補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)活性成分及分子機(jī)理研究中文摘要研究背景：隨著計(jì)算機(jī)科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制探索研究中成為越來(lái)越有效的簡(jiǎn)便工具。研究目的：本文采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)的作用機(jī)理進(jìn)行了研究，并對(duì)其有效成分和治療痛經(jīng)的關(guān)鍵靶點(diǎn)、通路進(jìn)行預(yù)測(cè)。方法：首先運(yùn)用公共數(shù)據(jù)庫(kù)資源以及挖掘相關(guān)文獻(xiàn)搜尋補(bǔ)血益母丸化學(xué)成分，再通過(guò)實(shí)驗(yàn)GC-MS、LC-MS分析鑒定出62個(gè)主要化合物，利用Pharmmapper數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)化學(xué)成分對(duì)應(yīng)的作用靶點(diǎn)，再以口服利用度(OB)和類藥性(DL)為指標(biāo)篩選出其主要活性成分；在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中統(tǒng)計(jì)與痛經(jīng)相關(guān)痛經(jīng)的靶點(diǎn)，與補(bǔ)血益母丸成分靶點(diǎn)對(duì)照篩選出共同靶點(diǎn)作為研究靶點(diǎn)，再將共同靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)中，獲得GO富集和KEGG富集結(jié)果，利用Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖。最后通過(guò)文獻(xiàn)挖掘驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)圖的分析結(jié)果。結(jié)果：從補(bǔ)血益母丸中篩選得到歐當(dāng)歸內(nèi)酯A、黃芪皂苷I、異鼠李素、豆甾醇、羽扇豆醇、新當(dāng)歸內(nèi)酯等30個(gè)活性成分，共涉及AKT2、MMP9、HRAS、ESR1等在內(nèi)的30個(gè)痛經(jīng)靶點(diǎn)。KEGG結(jié)果顯示補(bǔ)血益母丸可能是通過(guò)作用于與痛經(jīng)相關(guān)的中樞鎮(zhèn)痛、激素調(diào)節(jié)、炎癥等靶點(diǎn)蛋白或信號(hào)通路發(fā)揮藥理作用。結(jié)論：該研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步揭示了補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多通路發(fā)揮藥效。還對(duì)關(guān)于補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)活性成分及分子機(jī)理進(jìn)行了歸納整理和綜述，為進(jìn)一步闡釋補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)作用機(jī)制提供一定的參考。關(guān)鍵詞：網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；補(bǔ)血益母丸；活性成分；治療痛經(jīng)；機(jī)制；

StudyonActiveComponentsandMolecularMechanismofBuxueYimuPillinTreatingDysmenorrheaAbstractResearchbackground:Withtherapiddevelopmentofcomputerscienceandtechnology,networkpharmacologyhasbecomeanincreasinglyeffectiveandsimpletooltostudythematerialbasisandmechanismoftraditionalChinesemedicine.ResearchObjective：Inthispaper,themechanismofBuxueYimuPillsinthetreatmentofdysmenorrheaisstudiedbynetworkpharmacologymethod,anditsactivecomponentsandkeytargetsinthetreatmentofdysmenorrheaarepredicted.Method：Firstly,thechemicalcomponentsofBuxueYimupillweresearchedbyusingpublicdatabaseresourcesandminingrelatedliterature.Then62maincompoundswereidentifiedbyGC-MSandLC-MSanalysis.Thecorrespondingtargetofchemicalcomponentswaspredictedbyusingpharmapperdatabase,andthentheoralutilizationwasusedThemainactivecomponentswerescreenedoutwithOBandDLasindicators;thetargetpointsofdysmenorrhearelatedtodysmenorrheawerecountedinthegenecardsdatabase,andthecommontargetpointswerescreenedoutastheresearchtargetpointsbycomparingwiththetargetpointsofBuxueYimupill,thenthecommontargetpointswereimportedintotheDaviddatabasetoobtaintheresultsofgoenrichmentandKEGGenrichment,andcycloscapewasused3.7.2thenetworkdiagramof"activeingredienttargetpathway"isconstructedbysoftware.Finally,theanalysisresultsofnetworkgraphareverifiedbyliteraturemining.Result：30activecomponents,suchasAngelicalactonea,astragalosideI,isorhamnetin,stigmasterol,lupanolandAngelicalactone,werescreenedfromBuxueYimupill,involving30dysmenorrheatargetsincludingAKT2,MMP9,HRASandESR1.KEGGresultsshowedthatbuxueyimupillmayplayapharmacologicalrolebyactingonthecentralpainrelief,hormoneregulation,inflammationandothertargetproteinsorsignalpathwaysrelatedtodysmenorrhea.Conclusion：Basedonthemethodofnetworkpharmacology,thisstudypreliminarilyrevealedthatbuxueyimupillcanexertitsefficacyinthetreatmentofdysmenorrheathroughmulti-component,multi-targetandmulti-channel.Inaddition,theactivecomponentsandmolecularmechanismofbuxueyimupillinthetreatmentofdysmenorrheaweresummarized,whichprovidedsomereferenceforfurtherexplainingthemechanismofbuxueyimupillinthetreatmentofdysmenorrhea.Keywords:networkpharmacology;BuxueYimupill;activeingredients;treatmentofdysmenorrhea;mechanism;

