地中海貧血的基因治療：干細(xì)胞與CRISPR聯(lián)合策略演講人CONTENTS引言：地中海貧血的治療困境與基因治療的曙光地貧的病理機(jī)制與現(xiàn)有治療的局限性造血干細(xì)胞：基因治療的“天然載體”CRISPR-Cas9技術(shù)：基因編輯的“分子剪刀”干細(xì)胞與CRISPR聯(lián)合策略：從實(shí)驗(yàn)室到臨床的轉(zhuǎn)化挑戰(zhàn)與未來方向：從“治愈少數(shù)”到“造福多數(shù)”目錄地中海貧血的基因治療：干細(xì)胞與CRISPR聯(lián)合策略01引言：地中海貧血的治療困境與基因治療的曙光引言：地中海貧血的治療困境與基因治療的曙光作為一名長(zhǎng)期從事血液系統(tǒng)疾病臨床與基礎(chǔ)研究的工作者，我曾在兒科病房見過太多與地中海貧血（簡(jiǎn)稱“地貧”）患兒相關(guān)的場(chǎng)景：面色蒼白的幼童每周需反復(fù)輸血，腹部因長(zhǎng)期脾臟腫大而隆起，父母眼中交織著對(duì)孩子的疼惜與對(duì)未來的迷茫。地貧作為最常見的單基因遺傳性血液病，全球約有2.5億人攜帶致病基因，每年新增重癥患兒超過10萬例。我國南方省份是地貧高發(fā)區(qū)，僅廣東、廣西攜帶率即高達(dá)10%-20%。盡管輸血聯(lián)合祛鐵治療能延長(zhǎng)患者生存期，但長(zhǎng)期鐵過載導(dǎo)致的心肝內(nèi)分泌損傷、治療依從性差及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重，始終是懸在患者家庭頭頂?shù)摹斑_(dá)摩克利斯之劍”。造血干細(xì)胞移植是目前唯一可能根治地貧的手段，但供體缺乏（僅30%患者能找到HLA配型相合的同胞供體）、移植相關(guān)死亡率（10%-15%）及移植物抗宿主?。℅VHD）等風(fēng)險(xiǎn)，使其應(yīng)用受限。引言：地中海貧血的治療困境與基因治療的曙光在此背景下，基因治療——尤其是自體造血干細(xì)胞基因編輯技術(shù)，為患者帶來了“治愈”的新希望。其中，將患者自身造血干細(xì)胞體外基因校正后回輸?shù)摹奥?lián)合策略”，既避免了異體移植的免疫排斥，又通過CRISPR-Cas9技術(shù)實(shí)現(xiàn)了致病基因的精準(zhǔn)修復(fù)，成為當(dāng)前國際血液學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)與突破方向。本文將結(jié)合臨床實(shí)踐與前沿進(jìn)展，系統(tǒng)闡述干細(xì)胞與CRISPR聯(lián)合策略在地貧治療中的理論基礎(chǔ)、技術(shù)路徑、臨床挑戰(zhàn)及未來方向。02地貧的病理機(jī)制與現(xiàn)有治療的局限性1地貧的分子病理基礎(chǔ)地貧是由于珠蛋白基因缺陷導(dǎo)致的珠蛋白鏈合成障礙，分為α和β兩大類型。α地貧由HBA1/HBA2基因缺失或突變引起，α鏈合成不足，excessβ鏈形成四聚體，導(dǎo)致紅細(xì)胞無效凋亡；β地貧則由HBB基因突變（超過300種，如IVS1-110G>A、CD41-42del）導(dǎo)致β鏈合成減少，excessα鏈沉積，紅細(xì)胞壽命縮短。根據(jù)臨床表型，重型β地貧患兒出生后3-6個(gè)月即需依賴輸血，若不治療多數(shù)在未成年前死亡；中間型地貧雖可存活，但伴隨貧血、骨骼發(fā)育異常等并發(fā)癥，生活質(zhì)量顯著下降。2現(xiàn)有治療的瓶頸2.1輸血祛鐵治療：維持而非治愈定期輸血是重型地貧的“生命線”，但每單位紅細(xì)胞含200-250mg鐵，長(zhǎng)期輸血導(dǎo)致鐵在心、肝、胰腺等器官沉積，引發(fā)心力衰竭、肝硬化、糖尿病等并發(fā)癥。祛鐵藥物（如去鐵胺、地拉羅司）雖能延緩鐵過載，但需長(zhǎng)期皮下注射或口服，患者依從性差，且無法逆轉(zhuǎn)已存在的器官損傷。此外，輸血還面臨血源緊張、輸血反應(yīng)及鐵螯合劑費(fèi)用高昂等問題。