概念與分類檢測時機(jī)與方法檢測步驟與注意事項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)化與應(yīng)用CONTENTS目

錄Bethesda

單位介紹Bethesda

單位(BU)

是衡量凝血因

子VⅢ抑制物含量的單位，定義為使正

?；旌涎獫{的FVⅢ活性減少50%的含

量。FV

抑制物陽性標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)兩次檢測中，患者血漿稀釋度的

倒數(shù)即FVⅢ抑制物滴度≥0.6BU/ml

時，可判定為FVⅢ抑制物陽性。凝血因子VII抑制物定義凝血因子VⅢ抑制物是獲得性血友病

A的診斷指標(biāo)，用于監(jiān)測外源性FVⅢ

輸注后患者產(chǎn)生的抑制物。基本概念介紹抑制物類型劃分抗FVII同種抑制物主要存在于血友病A患者中，多為1

型抑制物，影響凝血因子IX的結(jié)合抑制物滴度分類根據(jù)FVⅢ抑制物滴度，分為低滴度

抑制物(5

.0

BU/ml)

和高滴度抑

制物(≥5.0

BU/ml)?？?/p>

FVII自身抑制物主要存在于獲得性血友病患者中，

多為2型抑制物，干擾磷脂和血管性血友病因子的結(jié)合。滴度分類的臨床意義根據(jù)FVⅢ抑制物的滴度，可以將其分

為低滴度和高滴度，有助于指導(dǎo)治療

方案的選擇和調(diào)整。低滴度抑制物低滴度抑制物是指FVⅢ抑制物滴度小

于5.0

BU/m1的情況。高滴度抑制物高滴度抑制物是指FVⅢ抑制物滴度大

于或等于5.0

BU/ml的情況。滴度分類方法首次擬確診的HA

患者檢測時機(jī)擬確診或已確診的AHA

患者，應(yīng)進(jìn)行

FVⅢ抑制物定量檢測，門診患者每周一

次，住院患者每周兩次，直至完全緩

解后根據(jù)臨床需求進(jìn)行檢測。已確診HA

患者的監(jiān)測時機(jī)在首次擬診血友病A(HA)

患者時，特

別是輕型和中間型患者，為鑒別診斷

與獲得性血友病A(AHA),

在接受替

代治療前需進(jìn)行FVⅢ抑制物定量檢測。AHA

患者的檢測時機(jī)對于已確診的HA患者，除定期預(yù)防治

療外，若治療效果不佳、出血頻率增

加等情況應(yīng)及時檢測EVⅢ抑制物，以調(diào)

整治療方案。02.01.03.啟動檢測的時機(jī)正常混合血漿來源影響根據(jù)檢測對象不同，正?；旌涎獫{的來源分為抗人FVⅢ抑制物檢測和抗rpFVⅢ抑制物檢測，影響結(jié)果的解讀

和應(yīng)用。檢測方法分類FVⅢ抑制物定量檢測方法主要分為一

期凝固法和發(fā)色底物法，每種方法有

其獨(dú)特的原理和應(yīng)用范圍。檢測體系區(qū)分檢測體系的不同主要體現(xiàn)在Bethesda

法和Nijmegen

法上，兩

者在操作細(xì)節(jié)及特異性方面有所差異檢測方法概述國際推薦與應(yīng)用情況Nijmegen

法被國際血栓與止血學(xué)會推薦為FVⅢ抑制物定量檢測的參考方

法，而Bethesda

法在國內(nèi)仍廣泛使

用

。檢測原理的區(qū)別Bethesda

法基于活化部分凝血活

酶時間(APTT)的糾正能力，而Nijmegen

法則使用乏FVⅢ血漿作為

樣本稀釋液。特異性與假陽性率Nijmegen

法通過改良提高了FVⅢ抑

制物定量檢測的特異性，降低了由其

他凝血因子抑制物引起的假陽性率。不同檢測體系的比較樣本采集與處理樣本采集方法應(yīng)使用含0.