第一章文獻(xiàn)綜述1.1痛經(jīng)簡(jiǎn)介婦科疾病有許多種，而在其中比較常見(jiàn)的疾病，痛經(jīng)可以算是其中之一，它通常是指女性月經(jīng)期間或前后下腹部產(chǎn)生痙攣性疼痛，而部分患者除了會(huì)感到痙攣性疼痛之外，可能還會(huì)伴隨著頭暈、惡心、腹瀉、嗜睡甚至是昏厥等癥狀[1]。其中，生殖器官無(wú)器質(zhì)性病變所引起的痛經(jīng)稱為原發(fā)性痛經(jīng)；盆腔內(nèi)器質(zhì)性病變導(dǎo)致的痛經(jīng)為繼發(fā)性痛經(jīng)。目前，臨床對(duì)于痛經(jīng)發(fā)病機(jī)制的研究尚未取得突破性進(jìn)展，但通常認(rèn)為神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)與痛經(jīng)有著緊密聯(lián)系。引起原發(fā)性痛經(jīng)的因素有很多，前列腺素、雌激素、一氧化氮、子宮平滑肌收縮等因素都與原發(fā)性痛經(jīng)癥狀有關(guān)；子宮腺肌病、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜異位癥等會(huì)引起繼發(fā)性痛經(jīng)。1.2中醫(yī)藥治療痛經(jīng)的相關(guān)研究中醫(yī)辨證理論提出“不通則痛、不榮則痛”。傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)認(rèn)為痛經(jīng)的發(fā)病機(jī)制不通則痛是指患者受到寒、濕等引起氣血瘀阻、經(jīng)血流通不暢；氣血不足、腎氣虧損為不榮則痛[2]。在目前中醫(yī)藥治療體系的范圍內(nèi)，有很多治療方法、藥物可以治療痛經(jīng)，對(duì)于原發(fā)性痛經(jīng)，西藥主要采用非甾體類抗炎藥，前列腺素合成酶抑制劑、避孕藥等來(lái)治療緩解痛經(jīng)癥狀，但其不良反應(yīng)較多。中醫(yī)治療原發(fā)性痛經(jīng)的方法很多，療效確切且副作用少。其中最常見(jiàn)的中藥復(fù)方治療原發(fā)性痛經(jīng)主要以通調(diào)氣血的藥物為主，比如烏藥湯、四物湯等中藥。臨床上還有脊椎按摩和推拿術(shù)也可有效減輕原發(fā)性痛經(jīng)；還有針灸治療等等。齊峰[3]等人對(duì)痛經(jīng)大鼠進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，給予痛經(jīng)大鼠當(dāng)歸四逆湯，連續(xù)服用2個(gè)月經(jīng)周期，發(fā)現(xiàn)大鼠子宮內(nèi)膜前列腺素PGF2α的含量降低了，而前列腺素PGE2的含量升高了。說(shuō)明當(dāng)歸四逆湯能降低PGF2α含量，升高PGE2含量是治療原發(fā)性痛經(jīng)的機(jī)制。陳冬梅等[4]對(duì)60例痛經(jīng)(寒凝血瘀型)患者進(jìn)行分組治療，30人服用姜黃溫經(jīng)顆粒作為中藥治療組，30例給予布洛芬緩釋膠囊為西藥治療組，結(jié)果中藥組的總有效率高達(dá)90%明顯優(yōu)于西藥治療組。顏艷芳[5]自制了以紫石英、牡丹皮、肉桂、艾葉等藥材組成的溫經(jīng)止痛湯，對(duì)80位痛經(jīng)患者進(jìn)行了分組治療，一組40人，給予進(jìn)行口服治療，另外40人給予溫經(jīng)止痛湯進(jìn)行治療，溫經(jīng)止痛湯組患者月經(jīng)前3天開(kāi)始用藥，服用1周；而消炎藥組患者在月經(jīng)第一天開(kāi)始服用，兩組都連續(xù)服用3個(gè)月經(jīng)周。最后根據(jù)兩組結(jié)果對(duì)比得知溫經(jīng)止痛湯治療組療效明顯高于消炎藥治療組。且兩組差異具有顯著性意義(P<0.05)。以上充分說(shuō)明中藥治療痛經(jīng)具有臨床療效好、復(fù)發(fā)率低的優(yōu)點(diǎn)。補(bǔ)血益母丸屬于中藥復(fù)方藥，其成分復(fù)雜，涉及到的靶點(diǎn)蛋白眾多，因此需要進(jìn)一步對(duì)補(bǔ)血益母丸的活性成分及分子機(jī)理研究。1.3網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中醫(yī)藥研究中的發(fā)展及現(xiàn)狀近年來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)與計(jì)算機(jī)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，Hopkins在2007年初次提出網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)(Networkpharmacology)理論[6]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)由單基因、單靶點(diǎn)的傳統(tǒng)思路發(fā)展到了多成分、多靶點(diǎn)以及多通路的研究，是探索研究中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制的有效工具。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是以系統(tǒng)生物學(xué)以及藥理學(xué)范疇為基礎(chǔ)，再把藥物與靶點(diǎn)、疾病之間的相互作用關(guān)系運(yùn)用軟件進(jìn)行可視化，再對(duì)構(gòu)建所得到的網(wǎng)絡(luò)圖分析探討藥物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制[7-8]。在闡明中醫(yī)藥繁雜體系的過(guò)程中，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)為醫(yī)療者們提供了許多新型的手段和方法，并且在找尋中醫(yī)藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)以及分子機(jī)制的實(shí)踐中，該方法得到了廣泛的應(yīng)用，這是計(jì)算機(jī)技術(shù)以及各種數(shù)據(jù)庫(kù)的聯(lián)合發(fā)展應(yīng)用所帶動(dòng)的結(jié)果。隨著信息技術(shù)和臨床醫(yī)學(xué)的需要，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)不僅在中藥單味藥的效物質(zhì)的篩選中得以實(shí)現(xiàn)，而且在中藥復(fù)方藥的有效物質(zhì)篩選中也得到了應(yīng)用。Zeng等[9]人以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法為基礎(chǔ)，揭示了黃芪丹參復(fù)方治療妊娠高血壓綜合征的藥理作用機(jī)制,首先通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)獲得化合物和疾病各自的相關(guān)靶點(diǎn),然后構(gòu)建化合物-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖,再根據(jù)富集分析結(jié)果，得知該復(fù)方藥是通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多通路治療妊娠高血壓綜合征的特點(diǎn),從而更深入地闡述黃芪丹參活性。韓彥琪[10]等人利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，選取了元胡止痛滴丸的28個(gè)成分作為研究對(duì)象，探究出其可能通過(guò)作用于激素調(diào)節(jié)、解痙、炎癥等相關(guān)的蛋白靶點(diǎn)和途徑，從而在治療原發(fā)性痛經(jīng)中發(fā)揮作用。揭示了元胡止痛滴丸是以多種成分作用多個(gè)靶點(diǎn)多維調(diào)控進(jìn)行治療痛經(jīng)。