diào)，并通過(guò)靶向STAT3促進(jìn)了對(duì)5-氟尿嘧啶的耐藥性，而miR-196b-5p的下調(diào)則使CRC細(xì)胞對(duì)其重新敏感

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19］

。另一項(xiàng)研究報(bào)道，低表達(dá)miR-128-3p的CRC患者對(duì)奧沙利鉑的治療效果不佳，將表達(dá)miR-128-3p的sEV運(yùn)輸至奧沙利鉑耐藥的CRC細(xì)胞，可以有效地逆轉(zhuǎn)耐藥性，從而改善治療效果

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20］

。工程化sEV的開(kāi)發(fā)為CRC治療提供了新的策略，例如通過(guò)基因編輯技術(shù)，將特定的miRNA插入sEV中，從而實(shí)現(xiàn)高效的基因傳遞?；蛘邔iRNA與脂質(zhì)體結(jié)合后與sEV整合，從而實(shí)現(xiàn)miRNA的高效裝載。上述研究表明，sEV可以作為藥物運(yùn)輸載體，通過(guò)逆轉(zhuǎn)化療抵抗，提高CRC的治療效果。然而目前的改造方法可能引入新的生物安全性問(wèn)題。此外，工程化sEV的載藥效率和靶向性仍然需進(jìn)一步優(yōu)化。（三）sEV-miRNA在結(jié)直腸癌預(yù)后中的研究近些年來(lái)，sEV-miRNA在CRC預(yù)后評(píng)估中被認(rèn)為是判斷不良預(yù)后的重要分子標(biāo)志物，其作用被廣泛關(guān)注。通過(guò)對(duì)88例CRC患者，29例CRC術(shù)后患者和11名健康個(gè)體的血清中的sEV-miRNA進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，有16種miRNA在CRC患者中顯著升高，并且在手術(shù)后明顯下降，這些結(jié)果提示了sEV-miRNA可以對(duì)CRC患者治療情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)

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21］

。通過(guò)基因芯片技術(shù)分析結(jié)直腸癌患者血清中的多種miRNA，發(fā)現(xiàn)miR-638和miR-5787的低表達(dá)和晚期分期以及肝轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，表明了其低水平表達(dá)提示較高的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)

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22］

。研究表明，來(lái)自CRC的sEV中miR-548c-5p可以在體外抑制CRC細(xì)胞的增殖和侵襲，還可以防止裸鼠的結(jié)直腸癌變，因此，sEV來(lái)源的miR-548c-5p可以成為CRC預(yù)后的預(yù)測(cè)因素

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23］

。研究顯示，miR-6803-5p和miR-6869-5p在CRC患者中的表達(dá)水平顯著升高，它們的高表達(dá)與比較差的疾病生存率顯著相關(guān)。Fu等

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24］

發(fā)現(xiàn)sEV中miR-17-5p和miR-92a-3p的表達(dá)與轉(zhuǎn)移性CRC密切相關(guān)，表明它們可以用于CRC轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估，成為潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物。這些結(jié)果表明了sEV-miRNA可以作為CRC預(yù)后的分子標(biāo)志物，在識(shí)別高風(fēng)險(xiǎn)患者中發(fā)揮重要作用。二、長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Longnon-codingRNA，lncRNA）與miRNA相類(lèi)似，lncRNA也可以通過(guò)sEV轉(zhuǎn)移并作用于受體細(xì)胞發(fā)揮相應(yīng)的功能，在CRC中更多的是其在耐藥方面的研究

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25,26］

。在CRC鑒別診斷中，小細(xì)胞外囊泡來(lái)源的lncRNA（sEV-lncRNA）中的lncRNACRNDE-h和傳統(tǒng)指標(biāo)CEA相比，其AUC為0.89，對(duì)CRC具有更好的診斷價(jià)值

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27］

。sEV-lncRNACCAL通過(guò)與人類(lèi)抗原R（HuR）直接相互作用激活β-catenin并抑制細(xì)胞凋亡

［

28］

。研究發(fā)現(xiàn)，血漿中sEV-lncRNAPCAT1在CRC組織和細(xì)胞系中顯著增加，敲低lncRNAPCAT1顯著抑制HT29和HCT8細(xì)胞的黏附與侵襲

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29］

，為CRC的治療又提供了方向。而sEV-lncRNACRNDE-h不僅可以鑒別診斷，同時(shí)對(duì)CRC的預(yù)后判斷具有一定價(jià)值。sEV-lncRNACRNDE-h高表達(dá)組的生存率低于低表達(dá)組，其過(guò)表達(dá)可以作為CRC的獨(dú)立預(yù)后因素

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27］

。另一項(xiàng)研究分析鑒定出了CRC細(xì)胞來(lái)源的sEV的lncRNASNHG3，它可以通過(guò)上調(diào)β-catenin的表達(dá)導(dǎo)致EMT的激活和促進(jìn)CRC的轉(zhuǎn)移

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30］

?？傊瑂EV來(lái)源的lncRNA在結(jié)直腸癌的診斷、治療和預(yù)后中具有廣闊的應(yīng)用前景。三、circRNA越來(lái)越多的數(shù)據(jù)表明環(huán)狀RNA（circularRNA，circRNA）對(duì)CRC的進(jìn)展至關(guān)重要，并且發(fā)現(xiàn)CRC組織和sEV中的circRNA表達(dá)異常

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31］

，但是其作為CRC的生物標(biāo)志物的研究相對(duì)較少。研究表明，sEV-circGAPVD1在CRC中上調(diào)，并且診斷CRC的敏感性和特異性分別為0.7564和0.7179