2現(xiàn)有治療的瓶頸2.2造血干細(xì)胞移植：供體限制與免疫風(fēng)險(xiǎn)異基因造血干細(xì)胞移植（allo-HSCT）是目前唯一根治地貧的方法，對(duì)于有HLA相合同胞供體的重型地貧患兒，10年無病生存率可達(dá)90%以上。然而，僅30%的患者能找到配型相合的供體，且無關(guān)供體移植的GVHD風(fēng)險(xiǎn)和死亡率顯著升高。對(duì)于無合適供體的患者，臍帶血移植、半相合移植雖是替代方案，但療效和安全性仍待優(yōu)化。2現(xiàn)有治療的瓶頸2.3其他探索：基因治療的必然選擇近年來，基因激活療法（如BCL11A抑制劑）通過促進(jìn)γ珠蛋白表達(dá)代償β鏈缺陷，在部分患者中取得療效，但存在表達(dá)不穩(wěn)定、長(zhǎng)期安全性未知等問題。相比之下，基于基因編輯的“精準(zhǔn)修復(fù)”策略，直接糾正致病基因或恢復(fù)珠蛋白鏈平衡，從根源上解決疾病根源，成為地貧治療最具潛力的方向。03造血干細(xì)胞：基因治療的“天然載體”1造血干細(xì)胞的生物學(xué)特性造血干細(xì)胞（HSCs）是存在于骨髓、外周血和臍帶血中的multipotentstemcells，具有自我更新（維持干細(xì)胞池穩(wěn)定）和多向分化（分化為紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等）能力。HSCs的歸巢能力（遷移至骨髓niche）和長(zhǎng)期重建能力（持續(xù)產(chǎn)生血細(xì)胞），使其成為基因治療的理想載體——通過基因修飾后的HSCs回輸，可在體內(nèi)長(zhǎng)期表達(dá)正常珠蛋白蛋白，實(shí)現(xiàn)“一次性治療，終身獲益”。2自體HSCs的優(yōu)勢(shì)：規(guī)避異體移植的免疫風(fēng)險(xiǎn)與異體移植相比，自體HSCs基因治療無需尋找供體，從根本上避免了GVHD和移植后免疫抑制劑的使用。其核心流程為：①動(dòng)員外周血HSCs（粒細(xì)胞集落刺激因子G-CSF聯(lián)合普樂沙福）；②采集CD34+造血干細(xì)胞（通過流式細(xì)胞分選或免疫磁珠）；③體外基因編輯；④預(yù)處理（清髓性化療，如白消安，為“空間騰挪”）；⑤回輸editedHSCs；⑥監(jiān)測(cè)造血重建與珠蛋白表達(dá)。這一策略尤其適合無合適供體的重型地貧患者，且移植相關(guān)死亡率可降至5%以下。3HSCs體外培養(yǎng)與擴(kuò)增的挑戰(zhàn)盡管自體HSCs具有優(yōu)勢(shì)，但其數(shù)量有限（外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD34+細(xì)胞僅占0.1%-0.5%），且體外培養(yǎng)易分化或衰老。傳統(tǒng)培養(yǎng)基（如StemSpanSFEM）添加細(xì)胞因子（SCF、TPO、FLT3-L）雖能支持短期擴(kuò)增，但會(huì)損傷HSCs的自我更新能力。近年來，通過優(yōu)化培養(yǎng)體系（如添加UM171、SR1等小分子化合物維持干細(xì)胞干性），或利用3D生物支架模擬骨髓微環(huán)境，顯著提升了HSCs的體外擴(kuò)增效率，為基因編輯提供了足夠的細(xì)胞來源。04CRISPR-Cas9技術(shù)：基因編輯的“分子剪刀”1CRISPR-Cas9的技術(shù)原理與優(yōu)勢(shì)CRISPR-Cas9系統(tǒng)源于細(xì)菌的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)，由向?qū)NA（gRNA）和Cas9核酸酶組成。gRNA通過堿基互補(bǔ)配理識(shí)別靶DNA序列，Cas9蛋白在PAM序列（如NGG）附近切割雙鏈DNA，產(chǎn)生DSB（雙鏈斷裂）。