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于“藥物-靶點(diǎn)-疾病”相互作用網(wǎng)絡(luò)，從整體上系統(tǒng)、全面地觀察藥物對(duì)疾病網(wǎng)絡(luò)的作用和影響，揭示藥物分子協(xié)同作用于疾病的機(jī)制。本研究擬基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出補(bǔ)血益母丸成分作用的靶點(diǎn)進(jìn)行分析，得出補(bǔ)血益母丸的活性化合物、靶點(diǎn)，進(jìn)而構(gòu)建化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)以及通路注釋，預(yù)測(cè)補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)的作用機(jī)制，為后期的深入研究提供參考。1.4補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)的意義補(bǔ)血益母丸由黃芪、當(dāng)歸、益母草、阿膠、陳皮5味藥材組成。臨床用于補(bǔ)益氣血，祛瘀生新，氣血兩虛兼血瘀證產(chǎn)后腹痛[11]。其中，朱敏[12]著重對(duì)補(bǔ)血益母丸中的主要成分益母草展開(kāi)了活性成分測(cè)試，發(fā)現(xiàn)益母草所包含的生物堿、苯丙醇等活性成分，在活血化瘀、調(diào)經(jīng)利水方面有突出作用；同時(shí)，其內(nèi)包含的益母草堿對(duì)于子宮平滑肌還能夠起到雙向調(diào)節(jié)的作用，這對(duì)于子宮痙攣的緩解、子宮收縮的促進(jìn)有積極效果。在隨后的研究中，趙茄靜[13]等人發(fā)現(xiàn)補(bǔ)血益母丸中阿膠的主要活性成分為粗蛋白和膠原蛋白，其中粗蛋白含量達(dá)到75.1%、膠原蛋白含量達(dá)到48.21%。阿膠主要由驢皮熬制而成，而且阿膠的應(yīng)用已有幾千年的歷史，阿膠具有益氣補(bǔ)血、治療血虛的功效[14]，是調(diào)經(jīng)補(bǔ)血的常用藥材。補(bǔ)血益母丸中的當(dāng)歸是一種傘形科植物，常用于中醫(yī)藥，且含有多種化學(xué)成分，當(dāng)歸的補(bǔ)血活血功效都被人們熟知，藥性甘、辛、溫，在調(diào)經(jīng)止痛、補(bǔ)血活血方面有較好的效果[15]?，F(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)了，當(dāng)歸還具有抑制血小板凝集、增強(qiáng)心血管、鎮(zhèn)痛等多種藥理作用，都對(duì)緩解痛經(jīng)癥狀有很大的作用。補(bǔ)血益母丸包含的陳皮屬于蕓香科植物橘的干燥成熟果皮，陳皮味辛、苦、性溫，能化痰止咳、健脾、利水通便。陳皮中含有著豐富的天然黃酮類化合物，具有抗炎、抗氧化等作用[16]。補(bǔ)血益母丸中的黃芪屬于豆科植物蒙古黃芪的干燥根部分，在治療中發(fā)揮補(bǔ)氣升陽(yáng)、益氣固表的作用，《本草求真》書中對(duì)其如此形容道：“黃芪為補(bǔ)氣諸藥之最”[17]。綜上所述，補(bǔ)血益母丸內(nèi)含當(dāng)歸、黃芪、阿膠、益母草、陳皮5味中藥材，而五味中藥材都是臨床用于治療氣血兩虛、活血化瘀、活血調(diào)經(jīng)的藥材,為婦科調(diào)經(jīng)之要藥，補(bǔ)益氣血、祛瘀生新、滋陰補(bǔ)血效果顯著，對(duì)于痛經(jīng)有良好的的緩解和治療作用。因此更深層次地補(bǔ)血益母丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制是很有必要的,同時(shí)也對(duì)于補(bǔ)血益母丸的臨床用藥與制劑開(kāi)發(fā)具有積極的意義。1.5研究目的與方法網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中藥及新藥研究開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用越來(lái)越多，也非常便捷，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是通過(guò)在現(xiàn)有的中藥數(shù)據(jù)庫(kù)中，利用計(jì)算機(jī)虛擬篩選所有具有一定療效的藥物，在已知療效的中藥和疾病之間構(gòu)建一個(gè)“藥物-靶點(diǎn)-疾病”相互作用網(wǎng)絡(luò)，從整體出發(fā)，系統(tǒng)綜合地觀察藥物對(duì)疾病網(wǎng)絡(luò)的作用與影響，揭示藥物分子如何與疾病作用。補(bǔ)血益母丸是千金藥業(yè)股份有限公司開(kāi)發(fā)的中成藥，其處方為著名藥方。具有活血化瘀、益氣活血的雙重功效。主要用于氣虛腹痛患者（產(chǎn)后腹痛，伴月經(jīng)不停，貧血?dú)馓?，身體恢復(fù)緩慢）和婦科手術(shù)后氣虛、血虛。雖然本方已開(kāi)發(fā)成中成藥，且補(bǔ)血益母丸膠囊且療效已明確，但其化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)以及作用機(jī)制卻尚未有報(bào)道研究。由于補(bǔ)血益母丸中的各味中藥具有多分子、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，因此采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)手段進(jìn)行研究該復(fù)方藥治療痛經(jīng)的活性成分及分子作用機(jī)理。為后續(xù)的藥物基礎(chǔ)研究、質(zhì)量控制的改進(jìn)及機(jī)理的探索提供了理論依據(jù)。1.首先運(yùn)用公共數(shù)據(jù)庫(kù)資源以及挖掘相關(guān)文獻(xiàn)搜尋補(bǔ)血益母丸化學(xué)成分，再通過(guò)實(shí)驗(yàn)GC-MS、LC-MS分析鑒定出其主要化合物；2.在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)下載化合物結(jié)構(gòu)，上傳至Pharmmapper數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行反向分子對(duì)接預(yù)測(cè)補(bǔ)血益母丸化學(xué)成分對(duì)應(yīng)的作用靶點(diǎn)，在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中以“dysmenorrhea”為關(guān)鍵詞搜索統(tǒng)計(jì)痛經(jīng)的疾病靶點(diǎn)，然后與補(bǔ)血益母丸成分靶點(diǎn)映射篩選出共同靶點(diǎn)作為研究靶點(diǎn)；3.把選取的活性成分、預(yù)測(cè)的作用靶點(diǎn)以及信號(hào)通路作為節(jié)點(diǎn)，在Excel中進(jìn)行整合對(duì)應(yīng)，導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件中構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖。再將共同靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)中，獲得GO富集和KEGG富集結(jié)果，再利用clusterProfiler這個(gè)R程序包中barplot函數(shù)繪制條形圖，將其結(jié)果可視化。最后，通過(guò)文獻(xiàn)挖掘?qū)W(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析結(jié)果進(jìn)行總結(jié)驗(yàn)證，探究補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)的活性成分及其作用機(jī)制。

