ICS65.020.20

CCSB05

DB2308

黑龍江省佳木斯市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB2308/T211—2024

水稻稻瘟病菌孢子保存技術(shù)規(guī)程

2024-11-28發(fā)布2024-12-28實(shí)施

佳木斯市市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB2308/T211—2024

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由佳木斯市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件由佳木斯市市場監(jiān)督管理局批準(zhǔn)發(fā)布。

本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所。

本文件主要起草人：王桂玲、宋成艷、陸文靜、韓笑、周雪松。

本文件2024年首次發(fā)布。

Ⅰ

DB2308/T211—2024

水稻稻瘟病菌孢子保存技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了佳木斯市水稻稻瘟病病菌定義、使用設(shè)備、保存方法等。

本文件適用于佳木斯市水稻稻瘟病病菌保存技術(shù)，為更深入研究稻瘟病菌提供菌種來源。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1病原物pathogeny

稻瘟病菌：無性階段為灰梨孢菌（學(xué)名：PyriculariaoryzaeCav.），有性階段為灰色大角間座

殼菌（學(xué)名：MagnaporthegriseaBarr.），屬子囊菌廣大角間座殼屬。

3.2水稻莖節(jié)ricestemnodes

水稻莖節(jié)是指水稻莖上的特定部位，這些部位是芽與葉的著生處，通常凸出或微凹下，是辨別莖枝

的主要特征。

以下簡稱稻節(jié)。

4材料和用具

4.1常用儀器用具

常用儀器及用具包括：剪刀、超凈工作臺、小試管（直徑12mm，長100mm）、接種針、培養(yǎng)皿、

冰箱、生物顯微鏡、培養(yǎng)箱、高壓滅菌器、干燥滅菌器、醫(yī)用白瓷盤、變色硅膠、普通玻璃干燥器、酒

精燈、記號筆，鑷子等。

4.2試劑及培養(yǎng)基

1

DB2308/T211—2024

試劑：75%酒精、凡士林。

培養(yǎng)基：稻節(jié)。

5預(yù)保存菌株要求

培養(yǎng)在試管斜面培養(yǎng)基上的或培養(yǎng)皿里的菌種，以及高梁粒培養(yǎng)基上的新鮮菌種，都可以使用。

6保存方法

6.1稻節(jié)采集與備用

秋季水稻（普通水稻，不包括彩色水稻等特種稻）收獲時(shí)，采集水稻植株較細(xì)的莖節(jié)，用剪刀剪成

長約3cm～5cm的稻節(jié)，且要求稻節(jié)干凈無病，采集后放在干燥通風(fēng)處晾干保存?zhèn)溆谩?/p>

6.2稻節(jié)培養(yǎng)基的制備

選保存?zhèn)溆玫母蓛舻竟?jié)，保留節(jié)部，剪成長約0.5cm～1cm的小節(jié)，用蒸餾水洗凈后放在容器內(nèi)，

根據(jù)需要放入稻節(jié)數(shù)量，然后加入蒸餾水適量（沒過稻節(jié)以上15cm），加熱煮沸20min后，常溫?zé)A餾

水冷過濾至常溫，然后裝入小試管內(nèi)，每管放10個稻節(jié)，蓋上棉塞，放入高壓滅菌器（蒸氣滅菌器）

內(nèi)溫度達(dá)到121℃，滅菌40min，取出晾涼備用。

6.3接種培養(yǎng)

在無菌室內(nèi)，把要保存的新鮮菌株切成小的菌塊，接種在稻節(jié)培養(yǎng)基上，在試管上注明菌株編號、

接種日期，放入28℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待菌絲長滿稻節(jié)后，從培養(yǎng)箱內(nèi)取出放在室內(nèi)通風(fēng)干燥處。

6.4變色硅膠干燥

將變色硅膠倒入玻璃培養(yǎng)皿或者瓷盤中，放入烘箱80℃干燥2h至硅膠變?yōu)樯钏{(lán)色(干燥的變色

硅膠呈深藍(lán)色，根據(jù)吸濕量的多少顏色會依次呈淡藍(lán)色、藍(lán)白色、藍(lán)紫色和粉紅色)后冷卻，然后倒入

玻璃干燥器中備用。

6.5病菌保存

準(zhǔn)備普通玻璃干燥器（根據(jù)需要準(zhǔn)備干燥器型號），在干燥器底部放入變色硅膠(干燥的變色硅膠

呈深藍(lán)色)，把通風(fēng)干燥后的小試管5個～10個為一組，用硫酸紙包住試管上部（棉塞部分）扎好，

2

DB2308/T211—2024

做上編號標(biāo)記便于查找，在干燥器磨口處摸上凡士林，蓋上干燥器蓋子，用力壓實(shí)，以干燥器磨口處不

漏氣為準(zhǔn)，最后將干燥器放入低溫（4℃）通風(fēng)干燥處保存。

6.6保存菌種干燥狀態(tài)檢查

檢查玻璃干燥器中硅膠顏色的變化，濕度為0時(shí)呈深藍(lán)色；濕度約為10%時(shí)呈淡藍(lán)色；濕度約為

25%時(shí)呈藍(lán)白色；濕度約為40%時(shí)呈藍(lán)紫色；濕度約為50%時(shí)呈粉色，菌種保存過程中如果變色硅膠

呈粉紅色，表明其吸濕性已經(jīng)很弱，無法繼續(xù)維持所保存菌種的干燥環(huán)境，需要進(jìn)行更換。

6.7保存病菌使用

可根據(jù)需要