寵物食品用益生菌后生元技術通則2025-02-21發(fā)布2025-02-28實施中國質(zhì)量檢驗協(xié)會發(fā)布I前言 Ⅲ N 12規(guī)范性引用文件 13術語和定義 14分類 25技術要求 26采樣 47檢驗方法 48檢驗規(guī)則 59保質(zhì)期 6 6附錄△(規(guī)范性)允許使用的輔料 8附錄B(規(guī)范性)菌體數(shù)檢驗方法 9附錄C(資料性)添加益生菌后生元的寵物食品標簽聲稱標示 參考文獻 Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由中國農(nóng)業(yè)科學院飼料研究所、中國質(zhì)量檢驗協(xié)會寵物食品用品專業(yè)委員會、河南安邁康生物科技有限公司共同提出。本文件出中國質(zhì)量檢驗協(xié)會歸口。本文件起草單位：河南安邁康生物科技有限公司、中國農(nóng)業(yè)科學院飼料研究所、中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院、中國海關科學技術研究中心動物檢疫研究所、清華大學分析中心、北京農(nóng)學院動物醫(yī)學院、中原食品實驗室、蘇州大學蘇州醫(yī)學院放射醫(yī)學與防護學院、華生維克生物工程(漯河)有限公司、上海福貝寵物用品股份有限公司、上海寵幸寵物用品有限公司、上海弗艾柏生物科技有限公司、河南心糧寵物食品有限公司、潤菁寵務(南京)科技有限公司、艾心倍健(吉林)生物科技有限公司、上海紐諾貝健進出口貿(mào)易有限公司、蘇州集合維康生物科技有限公司、中二科技(杭州)有限責任公司、深圳市豆柴寵物用品有限公司、北京集寵生物科技有限公司、中國質(zhì)量檢驗協(xié)會寵物食品用品專業(yè)委員會。2013年12月，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定施行《飼料添加劑品種日錄》,之后根據(jù)生產(chǎn)需要增補修訂，明確37種微生物可以作為動物飼料添加劑使用，其中30種微生物為寵物食品添加劑，該《飼料添加劑品種目錄》的實施與修訂以及微生物新飼料添加劑的申請批準，有力推動了我國微生物飼料(寵物食品)添加劑的開發(fā)與利用。2021年5月，國際益生菌和益生元科學協(xié)會(ISAPP)發(fā)表了后生元的共識聲明，其定義和范圍是：——后生元是對宿主健康有益的無生命微生物和/或其成分的制劑；——后生元不是純化的微生物代謝產(chǎn)物；——后生元對日標宿主的有益功效及使用安全性必需得到確認；——后生元的作用機制包括調(diào)節(jié)常駐菌群、增強上皮屏障功能、調(diào)節(jié)局部和全身免疫、調(diào)節(jié)系統(tǒng)代謝和通過神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)出系統(tǒng)信號；——后生元的靶點不限于腸道，如口腔、鼻咽、皮膚、泌尿生殖道，注射不屬于后生元的范圍。并提出了后生元的五大作用機制：對微生物組的有益調(diào)節(jié)，增強組織上皮屏障功能，促進免疫反應的調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)企身代謝，通過神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)出信號。中國質(zhì)量檢驗協(xié)會于2023年12月15日發(fā)布了T/CAQI362—2023《寵物食品用益生菌通則》,滿足寵物食品生產(chǎn)需求與市場需求，添加益生菌后生元的功能性寵物食品和營養(yǎng)補充劑是寵物食品發(fā)展的重要方向。近幾年我國科研院校和企業(yè)對益生菌后生元成分與實驗動物及寵物犬貓宿主的益生功能進行了大量研究，越來越多的動物體內(nèi)和體外實驗證明，益生菌后生元在增強動物機體免疫力、調(diào)節(jié)胃腸道功能、調(diào)整腸道微生態(tài)菌群具有顯著功效，同時益生菌后生元具有更高的產(chǎn)品安全性和穩(wěn)定性，更易于生產(chǎn)、儲存、運輸和使用的優(yōu)勢，并得到市場的認可。中國質(zhì)量檢驗協(xié)會組織相關科研單位、高等院校、益生菌后生元生產(chǎn)企業(yè)和寵物食品企業(yè)共同制定本文件，從而更好地規(guī)范寵物食品用益生菌后生元的質(zhì)量安全，指導企業(yè)的生產(chǎn)、研發(fā)與產(chǎn)品創(chuàng)新、技術創(chuàng)新，促進益生菌后生元產(chǎn)品在寵物食品中的規(guī)范化使用。