第二章補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究2.1工作流程本研究以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法為基礎(chǔ)，借鑒該學(xué)科的研究思路，建立復(fù)方補(bǔ)血益母丸活性分子數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選出其關(guān)鍵的靶點(diǎn)蛋白，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)以及生物信息學(xué)方法，進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)和通路分析，預(yù)測(cè)補(bǔ)血益母丸發(fā)揮治療痛經(jīng)作用的分子機(jī)制，為深入開(kāi)展補(bǔ)血益母丸機(jī)制研究提供參考，以及對(duì)痛經(jīng)的治療與相關(guān)藥物的使用奠定理論基礎(chǔ)，為補(bǔ)血益母丸的研究提供新的方法和思路。圖1為研究分析討論工作流程圖：圖1.工作流程簡(jiǎn)介2.2補(bǔ)血益母丸化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建2.2.1補(bǔ)血益母丸化學(xué)成分的收集本次研究以補(bǔ)血益母丸為研究對(duì)象，由于提取分離得到的補(bǔ)血益母丸化合物數(shù)量有限，為了得到較為完整的補(bǔ)血益母丸物質(zhì)基礎(chǔ)。通過(guò)查閱大量文獻(xiàn)以及借助各種數(shù)據(jù)庫(kù)，收集補(bǔ)血益母丸中5種藥材的主要化學(xué)成分建立相關(guān)化合物數(shù)據(jù)庫(kù)。將檢索得到的化合物稱為候選化合物。益母草（Leonuri