109mol/L(3.2%)枸櫞酸三鈉抗凝劑的抗凝管進(jìn)

行樣本采集，并確保紅細(xì)胞比容

≥55%時調(diào)整抗凝劑或采血量。樣本處理與保存樣本采集后需確認(rèn)無血凝塊存在

,宜在常溫條件下1小時內(nèi)送檢

,采用規(guī)定的離心速度和時間離

心得到乏血小板血漿，建議當(dāng)天

內(nèi)完成檢測。樣本滅活步驟在

EVⅢ抑制物定量檢測前，將樣

本置于56℃孵育30分鐘以滅活殘

留的EVⅢ,減少其對檢測結(jié)果的

干擾。商品化NPP

的使用與保存商品化的正?；旌涎獫{(NPP)使用和保存應(yīng)嚴(yán)格按照制造商提供的說明書進(jìn)行操作，以確保其質(zhì)量和有效性。自

制NPP

的制備要求自制NPP時，需選擇20份常規(guī)凝血試驗(yàn)結(jié)果均正常的血漿，男女比例1:1,

且排除特定健康狀況或治療的個體。NPP

的FVII:C

檢測標(biāo)準(zhǔn)自制NPP的EVⅢ:c結(jié)果應(yīng)在958至105%之間，確保其活性符合標(biāo)準(zhǔn)，以保

證FVⅢ抑制物定量檢測的準(zhǔn)確性。正常混合血漿準(zhǔn)備檢測限與灰區(qū)當(dāng)原倍管剩余FVⅢ:C758

時，F(xiàn)VⅢ抑制

物滴度為0.42

BU/ml;

灰區(qū)設(shè)為2.0BU/ml,可通過回收試驗(yàn)確認(rèn)。參考范圍設(shè)定目前公認(rèn)的臨床意義FVⅢ抑制物滴度為“≥0.6BU/ml

”,建議報告時以

此為參考范圍。FVII抑制物滴度計算根據(jù)公式計算樣本的FVⅢ抑制物滴度，需將FVⅢ抑制物滴度計算系數(shù)

代入公式。結(jié)果計算與解釋檢測流程標(biāo)準(zhǔn)化01

(樣本處理與準(zhǔn)備確保使用含0.109mol/

工枸櫞酸三鈉抗

凝劑的抗凝管采集樣本，并采用規(guī)定的離

心速度和時間分離血漿，以獲得適合檢測

的乏血小板血漿。03

□D剩

余FVII:C檢測與結(jié)果計算通過標(biāo)準(zhǔn)管與檢測管分別檢測EVⅢ:C或使

用標(biāo)準(zhǔn)管制定標(biāo)準(zhǔn)曲線兩種方法進(jìn)行剩余

FVⅢ:C檢測，并根據(jù)公式計算FVⅢ抑制物

滴度，選擇最接近50%稀釋度的檢測結(jié)果

進(jìn)行報告。02正?；旌涎獫{的準(zhǔn)備當(dāng)檢測抗人FVⅢ抑制物時，可使用商品化的

NPP或自制NPP;

而檢測抗rpEVⅢ抑制物時

,則需使用商品化的rpFVⅢ作為NPP,確保

其活性接近100%。注意事項(xiàng)匯總中和性抑制物與非中和性抑制物FVⅢ抑制物定量檢測主要針對中和性抑制物，即免疫球蛋白G(IgG),而非中

和性抑制物則通過其他方法檢測。樣本保存與滅活處理樣本需在特定條件下保存，所有待測樣本均需經(jīng)過56℃孵育30分鐘滅活處理以

減少干擾。1型抑制物與2型抑制物HA患者的抗EVⅢ同種抑制物多為1型抑制物，而AHA

患者的抗EVⅢ自身抑制物多

為2型抑制物，兩者動力學(xué)特征不同。檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)化需求當(dāng)前FVⅢ抑制物定量檢測存在影響因素

多、自動化程度低等問題，亟需標(biāo)準(zhǔn)

化操作