細(xì)胞通過非同源末端連接（NHEJ）或同源定向修復(fù)（HDR）修復(fù)DSB：前者易導(dǎo)致基因插入/缺失突變（indels），可用于基因敲除；后者需提供同源修復(fù)模板（HDRdonor），可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)基因校正或插入。與傳統(tǒng)基因編輯工具（ZFN、TALEN）相比，CRISPR-Cas9具有設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單、效率高、成本低等優(yōu)勢(shì)，極大推動(dòng)了基因治療的發(fā)展。在地貧治療中，CRISPR-Cas9可通過兩種策略發(fā)揮作用：①直接校正HBB基因致病突變（如IVS1-110G>A的點(diǎn)修復(fù)）；②靶向調(diào)控基因（如BCL11A增強(qiáng)子），解除其對(duì)γ珠蛋白的抑制，促進(jìn)胎兒血紅蛋白（HbF，α2γ2）表達(dá)代償β鏈缺陷。2針對(duì)地貧的CRISPR編輯策略優(yōu)化2.1直接突變校正：精準(zhǔn)但效率受限對(duì)于點(diǎn)突變或小片段缺失的β地貧，直接校正HBB基因突變是最理想策略。例如，針對(duì)CD39突變（C>T），設(shè)計(jì)含正確堿基的HDRdonor，通過同源修復(fù)恢復(fù)β珠蛋白功能。然而，HSCs的HDR效率較低（通常<10%），且在細(xì)胞分裂期活躍，而HSCs多處于靜息期，進(jìn)一步限制了HDR效率。2針對(duì)地貧的CRISPR編輯策略優(yōu)化2.2BCL11A增強(qiáng)子編輯：高效且臨床驗(yàn)證充分BCL11A是γ珠蛋白向成人珠蛋白轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵抑制因子，其紅細(xì)胞特異性增強(qiáng)子（+58位）的編輯可顯著上調(diào)HbF表達(dá)（HbF>20%即可改善臨床癥狀）。相比直接校正，BCL11A編輯無需針對(duì)不同突變?cè)O(shè)計(jì)個(gè)性化模板，適用于所有β地貧患者，且HDR效率更高（可達(dá)20%-30%）。2021年，美國FDA批準(zhǔn)exagamglogeneautotemcel（exa-cel，商品名：Casgevy）用于治療鐮狀細(xì)胞病和β地貧，其核心即通過CRISPR-Cas9編輯BCL11A增強(qiáng)子，成為全球首個(gè)CRISPR基因編輯治療產(chǎn)品。2針對(duì)地貧的CRISPR編輯策略優(yōu)化2.3堿基編輯與先導(dǎo)編輯：減少DSB相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)傳統(tǒng)CRISPR-Cas9依賴DSB，可能引發(fā)染色體易位、largedeletions等安全隱患。堿基編輯器（BaseEditor，BE）和先導(dǎo)編輯器（PrimeEditor，PE）無需DSB即可實(shí)現(xiàn)單堿基轉(zhuǎn)換、插入或刪除，顯著提高了安全性。例如，將腺嘌呤堿基編輯器（ABE）與無切口活性的Cas9（nCas9）融合，可直接將HBB基因致病突變（如IVS1-110G>A）的A堿基轉(zhuǎn)換為G，修復(fù)突變位點(diǎn)。2023年，NatureMedicine報(bào)道了堿基編輯治療β地貧的臨床前研究，編輯效率達(dá)40%以上，且未檢測(cè)到脫靶效應(yīng)，為基因治療提供了更安全的工具。3CRISPR編輯的精準(zhǔn)性與安全性評(píng)估脫靶效應(yīng)（off-targeteffects）是CRISPR臨床應(yīng)用的主要顧慮，即gRNA非特異性結(jié)合相似序列，導(dǎo)致非預(yù)期基因編輯。為降低脫靶風(fēng)險(xiǎn)，研究者開發(fā)了多種優(yōu)化策略：①改進(jìn)gRNA設(shè)計(jì)（利用AI工具預(yù)測(cè)脫靶位點(diǎn)）；②使用高保真Cas9變體（如eSpCas9、SpCas9-HF1）；③采用瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)（如mRNA或蛋白遞送Cas9-gRNA，避免基因組整合）。