寵物食品用益生菌后生元技術通則本文件適用于工業(yè)化加工、制作的寵物食品用益生菌后生元和添加益生菌后生元的寵物食品。下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文GB5009.157食品安全國家標準食品中有機酸的測定GB/T5917.1飼料粉碎粒度測定兩層篩篩分法GB/T6435飼料中水分的測定GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表示和判定GB/T13079飼料中總砷的測定GB/T13080飼料中鉛的測定原子吸收光譜法GB/T13091飼料中沙門氏菌的測定GB/T13092飼料中霉菌總數(shù)的測定GB/T17480飼料中黃曲霉毒素B?的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T18246飼料中氨基酸的測定GB/T18869飼料中大腸菌群的測定GB/T23181微生物飼料添加劑通用要求GB/T28716飼料中玉米赤霉烯酮的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法GB/T30956飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法GB/T42959飼料微生物檢驗采樣下列術語和定義適用于本文件。2對寵物健康有益的遺傳背景明確的滅活益生菌和/或菌體成分，包括或不包括其代謝產(chǎn)物。主要成分為滅活益生菌菌體類的后生元。主要成分為益生菌滅活菌體和代謝產(chǎn)物類的后生元。主要成分為益生菌破壁后菌體及代謝產(chǎn)物類的后生元。可分為液體和固體。5.1.1寵物食品用益生菌后生元菌種(株)應來自《飼料添加劑品種日錄》并符合GB/T23181的規(guī)定。篩選菌種進行生產(chǎn)的，應經(jīng)過國家或省部級微生物菌種保藏機構鑒定到種的水平。或不干燥處理的制品。3外觀與性狀應符合表1的規(guī)定。液態(tài)或固態(tài)，無正常視力可見外來異物與雜質(zhì)理化指標應符合表2的規(guī)定。固態(tài)一一一菌體數(shù)/[個/mL(g)]一一游離氨基酸/[mg/100mL(g)]一一一一一一一一一衛(wèi)生指標應符合GB13078及表3的規(guī)定。總砷/(mg/kg或mg/L)鉛/(mg/kg或mg/L)汞/(mg/kg或mg/L)鎘/(mg/kg或mg/L)黃曲霉毒素B?/(μg/kg或pg/L)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇/(mg/kg或mg/L)4玉米赤霉烯酮/(mg/kg或mg/L)大腸菌群/(MPN/g或MPN/mL)霉菌總數(shù)/(CFU/g或CFU/mL)沙門氏菌(25g或25mL中)不應檢出注：表中所列限量，除特別注明外，均以干物質(zhì)88%為基采樣應符合GB/T42959的規(guī)定。樣品的采集應遵循隨機性、代表性的原則，采樣過程應符合無菌采樣要求。6.2.1應在同一批次產(chǎn)品中采集樣品，每件樣品的采樣量應滿足微生物指標檢驗的要求，一般不少于6.2.2獨立包裝小于或等于500g的產(chǎn)品，取完整包裝。6.2.3獨立包裝大于500g的產(chǎn)品，應用無菌采樣器從同一包裝的不同部位分別采取適量樣品，放入同一個無菌采樣容器內(nèi)作為一件樣品。水分按GB/T6435規(guī)定的方法測定。菌體數(shù)按附錄B規(guī)定的方法測定。游離氨基酸按GB/T18246規(guī)定的方法測定。57.5有機酸(以乳酸計)有機酸(以乳酸計)按GB5009.157規(guī)定的方法測定。粒度按GB/T5917.1規(guī)定的方法測定。總砷(以As計)按GB/T13079規(guī)定的方法測定。鉛(以Pb計)按GB/T7.9汞(以Hg計)汞(以Hg計)按GB/T7.10鎘(以Cd計)鎘(以Cd計)按GB/T13080規(guī)定的方法測定。13081規(guī)定的方法測定。黃曲霉毒素B?按GB/T17480規(guī)定的方法測定。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇按GB/T30956規(guī)定的方法測定。玉米赤霉烯酮按GB/T28716規(guī)定的方法測定。