Herba）、當(dāng)歸（Angelicae

Sinensis

Radix）、黃芪(Astragali

Radix)

、陳皮(Citri

Reticulatae

Pericarpium)化學(xué)成分均收集自PubChem、TCMSP和Drug公共數(shù)據(jù)庫(kù)，阿膠(Asini

Corii

Colla)成分來(lái)自文獻(xiàn)。2.2.2化學(xué)成分的收集再以補(bǔ)血益母丸作為實(shí)驗(yàn)材料，采用水蒸氣提取法提取藥材中的揮發(fā)性成分，再用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀定性分析，得到16種化學(xué)成分；同時(shí)采用醇提法提取藥材的化學(xué)成分，通過(guò)高效液相色譜串聯(lián)用質(zhì)譜及高分辨質(zhì)譜分析技術(shù)進(jìn)行定性分析，推測(cè)出了主要由益母草中的黃酮類化合物與當(dāng)歸、黃芪中的藁本內(nèi)酯類化合物組成的50個(gè)小分子化合物。結(jié)合相關(guān)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)信息，對(duì)補(bǔ)血益母丸的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)分析，鑒定了其中的62個(gè)成分，為的補(bǔ)血益母丸藥效物質(zhì)發(fā)現(xiàn)研究奠定了基礎(chǔ)。2.2靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建2.2.1化學(xué)成分小分子的準(zhǔn)備Pubchem是一個(gè)可以進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)搜索的數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)運(yùn)用網(wǎng)站進(jìn)行搜索，找到與化合物相對(duì)應(yīng)的2D結(jié)構(gòu)，并下載它的sdf格式，得到62個(gè)小分子配體，對(duì)其進(jìn)行收集整理。2.2.2反向分子對(duì)接Pharmapper數(shù)據(jù)庫(kù)是一個(gè)WEB服務(wù)器，它是使用藥效映射來(lái)識(shí)別藥物的潛在靶點(diǎn)[18]。運(yùn)用PharmMapper藥物靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)，將收集到的化學(xué)成分的sdf格式小分子配體文件導(dǎo)入PharmMapper，導(dǎo)入時(shí)將蛋白質(zhì)名稱與物種都限制為“人類”，同時(shí)將靶點(diǎn)數(shù)目限制為300，提交后記錄對(duì)應(yīng)小分子化合物的JOBID，等待檢測(cè)結(jié)果郵件，以進(jìn)行化合物靶點(diǎn)的收集。2.2.3靶點(diǎn)的收集根據(jù)檢測(cè)結(jié)果得到化學(xué)成分結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)蛋白，然后進(jìn)行篩選（fitscore≥3）統(tǒng)計(jì)相關(guān)蛋白質(zhì)和基因信息，并使用官方標(biāo)志如P03372、Q06520等命名收集的蛋白質(zhì)，，其中基因作為化學(xué)成分的潛在靶點(diǎn)。在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中以“dysmenorrhea”為關(guān)鍵詞搜索痛經(jīng)的疾病靶點(diǎn)基因，得到與痛經(jīng)相關(guān)的基因，然后與補(bǔ)血益母丸活性成分的潛在靶點(diǎn)基因映射篩選出共同靶點(diǎn)作為主要研究靶點(diǎn)。經(jīng)過(guò)這一系列操作,最終得到補(bǔ)血益母丸活性成分治療痛經(jīng)的潛在靶點(diǎn)基因，進(jìn)而構(gòu)建靶點(diǎn)信息數(shù)據(jù)庫(kù)。2.3靶點(diǎn)通路的構(gòu)建DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)(/tools.jsp）是一個(gè)比較全面的生物功能、富集通路注釋信息平臺(tái)[20]。為了更進(jìn)一步了解篩選出補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)靶點(diǎn)的功能以及在信號(hào)通路中的作用，將篩選的靶點(diǎn)基因?qū)隓AVID數(shù)據(jù)庫(kù)，輸入靶標(biāo)基因名稱列表選擇“Homosapiens”作為物種類型，并將目標(biāo)基因名稱修正為（OFFICIALGENESYMBOL），選擇“genelist”作為表格類型，選擇背景為“Homosapiens”，最后點(diǎn)擊“FunctionalAnnotationTool”，根據(jù)上述轉(zhuǎn)化操作得到得到AnnotationSummaryResults，根據(jù)得到的結(jié)果并設(shè)定（P＜0.01）來(lái)篩選CC、BP、MF及KEGG數(shù)據(jù)，再利用clusterProfiler中R程序包barplot函數(shù)繪制GO和KEGG條形圖，即可進(jìn)行GO生物功能富集分析和KEGG信號(hào)通路富集分析。通路分析可以揭示蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)中不同信號(hào)通路的重要性，在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)中常用于分析藥物作用機(jī)制。2.4網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建Cytoscape3.7.2是一個(gè)可以對(duì)相關(guān)聯(lián)的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和編輯形成可視化網(wǎng)絡(luò)的有效工具[19]，。用該軟件構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖和“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)。在Excel表格中建立補(bǔ)血益母丸的化學(xué)成分和靶點(diǎn)蛋白，導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件，完成以“節(jié)點(diǎn)”為活性成分和靶蛋白的相關(guān)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，活性成分與靶點(diǎn)蛋白之間的關(guān)系用“邊”表示。在網(wǎng)絡(luò)圖中，節(jié)點(diǎn)的度值表示連接到網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)的路線條數(shù)，度的值越大，說(shuō)明該節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的地位越重要。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)湫再|(zhì)，分析度值較大的節(jié)點(diǎn)，因?yàn)檫@些節(jié)點(diǎn)具有更多的連接化合物或靶點(diǎn)，可能在整個(gè)網(wǎng)絡(luò)中起著關(guān)鍵的作用，它們很可能是治療痛經(jīng)的關(guān)鍵成分或靶點(diǎn)。

第三章實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論3.1活性化學(xué)成分篩選通過(guò)各種數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)檢索共計(jì)收集到補(bǔ)血益母丸448個(gè)化學(xué)成分，益母草中有64個(gè)化合物，當(dāng)歸中有122個(gè)，黃芪中109個(gè)，陳皮中62個(gè)，阿膠中91個(gè)。采用LC-MS（高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜及高分辨質(zhì)譜分析技術(shù)）和GC-MS（氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀），結(jié)合相關(guān)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)信息，鑒定了其中的62個(gè)化學(xué)成分。進(jìn)一步對(duì)補(bǔ)血益母丸62個(gè)化學(xué)成分進(jìn)行分析，再以口服利用度(OB)和類藥性(DL)為指標(biāo)篩選出其主要活性成分。取類藥性（DL≥0.18）的化合物作為進(jìn)一步的活性成分，再對(duì)其進(jìn)行分析；由于黃芪皂苷I、阿魏酸、藳本內(nèi)酯、洋川穹內(nèi)脂四個(gè)屬于黃芪、當(dāng)歸藥材的主要成分，且它們的口服利用度（OB）也很高，因此也選入其中進(jìn)行進(jìn)一步分析。其基本信息見(jiàn)下表1：表1.補(bǔ)血益母30個(gè)主要活性成分信息表化學(xué)名分子式中文名OB%DL來(lái)源astragalosideIC17H16O5黃芪皂苷I46.790.11黃芪(+)-SyringaresinolC22H26O8丁香樹(shù)脂酚3.290.72黃芪LevistolideA\o"FindallcompoundswithformulaC24H28O4"C24H28O4歐當(dāng)歸內(nèi)酯A9.960.82當(dāng)歸DocosanoateC22H44O2二十二烷酸酯15.960.26黃芪lupeol\o"FindallcompoundswithformulaC30H50O"C30H50O羽扇豆醇12.120.78黃芪Riligustilide\o"FindallcompoundswithformulaC24H28O4"C24H28O4新當(dāng)歸內(nèi)酯9.830.7當(dāng)歸StigmasterolC29H48O豆甾醇43.830.76當(dāng)歸Leonuriside