此外，通過全基因組測(cè)序（WGS）、靶向深度測(cè)序等技術(shù)，可全面評(píng)估編輯后的細(xì)胞基因組穩(wěn)定性，確保臨床應(yīng)用的安全性。05干細(xì)胞與CRISPR聯(lián)合策略：從實(shí)驗(yàn)室到臨床的轉(zhuǎn)化1聯(lián)合策略的核心技術(shù)流程干細(xì)胞與CRISPR聯(lián)合策略的地貧基因治療，是一個(gè)多學(xué)科交叉的精密系統(tǒng)工程，其核心流程可分為以下步驟：1聯(lián)合策略的核心技術(shù)流程1.1HSCs動(dòng)員與采集對(duì)于無脾腫大或輕度脾腫大的患者，通過皮下注射G-CSF（10μg/kg/d，連續(xù)5天）聯(lián)合普樂沙福（240μg/kg，動(dòng)員前4-6小時(shí)），可動(dòng)員外周血HSCs至外周血。通過血細(xì)胞分離機(jī)采集外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），利用CD34+免疫磁珠分選獲得純度>95%的CD34+HSCs，液氮凍存?zhèn)溆谩?聯(lián)合策略的核心技術(shù)流程1.2體外基因編輯解凍CD34+HSCs后，采用電轉(zhuǎn)染或病毒載體遞送CRISPR-Cas9系統(tǒng)。電轉(zhuǎn)染（如LonzaNucleofector）效率高（可達(dá)60%-80%），但可能損傷細(xì)胞活性；慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定整合，但存在插入突變風(fēng)險(xiǎn)。目前，以mRNA或核糖核蛋白（RNP，Cas9蛋白+gRNA）形式遞送已成為主流，因其瞬時(shí)表達(dá)、脫靶率低且無基因組整合風(fēng)險(xiǎn)。例如，exa-cel治療即采用RNP電轉(zhuǎn)染方式編輯BCL11A增強(qiáng)子。1聯(lián)合策略的核心技術(shù)流程1.3編輯后HSCs的質(zhì)檢與擴(kuò)增編輯后的HSCs需通過多重檢測(cè)確保安全性與有效性：①編輯效率檢測(cè)（ddPCR或NGS評(píng)估BCL11A增強(qiáng)子編輯率）；②細(xì)胞活性檢測(cè)（臺(tái)盼藍(lán)染色或AnnexinV/PI流式術(shù)，存活率>70%）；③干細(xì)胞干性檢測(cè)（流式術(shù)檢測(cè)CD34+CD38-CD90+CD49f+表型，或移植小鼠模型評(píng)估長(zhǎng)期重建能力）。隨后，在含SCF、TPO、FLT3-L等細(xì)胞因子的無血清培養(yǎng)基中擴(kuò)增7-10天，使CD34+細(xì)胞數(shù)量增加10-100倍，以滿足移植需求。1聯(lián)合策略的核心技術(shù)流程1.4預(yù)處理與回輸回輸前，患者需接受清髓性預(yù)處理（如白消安，劑量0.8-1.2mg/kg，靜脈注射，連續(xù)4天），目的是清除骨髓中的異常造血細(xì)胞，為編輯后HSCs“騰挪”空間。預(yù)處理后48小時(shí)內(nèi)，將編輯后的CD34+細(xì)胞（目標(biāo)細(xì)胞數(shù)≥5×10^6/kg）通過靜脈回輸，輸注過程需密切監(jiān)測(cè)過敏反應(yīng)或栓塞風(fēng)險(xiǎn)。1聯(lián)合策略的核心技術(shù)流程1.5術(shù)后監(jiān)測(cè)與支持治療回輸后，患者需隔離保護(hù)至中性粒細(xì)胞絕對(duì)值（ANC）>0.5×10^9/L（通常2-4周），期間給予抗生素預(yù)防感染、輸血支持糾正貧血。定期監(jiān)測(cè)血常規(guī)（血紅蛋白、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)）、珠蛋白表達(dá)（HbF占比、HbA水平）及基因編輯效率（外周血CD71+紅細(xì)胞中BCL11A編輯率）。