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32］

，有望成為CRC的新型診斷標(biāo)志物。多項(xiàng)研究表明，sEV-circRNA也可以作為CRC患者的耐藥診斷標(biāo)志物。circRNAFBXW7在奧沙利鉑耐藥的CRC患者的細(xì)胞中降低，通過(guò)sEV分泌并轉(zhuǎn)移circRNAFBXW7至耐藥的CRC細(xì)胞，可以增加奧沙利鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，抑制奧沙利鉑誘導(dǎo)的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，并抑制奧沙利鉑外流，從而改善CRC患者對(duì)奧沙利鉑的化療抵抗

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33］

。sEV來(lái)源的circ_0094343（circPTEN）通過(guò)miR-766-5p/TRIM67軸抑制CRC細(xì)胞的增殖、克隆形成和糖酵解，進(jìn)而改善對(duì)5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑和阿霉素的化療敏感性

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34］

。Yue等

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35］

的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞衍生的sEV來(lái)源的hsa_circ_0001739和lncRNAAC159540.1通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性地抑制miR-218-5p進(jìn)而誘導(dǎo)CRC的進(jìn)展。這些結(jié)果說(shuō)明sEV-circRNA對(duì)CRC的調(diào)控發(fā)揮著重要的作用，為CRC的治療提供了理論基礎(chǔ)。血漿sEV來(lái)源的circLPAR1在CRC中表達(dá)顯著降低，但在手術(shù)后恢復(fù)，此外，circLPAR1在CRC診斷中顯示出腫瘤特異性，診斷性能可以提高到受試者工作特征曲線下0.875的區(qū)域，這些結(jié)果為臨床CRC早期診斷和疾病發(fā)展的機(jī)制提供了新的視角。四、蛋白、脂質(zhì)及代謝物在高體脂比的CRC患者的血漿sEV中微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白MTTP表達(dá)增加，可以作為鐵死亡的抑制劑并降低對(duì)化療的敏感性，提示靶向分泌型MTTP的治療可能會(huì)逆轉(zhuǎn)CRC中的奧沙利鉑耐藥性

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36］

。肝轉(zhuǎn)移是CRC患者死亡的主要原因，研究表明，肝細(xì)胞來(lái)源的sEV中致癌相關(guān)蛋白YAP活性增加，通過(guò)增加M2巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)和CRC肝轉(zhuǎn)移的生長(zhǎng)

［

37］

。血液學(xué)轉(zhuǎn)移被認(rèn)為是導(dǎo)致CRC高轉(zhuǎn)移率和死亡率的關(guān)鍵因素，sEV來(lái)源的ADAM17通過(guò)誘導(dǎo)血管滲漏從而促進(jìn)CRC轉(zhuǎn)移，而ADAM17選擇性抑制劑可以有效地減少CRC轉(zhuǎn)移

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38］

。而一項(xiàng)蛋白組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，CRC中sEV中存在多種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，尤其是HLA-DPA1顯著表達(dá)，AUC為0.96，顯示出良好的診斷和預(yù)后潛力

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39］

。脂質(zhì)組學(xué)研究的結(jié)果顯示，CRC患者血漿中的特定脂質(zhì)代謝物（如TAG類(lèi)、CE類(lèi)和FAHFA類(lèi)）與疾病分期密切相關(guān)。這些脂質(zhì)代謝物的ROC回歸模型敏感度為0.85，特異度為0.8，AUC值為0.898，顯示出良好的診斷潛力

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40］

。最新研究發(fā)現(xiàn)，CRC來(lái)源的sEV中某些脂質(zhì)的特定變化與化療耐藥相關(guān)。在SW620耐藥細(xì)胞中，甘油三酯、磷脂酰膽堿和膽固醇酯類(lèi)的整體變化與FOLFOXIRI（亞葉酸、5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑和伊立替康的聯(lián)合療法）耐藥性顯著相關(guān)，這些改變的脂質(zhì)種類(lèi)可能作為CRC化療后的潛在預(yù)后標(biāo)志物

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41］

。近期研究表明，sEV能夠攜帶代謝物等生物活性分子調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境和腫瘤細(xì)胞間通訊。對(duì)CRC組織中sEV的分泌代謝物的活性分析發(fā)現(xiàn)，sEV分泌活性代謝物較高的細(xì)胞亞群表現(xiàn)出更強(qiáng)的腫瘤侵襲性

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42］

，可作為能用于潛在的預(yù)后標(biāo)志物。因此，多組學(xué)聯(lián)合分析能夠深入地理解sEV在腫瘤進(jìn)展中的作用機(jī)制，并有望開(kāi)發(fā)出的診斷模型和治療策略，多組學(xué)的聯(lián)合應(yīng)用或許會(huì)提高診斷的準(zhǔn)確度和特異度。五、sEV在CRC臨床檢測(cè)的應(yīng)用sEV檢測(cè)具有非侵入性檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，能夠?yàn)榻Y(jié)直腸癌的早期診斷、治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)估提供新的思路。sEV可通過(guò)血液、尿液等體液獲取，避免了傳統(tǒng)組織活檢的侵入性和風(fēng)險(xiǎn)

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11］

。sEV攜帶的多種活性成分，能夠反映腫瘤的生物學(xué)特征，某些標(biāo)志物可能在疾病早期就發(fā)生變化，有助于早期發(fā)現(xiàn)CRC

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43］

。通過(guò)臨床樣本的分析，發(fā)現(xiàn)檢測(cè)血漿sEV中RNA標(biāo)志物可以區(qū)分早期結(jié)直腸癌和進(jìn)展期腺瘤

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43］

。通過(guò)對(duì)sEV中多項(xiàng)生物指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)，可提高診斷的敏感性和特異性，也可用于評(píng)估疾病進(jìn)展和治療效果。例如，對(duì)CRC來(lái)源的sEV進(jìn)行表征檢測(cè)以