BC25H38O16益母草堿B13.370.75益母草RutinC27H30O16蘆丁3.20.68黃芪LeojaponinC20H26O3益母草寧素28.050.27益母草Galeopsin\o"FindallcompoundswithformulaC22H32O5"C22H32O5半乳糖苷61.020.38益母草Leonurine\o"FindallcompoundswithformulaC14H21N3O5"C14H21N3O5益母草堿19.120.33益母草Astraisoflavan

Glucoside\o"FindallcompoundswithformulaC23H24O11"C23H24O11黃芪紫檀烷苷18.370.86黃芪LeosibiricinC22H28O7益母草琴素25.260.22益母草IsorhamnetinC16H12O7異鼠李素49.60.31益母草Ononin\o"FindallcompoundswithformulaC22H22O9"C22H22O9刺芒柄花苷11.520.78黃芪preleoheterinC20H30O4前益母草靈素85.970.33益母草7-O-methylisomucronulatolC18H20O57-O甲基異丁香酚74.690.3黃芪化學(xué)名分子式中文名OB%DL來(lái)源FormononetinC16H12O4芒柄花黃素69.670.21黃芪NobiletinC21H22O8川陳皮素61.670.52陳皮CalycosinC16H12O5毛蕊異黃酮47.750.24黃芪TangeretinC20H20O7桔紅素21.380.43陳皮DaidzeinC15H10O4大豆黃銅19.440.19益母草LeonurideC15H24O9益母草苷2.60.33益母草rhamnetinC16H12O7鼠李素2.40.3益母草Astraisoflavan