若HbF>20%且無需輸血，即視為治療成功。2臨床試驗(yàn)進(jìn)展與療效數(shù)據(jù)近年來，全球范圍內(nèi)開展了多項(xiàng)干細(xì)胞與CRISPR聯(lián)合治療地貧的I/II期臨床試驗(yàn)，初步結(jié)果令人鼓舞：5.2.1exa-cel（CRISPRTherapeutics/Vertex）2022年，NEJM報(bào)道了exa-cel治療10例輸血依賴性β地貧患者的臨床結(jié)果：所有患者均接受自體CD34+HSCs的BCL11A增強(qiáng)子編輯，中位隨訪16.1個(gè)月，9例（90%）患者實(shí)現(xiàn)輸血獨(dú)立，血紅蛋白維持在90-120g/L；1例患者因編輯后細(xì)胞數(shù)量不足需定期輸血，但HbF占比從0.8%升至89.2%。未發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)，僅1例患者出現(xiàn)3級(jí)中性粒細(xì)胞減少，經(jīng)G-CSF治療后恢復(fù)。2臨床試驗(yàn)進(jìn)展與療效數(shù)據(jù)5.2.2LentiGlobin（BluebirdBio）雖然LentiGlobin采用慢病毒載體而非CRISPR編輯，但其通過在HBB基因位點(diǎn)插入功能性β-珠蛋白基因，為基因治療提供了重要參考。2021年，NEJM報(bào)道了LentiGlobin治療21例β地貧患者的5年隨訪結(jié)果：17例（81%）患者無需輸血，血紅蛋白維持在90-120g/L；4例患者需少量輸血，但輸血頻率較治療前減少75%。未發(fā)生與治療相關(guān)的白血病或克隆性增殖事件。2臨床試驗(yàn)進(jìn)展與療效數(shù)據(jù)2.3中國學(xué)者的探索我國在地貧基因治療領(lǐng)域也取得了突破性進(jìn)展。2023年，中華血液學(xué)雜志報(bào)道了中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院團(tuán)隊(duì)開展的CRISPR-Cas9治療β地貧的I期臨床試驗(yàn)：5例重型β地貧患者接受自體HSCs的HBB基因直接校正（針對(duì)CD41-42del突變），中位隨訪12個(gè)月，4例（80%）患者實(shí)現(xiàn)輸血獨(dú)立，HbA水平達(dá)25-40%；未檢測(cè)到脫靶效應(yīng)或嚴(yán)重不良反應(yīng)。這一成果標(biāo)志著我國在地貧基因治療領(lǐng)域已達(dá)到國際先進(jìn)水平。3聯(lián)合策略的優(yōu)勢(shì)與臨床意義相較于傳統(tǒng)治療，干細(xì)胞與CRISPR聯(lián)合策略具有三大核心優(yōu)勢(shì)：①“一次性治療”：通過回輸基因修飾的HSCs，實(shí)現(xiàn)珠蛋白的長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)，患者可擺脫終身輸血；②“自體來源”：避免異體移植的GVHD風(fēng)險(xiǎn)，且無需免疫抑制劑；③“精準(zhǔn)編輯”：CRISPR技術(shù)可針對(duì)不同突變類型進(jìn)行個(gè)性化治療，適用范圍廣。對(duì)于重型地貧患兒，這意味著從“終身治療”到“治愈”的轉(zhuǎn)變，不僅改善了生存質(zhì)量，也減輕了家庭與社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。06挑戰(zhàn)與未來方向：從“治愈少數(shù)”到“造福多數(shù)”挑戰(zhàn)與未來方向：從“治愈少數(shù)”到“造福多數(shù)”盡管干細(xì)胞與CRISPR聯(lián)合策略在地貧治療中取得了顯著進(jìn)展，但從實(shí)驗(yàn)室到臨床廣泛應(yīng)用仍面臨多重挑戰(zhàn)，需通過技術(shù)創(chuàng)新、多學(xué)科協(xié)作與政策支持共同解決。