霉菌總數(shù)按GB/T大腸菌群按GB/T沙門氏菌按GB/T13091規(guī)定的方法測定。每批產(chǎn)品不應超過50t。6a)產(chǎn)品定型投產(chǎn)時；c)在正常生產(chǎn)情況下，每半年至少進行1次型式檢驗；e)出廠檢驗結果與上次型式檢驗有較大差異時；f)行政管理部門提出檢驗要求時。8.5.3檢驗結果中其他指標不符合本文件規(guī)定時，可自同批產(chǎn)品中加倍取樣進9.1產(chǎn)品保質(zhì)期應根據(jù)益生菌后生元的特性確定，保質(zhì)期內(nèi)的產(chǎn)品應保持其質(zhì)量要求。元”“××菌后生元”“××菌，×××菌后生元”。示例：“寵物用益生菌后生元”“寵物食品用益生菌后生元”10.1.4添加益生菌后生元的寵物食品標簽聲稱標示參照附錄C。710.3.1根據(jù)產(chǎn)品特性選擇適宜的貯存環(huán)境(陰涼、冷凍或冷藏)。10.3.3液態(tài)產(chǎn)品不應擠壓放置。10.4.1應根據(jù)產(chǎn)品特性選擇適宜的運輸車輛(普通運輸車輛或冷藏運輸車輛)和運輸工具。8(規(guī)范性)允許使用的輔料見表A.1。1固態(tài)23456789山梨醇酐脂肪酸酯9(規(guī)范性)菌體數(shù)檢驗方法B.1流式細胞儀計數(shù)通過流式細胞儀對后生元進行死菌體數(shù)統(tǒng)計。B.1.2材料及設備熒光染料：PI(PropidiumIodide,碘化丙錠)或EB(EthidiumBromide,溴化乙錠)、7-AAD(7-Amino-DMSO(二甲基亞砜)中]、SYTO9(綠色熒光核酸染料):5mmol(溶于DMSO中)PBS(pH7.2)。B.1.3試驗方法B.1.3.1取1mL后生元懸液于滅菌后的2mLEP管，4000g離心5min,離心后的沉淀重懸于生理鹽水B.1.3.2將復溶后樣品10倍遞增系列稀釋到菌懸液濃度10?CFU/mL～10?CFU/mL待用。B.1.3.3各取稀釋后的液休980μL,分別加入兩個2mL離心管中，記為：——陰性對照(一):只加入菌懸液：——SYT09/PI雙染：分別加入10μL0.1mmol/L的SYTO9,10μL0.2mmol/L的PI,振蕩30s,室溫暗置孵育15min。B.1.3.4取上述雙染樣品200μL,加入等體積絕對計數(shù)微球(Flow-CountFluorospheres,Beckman),充分振蕩混勻，上機檢驗。B.1.3.5計算公式：總菌數(shù)=(SYTO9染色陽性和PI染色陽性菌的個數(shù)/絕對計數(shù)微球數(shù))×絕對計數(shù)×微球數(shù)濃度×稀釋倍數(shù)。B.2顯微鏡計數(shù)利用細菌計數(shù)板對樣品中死菌體數(shù)進行計數(shù)。B.2.3試驗方法B.2.3.1細菌計數(shù)板的基本構造細菌計數(shù)板計數(shù)區(qū)的刻度有兩種，一種是計數(shù)區(qū)分成16個大方格(大方格用三線隔開),每個大方格乂分成25個小方格；另一種是一個計數(shù)區(qū)分成25個大方格(大方格之間用雙線分開),每個大方格又分成B.2.3.2.1準確稱取樣品25.0g或25.0mL溶于225mL無菌生理鹽水中，振蕩混合均勻。B.2.3.3.1在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢，若有污物，則需清洗，吹干后進行計數(shù)。液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以B.2.3.3.4計數(shù)時若計數(shù)區(qū)是由16個大方格組成，按對角線方位，數(shù)左上、左下、右上、右下的4個大方格B.2.3.4.116格×25格菌體數(shù)按公式(B.1)計算：Y?=(y?/100)×400×b×10?Y?——細胞數(shù)，單位為個每毫升(個/mL);B.2.3.4.225格×16格菌體數(shù)按公式(B.2)計算：Y?=(y?/80)×400×b×10……Y?——細胞數(shù)，單位為個每毫升(個/mL);y?——80小格內(nèi)細胞個數(shù)，單位為個；b——稀釋倍數(shù)。(資料性)添加益生菌后生元的寵物食品標簽聲稱標示寵物食品中添加益生菌后生元產(chǎn)品，其中所含的某種營養(yǎng)素或有效生物成分具有維持、增強寵物生長、發(fā)育、生理功能或者機體健康的作用，以及對非疾病性問題有預防作用，標簽聲稱標示參照表C.1。表C.1