GlucosideC23H24O11黃芪紫檀烷苷18.370.86黃芪NaringeninC15H12O5柚皮素59.290.21陳皮AstrapterocarpanC17H16O5黃芪紫檀烷64.260.42黃芪ferulicAcidC10H10O4阿魏酸39.560.06當(dāng)歸(Z)-ligustilideC12H14O2藳本內(nèi)酯53.720.07當(dāng)歸senkyunolideC12H16O2洋川芎內(nèi)酯68.20.07當(dāng)歸3.2潛在活性靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)用韋恩圖將30個(gè)活性成分的330個(gè)潛在靶點(diǎn)與痛經(jīng)的288個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行對(duì)照映射，綜合后得到30個(gè)交集靶點(diǎn)，如圖2所示。由此預(yù)測(cè)其作為治療痛經(jīng)的活性成分。根據(jù)得到的30個(gè)靶標(biāo)蛋白進(jìn)行分析預(yù)測(cè)得知:1.與激素調(diào)節(jié)相關(guān)的靶蛋白包括雌激素受體(ESR2)、孕激素受體（PGR），表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)；2.EGFR靶蛋白與平滑肌痙攣相關(guān)；另外發(fā)現(xiàn)EGFR靶蛋白還與中樞鎮(zhèn)痛和炎癥相關(guān)；表明EGFR靶蛋白作用廣泛。據(jù)此推測(cè)，補(bǔ)血益母丸可能通過(guò)與平滑肌痙攣、激素調(diào)節(jié)、抗炎和中樞鎮(zhèn)痛等相關(guān)靶蛋白結(jié)合起到治療或緩解痛經(jīng)的作用。下表2為30個(gè)補(bǔ)血益母丸潛在治療痛經(jīng)的靶點(diǎn)基因信息。圖2.韋恩圖Compound表示補(bǔ)血益母丸化學(xué)成分靶點(diǎn)；dysmenorrhea表示痛經(jīng)靶點(diǎn)表2.補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)的30個(gè)靶點(diǎn)基因信息UniProtIDProteinname靶點(diǎn)蛋白中文名GeneIDP37231PeroxisomeProliferatorActivatedReceptorGamma過(guò)氧化物酶體增殖激活受體PPARGP06401ProgesteroneReceptor孕激素受體PGRP09488GlutathioneS-TransferaseMu1谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶Mu1GSTM1Q92731Estrogenreceptorbeta雌激素受體ESR2P0825372kDatypeIVcollagenase72kDa型膠原酶，MMP2P13501C-CMotifChemokine5C-C基序趨化因子5CCL5P14174MacrophageMigrationInhibitoryFactor巨噬細(xì)胞遷移抑制因子MIFP08473Neprilysin腦啡肽酶MMEP31751RAC-betaserinethreonine-proteinkinaseRAC-β絲氨酸蘇氨酸激酶AKT2P14780Matrixmetalloproteinase-9基質(zhì)金屬蛋白酶-9MMP9P31749Threonine-proteinkinase蘇氨酸蛋白激酶AKT1P42574Caspase3半胱天冬酶3CASP3P00533EpidermalGrowthFactorReceptor表皮生長(zhǎng)因子受體EGFRP35968Vascularendothelialgrowthfactorreceptor2血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2KDRQ00987E3ubiquitin-proteinligaseMdm2E3泛素蛋白連接酶Mdm2MDM2P01112GTPaseHRas酶促腎上腺皮質(zhì)激素HRASP03956Interstitialcollagenase間質(zhì)膠原酶MMP1P08254Stromelysin-1奧美利辛-1MMP3P28845Corticosteroid11-beta-dehydrogenaseisozyme1皮質(zhì)類固醇11-β-脫氫酶同工酶1HSD11B1P05019InsulinLikeGrowthFactor1類胰島素生長(zhǎng)因子IGF1P09237MatrixMetallopeptidase7基質(zhì)金屬肽酶7MMP7Q92731Peroxisomeproliferator-activatedreceptoralpha過(guò)氧化物酶體增殖激活受體PPARAP08842Steryl-sulfatase類固醇硫酸酯酶STSP04278SexHormoneBindingGlobulin性激素結(jié)合球蛋白SHBGUniProtIDProteinname靶點(diǎn)蛋白中文名GenenameP15090Fattyacid-bindingproteinadipocyte脂肪酸結(jié)合蛋白脂肪細(xì)胞FABP4P14061Estradiol17-beta-dehydrogenase1雌二醇17-β-脫氫酶1HSD17B1P09211GlutathioneS-transferaseP谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶PGSTP1P11362FibroblastGrowthFactorReceptor1成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1FGFR1P52333Tyrosine-proteinkinaseJAK3酪氨酸受體激酶JAK3P15121Aldo-KetoReductaseFamily1MemberB醛酮還原酶家族1成員B1AKR1B13.3關(guān)鍵靶點(diǎn)功能和通路富集由GO功能富集結(jié)果得知其中分子功能（MolecularFunction）條目43條，細(xì)胞組成（CellComponent）11條，生物過(guò)程（BiologicalProcess）534條，分別有：steroidhormonereceptoractivity（類固醇激素受體），vascularsmoothmusclecellproliferation（血管平滑肌細(xì)胞增殖），negativeregulationofapoptoticprocess（細(xì)胞凋亡的負(fù)調(diào)控）等生物功能，GO富集的基因功能各自顯著性較強(qiáng)的前十項(xiàng)（P＜0.01）顯示見(jiàn)圖4、5、6。圖3.基因功能（GO）分析：細(xì)胞組成CC圖4.基因功能（GO）分析：生物過(guò)程BP圖5.基因功能（GO）分析：分子功能MF將預(yù)測(cè)出的30個(gè)作用靶點(diǎn)再進(jìn)行KEGG通路注釋,得到74條信號(hào)通路，據(jù)條件（P＜0.01）篩選與痛經(jīng)相關(guān)的主要通路13條。詳細(xì)信息見(jiàn)表3。分別有：Endocrineresistance（內(nèi)分泌抗性）、Estrogensignalingpathway（激素受體信號(hào)通路）、PI3K-Aktsignalingpathway（PI3K-Akt信號(hào)通路）、VEGFsignalingpathway（VEGF信號(hào)通路）、HIF-1signalingpathway（HIF-1信號(hào)通路）等。再圖4為KEGG通路富集結(jié)果。圖6.KEGG通路富集分析條形圖表3.補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)的13條通路信息表ID英文名中文名Degreehsa01522Endocrineresistance內(nèi)分泌抗性9hsa04915Estrogensignalingpathway雌激素信號(hào)通路8hsa04926Relaxinsignalingpathway松弛素信號(hào)通路7hsa01521EGFRtyrosinekinaseinhibitorresistanceEGFR酪氨酸激酶抑制劑抗性6hsa04668TNFsignalingpathwayTNF信號(hào)通路6hsa04151PI3K-AktsignalingpathwayPI3K-Akt信號(hào)通路9Hsa04010MAPKsignalingpathwayMAPK信號(hào)通路8Hsa04015Rap1signalingpathwayRap1信號(hào)通路7Hsa04370VEGFsignalingpathwayVEGF信號(hào)通路4Hsa04012ErbBsignalingpathwayErbB信號(hào)通路4Hsa04066HIF-1signalingpathwayHIF-1信號(hào)通路4Hsa00140Steroidhormonebiosynthesis類固醇激素生物合成3Hsa04664FcepsilonRIsignalingpathwayFc信號(hào)通路33.4網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析3.4.1“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖將30個(gè)補(bǔ)血益母丸活性成分及30個(gè)靶點(diǎn)，建立一個(gè)成分與靶點(diǎn)相互對(duì)應(yīng)的Excel表，導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件中構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。如圖1所示，該網(wǎng)絡(luò)圖由60個(gè)節(jié)點(diǎn)和187條邊組成，30個(gè)活性分子和30個(gè)潛在靶點(diǎn)作為節(jié)點(diǎn)，兩節(jié)點(diǎn)之間的邊代表活性化合物與靶點(diǎn)間的相互作用關(guān)系。其中綠色三角形節(jié)點(diǎn)代表靶點(diǎn)，紅色八邊形節(jié)點(diǎn)代表活性成分，用Cytoscape3.7.2軟件的NetworkAnalysis插件分析得知：每種化合物平均與5.63個(gè)靶點(diǎn)相互作用，每種靶點(diǎn)平均與9.57個(gè)化合物相互用。這體現(xiàn)了補(bǔ)血益母丸可能是通過(guò)多成分和多靶點(diǎn)相互作用發(fā)揮藥理作用。該網(wǎng)絡(luò)圖是按照其度（degree）大小，順時(shí)針?lè)较蚺帕械模梢灾庇^地看出排列靠前的成分分別是astragalosideI(黃芪皂苷I)、LevistolideA（歐當(dāng)歸內(nèi)脂A）、Riligustilide（新當(dāng)歸內(nèi)脂）。圖7.補(bǔ)血益母丸活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖3.4.2“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖將利用Cytoscape軟件構(gòu)建補(bǔ)血益母丸的“活性成分-靶標(biāo)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，如圖8所示。其中紅色橢圓節(jié)點(diǎn)代表30個(gè)主要活性成分；綠色三角形節(jié)點(diǎn)代表靶點(diǎn)；青色菱形節(jié)點(diǎn)代表通路。該網(wǎng)絡(luò)圖是按照其度（degree）大小，順時(shí)針?lè)较蚺帕械?，直觀地呈現(xiàn)了30個(gè)活性成分、30個(gè)靶標(biāo)、13條作用通路之間的關(guān)聯(lián)。從網(wǎng)絡(luò)圖中可以看出補(bǔ)血益母丸是多成分、多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同調(diào)控發(fā)揮治療痛經(jīng)的特點(diǎn)。圖8.補(bǔ)血益母丸活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖

3.5討論本研究首次構(gòu)建補(bǔ)血益母丸“活性成分-痛經(jīng)靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，并從多個(gè)角度探索補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)的潛在分子機(jī)制。研究結(jié)果表明，補(bǔ)血益母丸可通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多通路發(fā)揮治療痛經(jīng)的作用，為其進(jìn)一步分析補(bǔ)血益母丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究提供依據(jù)。研究結(jié)果顯示，益母草苷、豆甾醇、異鼠李素、丁香樹(shù)脂醇、黃芪皂苷I、阿魏酸、新當(dāng)歸內(nèi)脂等30個(gè)成分為治療痛經(jīng)潛在的主要活性成分。有相關(guān)文獻(xiàn)表明，異鼠李素屬于黃酮類物質(zhì)[21]。有關(guān)報(bào)道指出異鼠李素具有調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，抗氧化等多種治療作用，異鼠李素通過(guò)下調(diào)NF-KB通路緩解炎癥反應(yīng)[22]。有研究表明，astragalosideI（黃芪皂苷I）能抑制血小板聚集，降低血液粘稠度及凝固性，松弛平滑肌，起到緩解痛經(jīng)的作用；還能降低血管阻力，改善血循環(huán)，可以抑制動(dòng)脈血栓的形成。根據(jù)KEGG富集分析結(jié)果通路圖可以發(fā)現(xiàn)補(bǔ)血益母丸作用多靶點(diǎn)且映射于不同通路。補(bǔ)血益母丸主要介導(dǎo)與痛經(jīng)相關(guān)的通路有內(nèi)分泌抗、性雌激素受體信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等通路具有顯著性差異；而其中雌激素、HIF-1信號(hào)通路發(fā)揮補(bǔ)氣養(yǎng)血的作用[23]。但PI3K-Akt信號(hào)通路和內(nèi)分泌抗性顯著性最大，表明兩條通路與補(bǔ)血益母丸治療痛經(jīng)相關(guān)性最大，為潛在的主要活性通路。兩條通路同時(shí)調(diào)節(jié)的靶點(diǎn)蛋白AKT2、AKT1、EGFR、HRAS、IGF1的信號(hào)傳導(dǎo),其中靶點(diǎn)蛋白AKT1、AKT2和HRAS在KEGG13條通路分析結(jié)果中排名靠前，且與化學(xué)成分也密切相關(guān)，說(shuō)明在治療痛經(jīng)中起著關(guān)鍵作用。其中靶點(diǎn)蛋白HRAS屬于ras家族，而其在卵巢漿液性囊腫腺癌中高表達(dá)并極少發(fā)生突變。而王萍玲[24]發(fā)現(xiàn)在人子宮內(nèi)膜癌和卵巢癌組織中，原癌基因可直接被類固醇激素活化，且相關(guān)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了抑制HRAS基因的表達(dá)，卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)明顯受到限制，由此可說(shuō)明HRAS基因在卵巢腫瘤的異常增生中起著關(guān)鍵作用。另有報(bào)道[25]稱卵巢漿液性癌可能引起痛經(jīng)，兩者之間存在一定聯(lián)系，故推測(cè)原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)生與靶點(diǎn)蛋白HRAS有關(guān)且作用機(jī)制相似。絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶（AKT2）可通過(guò)磷酸化其下游分子，介導(dǎo)或參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)、細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡等多種生物學(xué)活性，從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[26]。而補(bǔ)血益母丸中LevistolideA、(+)-Syringaresinol等化合物同時(shí)調(diào)節(jié)RAC-β絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶（AKT2），而且這些化合物都是補(bǔ)血益母丸中的主要活性成分，因此推測(cè)該蛋白群可能與補(bǔ)血益母丸的補(bǔ)血活血功效相關(guān)聯(lián)，進(jìn)而起到治療痛經(jīng)的作用。有相關(guān)研究報(bào)道子宮收縮、供血不足導(dǎo)致的痛經(jīng)是因?yàn)榇萍に氐暮吭黾娱g接促進(jìn)了PGF2α的合成和釋放，而PGF2α釋放會(huì)引起痛經(jīng)[27]。靶點(diǎn)蛋白ESR2編碼一種雌激素受體，該雌激素受體與雌激素結(jié)合，激活血清肥大細(xì)胞，釋放致痛物質(zhì)[28]，而黃芪皂苷I(astragalosideI)、新當(dāng)歸內(nèi)脂（Riligustilide）、黃芪紫檀烷（Astrapterocarpan）、益母草琴素（leosibiricin）4個(gè)化合物都同時(shí)調(diào)節(jié)雌激素受體ESR2。由此可推測(cè),補(bǔ)血益母丸中活性分子可能與體內(nèi)的雌激素競(jìng)爭(zhēng)相應(yīng)受體,產(chǎn)生類雌激素作用,但是不會(huì)增加PGF2α的合成，從而減少子宮的異常收