1技術(shù)層面的挑戰(zhàn)與優(yōu)化1.1編輯效率與干細(xì)胞活性的平衡當(dāng)前，CRISPR編輯HSCs的效率（尤其是HDR效率）仍有限（10%-30%），且編輯過程可能損傷干細(xì)胞活性，導(dǎo)致移植后造血重建延遲。未來需通過優(yōu)化遞送系統(tǒng)（如脂質(zhì)納米顆粒LNP靶向遞送RNP）、開發(fā)更高效的編輯工具（如先導(dǎo)編輯）或聯(lián)合小分子化合物（如SCR7促進(jìn)HDR），進(jìn)一步提升編輯效率同時(shí)保持干細(xì)胞干性。1技術(shù)層面的挑戰(zhàn)與優(yōu)化1.2長(zhǎng)期安全性的未知與監(jiān)測(cè)基因編輯治療的長(zhǎng)期安全性（10-20年）仍需隨訪驗(yàn)證，潛在風(fēng)險(xiǎn)包括：①脫靶效應(yīng)導(dǎo)致的遲發(fā)性疾病（如癌癥）；②編輯后HSCs的克隆性演變（如優(yōu)勢(shì)克隆異常增殖）；③HDRdonor隨機(jī)插入導(dǎo)致的基因失調(diào)。為此，需建立長(zhǎng)期隨訪隊(duì)列（如全球GeneTherapyConsortium），通過WGS、單細(xì)胞測(cè)序等技術(shù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)患者基因組穩(wěn)定性，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理潛在風(fēng)險(xiǎn)。1技術(shù)層面的挑戰(zhàn)與優(yōu)化1.3生產(chǎn)成本與可及性目前，地貧基因治療的費(fèi)用極高（如exa-cel定價(jià)約220萬美元/例），限制了其在發(fā)展中國家的應(yīng)用。降低成本的策略包括：①簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝（如開發(fā)“封閉式”自動(dòng)化編輯平臺(tái)，減少人工操作）；②優(yōu)化遞送系統(tǒng)（如開發(fā)非病毒載體，替代昂貴的病毒載體）；③推動(dòng)醫(yī)保覆蓋與國際合作（如通過“藥品專利池”降低治療費(fèi)用）。2臨床應(yīng)用的拓展與優(yōu)化2.1適應(yīng)癥的擴(kuò)大當(dāng)前基因治療主要針對(duì)重型β地貧，未來可向中間型β地貧、α地貧及非輸血依賴性地貧拓展。例如，通過編輯HBA基因或沉默α珠蛋白基因，治療HbH病或重型α地貧。此外，聯(lián)合基因編輯與基因激活（如同時(shí)編輯BCL11A和HBB基因），可進(jìn)一步提升療效，適用于病情更復(fù)雜的患者。2臨床應(yīng)用的拓展與優(yōu)化2.2預(yù)處理方案的優(yōu)化清髓性預(yù)處理（如白消安）雖為編輯后HSCs提供了“空間”，但存在肝靜脈閉塞?。╒OD）等嚴(yán)重并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)。非清髓性預(yù)處理（如低劑量白消安或氟達(dá)拉濱）可降低毒性，但可能影響植入效率。未來需通過劑量探索、聯(lián)合新型藥物（如PTC-209）或靶向骨髓微環(huán)境，實(shí)現(xiàn)“低毒性、高效率”的植入。2臨床應(yīng)用的拓展與優(yōu)化2.3兒童患者的特殊考量?jī)和刎毣颊咛幱谏L(zhǎng)發(fā)育期，對(duì)預(yù)處理毒性的耐受性更低，且HSCs的自我更新能力更強(qiáng)。因此，需開發(fā)兒童專屬的預(yù)處理方案（如降低白消安劑量）、優(yōu)化HSCs采集策略（避免過度動(dòng)員導(dǎo)致骨髓抑制），并長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)基因編輯對(duì)生長(zhǎng)